Pruebas Serológicas: Fiebres y Sífilis
Pruebas Serológicas: Fiebres y Sífilis
PRUEBAS DIRECTAS
Son aquellas que basadas en el
principio de la reacción antígeno
anticuerpo investigan la presencia del PRUEBA PRIMARIA
antígeno. Son aquellas en las cuales la reacción
antígeno anticuerpo no da lugar a ninguna
CLASES DE manifestación visible
PRUEBA INDIRECTA
PRUEBAS Son aquellas en las cuales la reacción
antígeno-anticuerpo da lugar a una ma-
SEROLÓGICAS nifestación visible lo cual-permite una
lectura visual macroscópica. Su
PRUEBAS SECUNDARIAS
realización usualmente es simple. Son aquellas en las cuales la reacción
antígeno-anticuerpo da lugar a una
manifestación visible lo cual- permite
una lectura visual macroscópica
PRUEBAS SEROLOGICAS
DETERMINACION DE
FIEBRE TIFOIDEA,
PARATIFOIDEA Y MALTA
NOCION DE DIFERENCIAS
ENTRE ESTOS 3 TIPOS DE
FIEBRES
TIFOIDEA
La fiebre tifoidea se propaga por vía entérica y causa fiebre y otros síntomas
generales (p. ej., dolor de cabeza, artralgias, anorexia, dolor abdominal y
sensibilidad); en etapas posteriores de la enfermedad, algunos pacientes
desarrollan diarrea grave a veces con sangre, una erupción característica
(manchas rosa), o ambas.
En ocasiones, la bacteriemia causa infecciones focales (p. ej., osteomielitis,
endocarditis, meningitis, abscesos de los tejidos blandos, glomerulitis).
Un estado de portador crónico se desarrolla en un 3% de los pacientes no
tratados; estos albergan microorganismos en su vesícula biliar y los diseminan
en las heces durante más de 1 año.
Diagnosticar con hemocultivos y coprocultivos; como es frecuente la resistencia
a fármacos, las pruebas de susceptibilidad son esenciales.
Tratar con ceftriaxona, una fluoroquinolona o azitromicina, según las pruebas de
sensibilidad; pueden administrarse corticoesteroides para aliviar los síntomas
graves.
PARATIFOIDEA
Moldadientes
REACTIVOS
TÉCNICA OPERATORIA
1. Se realiza diluciones de 1/10, 1/20, 1/40, 1/80 y 1/160 del suero en agua
fisiológica.
2. Para cada suspensión, añadir a una serie de tubos: 0,1 ml de cada dilución
del suero, 0,9 ml de suspensión.
3. Incubar en un baño de agua o incubadora a 37°C, durante 2 horas
4. Al final después del periodo de incubación examinar los tubos que
contienen la suspensión H: puede observarse una aglutinación H que es
coposa y fácilmente disociable.
5. Los tubos que contienen suspensiones O se dejan a temperatura ambiente
(18-30°C) hasta el día siguiente
6. Después de ese tiempo se observa que la aglutinación es fina, granular y
difícil de disociar.
TÉCNICA DE
CENTRIFUGACIÓN RAPIDA
FUNDAMENTO
PROCEDIMIENTO:
Lectura: La reacción es
positiva cuando aparece
aglutinación en uno de los 5
cuadrados.
Se preparan 5 cuadrados limpios
y con una pipeta depositar en
[Link] de titulación: cada uno el volumen de suero:
0,08, 0,04, 0,02, 0,01 y 0,005
mL de suero respectivamente
Titulo
1/40 o 1/80 Sospechoso de tener la
Los resultados se expresan en enfermedad
términos de la más alta
1/80 a mas Considerados probatorias
dilución que presenta de enfermedades
aglutinación.
PRUEBAS SEROLOGICAS PARA DIAGNOSTICO DE SIFILIS
MICROSCOPIA MICROPIPETA
BAÑO MARIA
REACTIVOS
FUNDAMENTO
Limitaciones de la técnica
a. Puede producirse un fenómeno de prozona, en el
cual la reactividad de un suero no diluido se ve
inhibida.
b. Puede producirse falsos positivos en muestras de
personas o pacientes que usan:
Narcóticos
Padecen de lupus eritematoso,
Malaria,
Lepra,
Neumonía viral.
TECNICAS NO TREPONEMICAS
RPR
Prueba floculación macroscópica.
Utiliza un antígeno que es una modificación del antígeno de VDRL.
Muestra en suero y plasma
Positivo: Aglutinación franca
Negativo: No aglutinación
Fundamento
Las reaginas plasmáticas, anticuerpos dirigidos contra antígenos derivados de fuentes no
treponémicas, producen agregaciones con el antígeno, coaglutinando con las partículas de
carbón
TECNICAS NO TREPONEMICAS
RPR
Limitaciones
Pueden aparecer falsos negativos en sífilis primaria temprana y en sífilis tardía, o también debido a fenómenos
de prozona.
No utilizar con líquido cefalorraquídeo
Se han descrito con antígenos cardiolipínicos falsas positividades en enfermedades tales como:
TECNICA TREPONEMICA
Limitaciones de la prueba
a. La prueba de MHA-TP, tiene una sensibilidad de 98-99%frente a la FTA-Abs.
b. No debe ser utilizada para evaluación de tratamiento
c. Puede ser reactiva en pequeño porcentaje (1%) en personas sanas
d. En suero de personas con Mononucleosis, Lepra y enfermedades autoinmunes,
puede dar falsos positivos.
TECNICA TREPONEMICA
FTA-ABS
Es una prueba de anticuerpos fluorescentes indirecta
Empleada como examen confirmatorio (FTA-Abs y MHA-Tp)
Es un examen cualitativo
Permanece positiva de por vida
Es útil en todas las etapas de la enfermedad
Es una técnica compleja y de alto costo, se requiere equipamiento y personal adiestrado
TECNICA TREPONEMICA
FTA-ABS
Fundamento
Es una prueba de inmunofluorescencia indirecta, en la que el suero problema,
es diluido en una solución absorbente(extracto de cultivo de Treponema
phagedenis),y colocado en una lámina que contiene el antígeno(Treponema
pallidium cepa Nichols).Si en el suero se encuentran anticuerpos contra
treponemas patógenos, estos se unirán al antígeno y cuando se adiciona el
conjugado(inmunoglobulina antihumana con isotiocianato de
fluoresceína)este se unirá al anticuerpo dando como resultado una reacción
que se visualiza en el microscopio de fluorescencia
TECNICA TREPONEMICA
ELISA
Sifilis Sifilis
Sifilis Sifilis
lis li
s
fi fi
Si Si
1 2 3
Cortar una tira Añadir la sangre del Inmediatamente
por capilar apoyando agregar 1
la línea sobre la superficie y gota de
Resu ltado positivo Resultado Resultado punteada. esperar hasta que se buffer.
Dos bandas rojas de negativo invAlido Retirar el plástico impregne.
cualquier intensidad en las cobertor.
Una banda roja en la ventana Ausencia de banda en la
Colocar la tira
ventanas de control y de control y ausencia de ventana de control. Repetir en un lugar
paciente. banda en la ventana de el ensayo con una nueva plano.
paciente. tira, incluso si aparece una
banda en la ventana del ,
paciente.
positivo negativo invalido
,
Guia de l a i n te n s i d a d
de l a s b a r r a s p a r a E s c a l a ,de i n t e n s id a d d e Si fili s Sifilis Sifilis Sifilis
determinar e l lin ea de prs
resultado:
Cualquier tipo de tonalidad roja
que
pueda aparecer en la ventana de
resultados indica que el resultado
00:15
es positivo. El resultado es
0 1 2 3 4
positivo aunque la barra de la
ventana de resultados sea más
clara o más oscura que la barra negativo positivo
de la ventana de control.
4 5
21. Registre los resultados en la “Planilla de resultados de prueba rápida” Esperar al menos 15 Interpretación de
minutos los resultados.
para leer el resultado.
22. Descarte la tira, algodón y gasa como residuos patogénicos, en una bolsa
roja.
PRIMER NIVEL ATENCIÓN (PNA)
1.- Pruebas Rápidas 3.- Pruebas Rápidas PRS en el PDA
en el punto de P R S en el P N A Si se sospecha:
Sífilis primaria
en el punto de Si se
sospecha:
Sífilis
atención asociado
reciente atención, para nivel de primaria
(repetir entre las Iniciar
PRIMER NIVEL O
Iniciar
tratamiento Positiva Negativa 2 y 4 semanas Atención Primaria de tratamiento Positiva Negativa reciente
a algoritmo la PRS) (repetir
la Salud con posibi- entre las
2y4
tradicional. lidad de realizar Sífilis actual Descarta semanas
Sífilis actual o pasada Descarta SIFILIS
PDA
la PRS)
Prueba No o pasada SIFILIS
Treponémica
El laboratorio únicamente.
debe PNT 1
PNT 1
cuantificar
sin
LABORATORIO
la prosecución de la PT, pues de otro
de (repetir entre
modo el algoritmo tradicional
terminará en ese infección, SIFILIS SIFILIS las 2 y 4
repertir a
Tratar y actual
punto . Se sugiere la inscripción (“PRS + C onfirma SIFILIS semanas la
LABORATORIO
Tratar y Descarta Descarta notificar
ó PRS -) en la solicitud médica .
notificar SIFILIS
SIFILIS
pasada
SIFILIS
las 2
SN VS 2.0 o PNT)
actual o o muy semanas
SN V S 2.0 reciente. o
pasada
pasada. Evaluar. derivar
al LNR 1 Para definir infección activa y seguimiento
del tratamiento.
PRIMER NIVEL DE ATENCION (PNA)
2 .-Pruebas Rápidas
en el punto de P R S en el PDA Si se sospecha: .4 -Prueba Rápida en
atención asociado Sífilis primaria
reciente el punto de atención,
PRS en el PDA Sospecha de
(repetir entre las • Sífilis primaria
a algoritmo Iniciar
Positiva Negativa 2 y 4 semanas para nivel de APS sin (repetir entre
tratamiento
Tratar y las 2 y 4
reverso. la PRS)
Guía para la utilizaciónde pruebas rápidas deposibilidad de realizar notificar
SN VS 2.0
Positiva Negativa semanas la
PRS)
Sífilis actual o pasada Descarta SIFILIS Prueba No • Con clínica
sífilis compatible,
Treponémica tratar
Sífilis actual Descarta
o pasada SIFILIS
El PT En caso de
duda
laboratorio diagnóstica Consideraciones
LABORATORIO NIVEL
de por sospecha
be Positiva Negativa de infección, La muestra no reactiva en la prueba rápida inicial se define como: “muestra no reactiva para sífilis”. Si persiste la sospecha
cuantificar repertir a las
sin 2 semanas o
clínica de sífilis se deberá repetir el algoritmo entre las 2 y las 4 semanas después, para la exclusión del diagnóstico (esto
esperar la derivar al LNR dependerá del periodo de incubación de la enfermedad, ya que la respuesta humoral puede ser entre 17 y 118 días desde el
solicitud
médica
PNT 1 Falso positivo
de la PRS. inicio de la infección).
No tratar. No La muestra con resultados reactivos en las dos pruebas (PRS y prueba no treponémica), se define como: “muestra
seguir
III
reactiva para sífilis”. En ese caso se deberán cuantificar los anticuerpos no treponémicos (Algoritmo 4.2.3).
Reactiva NO Reactiva Por discordancia
previo diferente PT (TP - En las muestras con resultados discordantes se deberá realizar una prueba treponémica diferente a la PRS (FTA-abs, TP-
Tratar y
PA) PA, TP-HA), para descartar un falso positivo en la PRS (Algoritmo 4.2.1).
notificar
SN V S 2.0 Confirma Confirma
Positivo Negativo Muestras con resultados reactivos en dos pruebas treponémicas de distinta metodología y no reactivas en pruebas no
SIFILIS SIFILIS
actual o actual o trepo- némicas se definen como: “muestra reactiva para sífilis” (Algoritmos 4.2.1 y 4.2.2).
Falso positivo de la PRS y
pasada pasada CIA. No tratar. No
seguir
PRUEBA DE CAMPO OSCURO
VDRL
TREPONEMA PALLIDUM
• INMUNOLOGIA – V.D.R.L. Y
R.P.R
SÍFILIS: Diagnostico laboratorio
Identificación del T. pallidum
• Microscopio de campo oscuro
• Espiroqueta : 0.1 a 0.2 X 6 – 20 um.
• Movimiento rotacional
• Raspados del chancro duro
• No útil en lesiones de boca
• PCR
• Biopsia
PRUEBA V.D.R.L.
SEROLOGICAS (V.D.R.L.) CUALITATIVO
1. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS.
Antígeno no Treponémico El antígeno de V.D.R.L. no es necesario
preparar todo el frasco de 500 pruebas, por
que una ves preparado tiene una duración
máxima de 48 horas.
Ejemplo:
1) 1 ml. solución buffer salina, 20
gotas antígeno (P/ 50 pruebas)
2) 0.5 ml. solución buffer salina 10
gotas antígeno (P/25 pruebas)
REACTIVO DE V. D. R. L.
3) 0.25 ml. solución buffer salina 05
1. SEROLOGICAS (V.D.R.L.).
gotas
• COMPONENTES:
antígeno (P/12 pruebas)
Muestra:
– Lecitina
– Cardiolipina –Suero o plasma
– Colesterol –ANTIGENO
– Buffer – 20 l para cada
PROCEDIMIENTO:
1. Extraer sangre venosa 2 ml. aproximadamente
con anticoagulante o sin anticoagulante.
2. Centrifugar cuidadosamente a 2,500 r.p.m. por
5 minutos.
3. Inactivar el suero a 56 por 30 minutos en
baño María.(VDRL)
4. Tomar el suero inactivado 50 l. en una
superficie plano con anillo y una gota de
antígeno preparado con una aguja calibre Nº
l8.
5. Homogeneizar y colocar la lámina en un
rotador eléctrico por 4 minutos a l80 Rpm.
180 r p m
6. Lectura al microscopio con lente de 40 x.
METODOLOGIA - REPORTE DE RESULTADOS
• REPORTE DE RESULTADOS
• Reactivo: Grumos medianos a grandes
• Reactivo Débil: Grumos pequeños con partículas de antígeno libre.
• No Reactivo: Sin grumos (antígeno libre)
PRUEBA DE V.D.R.L. CUANTITATIVO
Numerar 5 tubos y colocar en tubos del 1º al 5º
0.5 ml. de suero fisiológico.
[Link] el 1º tubo colocar 0.5 ml de suero problema,
homogeneizar y tomar 0.5 ml para el 2º tubo,
homogeneizar y tomar 0.5 para el tercer tubo y así
sucesivamente hasta el 5º tubo.
[Link] esta manera tenemos que las diluciones del suero
están en orden creciente, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32
diluciones.
[Link] el contenido de cada tubo, realizar el mismo
procedimiento que para una prueba cualitativa. 0.5 ml
[Link] 01 gota de antígeno a cada uno de los
círculos del 1º al 5º , homogeneizar y rotar por 8 1 2 3 4 5
minutos.
[Link] lectura sigue los mismos parámetros que para 0
.
la 5
prueba cualitativa.
SUERO H
SUERO
[Link] el título en términos de la más alta dilución FISIOLOG SUERO F
HOMOGENIZAR Y RETIRAR
PARA EL TUBO 1, 0.5
en que se produzca un resultado reactivo (Reactivo .
ml. Y PARA T. 2 ,3 Y ASI
débil) . SUCESIVAMENTE
INTERPRETACION DE RESULTADOS PRUEBAS NO
TREPONEMAICAS
RD N N N N REACTIVO 2 DILS.
R R N N N REACTIVO 4 DILS.
R R R N N REACTIVO 8 DILS.
R R R R N REACTIVO 16 DILS.
R R R R R REACTIVO 32 DILS.
COMPONENTES
• Cardiolipina
– Lecitina
– Colesterol
– EDTA
– Acetil colina
– Carbón
R. P. R.
(REAGINA PLASMATICA
RAPIDA).
PRUEBA DE R.P.R. SEMICUANTITATIVO
1. Colocar 50 l. de suero fisiológico al 0.9 % del 1º al 5º
círculo de la tarjeta
[Link] 50 l. del suero problema en el primer círculo,
mezcle bien y luego transfiera 50 l. al segundo
círculo mezcle bien y transfiera 50 l. al tercero
círculo, mezcle bien y transfiera 50 l. al 4º y 5º círculo,
mezcle y descarte 50 l. del último círculo.
[Link] un aplicador, extienda la mezcla en cada
círculo comenzando en el 5º y terminando en el 1º
círculo.
4. Adicionar 01 gota de antígeno a cada uno de los círculos
del 1º al 5º , homogeneizar y rotar por 8 minutos.
[Link] lectura sigue los mismos parámetros que para la
prueba cualitativa.
6. Reportar el título en términos de la más alta dilución
en
PRUEBA DE R.P.R. SEMICUANTITATIVO
SUERO
FISIOLOG.
50 ul
50 ul
100 ul
1 2 3 5
4
Suero fisiolog.50 ul
Suero humano 50 ul.
Sífilis < 1 (o Pen. G benzatínica 2,4 MUI -tetraciclina 500 mg c/6 h. (o 3-6-12 meses
2) años i/m en dosis única. doxiciclina 100 mg c/12 h) v/o
Puede repetirse a la semana, por 14 d.
especialmente - o ceftriaxone 1 g i/m o i/v 10
en d.
ambarazada o no adherente a
controles
Sífilis > 1 (o Pen. G benzatínica 7,2 MUI - tetraciclina 500 mg c/6 h. (o 3-6-12 meses
2) años i/m en 3 dosis, con 1 semana doxiciclina 100 mg c/12 h.
no de intervalo v/o, 28 d.
neurosífilis