ELECTROFORESIS
MC JANET COLLADO FELIX
DEFINICION
• Se denomina al transporte de partículas
cargadas en un campo eléctrico.
• Consiste en la separación mediante la
diferencia de su velocidad de migración (a.a,
proteínas nucleótidos y ácidos nucleícos).
Transporte electroforético (la fuerza del campo se opone a la
resistencia viscosa del medio).
La movilidad electroforética de una molécula depende
directamente de su carga e inversamente del coeficiente de
rozamiento
Amortiguador
• Lleva la carga eléctrica.
• Determina la carga neta de la moléculas que
se separan.
• La fuerza iónica del amortiguador determina
la anchura de la nube iónica.
• < FUERZA IONICA >MENOR SON LAS BANDAS
DE SEPARACIÓN.
ELECTROFORESIS DE ZONA
• LOS PRINCIPALES SOPORTES SON:
• Papel. (grupos carboxilos)
• Membranas de acetato de celulosa.
• Geles (agar , agarosa, almidón y
poliacrilamida).
• Uno de los PROBLEMAS es el flujo
electroendosmótico, que se debe a la presencia de
grupos cargados sobre la superficie del medio de
soporte
Electroforesis en acetato de celulosa
• La ventaja es de ser químicamente mas homogénea y
poder transparentarse, podrán cuantificarse por
densitometría.
• Su aplicación principal es para separar las proteínas del
suero (PROTEINOGRAMA).
• Las tiras de acetato de celulosa se colocan en la cámara
entre dos compartimentos que contienen electrodos, que
están sumergidos en el mismo amortiguador. (VERONAL ph
8,6)
• Separadas las proteínas se localizan en las tiras de acetato
de celulosa por colorantes (rojo ponceau, negro amido)
• Los densitómetros tiene un sistema de
arrastre se los soportes teñidos pasan por la
rendija de la luz que luego incide sobre el
detector.
• Cuanto mayor es la intensidad de la banda,
menor es la luz que llega al detector y mayor
la deflexión de la pluma del registrador que
dará picos altos.
• Los filtros para leer la banda lo hace por
sistemas de fluorescencia.
• Sirve para separar lipoproteínas en suero, las isoenzimas de
la lactato deshidrogenasa (LDH) y la creatincinasa (CK) del
suero.
Electroforesis en gel
• Los geles no solo son soportes que evitan la
difusión , pues modifican la concentración que
forman el gel, pueden conseguir diferentes
porosidades y separaciones.
• Gel de agarosa: produce buenas resoluciones
en periodos de tiempo cortos. Es transparente
se puede medir la intensidad de las fracciones
separadas por la densitometría (proteínas y
ácidos nucleicos).
• gel de almidón: debe estar parcialmente
hidrolizado.
• Gel poliacrilamida: su preparación de contenido
es 3 – 30%. Los porcentajes bajos tienen poros
de gran tamaño y se emplean en electroforesis
de proteínas o para separar fragmentos grandes
de ADN.
• (separar proteínas, lipoproteínas, isoenzimas y
ácidos nucleicos).
ENFOQUE ISOELECTRICOS
• Las moléculas se mueven hasta la zona en la
que el ph es igual a su punto isoeléctrico. El PH
se crea por medio de unas sustancias
denominadas anfolitos que son ácidos
poliaminocarboxilicos.
• Ph : amplio (3 a 10) o estrechos (entre 7 y 8).
• Las técnicas de enfoque isoeléctricos tiene un
gran poder de resolución y utiliza con fines
analíticos.
ELECTROFORESIS CAPILAR
• Ventaja que se logra mayor disipación de calor,
un menor volumen del espécimen y una
anchura menor.
• Su aplicación por inyección de alto voltaje o por
inyección a presión.
• Los detectores que se utilizan son de absorción
ultravioleta o visible de fluorescencia, de
conductividad, los amperométricos y los
espectrometría de masas.
Tipos de electroforesis de capilar
• Electroforesis de capilar de zona
• Electroforesis de capilar de gel (ADN).
• Se aplica para separar proteínas en líquidos
biológicos. También automatizan
proteinogramas.
