Dra. Mgs.

Gabriela Prado Gumiel

 “Es la aplicación de los
métodos y técnicas del
análisis químico para
detectar, identificar y
cuantificar la presencia de
sustancias, que en
determinadas circunstancias
pueden originar, o han
producido, daños a los seres
vivos.”“Menéndez M. y cols. Tendencias en
Toxicología Analítica”; M. Repetto (ed)Postgrado de
Toxicología. Ilustre Colegio Oficial de Químicos.
Sevilla. CD-ROM. 2008”.
 Permite en la
intoxicaciones:
› diagnosticar y/o
confirmar los tóxicos
responsables;
› establecer un correcto
pronóstico del problema.
Adquiere función de Vigilancia de:
-La eficacia de ciertos tratamiento o
técnicas de eliminación;
-Drogas susceptibles de abuso;
-Drogas terapéuticas;
-Exposición laboral;
-Exposición medioambiental a
sustancias químicas.
Además:
En toxicología forense, comprende el uso de la
toxicología para los propósitos de la ley determinando:
- la presencia de drogas o sus metabolitos en fluidos o
tejidos humanos ,
- evaluando su contribución en la causa de muerte o
lesión sobre seres humanos.
En colaboración con centros de información toxicología
puede desarrollar investigaciones sobre la
toxicocinética y los mecanismos de toxicidad .
El análisis toxicológicos es una
sistemática de trabajo, de dos pasos:
 Análisis preliminar, generales u
orientación: Sensibles, detectan
varias sustancias a la vez , identifica
al tóxico durante los primeros minutos
del análisis. Ejemplo: técnicas
inmunocromatográficas
Confirmación de identidad y
cuantificación del tóxico: por
principios físico-químicos diferentes
más específicos y sensibles. Ejemplo;
Gas Cromatografía y Espectrometría de
masas
 La gran cantidad de tóxicos
constituye una gran limitación ,así
como la naturaleza de la matriz, por
lo cual la historia clínica y toxicológica
del paciente es fundamental

.
TIPOS DE MUESTRA
 A-Relacionadas con el intoxicado: Ej, sangre,
orina, heces, vómitos, ropas, lavado y raspado
de dedos ;
 B-Muestras en caso de fallecimiento: contenido
estomacal, vísceras, faneras
 C-Posibles productos causantes de la
intoxicación: medicamentos, productos
químicos encontrados, alimentos, etc.
 Es fundamental para que el resultado
tenga significado clínico
 Ej. Intoxicaciones por Hg: orina en
agudas, pelo en crónicas, Plomo en
sangre total.
CANTIDAD DE LAS MUESTRAS
 Sangre: (20 mL en adultos y 1 a 3 mL
en niños),con y sin anticoagulante.
 Orina: 50-100mL
 Vómitos o líquido del lavado gástrico,
50-100 mL
 Producto supuesto causante de la
intoxicación lo que se encuentre
Observaciones:
--Las muestras que puedan contener tóxicos volátiles
deben remitirse herméticamente cerradas y con una
mínima cámara de aire.
-Se debe evitar tapones porosos
-Conviene centrifugar para evitar hemólisis, pues la mayor
parte de los tóxicos de determina en plasma o suero.
-La cantidad y espécimen colectado deberán ser
suficientes para permitir re-análisis o muchos análisis
posteriores, que sean necesarios agregar.
 En general: No deben mezclarse con conservantes,
fijadores, ni otras sustancias que podrían interferir.
 Todas las muestras biológicas deben mantenerse a 4°C
antes del análisis y si es posible las muestras remanentes
deben mantenerse a 4°C durante 3 a 4 semanas para
futuros análisis requeridos.
 En implicancias médico legales ( ejemplo cuando no está
identificado el tóxico o el paciente fallece) las muestras
remanentes deben ser mantenidas preferentemente a –
20ºC hasta que la investigación haya concluido.
Remitir datos al laboratorio como:
I-Tóxico sospechoso para confirmarlo o descartarlo,
mediante declaración de familiares y allegados
II- Dosis probable permite suponer la concentración
plasmática y permite seleccionar el procedimiento
analítico
III-Tiempo transcurrido entre la absorción y la recogida
de la muestra.
IV-Datos clínicos más relevantes: pupilas puntiformes,
euforia, etc.
- Obtener anamnesis del paciente incluyendo cualquier
evidencia circunstancial del tóxico;
-Resultados bioquímicos y hematológicos realizados;
-Tratamiento instaurado;
-Datos anatomopatológicos de la autopsia si hubieren.
Procesos de extracción:
 Se realizan antes de llegar al análisis
instrumental, para la detección, identificación y
cuantificación.
 Es un factor de cuidado
 Permite obtener muestras:

› limpias ( aumenta selectividad, precisión)

› Mas concentradas (aumenta sensibilidad).
Cuando se desconoce el tóxico
Se utiliza un método sistemático y estandarizado para
identificar las sustancias tóxicas mas frecuentes, que se
caracteriza por el tipo de sustancia :
 1-Gases y vapores
 2-Tóxicos orgánicos
 3-Tóxicos inorgánicos

Desafío: separar el tóxico con pureza y cantidad

suficientes para identificarlo y cuantificarlo.
1-Extracción de compuestos volátiles ( en forma
de gas o vapor)
 1.1Extracción por espacio en cabeza: En general se
incuba la muestra a una temperatura predeterminada en
recipiente cerrado, el gas liberado se recolecta sobre el
espacio superior , para luego inyectar en el GC Ej
determinación de alcoholemia;
 1.2Micro extracción en fase sólida (SPME): El analito
volátil se adsorbe sobre fases estacionarias, unidas
químicamente a fibras muy finas de sílice fundidas
insertadas en la aguja de una jeringa, que
posteriormente se inyecta a CG o HPLC. Se debe elegir
acertadamente la fase estacionaria que recubre la fibra
de sílice fundida, de acuerdo al Tóxico a analizar. Ej
determinación de anfetaminas y sus metabolitos
 1.3Destilación con arrastre: el procedimiento clásico Ej: los
tóxicos que volatilizan a menos de 100ºC, son arrastrados
en corriente de vapor, luego el destilado se extrae con
disolventes de los que se separan por evaporación. Ejemplo
hidrocarburos de bajo PE;
 1.4Micro difusión: Ej: por el método de Conway en el se
utilizan 2 placas concéntricas. La muestra se colocan en el
compartimiento externo y el absorbente en el interior, se
cierra y el tóxico se distribuye.
2-Separación de tóxicos orgánicos fijos
Pueden ser:
- Sin tratamiento de la muestra
- Desproteinización , liberación de conjugados
Se utilizan técnicas como:
-2.1Extracción líquido-líquido (LLE): los tóxicos son extraídos de
la matrices biológicas por partición entre dos disolventes
inmiscibles (ajustando el pH). Las polaridades favorecen la
extracción.
-2.2Extracción sólido -líquido(SPE)
pequeñas columnas rellenas de
gránulos de fases sólidas apolares,
polares o de resinas iónicas. Ventajas:
rapidez, mejora el límite de detección
y cuantificación, buena recuperación
o extracción de analitos. Ej columnas
de inmunofinidad para BZD,
micotoxinas, THC.
-2.3Mediante fluidos súper críticos (SFE): El más usado es
CO2, por su densidad y poder de solvatación (asociación
de moléculas de un disolvente con moléculas o iones de
un soluto) similar a un líquido y capacidad de difusión y
viscosidad similar a un gas. Usos para extraer pesticidas
de suelo, tóxicos del carbón activado.
-2.4Separación por electroforesis capilar :Al aplicar un
voltaje considerable entre dos electrodos unidos por un
capilar, se establece una diferencia de potencial, las
especies cargadas emigran a distinta velocidad a través
del capilar por el que circula una fase móvil, hasta
alcanzar el detector separadas. Ej. Medicamentos y sus
metabolitos, drogas de abuso, control antidoping.
3-Extracción de tóxicos minerales o
inorgánicos
1º Preparación de la muestra
*Métodos con destrucción de materia orgánica: La
mineralización se hace por calor (vía seca), o por ataque con
ácidos ( vía húmeda).Esto deja a los metales para ser
identificados y cuantificados en el residuo inorgánico.
Otros métodos utilizan ultra filtración, desproteinización, etc.
2º Métodos de enriquecimiento de la muestra: ejemplos
*Físicos: evaporación. *Químicos: quelantes.

Para la separación y determinación de aniones se utilizan

técnicas como cromatografía iónica.
 Son micro ensayos químicos que de forma presuntiva y
rápida dan información cualitativa sobre la presencia de
tóxicos individuales o de grupos y familias de
medicamentos y drogas. Así se tienen:
 Inmunoensayos, utilizan como principio analítico las
reacciones Ag/Ac (el tóxico es el Ag).:Ej. ELISA,
Inmunocromatografia de fase lateral. Aplicaciones:
Drogas de abuso y monitoreo de drogas terapéuticas.
Deben ser confirmados por otras técnicas de mayor
capacidad identificadora, que permitan su cuantificación
(GC-EM).
La elección depende de:
 La determinación analítica requerida
 Posibilidades del laboratorio
 Tipo de muestra
 Cantidad de muestra
 Naturaleza del tóxico
 I-Espectrofotométricas: permiten detectar trazas de
elementos, como metales pesados, en muestras
biológicas.
› Espectrofotometría de absorción atómica (AAS):
 De llama: poco sensible, sirve p/elementos en alta
concentración ( Na, K, Zn)
 De cámara de grafito o electrotérmica: la más sensible
(Plomo, Cadmio).
 Por formación de hidruros volátiles: para Arsenico,
Bismuto, Antimonio, Selenio, Telurio.
 Por vapor frío: Mercurio
› Espectrometría de plasma acoplado por
inducción (ICP) capacidad alta de análisis
multielemental, tanto para análisis cuali como
cuantitativo, con bajos límites de detección.
 ICP-AES: Limitado con elementos de transición
 ICP-MS: Alto grado de selectividad , buena
precisión y exactitud
› Espectrofotometría de fluorescencia atómica
por láser (LEAFS): poder de detección de
partes por cuatrillón.
II-Cromatográficas: técnicas de separación de
una mezcla de solutos, basados en la
diferente velocidad con que se mueve cada
uno de los componentes a través de medios
porosos arrastradas por un disolvente en
movimiento. Ej.: técnicas HPLC, GC,
permiten identificar drogas de abuso,
medicamentos, plaguicidas, etc.
Acoplamientos: CG/MS; CG/MS/MS;
HPLC/MS; HPLC/MS/MS.
 III-Técnicas eléctricas o electrométricas :
› -Electrogravimetría como electrodeposición
(Arsenico, Antimonio, Mercurio)
› Conductimetría (iones en agua potable),
› Reacciones sobre electrodos con medidas de
potenciales: potenciometría ( compuestos
orgánicos),polarografía (talio en orina),
voltametría de gota desnuda (Pb en hueso,
sangre y orina).
 Comparar el nivel del tóxico
detectado con valores tóxicos y
letales encontrados en la literatura.
 Relacionar con las circunstancias
implicadas
Se tienen tres clases o actividades:
 1. Toxicología postmortem
 2. Determinación y valoración de drogas
de abuso en medios biológicos
 3. Toxicología Conductual.
1-En toxicología forense post mortem
Muestras relacionadas con la puerta de entrada, con órganos
parenquimatosos y fluidos biológicos:
 Cerebro: 100 g.
 Hígado: 100 g.
 Riñón: 50 g.
 Sangre Arterial (cardiaca): 25 ml.
 Sangre Periférica: 10 ml.
 Humor Vitreo: Todo lo obtenido.
 Bilis: Todo lo obtenido.
 Orina: Todo lo obtenido.
 Contenidos gástricos: Todo lo obtenido.
 Ciertos tóxicos pueden necesitar además: pulmón e intestino,
cada caso será tratado específicamente
 Los tejidos no deben ser conservados en formol
2-Detección e interpretación de drogas en medios
biológicos
El uso de drogas y el abuso de fármacos acarrea una serie
importante de problemas en el ámbito social y médico
En los últimos años, la administración de sustancias
químicas psicoactivas a personas con fines delictivos ha
adquirido una especial relevancia en el ámbito de la
Ciencias Forenses, con especial repercusión en esta
parte de la Toxicología Forense. Así es preciso afrontar y
definir un nuevo término : “Sumisión química”
Muestras:saliva, sudor,pelo,orina, sangre
3-Toxicología Conductual
 Esta parte de la Toxicología
Forense se orienta sobre las
siguientes facetas: el
tráfico rodado y los
centros de trabajo. Donde
se resalta el uso de drogas
ilícitas, consumo de
fármacos, así como el
exceso del alcohol.
 El aire alveolar, aire espirado o aliento, tiene su máximo
de alcohol a los pocos minutos de ingerido éste,
establece hacia los 20 minutos una curva paralela a la
de alcoholemia, aunque por debajo de ella al llevar
menor concentración de alcohol, y resulta muy útil a
efectos analíticos.
 Aproximadamente un valor numérico de alcoholemia,
expresado en gramos por litro de sangre(g/Ls) equivale
a la mitad de dicho valor, expresado en miligramos de
alcohol por litro de aire espirado (mg/La) (Repetto,
1995).
 Muestras: saliva, sudor,pelo,orina, sangre
 Detectores portátiles de fotoionización
para contaminantes orgánicos en el
aire ambiente, con alarmas óptica y
acústica.
 Detectores estacionarios con sensores,
convertidores de medio y alarmas.
 Tipos de sensores; electroquímico, IR,
catalíticos.
 Control interno: permite comprobar el
buen estado de los reactivos y las
condiciones de la prueba.
 Control externo consiste en detectar,
identificar y cuantificar el/los tóxico/s
desconocido/s, los resultados se
envían al centro de referencia.
Peligros:
 Sustancias químicas con que se
trabaja
 Enfermedades relacionadas con
muestras biológicas.
Reducción del Riesgo para el personal:
Educación y seguridad apropiados.
 NOMBRE DEL MUESTRAS EQUIPOS EMPLEADOS OBSERVACIONES
ANÁLISIS
Determinación y Sangre Espectrofotometría UV- Vivos:Sangre venosa
cuantificación de Orina visible y CG-MS Cadáveres:sangre liquida y
anfetaminas fresca

Determinación de la Orina Acido 11-Nor-Delta-9- Muestras no aptas serian

presencia del principal tetrahidrocannabiol-9- aquellas que presentan un
metabolito de Carboxilo estado de descomposición
cannabis o cuando la muestra es
insuficiente

Determinación de la Sangre Colinesterasa Pueden dar falsos positivos

actividad de
colinesterasa

Identificación y Sangre Espectrofotometría UV- Muestras no aptas serian

determinación de la visible aquellas que presentan un
cantidad de monóxido estado de descomposición
de carbono

Determinación de Sangre Espectrofotometría UV- Vivos:Sangre venosa

opiáceos Orina visible y CG-MS Cadáveres:sangre liquida y
fresca

Determinación de Orina HPLC Muestras no aptas serian

Benzodiacepinas Riñón aquellas que presentan un
Hígado estado de descomposición
CG