UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
QUÍMICO FARMACÉUTICO BIOLOGICA
MICROBIOLOGÍA GENERAL II
Cultivo y microcultivo de hongos
Equipo: 7
Cova Díaz Martha Zaidet
Chávez Juárez Víctor
Jiménez Moreno Andrea Yhael
Pedroza Vázquez Abigail
Grupo: 2752
CULTIVO DE HONGOS
Para estudiar a los hongos se dispone de dos tipos
especiales de cultivo.
a) Microcultivo. Los microcultivos se pueden
observar directamente día a día, lo que permite
hacer el seguimiento del desarrollo del hongo en
estudio.
b) Cultivo en placa. Se obtienen sembrando por
picadura el centro de cajas que contienen medios
ricos en carbohidratos (PDA, Rosa de Bengala, Agar
Harina de Maíz, Sabouraud, Czapek, etc).
HONGOS FILAMENTOSOS
Se identifican a nivel de género y especie por la
morfología del micelio.
Pero sobre todo por las características
microscópicas de sus esporas asexuadas.
Las estructuras reproductoras asexuadas
(conidioforos) son muy frágiles.
para poder observarlas al microscopio sin
distorsionarlas o destruirlas se emplean
técnicas especiales como el microcultivo.
TÉCNICA DE
MICROCULTIVO
Se emplea para:
Identificación taxonómica.
Estudios de ontogenia de los conidios.
Preparaciones permanentes útiles en la
enseñanza.
Como apoyo para identificaciones
diferenciales.
Obtención de material para microfotográfia
y micrográfia electrónica
Desarrollo de la técnica:
1. Colocar un trozo circular de papel filtro
sobre el fondo de una caja de Petri estéril.
Colocar un par de varillas de vidrio cortadas
apropiadamente para que entren en la caja
encima del papel filtro, para sostener un
portaobjetos.
2. Colocar un cilindro de agar de dextrosa
papa o agar Sabouraud sobre la superficie del
portaobjetos.
3. Inocular los bordes del cilindro de agar
en tres o cuatro lugares con una pequeña
porción de la colonia a estudiar, mediante un
asa recta o la punta de una aguja de
disección.
4. Calentar un cubreobjeto con suavidad,
pasándolo con rapidez por la llama de un
mechero Bunsen y colocarlo de inmediato
directamente sobre la superficie del cilindro
de agar inoculado.
5. Colocar 5 mL dé glicerina-agua en la base de
la caja Petri, suficiente para saturar el papel.
Tapar la placa e incubar el conjunto a
temperatura ambiente o a 30ºC, durante 3 a
7 días.
6. Diariamente se debe revisar el crecimiento
del hongo, para verificar si ya esta madura la
colonia. Si se decide que esta completa la
maduración del cultivo se le agrega de 1 a 3
mL de formaldehído al 10% o fenol, 30 min.
antes de la manipulación del microcultivo.
7. Una vez inactivadas las esporas, se retira con
sumo cuidado el cubreobjetos y se coloca en
un portaobjetos que tiene una o dos gotas
de azul de algodón de lactofenol. Se observa
a seco débil y a seco fuerte.
8. Al portaobjetos se le quita el agar y se
deposita en un vaso con fenol al 10% al
portaobjetos ya sin agar se le aplica una o
dos gotas de azul de algodón de lactofenol y
se le coloca un cubreobjetos y se observa al
microscopio.
Ventajas
Evita daños en las estructuras del hongo
Permite identificar fácilmente la ontogenia de las conidias
Demuestra los sutiles aspectos microscópicos
identificación definitiva de algunos hongos.
Desventajas
Tedioso de llevar a cabo.
No es adecuado para un diagnostico rápido.
Método B
1. Con pipeta Pasteur estéril, añadir en 1 gota de A. Sabouraud
(medio fundido a 45ºC) en la concavidad del porta excavado.
Esperar 2 minutos a que el agar solidifique.
2. Con asa de Kolle, sembrar con esporas del hongo a studiar.
3. Con un palillo añadir silicona a los 3 lados alrededor del
pocillo, dejando el cuarto sin silicona para permitir la entrada
de aire, manteniendo así el ambiente aerobio.
4. Colocar un cubre.
5. Añadir agua destilada hasta empapar el papel de filtro y
colocar en su posición el vidrio portaobjetos con el inóculo.
Tapar la placa petri.
6. Incubar a 25 ºC. , observándolas diariamente, hasta que se
considere que el crecimiento es adecuado para la observación
al microscopio (1 semana).
7. Observar con objetivo (x10, x40).
Penicillium sp.
.
Aspergillus sp.
Identificación
Muestras
Envases
Las muestras de agua o suelo se debe
coleccionar en envases esterilizados
El transporte de los envases debe ser de
forma derecha y deben descartarse luego de
su uso.
Almacenamiento
Las muestras deben ser procesadas no más
tarde de 24 horas.
Sí el análisis no se comienza deberán
refrigerar.
Medios de Cultivo
Agar Sabouraud
Agar Neopeptone-glucose-rose
Bengal-aureomycin
Agar Czapek (para Aspergillus,
penicillium)
Agar Yeast extract-malt extract-
glucose
Agar Diamalt (para levaduras)
Características de un medio de cultivo
Todos los medios de cultivo utilizados en micología han
de contener los nutrientes suficientes para asegurar el
desarrollo de los hongos)
El pH ha de ser ligeramente ácido
Se añadirán antibióticos para inhibir el crecimiento de
las bacterias
Se añade también Cicloheximida que inhibe el
desarrollo de hongos saprofitos ambientales
Placa o tubo
Los medios en placa tienen la ventaja Los medios en tubo tienen
de ofrecer: una superficie de trabajo
mucho más pequeña
Gran superficie para el aislamiento
Ofrecen máxima seguridad en
Son más peligrosos a la hora de su su manipulación y buena
manipulación y fáciles de contaminar. resistencia a la deshidratación
y contaminación.
En el momento de la siembra, han de
escogerse adecuadamente los
medios a utilizar.
Si la muestra procede de zonas
presuntamente contaminadas, es
fundamental incluir, junto a los
medios normales, medios que
contengan sustancias inhibitorias de
bacterias y hongos
Placa o tubo
Tanto la muestra como las placas y tubos
que se van a sembrar:
Deben manipularse, para mayor seguridad
del técnico y para evitar contaminaciones
ambientales, en campana de flujo laminar.
Han de rotularse adecuadamente, con el nº
de la muestra y la fecha
Las placas se precintan con cinta de
Parafilm, en la que se realizan un par de
aberturas, y los tubos se dejan con el tapón
de rosca a medio cerrar.
Preparación y diluciones
Una vez recolectada las muestras en el campo se deben
hacer diluciones
Cuando se procesan muestras de agua se deberá hacer
diluciones de 1/10.
Para muestras de agua con gran material orgánico se
deberán hacer diluciones de 1/100 o 1/1,000.
Para muestras de suelo, utilizar diluciones de 1/1,000 o
1/10,000.
Para realizar diluciones de las muestras se deberá usar
agua estéril y toda el material también estéril.
Cultivo en placas
Preparar placas para cada dilución a ser
examinada.
Transferir 10 ml de medio a 45 0C.
Añadir 1 ml de la muestra diluida
Mezclar mediante rotación de la placa.
Dejar solidificar el agar.
Tapar de inmediato las placas para evitar
contaminación
Incubación
Incubar las placas sin
invertirlas a
temperatura ambiente
(20-24°C) en luz.
Examinar y contar las
colonias en las placas
luego de 3, 5 y 7 días
Conteo
El conteo de hongos en una placa # hongos/ mL de muestra =
proveerá la base para del número de colonias en las 5
comparaciones cuantitativas. placas X dilución
Nos hablará de la abundancia de
especies de hongos en la zona.
Descartar placas con más de 300
colonias.
Se puede calcular el número de
hongos por volumen de agua en
las muestras
Se deberá complementar
utilizando el microscopio para
ver morfología y estructuras
reproductivas.
Feohifomicosis subcutánea
Subcutaneous phaeohyphomycosis
Fotografía 8. Macrocultivo con colonia negro-
cremosa.
Dermatofilosis humana y animal.
Dermatophilus congolensis.
Foto 3. Macrocultivos. Colonias blanquecinas
de aspecto rugoso y límites netos. Medio:
agar Sabouraud miel.
Cultivo de hongos
comestibles
CULTIVO DE HONGOS COMESTIBLES
En el caso de las setas ,
Pleurotus sp pueden utilizarse
todas las plantas ya bien secas
Se ocupan los residuos de los
cultivos de las gramíneas
como el maíz, trigo, sorgo,
avena y cebada y podemos
ampliar la lista a : sobrantes de
los cultivos de arroz, frijol
entre otros.
También los aserrines de la
industria maderera son
ETAPAS DEL CULTIVO
Se debe esterilizar el medio para evitar el
crecimiento de m.o. indeseables
Debe haber la humedad necesaria para que el
hongo comience a alimentarse
se toma un puño de material metiéndolo en una
bolsita de plástico usualmente de 50 por 70 cm o
de 60 por 90 cm, se le agrega un poco de inóculo
(que consiste generalmente en granos de
cereales invadidos por una redecilla blanca que es
algo así como la "raíz" del hongo
PROCESO DE PRODUCCIÓN
1. Preparación de sustrato
2. Esterilización
3. Inoculación
4. Colonización
5. Producción
6. Venta del Producto
Esterilización , enfriado e inoculación del sustrato
Termina colonización
Inicia Producción
BIBLIOGRAFÍA
* Arenas, G. R. Micología Médica Ilustrada. 2ª ed.
México, Editorial McGraw Hill, 2003.
* Bonifaz, A. Micología Médica Básica. 2ª ed. México,
Méndez Editores, 2002.
* Koneman, E. W. Micología: Práctica de laboratorio. 3ª
ed. Bogotá. Editorial Médica Panamericana, 1987.
