PRUEBAS DIAGNÓSTICAS
PARA VIH
DEFINICIÓN DE INFECCIÓN
POR VIH
ADULTOS Y NIÑOS > 18 MESES:
Prueba confirmatoria positiva.
Cumpla con los criterios de caso SIDA.
DEFINICIÓN DE INFECCIÓN
POR VIH
NIÑOS < 18 MESES:
Prueba positiva para anticuerpos no es definitiva.
Se considera positivo:
Tiene resultados positivos en dos momentos diferentes.
Técnica recomendada: detección de ácido nucleico o aislamiento viral
Cumple con los criterios de caso SIDA.
DIAGNÓSTICO DE INFECCIÓN
POR VIH
Personas con ITS.
Personas con pareja que muestran comportamiento de riesgo.
Trabajadores sexuales.
Farmacodependientes.
Pacientes multitransfundidos.
Compañeros sexuales de seropositivos.
Hijos de madre VIH positivas.
Pacientes con síntomas sugerentes.
Donantes de sangre o de órganos o tejidos.
PRUEBAS DE LABORATORIO
Métodos Directos:
Evidencian/cuantifican la
presencia de antígenos en
la muestra.
◦ PCR cualitativa,
◦ PCR cuantificada
◦ Cultivo y aislamiento viral,
◦ Antigenemia P-24.
PRUEBAS DE LABORATORIO
Métodos Indirectos:
◦ Evidencian la presencia o
ausencia de anticuerpos
totales en la muestra.
◦ Son los más utilizados.
Pruebas laboratoriales
Screening (tamizaje):
Prueba rápida
ELISA
Confirmatorio:
Western Blot
IFI
Pruebas complementarias
Recuento de Linfocitos CD4/CD8
Carga viral
PCR
1. MÉTODOS INDIRECTOS
a. Pruebas de screening serológicas
• Aglutinación
• Dot blot
• Inmunocromatografía
Pruebas rápidas disponibles en el mercado
Multispot
HIV-1/HIV-2
Uni-Gold
Recombigen
OraQuick
Advance
Reveal
G2
1. MÉTODOS INDIRECTOS
a. Pruebas de screening serológicas
I. Técnicas inmunoenzimáticas (EIA)
• EIA indirecto con antígeno obtenido de lisado vírico (primera generación)
• EIA indirecto o competitivo con antígeno obtenido de proteínas recombinantes y/o
péptidos sintéticos (segunda generación)
• EIA de tipo sándwich o de inmunocaptura, con antígeno obtenido de proteínas
recombinantes y/o péptidos sintéticos y detección conjunta de anticuerpos
específicos de clase IgG, IgM e IgA (tercera generación)
• Detección combinada de anticuerpos específicos y antígeno de VIH (cuarta
generación)
PRUEBAS DE ELISA:
Primera Generación: Los antígenos
utilizados provienen del lisado viral de
un cultivo
Segunda Generación: Los antígenos
corresponden a proteínas
recombinantes o Péptidos sintéticos.
Tercera Generación: Péptidos
recombinantes sintéticos de VIH-1, 2, 0.
Cuarta Generación: Se adicionó el p24.
b. Pruebas confirmatorias
I. Western blot
II. Inmunofluorescencia indirecta (IFI)
III. Radioinmunoprecipitación (RIPA)
IV. Inmunoensayo lineal (LIA)
Pruebas de Detección
ELISA: Detección de Anticuerpos (resultado en horas)
PRUEBAS RAPIDAS: Resultado en minutos
Nos dan RESULTADOS PRELIMINARES, requieren prueba
confirmatorias
Morfología
y Estructura del HIV
Conceptos Básicos Envelope
Familia: Retroviridae
Género: Lentivirus
Forma esférica
≈110nm
RNA Capsíde
viral
TR integrase
e protease
HIV1
ciclo de vida del HIV
Western Blot
Prueba de confirmación
Principio: Ensayo
inmunoenzimático
Detecta anticuerpos contra
proteínas específicas del VIH 1
Interpretación: visual
Muestras: suero y plasma
Volumen: 20 µl
Tiempo: 3.5 hrs
Sensibilidad: 100%
Especificidad: 100%
Nomenclatura de las bandas en Western Blot
Gen Proteína Denominación CDC OMS
env Precursora de la gp160 gp160 Al menos 2
envoltura bandas
Glucoproteína externa gp120 gp120
Glucoproteíina gp41
transmembrana
gag Precursora del core p55
Precursora del core p40
Proteína principal p24 p24
Proteína de la matriz p17
pol Transcriptasa inversa p66
Transcriptasa inversa p51
Endonucleasa p32
WESTERN BLOT
Antígeno
E Anticorpo
1ario
E
Conjugado
Legenda
Esquema
WESTERN BLOT
WESTERN BLOT
Incubacion con la muestra
WESTERN BLOT
Substrato - revelación
Criterios de interpretación del Western blot para infección
por el VIH, según algunos organismos internacionales
INMUNOFLUORESCENCIA
INDIRECTA
Usa material humano de Células T infectadas que
expresan antígenos de VIH-1.
Las células se fijan a la superficie de una laminilla de
vidrio, se utilizan células no infectadas como control.
Cuando los anticuerpos del VIH están presentes en suero
o plasma se unen a las células infectadas pero no a las
células no infectadas.
Inmunofluorescencia indirecta
Antígeno tisular
Inmunofluorescencia indirecta
suero de paciente(IgG)
Inmunofluorescencia indirecta
+ anti-IgG humana con
marca fluorescente
Inmunofluorescencia indirecta
Microscopio
de luz UV
Fluorocromo: molécula química q absorbe luz a una longitud de onda
(energía) y emite a una longitud superior (menor energía)
Fluoroforos mas comunes: Isotiocianato de Fluoresceína.
Rodamina
HO O O
O
C
OH
R2
R1
La inmunofluorescencia indirecta se ha utilizado
ampliamente como prueba confirmatoria para la infección
por el VIH-1 y lo siguen haciendo laboratorios con amplia
experiencia con la prueba.
Su desempeño es bueno pero requiere de personal
debidamente entrenado para su lectura y de microscopio de
fluorescencia
LIA: inmunoensayo lineal
Incorporan en un soporte plano ,equivalente a
la tira de nitrocelulosa , varias proteínas
recombinantes o péptidos sintéticos
correspondientes a diferentes proteínas del
VIH-1 y en algunos casos del VIH-2
Su sensibilidad es similar al WB y presenta
menos reacciones cruzadas.
LIA: inmunoensayo lineal
Estas pruebas que son sensibles y especificas pueden
considerarse como pruebas confirmatorias y en algunos
sitios reemplazan al WB.
Causas de resultado falso-
positivo:
Relativas al suero:
Relativo a la calidad y manipulación de la muestra:
Calidad, extracción, almacenamiento y contaminación de la misma,
estabilidad y calidad de los reactivos.
Relativas a la presencia de auto anticuerpos:
Presencia de enfermedades autoinmunes (AR, LES).
Relativas a otras condiciones:
Vacunaciones, Enf. Virales, I Renal, Cirrosis, Enfermedades
hemato -oncológicas, alcoholismo, embarazo, etc.
Causas de resultado falso-
negativo:
Periodo de ventana
Pobre respuesta inmune
Tratamiento con inmunosupresores
Procesos malignos
Trasplante de médula ósea
Pérdida de estabilidad de los reactivos
Selección de pruebas rápidas de
VIH apropiadas
Es necesario tomar en cuenta tres factores:
◦ El objetivo de hacer la prueba.
◦ Sensibilidad y especificidad de la prueba.
◦ Prevalencia de la infección de VIH en la población que será
tamizada con las pruebas.
Elección de Pruebas rápidas de VIH
Los tres objetivos para hacer un tamizaje de anticuerpos
contra VIH son:
◦ Tamizaje de donadores de sangre u órganos.
◦ Para fines epidemiológicos
◦ Diagnóstico de personas infectadas.
Sensibilidad y especificidad de la
prueba
Estos dos factores son críticos para diferenciar entre una
persona infectada y una que no está infectada.
Pruebas altamente sensibles disminuyen la posibilidad de
obtener resultados falsos negativo.
Las pruebas altamente específicas disminuyen la posibilidad de
tener resultados falsos positivo.
La mejor elección dependerá del objetivo de hacer la pruebas.
Los estándares mínimos son: Sensibilidad >99%y especificidad
>95% preferiblemente validadas en nuestra población.
Detección de anticuerpos
contra el VIH
Pruebas de Pruebas de
Confirmación
Tamizaje
Sensibilidad Especificidad
Falsos negativos es bajo Falsos positivos es bajo
Algoritmo de diagnóstico por laboratorio para
la infección por el VIH
GRACIAS
