Enzimología

clínica
Alex Daniel Rios Bobadilla
Valentina Robayo Aguirre
María Fernanda Rodríguez
María Ximena Rubiano
Esteban Sánchez Bustos

Universidad militar nueva granada - Facultad de Medicina - Biomédica l - 2020

TABLA DE CONTENIDO

1. 4.
INTRODUCCIÓN CASO CLÍNICO
Caso clínico con base al
Conceptos fundamentales artículo

2. 5.
CONCLUSIONES
FUNDAMENTO TEÓRICO Conceptos aprendidos y
Bioquimica aplicada al tema esperados

3.
ARTÍCULO CIENTÍFICO
Aplicación en investigación 6.
REFERENCIAS
INTRODUCCIÓN
- Definición de enzima
- Características de las enzimas
- Tipos de enzima
- Definición de enzimología clínica
DEFINICIÓN DE ENZIMA

Las enzimas son catalizadores

biológicos, proteínas las cuales
aceleran la reacción química
específica de una célula.

La mayor parte son proteínas, aunque

existe un pequeño grupo de moléculas
de RNA con actividad catalítica.
CARACTERÍSTICAS

Las enzimas se componen de proteínas globulares de

tamaño muy variable: desde monómeros de 62 aminoácidos,
hasta enormes cadenas de alrededor de 2500.
Las más comunes trabajan en el
proceso de digestión, separando las
moléculas de los alimentos en piezas
más pequeñas para que el cuerpo
pueda absorberlas. Otras veces, las
enzimas actúan para permitir que
moléculas se unan para producir
una nueva.
FUNCIÓN DE LAS ENZIMAS
Cada enzima está hecha para una función específica. Las
moléculas por sobre las cuales trabaja una enzima se
denominan sustratos y cada uno está ligado a una región de
la enzima, llamado sitio activo.
Una vez que se desarrolla la unión
entre enzima y sustrato ocurre una
reacción química, tras las cual se
crea una nueva molécula. Esa
molécula recién creada se separa de
la enzima y ésta vuelve a estar
disponible para catalizar otras
reacciones.
 TIPOS DE ENZIMAS
Existen una gran variedad de enzimas que se clasifican en función de la International
Union of Biochemistry and Molecular Biology, ésta evita tanto imprecisiones como
ambigüedades, y toma como base las reacciones que catalizan cada una.

Recuperado de: Feduchi E,

(2015). BIOQUÍMICA, Tabla 8-1
TIPOS DE ENZIMAS
Reacciones catalizadas por cada tipo de enzima:

1. Oxidorreductasas: Catalizan reacciones Redox.

El principal agente oxidante es el O2; que, participa
de manera frecuente en este tipo de reacciones junto
con el FAD y el NAD+.

2. Transferasas: transfieren un grupo químico de una

molécula a otra. Por ejemplo, las quinasas catalizan
la transferencia de un grupo fosfato desde un
nucleósido trifosfato hacia una nueva molécula.
3. Hidrolasas: Transfieren un grupo – OH desde el
agua hacia algún sustrato, que por lo general es un
enlace Éster o amida.
4. Liasas: Catalizan la división reversible de un
enlace carbono-carbono y liberan Co2. Éstas no
requieren energía de nucleósidos trifosfato y se
denominan sintasas, como por ejemplo la citrato
sintasa.
5. Isomerasas: Catalizan el movimiento de un grupo
dentro de una misma molécula. Cuando la
transgresión es del grupo fosfato, la enzima se
denomina mutasa, y, si se da de las formas L a D,
epimerasa.
6. Ligasas: Al igual que las Liasas catalizan la formación
de enlaces carbono-carbono, pero, a diferencia de estas,
requieren de energía que obtienen a partir de la hidrólisis
del ATP; se denominan enzimas sintetasas.

CLASIFICACIÓN SISTEMÁTICA

1° Dígito: Nombre de la enzima, del 1-6 3° Dígito: Aspectos específicos de la

siguiendo el orden de la tabla mostrada reacción (sustrato, grupo funcional)

2° Dígito: Subclase (tipo de sustrato, 4° Dígito: Número que ocupa la enzima

agente reductor o enlace afectado) dentro de la subclase.
 Cofactores y Coenzimas

Las enzimas están compuestas por un componente no

proteico (cofactor o coenzima), y uno proteico (Apoenzima),
los cuales, al juntarse forman la holoenzima.

Algunos cofactores como las quinasas,

adquieren un estado inactivo en
ausencia de Mg2+. Las coenzimas, por
otro lado, son necesarias para
transportar un grupo funcional durante la
reacción catalizada por la enzima. Recuperado de: Feduchi E, (2015).
BIOQUÍMICA, Figura 8-1
DEFINICIÓN DE
ENZIMOLOGÍA CLÍNICA

Es uno de los campos de la

bioquímica que se desarrolló
recientemente y se refiere a la
aplicación del conocimiento de
las enzimas al diagnóstico,
pronóstico y tratamiento de
una enfermedad.
FUNDAMENTO
TEÓRICO
- Catálisis enzimática
- Cinetica enzimatica
- Inhibición enzimática
- Regulación enzimática
- Aplicación clínica de las enzimas
- Presentacion bioquimica sobre covid-19
CATÁLISIS ENZIMÁTICA

Las enzimas como catalizadores son capaces de

aumentar la velocidad en las reacciones
químicas que ocurren a diario en los seres vivos.

Esto es posible gracias a que poseen una estructura

tridimensional que cuenta con una porción
relativamente pequeña denominada centro activo
la cual se encarga de la actividad catalítica.
 Reacción enzimática
Transformación de un
sustrato específico en
un producto

Una vez el sustrato interacciona con el

centro activo se producen modificaciones
que lo convierten en un estado de
transición, que posteriormente está
estabilizado por residuos del centro activo Recuperado de: Feduchi E, (2015). BIOQUÍMICA,
Figura 8-4
Energia de activacion

En una reacción química espontánea

(exergónica), la energía basal del
sustrato es mayor que la del producto.
Para que inicie la reacción es necesario
llegar a un estado transitorio de
mayor energía que el estado basal del
sustrato, esto implica que se debe
Recuperado de: Feduchi E, (2015). BIOQUÍMICA, superar una barrera energética
Figura 8-5
conocida como energía de activación.
Energia de activacion

En la reacción catalizada los

intermediarios ES y EP ocupan
valores mínimos, como resultado la
energía de activación de la
reacción catalizada es menor que
la de la misma reacción sin
catalizar

Recuperado de: Feduchi E, (2015). BIOQUÍMICA,

Figura 8-7
Mecanismos de catálisis
enzimática
Las enzimas aceleran las reacciones químicas mediante
dos mecanismos:

1. Formación de enlaces covalentes

o intercambio de grupos
funcionales entre la enzima y el
2. Creación de interacciones no
covalentes entre la enzima y el
sustrato, que libera energía libre
sustrato. llamada energía de unión.

Recuperado de: Feduchi E, (2015). BIOQUÍMICA, Figura 8-8

 CINÉTICA ENZIMÁTICA

Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas y los

factores que afectan estas reacciones.

Concentración
de sustrato
Con más concentración de sustrato se
ocupan más centros activos y aumenta
la velocidad de reacción hasta que se
saturan los centros activos velocidad
es máxima y constante Recuperado de: Sanz E. (2003). Biologia 2° Bachillerato
Temperatura

Existe una temperatura óptima de

funcionamiento en enzimas, valores
inferiores o superiores disminuyen la
velocidad de la reacción

Temperaturas inferiores: disminuye el

número de vibraciones moleculares.

Temperaturas superiores: provoca la

desnaturalización de la enzimas.
Recuperado de: Sanz E. (2003). Biologia 2°
Bachillerato
pH

Existe una pH óptimo de

funcionamiento en enzimas, valores
inferiores o superiores disminuyen la
velocidad de la reacción, incluso se
puede llegar a desnaturalizar la enzima

Presencia de
inhibidores
Recuperado de: Sanz E. (2003). Biologia 2°
Bachillerato
enzimáticos
 INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

Existen cierto tipo de moléculas, Un inhibidor puede actuar

denominada inhibidores que sobre una enzima que está
ralentizan o detienen las en el organismo patógeno
reacciones enzimáticas. más no en el huésped.

INHIBIDOR REVERSIBLE INHIBIDOR IRREVERSIBLE

Se une a la enzima mediante Se une a la enzima mediante

interacciones no covalentes, interacciones covalentes
de forma reversible impidiendo su función
 INHIBIDOR REVERSIBLE

Se evidencian tres tipos de inhibición reversible que disminuyen

la velocidad de la reacción.

Inhibición competitiva
El inhibidor se une al mismo sitio
que el sustrato impidiendo la
Los dos ligandos
formación del complejo enzima
compiten por unirse
sustrato y la formación de producto
al centro activo
Inhibición no competitiva

El inhibidor muestra afinidad tanto

para la enzima libre como para el
complejo enzima-sustrato, ya que
la unión se realiza en un lugar
distinto al centro activo

Inhibición acompetitiva
El inhibidor se une exclusivamente al
complejo enzima-sustrato,haciendo que el
valor de Vmax disminuye.
INHIBIDOR IRREVERSIBLE

Son moléculas que se suelen unir a la enzima mediante

enlaces covalentes con residuos imprescindibles para la
catálisis, impidiendo su función

También pueden unirse mediante interacciones no

covalentes muy estables

Reacción del inhibidor irreversible

diisopropilfluorofosfato (DFP) con
serín-proteasa
REGULACIÓN ENZIMÁTICA

Existen varios mecanismos de regulación en los que:

1. Las enzimas alostéricas se unen de forma reversible no

covalente a pequeñas moléculas (que regulan su
actividad).

2. Las otras enzimas sufren modificaciones covalentes, que

pueden ser reversibles o irreversibles, produciendo
cambios en su función.
¿ENZIMA
ALOSTÉRICA?
Es aquella capaz de unirse covalente y de forma irreversible
a uno o más ligandos denominados moduladores.

MODULADOR MODULADOR
POSITIVO NEGATIVO

Aumento de afinidad Disminución de

enzimática con el afinidad enzimática
sustrato. con el sustrato.
INTERACCIONES DE
TIPO ENZIMA-
MODERADOR
INTERACCIONES HOMOTRÓPICAS:
El mismo sustrato tiene un efecto modulador. Son casi siempre
modulaciones positivas. En una enzima homotrópica, el centro activo
y el sitio regulador son el mismo.

INTERACCIONES HETEROTRÓPICAS:
El ligando es una sustancia diferente. Puede estarse hablando tanto
de modulaciones positivas como de negativas.
Figura 8-21. enzima alostérica. Una enzima alostérica heterotrópica muestra un sitio de unión para el modulador diferente del
centro activo. La unión del modulador produce un cambio de conformación que hace que la enzima tenga mayor afinidad por el
sustrato (modulador positivo). El cambio de conformación de la primera subunidad se transmite a la segunda, que también
presentará mayor afinidad por el sustrato.
 MODIFICACIONES
COVALENTES DE
LAS ENZIMAS

Pueden ser de 2 tipos

REVERSIBLES IRREVERSIBLES
Los grupos fosfato pueden eliminarse se necesitan otros mecanismos para la
por la acción de otras enzimas. Este inactivación de estas enzimas, ya que la
tipo de modificación puede hacer que pérdida de un fragmento de alguna cadena
esta se active o se inactive, produce cambios conformacionales en las
dependiendo de la enzima. mismas que hacen accesible su centro activo.
MODIFICACIONES REVERSIBLES

Figura 8-24. diferentes mecanismos de Modificación covalente Residuos

que aceptan modificación covalente de las enzimas
MODIFICACIONES IRREVERSIBLES

Figura 8-26. Conversión de zimógenos en sus formas activa. (a) Ejemplo de cascada de activación de proteasas. (b) La eliminación
de una porción del zimógeno (en verde) hace accesible el centro activo de la enzima pepsina, quedando ahora activada.
 APLICACIÓN CLÍNICA
DE LAS ENZIMAS

● Indispensables para desintegrar nutrientes con el fin de generar

energía para la contracción muscular y la unión de unidades de
proteínas, ADN, membranas, células y tejidos.

● Son clave en el diagnóstico clínico porque la alteración de la actividad

enzimática puede estar asociada a un estado patológico.
 APLICACIÓN CLÍNICA:
Diagnóstico

Las enzimas utilizadas en el diagnóstico clínico son:

● Alanina aminotransferasa (ALT).

● Aspartato aminotransferasa (AST).
● Creatina Kinasa (CK).
● Fosfatasa alcalina (AP, ALP, SAP).
● G-glutamil transpeptidasa (GGT).
● Amilasas.
● Lipasas.
TRANSAMINASAS (ALT, AST)

Distribución
tisular
 ALT AST
● Cataliza la transferencia del
● Cataliza la transferencia
grupo amino del ácido
de alanina al ácido
aspártico al ácido
cetoglutarato, formando
cetoglutárico, formando
piruvato y ácido
oxaloacetato y a.glutámico.
glutámico.
● En citoplasma y mitocondria.
● En citoplasma.
● Valores normales: < 40U/ml.
● Valores normales: < 50
● Aumento: Infarto del
U/ml.
miocardio, hepatitis,
● Aumento: Shock,
traumatismos, cirrosis,
hepatitis, cirrosis,
mononucleosis, ictericia,
mononucleosis, ictericia.
hemólisis.
CREATINA KINASA

Distribución
tisular
 CK
● Importante para la contracción muscular. Transfiere el fosfato de
la fosfocreatina al ADP, formando ATP.
● En citoplasma y mitocondria de miocitos.
● Isoenzimas: CK-1: isoenzima BB, cerebro CK-2: isoenzima MB,
músculo cardíaco y esquelético CK -3: isoenzima MM, músculo
esquelético y cardíaco CK-Mt: membranas mitocondriales.
Músculo cardíaco.
● Valores normales: <160U/ml (varones) y <130U/ml (mujeres).
● Aumento importante: Infarto de miocardio CK-MB.
● Aumento moderado: miopatías, distrofia muscular, accidente
cerebro-vascular.
FOSFATASA ALCALINA

Distribución
tisular
 AP
● Metaloenzima que cataliza la hidrólisis de diferentes ésteres de
fosfato. Requiere pH alcalino y cofactores (iones zinc y
magnesio).
● Se encuentra asociada a la membrana.
● Valores normales: 85-190 U/ml en el adulto. Hasta 500 U/ml en
niños en desarrollo.
● Aumento importante: ictericia obstructiva, colelitiasis,
neoplasia de vías biliares, cirrosis, hepatomas.
● Aumento moderado: neoplasias óseas osteogénicas,
osteomalacia, enf. Paget, hiperparatiroidismo
G-GLUTAMIL TRANSPEPTIDASA

GGT
● Cataliza la transferencia de grupos glutamil C-terminales de unos péptidos a otros o a
aminoácidos. Es importante en el metabolismo del GSH (glutatión), la absorción de
aminoácidos y en la antioxidación.
● En membrana y citoplasma (Hepática).
● Valores normales: < 35 U/ml (varones) y <25 U/ml (mujeres).
● Aumento importante: Hepatitis vírica, obstrucción biliar, metástasis hepáticas.
● Aumento moderado: Infecciones que afectan al hígado (citomegalovirus,
mononucleosis infecciosa).
 AMILASAS

𝛂-A
● Hidroliza carbohidratos complejos para formar maltosa y glucosa.
● Se produce en páncreas, hígado e intestino delgado.
● Se filtra y reabsorbe a través del riñón.
● Valores normales: <50 U/ml.
● Aumento importante: pancreatitis aguda y crónica, cáncer de páncreas.
● Aumento moderado: parotiditis, algunos carcinomas, procesos
parapancreáticos (gastritis, úlcera duodenal, peritonitis, obstrucción intestinal.
LIPASAS

● Hidroliza triglicéridos.
● Se sintetiza en el páncreas y en la mucosa gástrica.
● Se elimina a través del riñón.
● Causas del incremento de lipasa:
■ Pancreatitis.
■ Enfermedades gastrointestinales.
■ Problemas renales.
● Valores normales: <50 U/ml.
● Aumento: Pancreatitis.
APLICACIÓN CLÍNICA:
Tratamiento

● Gaucher.
● Fabry.
● Pompe.
● MPS I.
● MPS II.
● MPS VI.
 ¿ PERO LOS TRATAMIENTOS
REALMENTE FUNCIONAN ?

El TES corrige las anomalías viscerales y hematológicas,

ENFERMEDAD
mejora o normaliza el crecimiento y revierte la afectación de
DE GAUCHER la médula ósea, reduciendo la frecuencia de crisis óseas y
de fracturas.

El TES mejora el dolor, la calidad de vida, la sintomatología

ENFERMEDAD
gastrointestinal, la audición, estabiliza la función renal,
DE FABRY reduce de la masa del ventrículo izquierdo hipertrofiado y
revierte la respuesta vascular cerebral anormal.
ENFERMEDAD El TES aumenta la supervivencia y mejora las
DE POMPE funciones cardíaca, respiratoria y motora.

ENFERMEDAD El TES incluyen disminución de la

DE MPS I excreción de glucosaminoglucanos,
reducción de la hepatomegalia,
aumento de la capacidad vital forzada
respiratoria, mejora de la
ENFERMEDAD
deambulación y reducción de la masa
DE MPS II ventricular izquierda.

ENFERMEDAD El TES mejora el crecimiento, el desarrollo puberal y la

DE MPS VI función pulmonar.
BIOQUÍMICA DEL COVID-19

- NOMBRE: Visto con microscopio se

asemeja a la corona (atmósfera) solar.

- Cadena simple de material genético

(ARN) protegida por una envoltura esférica

de la que sobresalen varias proteínas

- Enfermedad zoonótica.
BIOQUÍMICA DEL COVID-19
BIOQUÍMICA DEL COVID-19
BIOQUÍMICA DEL COVID-19
BIOQUÍMICA DEL COVID-19
 BIOQUÍMICA DEL COVID-19

Cada virus
puede crear
entre 10.000
y 100.000
copias
ARTÍCULO
CIENTÍFICO
- Título: Enzimología clínica: uso en
el infarto agudo al miocardio
- Autor: Maria Rodriguez Millan de la
escuela de enfermería de palencia
- Fecha: Junio, 2016
INTRODUCCIÓN

Actualmente la enzimología clínica es de fundamental importancia en

la práctica clínica para el uso en el diagnóstico, control y tratamiento de
diversas enfermedades; como por ejemplo el infarto agudo del
miocardio, el cual es más común de lo que se cree. Con métodos
nuevos de diagnóstico se reducen riesgos y se ahorran costos.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Definir cuales son las enzimas de uso

Realizar una revisión sobre más corriente en el laboratorio y sus
la efectividad de las aplicaciones clínicas frecuentes.
enzimas como herramienta
para el diagnóstico de
enfermedades, haciendo Conocer los marcadores de elección en
hincapié en el infarto el infarto agudo de miocardio y explicar
agudo de miocardio. el perfil enzimático necesario para la
valoración y pronóstico del IAM.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Específicamente, el infarto de
miocardio se puede identificar por la
presencia de ciertos biomarcadores
cardiacos que identifican la necrosis 1. Aspartato
cardiaca por su elevación en el aminotransferasa.
miocardio y falta en otros tejidos, 2. Creatina quinasa.
donde niveles más allá de lo normal 3. Lactato
pueden ser causantes de necrosis al deshidrogenasa.
miocardio. Las enzimas más
destacadas son:
CONCLUSIONES

1. Las enzimas resultan una herramienta muy útil para el diagnóstico,

pronóstico y tratamiento de las enfermedades.

2. Las enzimas AST, LDH y CK total son consideradas obsoletas

para el diagnóstico agudo del miocardio.
CASO CLÍNICO
- Título: Infarto agudo al miocardio de un
hombre joven sin ateromatosis coronaria
como forma de presentacion de sindrome
antifosfolipido primario
- Autor: Jurado M, Durán J, Martínez J,
Castellon J, Gutiérrez M.
- Fecha: Noviembre, 2009
 CASO CLÍNICO

Género: Hombre

Edad: 25 años

Antecedentes: Eritromegalia en mano izquierda en la infancia. Sin factores

de riesgo vascular conocidos, ni consumo de drogas.

Presentación clínica: En 2006 tuvo un dolor retroesternal opresivo por

esfuerzo, el electrocardiograma no mostró isquemia. 2 meses después
presentó dolor de similares características por 3 H
Exámenes realizados:

● El electrocardiograma evidenció hipocinesia marcada no

adelgazada anteroseptal distal, anterior y apical.
● Examen físico normal
● Presión arterial normal
● Perfil lipídico normal
● Hemograma normal
● Recuento plaquetario normal
● Enzimas cardiacas elevadas con troponina hasta de 35,54 ng/ml
● Coronariografía mostró lesión trombótica 80% del tercio proximal de la
arteria descendente anterior, no se encuentran lesiones ateromatosas
● Enzimas cardiacas elevadas con troponina hasta de 35,54 ng/ml

Estas enzimas están normalmente presentes en

cantidades bajas en el torrente sanguíneo. Cuando
estos niveles son elevados, indica que el músculo
cardíaco puede estar lesionado o puede no estar
recibiendo suficiente oxígeno.
Los valores normales de la troponina
en la sangre son:

Troponina T: 0,0 a 0,04 ng/mL

Troponina I: 0,0 a 0,1 ng/mL
Resultados:

● Se diagnosticó un Síndrome Antifosfolipídico (SAF) primario y

se indicó anticoagulación inicialmente con heparina y
posteriormente con anticoagulante oral que se mantuvo de
forma permanente
● 3 meses después se realizó un angio TAC coronario
que mostró reperfusión completa del vaso
comprometido.

● 2 años después se encontraba asintomático, en

tratamiento con atenolol, ramipril, aspirina e
hidroxicloroquina.
 CONCLUSIONES

● Las enzimas, además de ser los catalizadores biológicos por excelencia, son
proteínas (en su mayoría) encargadas de ayudar al correcto funcionamiento
de procesos en los seres humanos, tales como la digestión.

● Los diferentes tipos de enzimas permiten catálisis de distintas reacciones ya

sea por transferencia de grupos fosfato, por utilización de oxígeno (O2), por
liberación de dióxido de carbono (CO2) o requiriendo un considerable de
energía.
● Una holoenzima es una enzima compuesta por una coenzima
(componente no proteico) y una apoenzima (componente
proteico).

● En clínica, el uso de una enzima radica en el adecuado

diagnóstico, pronóstico y tratamiento de una enfermedad.

● La catálisis, cinética, inhibición y regulación enzimática son

procesos que facilitan, de cierta forma, el correcto
funcionamiento de los distintos procesos vitales que se llevan a
cabo dentro del organismo.
 REFERENCIAS

Feduchi E, Blasco I, Romero C, Yánez E. (2015). BIOQUÍMICA, conceptos esenciales. Segunda

edición. Capítulo 8: Enzimas y catálisis. Madrid, España: Panamericana.

Cornier A, Orengo J.. (2020). Así infecta el coronavirus. 12/03/2020, de Medicina y salud pública
Sitio web: https://medicinaysaludpublica.com/asi-infecta-el-coronavirus/

Plitt L. (2020). Coronavirus: ¿qué le hace el covid-19 a tu cuerpo?. 14/03/2020, de BBC News
Mundo. Sitio web: https://www.bbc.com/mundo/noticias-51858185

Informe SARS-CoV-2. Sociedad Argentina de Virología. 26 de marzo de 2020.

Sanz E, Serrano M, Torralba S. (2003) BIOLOGÍA 2° BACHILLERATO, Begoña,
España: Oxford University Press España S.A.

Rodríguez, M. (2016). Enzimología clínica: uso en el infarto agudo de miocardio .

Universidad de Valladolid. recuperado de: https://uvadoc.uva.es/handle/10324/2510

Guillén E, Jiménez R. (2011). Tratamiento enzimático sustitutivo en las

enfermedades lisosomales. Anales de pediatría continuada, 9, 98-105. 3/04/2020, De
Elsevier Base de datos.

Jurado O, Marisol, Durán, Josefina, Martínez, Alejandro, Castellón, José Miguel, &
Gutiérrez, Miguel A. (2009). Infarto agudo al miocardio en un hombre joven sin
ateromatosis coronaria, como forma de presentación de síndrome antifosfolípido
primario: Caso clínico. Revista médica de Chile, 137(11), 1478-1481.
https://dx.doi.org/10.4067/S0034-98872009001100011