Antimicrobianos

y
 Antimicrobianos

• Son substancias químicas que evitan el

crecimiento o destruyen a los microorganismos
invasores del cuerpo humano o
animal, produciendo ninguna o muy baja toxicidad
sobre éstos.

• Pueden ser naturales, sintéticas o semi-sintéticas.

 Clasificación
• Quimioterapéutico
– Sustancia producida de manera sintética que posee
propiedad de inhibir el crecimiento o destruir
microorganismos

• Antibiótico
– Sustancia producida por el metabolismo de organismos
vivos, principalmente hongos microscópicos y
bacterias, que posee la propiedad de inhibir el crecimiento
o destruir microorganismos.
– Pueden modificarse para generar los semi-
sinteticos.
 Agente
efectivo:
• Toxicidad selectiva
– Esto es que mate al agente infeccioso pero no al
paciente

• Capaz de entrar en contacto con el microorganismo

penetrando células y tejidos a concentraciones
efectivas.

• No debe alterar los mecanismos de defensa

naturales del individuo.
 Afectan…
• Efecto Bacteriostático
– Inhibiendo su crecimiento y multiplicación.
– A partir de la exposición al agente bacteriostático las
células en una población susceptible cesan su división.
– Si se retira las células vuelven a multiplicarse

• Efecto bactericida
– Matar a las células
– No solo inhiben el crecimiento de las células sino que
también desencadenan mecanismos dentro de la célula
que conducen a la muerte celular.
– Sus acciones son irreversibles
 Antibioticos
• Se conocen más de 5,000 antibióticos de los cuales
– Alrededor del 75% son producidos por el género
Streptomyces

• Para que ejerza su acción es necesario que llegue al foco

infeccioso, penetre en las bacterias (por difusión o transporte
activo) y alcance intracelularmente la concentración
necesaria.

• En general cada grupo de antibióticos actúa de manera

bacteriostática o bactericida.
 Clasificación
Antibióticos
• Basado en su estructura química:
– Betalactámicos
• En su estructura tienen el anillo betalactámico compuesto por 3
átomos de C y 1 átomo de nitrógeno.
• Incluyen:
– Penicilinas
– Clavamas
– Cefalosporinas
– Monobactamas
– Carbapenemas
 Clasificación
Antibióticos
– Macrólidos
• Anilo latónico con azúcares aminados
• Pertenece :
– Eritromicina
– Aminoglicósidos
• Azúcaes aminados y un anillo llamado aminociclitol
• Pertenece:
– Estreptomicina
– Neomicina
– Tetraciclinas
• Anillo naftaleno
• Pertenece
– Tetraciclina
– Clortetraciclina
– Oxytetraciclina
– Doxiciclina
 Clasificación
Antibióticos
– Polipeptídicos
• Poseen una cadena de aminoácidos
• Debido a su toxicidad se aplican de forma tópica
• Pertenecen:
– Bacitracina
– Polimixina B
– Polienos
• Contienen 3 o más dobles enlaces
• Pertenecen:
– Nistatina
» Debido a su toxicidad se usa en tratamientos de la piel e
infecciones bucales
– Anfotericina B
» Es tóxico (causa daños en el riñón)
» Se administra monitorizado en el tratamiento de infecciones
internas fúngicas
 Espectro de
Acción
Antimicrobian
• o
Rango de actividad de un quimioterápico
• Es la diversidad de microorganismos frente a los que el
fármaco es eficaz
• Puede ser:
– Espectro Amplio
• Actividad frente a la mayoría de os grupos bacterianos
de importancia clínica
• Gram + y Gram -

– Espectro Intermedio
• Gram +
 Espectro de
Acción
Antimicrobian
– Bajo Espectro
o
• Cocos Gram +
• Bacilos Gram -

– Espectro Reducido:
• Son activos selectivamente frente a un grupo determinado de
bacterias
 Antibiograma

• Es el estudio in vitro del comportamiento de los

antimicrobianos frente a los diferentes
microorganismos

• Se trata de reproducir experimentalmente lo que

pudiera ocurrir en el huésped, sin que podemos
asegurar que su comportamiento en el paciente será
el mismo que el observado en la prueba.
 Antibiograma
• Pruebas de Sensibilidad
– La menor concentración in vitro de microorganismo y se
refiere como la concentración minima inhibitoria (CMI)
– Punto de Corte (breakpoint)
• Es la concentración del antimicrobiano que defina las
categorías de resistente y sensible para cada
antimicrobiano
• Debe ser menos que el nivel del antimicrobiano
accesible en la sangre o tejidos
 Antibiograma
• Hay diferentes técnicas de laboratorio
– Métodos manuales
– Métodos automatizados
– Métodos semiautomatizados

• Estos diferentes métodos de rutina permiten categorizar una cierta cepa bacteriana en
función de su sensibilidad frente al antibiótico probado.

• Esta cepa se denomina:

– Sensible (S):
• si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso de un
tratamiento a la dosis habitual.
– Intermedia (I):
• cuando el éxito terapéutico es imprevisible. Se puede conseguir efecto
terapéutico en ciertas condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento
de la posología).
– Resistente (R)
• si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy reducida. No es de
esperar ningún efecto terapéutico sea cual fuere el tipo de
tratamiento.
 Antibiograma
• Ciertos mecanismos de resistencia se expresan débilmente in
vitro, cuando se inscriben en el DNA bacteriano.

• Su expresión en el organismo, en donde las condiciones en cuanto a

medios son diferentes, expondría al riesgo de fracaso terapéutico.

• Para evitar esto, el antibiograma debe ser interpretado de manera global a

fin de descubrir, a través de la comparación de las respuestas para cada
antibiótico, un mecanismo de resistencia incluso débilmente expresado.

• Gracias a la interpretación, una cepa que aparece como falsamente

sensible será categorizada como I o R
 Resistencia
bacteriana
• Cada antibiótico se caracteriza por un espectro natural de actividad
antibacteriana.
– Este espectro comprende las especies bacterianas que, en su estado
natural, sufren una inhibición de su crecimiento por concentraciones
de su antibiótico susceptibles de ser alcanzadas in vivo.
– Las especies bacterianas que no se encuentran incluidas dentro de
dicho espectro se denominan naturalmente resistentes.
• Presión de selección.
– El antibiótico no crea resistencia, pero selecciona las bacterias
resistentes eliminando las sensibles.
• El aumento de la frecuencia de las cepas resistentes va unido casi
siempre
al uso intensivo del antibiótico en cuestión.
 Resistencia
bacteriana
• Resistencia Natural
– Es un carácter constante de todas las cepas de una misma especie
bacteriana.
– El conocimiento de las resistencias naturales permite prever la
inactividad de la molécula frente a bacterias identificadas o
sospechosas.
• Resistencia adquirida
– Es una característica propia de ciertas cepas, dentro de una especie
bacteriana naturalmente sensible, cuyo patrimonio genético ha sido
modificado por mutación o adquisición de genes.
– Contrariamente a las resistencias naturales, las resistencias adquiridas
son evolutivas, y su frecuencia depende a menudo de la utilización de
los antibióticos.
 Resistencia
bacteriana
• Resistencia Cruzada
– Es cuando se debe a un mismo mecanismo de resistencia.
– En general, afecta a varios antibióticos dentro de una misma familia
– En ciertos casos, puede afectar a antibióticos de familias diferentes

• Resistencia Asociada
– Es cuando afecta a varios antibióticos de familias diferentes.
– En general, se debe a la asociación de varios mecanismos de
resistencia
ETAPA PRE-ANALÍTICA
 Cuando
solicitar un
antibiograma
 Dx de un agente patógeno

 Terapia antimicrobiana dirigida

 Conocer el fenotipo de sensibilidad de un microorganismo

 Perfil epidemiológico institucional

 Seguimiento y análisis de brotes

 Estudio intrahospitalario 

*No realizarse sobre flora

bacteriana normal*
 Muestras para antibiograma 

Se puede hacer un cultivo de diferentes muestras corporales.

 • Sangre. Generalmente, se extraen dos muestras de dos lugares distintos del

cuerpo. Para extraer las muestras, se sigue la técnica de extracción sanguíena. 
 • Orina. La muestra de orina  se junta en un recipiente estéril. Por técnica de
chorro medio, cateterismo o punción suprapúbica. 
•Heces. La muestra fecal se junta en un recipiente igualmente estéril mediante
la técnica de recolección de heces.
• Secreciones pulmonares (esputo). Por lo general, para obtener esta muestra,
deberá toser en un recipiente estéril.
•Saliva. Toma de muestra mediante hisopado en la parte interna de las mejillas.
• Tejido blando y de la herida. Generalmente, la muestra se obtiene mediante
el hisopado del líquido que sale de la herida. 
ETAPA ANALÍTICA
Métodos para determinar la susceptivilidad susceptibilidad
microorganismos a los antimicrobianos
 Método de difusión 
El inoculo se siembra en la superficie del agar y se colocan
discos de papel filtro con concentraciones definidas del
antibiótico. Durante la incubación el antibiótico difunde en el
agar y se produce un halo de inhibición.
 De esta forma la CMI se determina en forma indirecta al
medir los halos o zonas de inhibición del microorganismo.
 Método de dilución
Determinan la concentración mínima inhibitoria (CMI) en forma
directa mediante el uso de diluciones seriadas del antimicrobiano
en concentraciones del rango terapéutico en forma decreciente,
añadido al medio de cultivo inoculado con el microorganismo a
probar, los cuales se incuban a temperatura y tiempo determinado. 
De esta forma la CMI estará en aquella dilución en donde no se
presente desarrollo microbiano evidente.
 Método de microdilución 

Este método se denomina microdilución porque involucra

pequeños volúmenes de caldo. La prueba se realiza en
policubetas de plástico estériles de fondo cónico o redondo,
cada pocillo debe contener 0,1 ml de caldo.
 Etapa analítica
Método Agar Tiempo de Temperatura  Procedimiento
incubación

Difusión Müeller- 18-24hrs 35°C

Hinton en
placa

Dilución Müeller- 18-24hrs 35°C

Hinton

Microdilu Müeller- 18-24hrs 35°C

ción Hinton
 Fundamento del método de difusión

Preparación de la placa:
• Inóculo llevado a una concentración igual a la del estándar  0.5
de McFarlane que corresponde aun diámetro de1.5 x10
UFC/ML, directo en caldo de colonias frescas en agar no
selectivo.
• Agar Müller-Hinton con pH de 7.2-7.4va temperatura
ambiente.
• Profundidad del Agar : La profundidad recomendada de la
capa de agar es de 3 a 5 mm.

Inoculación de la placa: Con un hisopo estéril en tres direcciones

inocule toda la placa (giros de 60°).

Aplicación de sensidiscos y separación: los discos deben de estar

separados24 mm (del centro de un sensidisco al otro más
cercano). Cantidad: 12 unidades en placas de 150mm y 5
unidades en placas se 100mm.
 Fundamento del método de difusión

Medición de los halos: Después de incuba las placas del antibiograma se

procederá a la lectura de este. Se usa una regla y se mide el radio del halo
de inhibición partiendo de desde donde está el disco de antibiótico hasta
donde se inhibió el crecimiento.
La longitud obtenida después se compararán con estándares que nos dirán
si el medicamento será efectivo o no en el tratamiento.
 Fundamento del método de dilución

• Se preparan tubos con concentración definida

de antibiótico y se agrega a cada tubo una
cantidad conocida del agar Müeller-Hinton,  se
homogeniza y se chorrea en una placa de Petri
vacía con lo que se logra una placa de agar
Müeller-Hinton con el antibiótico diluido.

• Se inicia a una concentración de 128 ug/ml y se

hacen diluciones dobles hasta obtener el
gradiente decreciente en la concentración de
antibiótico.

•  Adicional a esto, se inocula una placa de

Müeller-Hinton sin antibiótico, que sirve como
control positivo de crecimiento.
 Fundamento del método de microdilución

• Se emplean placas plásticas, estériles, con tapa, de 96 pozos y un fondo en

U. Cada placa permite realizar una CMI de un antibiótico a ocho cepas diferentes,
o una CMI de una cepa contra ocho diferentes antibióticos.

• Se parte de una solución madre que se debe diluir en las condiciones adecuadas
para cada antibiótico, la cual es diferente para cada antibiótico y su escogencia
depende del tipo de antibiótico y la cepa a probar.

• Colocar 50 ul del medio de cultivo en cada uno de los pozos de

la placa a emplear. Luego se colocan 50 ul de la solución madre del antibiótico,
teniendo en cuenta que estamos haciendo una dilución 1: 2, posteriormente
procedemos a realizar diluciones dobles hasta los pozos 10, dejando el 11 como
control de crecimiento negativo y al pozo 12 de control positivo de crecimiento. 
• El control positivo tiene medio de cultivo más el inóculo bacteriano y el
control negativo tiene medio de cultivo y antibiótico, para un volumen
final de 100 ul en ambos pozos.

• En los pozos de 1 a 10 (con excepción de pozos 11 y 12), colocamos 50 ul

de la solución madre en el primer pozo y realizamos diluciones dobles
hasta el pozo 10 del cual eliminamos 50 ul, siempre para un volumen hasta
el momento de 50 ul en cada pozo. Por último se colocan 50 ul del inóculo
bacteriano estandarizado.
ETAPA POST-ANALÍTICA
 ¿Cómo se
informa la CMI?

 Al lado de cada antibiótico se indica la interpretación de la sensibilidad:

 S (sensible)
 I (intermedia)
 R (resistente)
 Lo anterior seguido de la CMI en μg/ml.
 “Sensible” significa que el crecimiento del microorganismo está
inhibido a la concentración sérica del fármaco que se alcanza utilizando
la dosis habitual
 “Intermedia" significa que el crecimiento del microorganismo está
inhibido solamente a la dosis máxima recomendada
 “Resistente" significa que el microorganismo es resistente a los niveles
séricos del fármaco que se alcanzan normalmente.
 Bibliografía
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