MGA 0361 UV-Vis Hernández Pérez Manuel
Espectrofotomet
ría ultra violeta
visible
• La espectrofotometría se basa en la
medida de la absorción, por las diferentes
sustancias, de una radiación
electromagnética de longitudes de onda
situadas en una banda definida y
estrecha, esencialmente monocromática.
• puede considerarse como si estuviera
constituido par dos zonas, la ultravioleta
de 190 a 380 nm y la visible de 380 a 780
nm.
• En general, los espectros ultravioleta y visible de una sustancia,
• no tienen un alto grado de especificidad,
• sin embargo son muy adecuados para las valoraciones cuantitativas
La disminución de la energía de radiación monocromática que pasa a través de un media
absorbente homogéneo, se establece cuantitativamente por la ley de Beer:
• A = abc = I0g 10(1/T)
Donde:
A = Absorbancia: logaritmo en base 10 del inverso de la transmitancia (T).
Entre los términos descriptivos usados anteriormente se incluyen densidad
óptica y extinción.
a = Absortividad: cociente de dividir la absorbancia (A) entre el producto de
la concentración de la sustancia (c), y la longitud de la trayectoria de la
energía luminosa (b).
• b = Longitud de la trayectoria de la energía luminosa expresada en
centímetros.
• c = Concentración de la sustancia expresada en gramos por litro.
• T = Transmitancia: cociente de dividir Ia energia radiante transmitida
por la sustancia presente en el medio entre la energía radiante
incidente.
• Espectro de absorción, es la representación grafica de la absorbancia, o de cualquier función de la
absorbancia, trazada contra la longitud de onda o contra una función de longitud de onda.
REACTIVOS.
• Para las identificaciones y valoraciones por espectrofotometría de
absorción ultravioleta y visible pueden emplearse muchos disolventes
• agua,
• alcoholes,
• cloroformo,
• hidrocarburos ligeros,
• éteres Habitualmente se recomienda usar como
disolvente metanol o alcohol anhidro o alcohol
• soluciones diluidas de acido desnaturalizado por la adición de metanol, pero
• álcalis fuertes. que no contenga benceno u otras impurezas
que interfieran.
Aparato
• Todos los tipos de espectrofotómetros están
diseñados de modo que permitan el paso de la
energía radiante esencialmente monocromática a
través de la sustancia convenientemente
preparada y hagan posible la medición de la
fracción de la intensidad de la radiación
transmitida.
• por ejemplo un prisma o una gratícula (rejilla de
difracción), para seleccionar la banda de
longitudes de onda, de un detector de la energía
radiante, amplificadores asociados y dispositivos
de medición y registro.
Procedimiento para la identificación
01 02 03
Requieren el empleo de Estas condiciones incluyen Después de correr el
sustancias de referencia. el establecimiento de la espectro de absorción de la
sustancia de referencia,
• debe prepararse longitud de onda, ajuste de correr el espectro de
simultáneamente en Ia amplitud de Ia rendija, la absorción de la preparación
condiciones idénticas y a la colocación y corrección de de la muestra, tan
misma concentración a las
empleadas en la sustancia la celda y los niveles de rápidamente como sea
problema. transmitancia. posible.
Procedimiento para
cuantificación
• Primero con la sustancia de referencia luego con la
sustancia de muestra.
• En la practica, se recomienda emplear la longitud
de onda máxima observada realmente en el
instrumento utilizado, siempre que la diferencia
entre esta y la indicada en la monografía del
producto no pase
• de ± 0.5 nm en el intervalo de 240 a 280 nm,
• de ± 1.0 nm en el intervalo de 280 a 320 nm,
• de ± 2.0 nm en el intervalo de 320 a 380 nm
• de ± 5.0 nm en el intervalo de 380 a 700 nm;
• si la diferencia es mayor debe
recalibrarse el aparato.
Expresión de resultado para
identificación
• Para realizar la identificación de las sustancia problema
mediante el cociente de absorbancias, obtener las
absorbancias a las dos diferentes longitudes de onda,
indicadas en la monografía correspondiente, y calcular con
la siguiente formula:
• EI cociente de absorbancias obtenido, debe estar
comprendido dentro del intervalo establecido en
la monografía del producto.
