VALIDACIÓN Y
ESTANDARIZACÍON
Ing. BEATRIZ ÁLVAREZ BADEL [Link]
2
COLOMBIA
[Link]
3
Validación = Calidad
resultados reproducibles y confiables
Procedimiento analítico
adecuados para el propósito previsto
Buenas Prácticas de Laboratorio OECD OMS ISO 17025
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ISO/IEC 17025:2017
Requisitos relativos a la estructura
Requisitos relativos a los recursos: Trazabilidad
metrológica; Productos y servicios suministrados
externamente
Requisitos del proceso: Selección verificación y
validación de métodos
Requisitos relativos al sistema de gestión
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VALIDACIÓN
Confirmar por medio de examen y provisión de evidencia
objetiva que se cumplen los requisitos particulares para un
uso propuesto específico. [ISO 8402:1994]
Establecimiento de la evidencia documental de que un
procedimiento analítico conducirá con un alto grado de
seguridad a la obtención de resultados precisos y exactos,
dentro de las especificaciones y los atributos de calidad
previamente establecidos. AEFI, 2001
Cualificación Calibración
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PROTOCOLO REALIZACIÓN EVALUACIÓN INFORME
CERTIFICACIÓ
VALI
N
DA-
CIÓN
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Diseño de la validación
Definición de la aplicación, propósito y alcance del método
Definición de los parámetros de rendimiento y criterio de
aceptación
Diseño de los experimentos de validación.
Descripción de las características relevantes requeridas para
el equipamiento.
Calificación de los materiales, estándares y reactivos
Evaluado y autorizado para su ejecución Jefe de Laboratorio
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Criterios de validación
Exactitud (Precisión y Veracidad o Justeza)
Selectividad
Linealidad
Sensibilidad de calibrado
Límite de detección y límite de cuantificación
Tolerancia o fortaleza
Robustez
NMKL, (1996); AOAC, (2000); Codex Alimentarius, (2001) y IUPAC (2002)
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Ejecución
Realización de los experimentos de pre-validación.
Ajuste de los parámetros del método y/ o los criterios de
aceptación si fuera necesario.
Realización de los experimentos de validación interna en forma
completa.
Desarrollo los Procedimientos Operativos Estandarizados
(POE) para ejecutar el método en la rutina.
Definición del tipo y frecuencia de pruebas adecuadas para el
sistema y/ o control de calidad analítico (CCA) para controles
de rutina.
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Criterios
Realizar Carta de control con los resultados de materiales de referencia.
Controles Intralaboratorio - Participar en interlaboratorios
FAO, 2005 11
Categoría de Métodos
Categoría I: para la cuantificación de materia prima o principio activo en producto terminado.
Categoría II: para determinar impurezas en materia prima o compuestos de degradación en
producto terminado; o para análisis de residuos en material biológico o alimentos.
Categoría III: para determinar las características de funcionamiento como disolución o
liberación de droga.
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Exactitud
Capacidad del método analítico para dar resultados lo
más próximo posible a un valor verdadero.
Proximidad de concordancia entre el resultado de un
ensayo y el valor de referencia aceptado.
ISO 5725-1 (1994)
Precisión - Veracidad o Justeza
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Precisión
Es el grado de correlación o cercanía entre los resultados
analíticos individuales que se obtienen al aplicar
repetidamente el método a varias muestras, de una
homogénea común.
Repetibilidad Reproducibilidad
Determinaciones Determinaciones
independientes realizadas en independientes realizadas
las mismas condiciones bajo diferentes condiciones
[ALTA] [baja] [ALTA] [Media] [baja] máxima
variabilidad mínima variabilidad 14
Precisión
Coeficiente de variación o variabilidad (CV)
𝑆
𝐶𝑉 = ∗ 100 químicos (≤ 5 %)
𝑋
microbiológicos (≤ 7%)
Donde: S es la desviación estándar
𝑆= √∑ ¿¿¿¿
donde: Ẋ es el valor medio obtenido de las diferentes repeticiones
Xi es el valor individual obtenido para cada una de las diferentes determinaciones
n es el número de determinaciones (repeticiones realizadas)
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Veracidad o Justeza
Proximidad de la concordancia entre el valor promedio
obtenido en una serie de resultados de ensayo y el valor de
referencia aceptado de la propiedad analítica que se está
midiendo, o sea, el contenido verdadero de un analito dentro
de la muestra en estudio
Exceso Defecto
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Veracidad o Justeza
Valor obtenido ( Ẋ )
% 𝑅𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖 ó 𝑛= 100
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟𝑟𝑒𝑎𝑙
Análisis repetido de una muestra de concentración única conocida
Método de adición de patrón
Comparación con otro método analítico ya validado.
18
19
20
Selectividad
Capacidad de un método analítico para medir exacta y
específicamente el analito, sin interferencia de impurezas u
otros componentes que puedan estar presentes en la
muestra.
%Recuperación
características características de
del método la muestra
analítico (matriz)
Alimento sin Patrón con
analito impurezas
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Linealidad
Capacidad de un método analítico de obtener resultados
proporcionales a la concentración de analito en la muestra
dentro de un intervalo determinado
número de soluciones entre 6 y 10 𝑦=𝑚𝑥 + 𝑏
Donde:
2 x = concentración,
R m = pendiente,
y = respuesta del método,
a = intercepto
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Sensibilidad del calibrado
Coeficiente diferencial entre la señal medida (respuesta del
método) y la concentración del analito
Respuesta del m é todo
𝑆=
concentraci ó n de analito
Capacidad de respuesta del método analítico a
pequeñas variaciones de la concentración del analito
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Límite de detección y límite de cuantificación
Límite de detección es la menor concentración de analito
en una muestra que puede ser detectada, pero no
cualitativo necesariamente cuantificada, bajo las condiciones
experimentales establecidas.
El límite de cuantificación es la menor concentración o
cantidad de analito que puede ser determinada o
cuantitativo
cuantificada con aceptable precisión y exactitud, bajo las
condiciones experimentales establecidas
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La tolerancia o fortaleza
Grado de reproducibilidad de los resultados obtenidos por el
análisis de la misma muestra bajo diferentes condiciones de
operación como: temperaturas, laboratorios, columnas, lotes
de reactivos, equipos, etc.
Se realizan los análisis de muestras tomadas de un
mismo lote homogéneo, en diferentes laboratorios, por
diferentes analistas, en diferentes días, etc. las cuales
pueden diferir pero se mantienen dentro de los
parámetros específicos del método determinada
previamente bajo condiciones normales de operación.
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Robustez
Influencia de pequeños cambios en las condiciones
analíticas sobre la fiabilidad del método analítico,
localizando los factores que originan fluctuaciones menores
y los que necesitan una atención especial por cuanto
originan variaciones significativas.
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Conclusión
La validación de los métodos analíticos es la herramienta
del laboratorio para estandarizar sus procedimiento e
implementar un sistema de aseguramiento de la calidad
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Bibliografía
FAO, 2005. Taller subregional sobre aseguramiento de calidad y
validación de metodología para análisis químicos. Bogotá,
Colombia.
Instituto de Salud pública de Chile, 2020. Validación de métodos
y determinación de la incertidumbre de la medición: “Aspectos
generales sobre la validación de métodos”
CYTED, 2009. Aspectos prácticos de la validación e
incertidumbre en medidas químicas.
CENAM, INM, 2017. Estudio de diagnóstico en metrología,
normalización y evaluación de la conformidad de los
subsectores lácteos, hortofrutícola, chocolatería – confitería, de
la cadena productiva de agroalimentos
28
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