Práctica #1 Embrión de pollo
A. Observación del embrión
Comparar el desarrollo de
la MCA y la integridad de
los v.s. en los dif. días de
Observar los incubación
movimientos
del embrión
Observar y delimitar
Transluminar cada la cámara de aire
huevo (extremo
romo en la ventana) Descartar los
embriones muertos
Comparar el
desarrollo de
los embriones
Colocar el huevo con
el extremo romo hacia
Cortar y remover el
Vaciar el contenido en Desinfectar con arriba
casquete que cubre la
una caja petri cámara de aire y las EtOH 70% la
membranas superficie del
cascarón
C. Vías de
inoculaciónA. Inoculación en saco alantoideo
Depositar inóculo
(0.1-0.2 mL)
Insertar la aguja (27x13)
en el huevo embrionado
(1 cm)
Delimitar la cámara de aire,
localizar embrión y marcar el
punto de inoculación
B. Inoculación en saco
amniótico
Depositar inóculo
(0.1-0.2 mL)
Insertar la aguja
Delimitar la cámara de aire, Desinfectar y perforar el (22x32) hacia el
Seleccionar sitio de inoculación
localizar embrión y marcar el embrión y penetrar el
embriones
punto de inoculación saco amniótico
(9-11 días)
vivos C. Inoculación en saco vitelino
Depositar inóculo
(0.5-1.0 mL)
Insertar la aguja (22x32)
Delimitar la cámara de aire, perpendicularmente y del
localizar embrión y marcar el lado opuesto al embrión
punto de inoculación
D. Inoculación en membrana corioalantoidea
Perforar el cascaron y la
membrana en el sitio de
la cámara de aire
Retirar y sellar
perforación
En el sitio elegido para
Marcar la cámara de aire y marcar inocular, perforar solo el
Seleccionar
el sitio de inoculación sobre la Desinfectar los dos cascaron, sin romper la
embriones
MCA en el primer tercio del huevo sitios marcados membrana del cascaron
(10-12 días)
sin considerar cámara de aire , en
vivos
zona que muestre vasos sanguíneos
Succionar a través de la
Incubar (33, 35 o 37 ºC) Sellar primero el punto de perforación de la cámara de aire
Incubar en posición
inoculación y luego el de y observar la formación de una
horizontal
perforación falsa cámara de aire sobre la
MCA
Observar la
viabilidad del
embrión a las Distribuir el inoculo
24 horas Insertar la aguja (27x13)
con el bisel hacia abajo
Depositar inóculo
(0.1-0.2 mL) Mantener horizontal con
el punto de inoculación
hacia arriba
D. Cosecha de membranas y líquidos extraembrionarios
A. Cosecha de líquido alantoideo
Mezclar líquidos
4ºC -12 horas Centrifugar 10 min.
Aspirar el liquido
alantoideo 1500 RPM
Desinfectar la cámara Cortar y quitar cascaras, Viales de 0.5 mL a -
Embriones vivos y de aire membrana corioalantoidea 70ºC
delimitar cámara de aire
D. Cosecha de membrana corioalantoidea
C. Cosecha de saco vitelino B. Cosecha de líquido amniótico
Desinfectar el extremo agudo
Depositar el cont. en caja Petri
Levantar el saco amniótico
Separar la MCA y aspirar el liquido
Evitar desprendimiento de MCA
Lavar con PBS Separar el vitelo del saco vitelino
Viales de 0.5 mL a -
70ºC
Contar las lesiones para
calcular #UFP/mL Membranas en viales + 1 mL de
PBS -70ºC
