UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Facultad de Farmacia y Bioquímica Escuela Profesional de

Farmacia y Bioquímica
INOCUIDAD DE LOS ALIMENTOS
Departamento Académico de Farmacología, Bromatología y
Toxicología
PRÁCTICA N º 2
Bacterias coliformes. Coliformes termotróficos. E. coli.
Método del Número Más Probable (NMP). Pruebas
bioquímicas de identificación
GRUPO 2
DOCENTE:
Q.F. Teresa Celina Gallardo Jugo

ALUMNA:
CARLA ISABEL LUNA MINUCHE

2020
 TÉCNICA DE LOS TUBOS MÚLTIPLES DE FERMENTACIÓN O MÉTODO DEL NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP)

1mL
1mL 1mL Anotar tubos con
producción de gas
Pipetear Incubar a
Preparar la muestra
35-37°C
y hacer las
por 24
diluciones Si no hubo producción de gas,
horas
reincubar 24h más
-1 -2 -3
Tubos LST 10mL
Inocular en caldo
La formación de gas en el Caldo CLVBB CLVBB
CLVBB
Incubar a 35 -
POSITIVO PARA 37 ºC por 24 a Aislar sobre placa
La formación de colonias negras en EMB
COLIFORMES 48 h. de
de Agar
Agar
EMB
EMB Tubo LST con g a s
Colonias rojas con haro rojo en ANDO

Referirse a la tabla NMP y notar el NMP basándose en los niveles de dilución de la muestra y el número de tubos
Obtener NMP
confirmados de cada dilución seleccionada.

NUMERACIÓN DE COLIFORMES DE ORIGEN FECAL O PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS

TERMOTRÓFICO COLIFORMES
Tubo LST con gas Tubos con caldo E.C Tubos con caldo E.C con gas
Placa EMB Agar nutitivo

Sembrar por

vo
Incubar los tubos de caldo estría

sado
nutiti
Incubar, tomar Incubar, seleccionar
EC a 44.5 ± 2º C por 24 a una colonia colonias

lacto
Agar
48 horas

o
Cald
24h después
Realizar prueba IMViC
Tubos con formación de gas. POSITIVO PARA
Anotar los positivos y referirse a COLIFORMES
la tabla del NMP TERMOTRÓFICO Para confirmar la presencia de bacilos gran
Tinción GRAM
negativo no esporulados.
 Prueba IMViC

Prueba Rojo de Prueba de Voges

Prueba de indol Prueba del citrato
Metilo Proskauer
Cultivo puro Cultivo puro Cultivo puro Cultivo puro

Incubar 35-37°C Incubar 35-37°C Incubar 35-37°C Incubar 35-37°C

por 24h por 5 días por 48 h por 48 h

Caldo triptonado Citrato de Simons

Caldo RM-VP Caldo RM-VP
inclinado

Adicionar 0.2-0.3
ml de reactivo de Separar 5 ml de cada Separar 1 ml de cada POSITIVO:
indol a cada tubo cultivo a otro tubo de cultivo a otro tubo de COLORACIÓN AZUL
ensayo ensayo

Añadir 5 gotas de Rojo Añadir 0.6mL de sol. de

POSITIVO: naphtol + 0.2mL de sol. de
de metilo y agitar
COLORACIÓN ROJA NaOH. Reposar 2-4 h

POSITIVO: POSITIVO:
COLORACIÓN ROJA COLORACIÓN
ROSADA