CHAGAS IgG
HEMAGLUTINACION INDIRECTA
(POLYCHACO)
OBJETIVO Detectar anticuerpos específicos presentes en los sueros
humanos anti-TrYpanosoma cruzi
ALCANCE Abarca a la muestra junto a su pedido de análisis
DEFINICIONES H.A.I. Chagas: Hemaglutinación indirecta de Chagas
VALOR CLINICO La enfermedad de Chagas es una infección parasitaria
producida por el Trypanosoma cruzi. En la mayoría de los
casos la enfermedad evoluciona hacia la fase crónica. El
diagnostico de laboratorio depende del estadio en el cual se
encuentra la enfermedad. Durante la fase aguda, el
diagnostico se efectúa mediante la comprobación de los
parásitos en sangre. Durante la fase crónica
Se usan métodos serológicos como prueba de screening
FUNDAMENTO
La prueba de Hemaglutinación Indirecta para Chagas
consiste en una suspensión estabilizada de hematíes de
carnero sensibilizados con antígeno de Trypanosoma cruzi,
los cuales se aglutinan en presencia de diluciones de
sueros humanos de animales que contengan anticuerpos
específicos. Los anticuerpos específicos contra
Trypanosoma cruzi, presumiblemente presentes en el
suero en estudio, aglutinan al antígeno fijado a la
superficie de los glóbulos rojos estabilizados, los cuales
sedimentan formando un manto en el fondo del pocillo de
la micro placa.
MUESTRA REQUERIDA
Tipo Suero o plasma heparinizado estrictamente frescos y
límpidos.
Cantidad 10 ul
Recolección En tubo seco (sin anticoagulante) o con heparina
Conservación Hasta 72 horas a 2-8ºC; tiempo prolongado a -20ºC
REACTIVOS
Listado de reactivos:
1. Antígeno, suspensión estabilizada de hematíes de carnero sensibilizadas con
antígenos de Trypanosoma cruzi
2. Diluente de muestras: solución salina isotónica, con adsorentes y conservadores.
3. Solución protéica: solución proteica estabilizada.
4. Hematíes no sensibilizadas: suspensión estabilizada de hematíes de carnero no
sencibilizados. Para control de heterofilia.
5. Control positivo: suero reactivo para anticuerpos contra Trypanosoma cruzi.
6. Control negativo: suero no reactivo,para anticuerpos contra Trypanosoma cruzi.
Preparación de a. Solución diluyente de muestras
reactivos - 1000 ul de diluyente de muestra
- 50 ul de Solución Proteica
b. Los reactivos listos para usar. Sólo mezclar bien antes de uso
Conservación de 2 a 8ºC. NO CONGELAR, estable solo por 2 dias.
reactivos
MATERIALES Micropipetas de 10 a 100 ul., tips, pipeta de 1 ml, cronómetro,
policubetas
EQUIPOS Espejo para lectura de policubetas (opcional)
Procedimiento Cualitativa:
Desarrollo 1.- Colocar en los primeros pocillos (1A, 2A, 3A…) 70 μl de diluyente de muestra
manual (ya preparado) utilizando una micropipeta calibrada.
2.- Colocar 25 μl de diluyente de muestra a los siguientes pocillos, hasta la
dilución (titulo) que se desea investigar (1B - 1D).
3.- Colocar 10 μl de la muestra problema (suero o plasma) o de los controles al
primer pocillo (1A, 2A, 3A...) (dilución 1/8). Con una pipeta calibrada para 25 μl,
homogeneizar la muestra. Transferir 25 μl a la fila siguiente y repetir la misma
operación hasta la dilución deseada (dilución 1/16, 1/32, 1/64, etc.) desechando
los últimos 25 μl.
Inicio de la reacción con los glóbulos rojos no sensibilizados y el antígeno
4.- Agitar bien los frascos de hematíes no sensibilizados y Antígeno (hematíes
sensibilizados).
5.- Depositar 25μl de Hematíes no sensibilizados al pocillo 1A (dilución 1/8).
6.- Depositar 25μl de antígeno a cada uno de los restantes pocillos 1B, 1C, 1D,
2B, 2C, 2D... (Dilución 1/16 hasta 1/64 o superior).
7.- Agitar la placa golpeando con los dedos sobre sus paredes laterales durante
no menos de 30 segundos.
8.- Tapar la placa para evitar evaporación y contaminación.
9.- Dejar la placa en reposo evitando vibraciones o movimientos bruscos, que
pueden dar lugar a reacciones falsas negativas
10.- Leer preferentemente después de 2 horas de incubación a temperatura
ambiente.
Resultados posibles
1.- Reacción positiva formación de un manto de aglutinación rojo tenue debido a
la formación del complejo antígeno-anticuerpo. (Reacción que cubre más del 50%
del fondo del pocillo). Importante informa heterofilia si se observa reacción en dil
1/8.
2.- Reacción negativa formación de un botón nítido rojo intenso y uniforme,
debido a la sedimentación de los glóbulos rojos sensibilizados (antígeno).
3.- Reacción indeterminada la formación del botón no es nítida o cuando el manto
CONTROL DE CALIDAD
Control de calidad Incluir controles positivos, negativos (del
interno kit) y control interno del laboratorio.
Criterios de Para la validación de los resultados,
verificación procesar en duplicado
REPORTES DE RESULTADOS
El HAI puede ser cualitativo, utilizando una sola dilución
del suero o muestra, generalmente la dilución de 1/16,
obteniéndose un resultado cualitativo positivo o negativo.
VALORES DE REFERENCIA
REACCIÓN NEGATIVA
INTERPRETACIÓN CLINICA
Se reportan resultados positivos a partir de la
dilución 1/16. Con la recomendación de
confirmar con otro método de principio
diferente.
TITULO SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD
8 100% 95%
16 98% 99%
LIMITACIONES PARA EL PROCEDIMIENTO
Interferencias Ver inserto del kit
y
precauciones
IA S
RA C
G
