ENZIMAS

Wilmer Leoncio CALDERON MUNDACA

BIOLOGO – MICROBIOLOGO – PARASITOLOGO – PEDAGOGO

DOCENTE INGENIERIA AMBIENTAL

 ENZIMAS

 Características generales.
 Cofactor.
 Clasificación.
 Especificidad.
 Sitio catalítico.
 Cinética enzimática.
 Factores que afectan la
actividad enzimática.
 ENZIMAS
 Las enzimas son los catalizadores de las reacciones de los sistemas biológicos.
• Su función es fundamental dentro de la bioquímica de los organismos, y cumplen con
las siguientes características:
a) Son termolábiles y su actividad depende en ciertos casos del pH del medio.
b) El reconocimiento de la enzima con el reactivo a procesar (denominado sustrato)
es
altamente específico.
c) Tienen gran eficiencia, es decir, transforman un gran número de moléculas de
sustrato por unidad de tiempo.
d) Están sujetas a una gran variedad de
controles celulares, genéticos y alostéricos.
e) Aceleran notablemente la velocidad de una
una reacción química y cumplen con las
siguientes características:
1) Son efectivas en pequeñas cantidades
2) No sufren modificaciones químicas
irreversibles durante la catálisis.
3) No afectan las concentraciones finales
en equilibrio, sino que únicamente
disminuyen la E° de activación requerida.
 NOMENCLATURA Y CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS

 Las enzimas pueden designarse agregando el sufijo “asa” al nombre del sustrato sobre el
cual actúan. ej. lipasa, ureasa, tirosinasa, etc.
 También suelen denominarse según el tipo de reacción catalizada, p.ej.
deshidrogenasa, descarboxilasa
 Ciertas enzimas conocidas desde hace mucho tiempo tienen nombres arbitrarios. p.ej.
amilasa, pepsina, tripsina, etc..
 De acuerdo con la Unión Internacional de Bioquímica se clasifican en 6 grandes grupos:

Clase 1. OXIDORREDUCTASAS. Catalizan reacciones de oxido-reducción, y con

frecuencia utilizan coenzimas como el NAD, FAD o lipoato. Ej.: Deshidrogenasas
reductasas, oxidasas, etc.
AH2 + B A + BH2
Ej. Lactato + NAD+ ---------------------Piruvato + NADH + H+
Clase 2. TRANSFERASAS. Catalizan la transferencia de un grupo de átomos desde un
sustrato a otro. Ej.: aminotransferasa, acetil transferasa, etc..
A - B + C A + C - B
Ej. L-aspartato + α-cetoglurtarato oxaloacaetato + L-glutamato
 CLASIFICACIÓN DE ENZIMAS (cont….)

 Clase 3. HIDROLASAS. Catalizan la hidrólisis del sustrato. Ej.: amilasa, ureasa,

pepsina, tripsina, quimotripsina, etc.
A - B + H2O A - H + B – OH
Ej. Lactosa + H20 Galactosa + Glucosa

 Clase 4. LIASAS. Catalizan la rotura de la molécula de sustrato por un proceso distinto

al de la hidrólisis. Ej.: Descarboxilasa, aldolasa, etc.
A - B A + B
Ej. Fructosa 1,6-biP Gliceraldehido 3-P + Dihidroxiacetona –P

 Clase 5. ISOMERASAS. Catalizan la interconversión de isómeros de cualquier tipo,

ópticos, geométricos o de posición. Ej.: Epimerasa, racemasa, mutasa
A B
Ej. Gliceraldehido-3-P Dihidroxiacetona-3-P

 Clase 6. LIGASAS. Tambieén llamadas sintetasas catalizan la unión de dos

compuestos para formar otro más complejo. La energía necesaria para la formación del
enlaces deriva a menudo de la hidrólisis del ATP. Ej.: tiocinasa, carboxilasa, etc.
A + B + ATP A - B + ADP + Pi
Ej. L-glutamato + NH4+ + ATP L-glutamina + ADP + Pi
 NATURALEZA QUIMICA DE LAS ENZIMAS

• Casi todas las enzimas son de naturaleza proteica

• Algunas enzimas son proteínas simples, constituidas sólo por aminoácidos. Ej. Hidrolasas
• Muchas enzimas son oligoméricas
• Algunas enzimas requieren cofactores para su funcionamiento.
• Cuando la coenzima o el ión metálico está estrechamente unido o covalentemente unido
a la proteína forma un grupo prostético.

Enzima + Cofactor (Coenzima o ion metálico)

(Apoproteína) Fe²+
Mg²+
Mn²+
Holoenzima Zn²+

Moléculas orgánicas complejas

Los cofactores participan de 2 maneras distintas:

1. A través de una fijación muy fuerte a la proteína y salen sin ser modificados del ciclo
catalítico
2. Como un segundo substrato; salen modificados del ciclo catalítico y por lo general
requieren otra enzima para volver al estado original.
 COFACTORES ENZIMATICOS

COFACTOR ENZIMA
COENZIMA
Tiamina pirofosfatasa Piruvato Deshidrogenasa
Flavin adenin nulceótido Monoamino oxidasa
(FAD)
Nicotinamida adenina Lactato deshidrogenasa
dinucleotido (NAD)
Piridoxal fosfato Glucógeno fosforilasa
Coenzima A (CoA) Acetil CoA carboxilasa
Biotina Piruvato carboxilasa
METAL
Anhidrasa carbónica
Zn2+
Alcohol deshidrogenasa
Mg2+ Hexoquinasa
Ni2+ Ureasa
Mo Nitrato reducatasa

Se Glutation peroxidasa
Carboxipeptidasa con Zn2+
Mn2+ Superóxido dismutasa
 Sitio
CATALISIS ENZIMATICA Enzima
(sacarasa) catalítico
Sustrato
(sacarosa)
Glucosa Fructosa
• La Enz. se une efectivamente al o a 1
los sustratos, formando un complejo
transitorio (ES), mediante una rx. Productos son 4
liberados
reversible, cuya E° de activación es Enzima disponible con
menor que la de la rx no catalizada. sitio ctalítico vacío

• Las modificaciones que puede

experimentar la molécula de la Enz.
durante dicha unión son pasajeras,
ya que aparece inalterada al final de 3
la reacción.
2
El proceso puede representarse con
Sustrato es
la ecuación: convertido a
E + S  ES  EP  E + P productos Sustrato se une a
la enzima por
encaje inducido
 Sitio catalítico de
SITIO CATALITICO carboxipeptidasa

 El sitio catalítico, centro activo o lugar del sustrato, es la

región de la enzima donde se fija el sustrato, y que
contribuye con los grupos funcionales que participan en
forma directa para formar o romper enlaces del sustrato
 Representa una pequeña porción de la totalidad de la
Enzima.
 Constituye una entidad Tri-dimensional.

ESPECIFICIDAD DE LAS ENZIMAS

• Las enzimas catalizan una reacción específica, y en lo fundamental ninguna otra.
• Pueden presentar especificidad óptica absoluta para al menos, una porción de la
molécula del sustrato o ala totalidad de dicha molécula. Ej. Enzimas de vía glucolítica
catalizan la interconversión de los D-.fosfoazúcares pero no así la correspondiente a los
L-fosfoazúcares.
• Las enzimas líticas actúan sobre agrupamientos químicos específicos; p.ej.
Glucosidasas sobre glucósidos, esterasa sobre los ésteres, etc.
• Ciertas enzimas líticas presentan una gran especificidad. Las carboxiopeptidasas y las
aminopeptidasas remueven, de uno en uno, los aminoácidos de los extremos de las
terminales carboxilo o amino, en las cadena polipeptídicas.
TEORÍAS DE LA ACCIÓN ENZIMÁTICA

MODELO DE LLAVE Y CERRADURA

(Emil Fischer)
• El sustrato y la enzima se acoplan de forma
estereoespecífica, de la misma manera que
una llave se ajusta a su cerradura.
• Hoy este modelo se considera insuficiente
al no explicar algunos fenómenos de la
inhibición enzimática.

TEORIA DEL AJUSTE INDUCIDO (Koshland)

• Considera a la E como una estructura dotada

de plasticidad y flexibilidad.
• Cuando el sustrato se une a la Enz., induce
cambios conformacionales en la molécula de
ésta, que recién entonces acomoda los
grupos funcionales críticos para asegurar la
ubicación más efectiva.
 FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

1. CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO

Si se mantiene constante la concentración

de la enzima y se varia la concentración de
sustrato se obtiene una curva hiperbólica
como la de la figura.
Al principio un aumento de la concentración
de sustrato produce un aumento rápido de
la velocidad de reacción, pero si se sigue
aumentando la concentración de sustrato,
la velocidad comienza a disminuir y a muy
altas concentraciones de sustrato se
observa que no cambia la velocidad de
reacción, se dice que los sitios catalíticos
de la enzima se encuentran saturados.

El Km corresponde a la concentración de sustrato con lo cual la velocidad de reacción

alcanza un valor igual a la mitad de la máxima.
El valor de Km es característico para cada enzima y Lpara cada uno de los sustratos que la
utiliza, siempre que se le determine en iguales condiciones de temperatura, pH, etc.
Ej. En la catalasa, el valor de Km para el sustrato, H2O2, es 25mM, mientras que la
hexoquinasa, tiene un Km de 0,005 mM para la D-glucosa.
2. CONCENTRACIÓN DE LA ENZIMA Vmáx

Cuando se determina la velocidad inicial de una

Actividad enzimática
reacción catalizada por una enzima a distintas
concentraciones de ésta, en presencia de
cantidades saturantes de sustrato y manteniendo
constantes todos los otros factores en el medio de
reacción, se obtiene el gráfico que nos indica que la
velocidad es directamente proporcional a la
concentración de la enzima. Concentración de Enzima

3. EFECTO DE LA TEMPERATURA

Si bien el aumento de la temperatura incrementa la

velocidad de una reacción catalizada por una enzima
esto resulta válido sólo en un intrevalo de T°
estrictamente limitado. Inicialmente, la velocidad de
reacción se incrementa conforme la T° aumenta,
debido al incremento de la energía cinética de las
moléculas reactantes. Finalmente, sin embargo, la E°
cinética de la enzima excede la barrera energética,
para la ruptura de los enlaces débiles, los cuales
conservan la estructura secundaria, terciaria de dicha
enzima, provocando la desnaturalización.
4. EFECTO DEL PH

Para la mayoría de las enzimas, la actividad

óptima se encuentra entre valores de pH de
6 a 8. Por debajo o por encima de esos
valores, la velocidad de reacción cae más o
menos rápidamente.
Se sabe que los cambios de pH del medio
afectan el estado de ionización de ciertos
grupos funcionales en la molécula de la
enzima y también en la del sustrato.
Por otra parte, los pH extremos provocan
desnaturalización de la molécula enzimática,
con la consiguiente inactivación.

ENZIMA pH
Fosfatasa alcalina 9.5
Lipasa pancreática 8.0
Quimotripsina 8.0
Tripsina 7.9
Catalasa 7.6
Carboxipeptidasa 7.5
Amilasa salival 6.8
Fosfatasa ácida 5.0
Pepsina 1.5
 INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

• Los inhibidores enzimáticos son aquellos agentes que interfieren con la catálisis,
disminuyendo o deteniendo la reacción enzimática.
• Los inhibidores enzimáticos se dividen en 2 grandes clases
1.- INHIBICIONES REVERSIBLES:
 Inhibición competitiva
 Inhibición no competitiva y
 Inhibición anticompetitiva
2.- INHIBICION IREVERSIBLE

INHIBICIÓN COMPETITIVA:

El inhibidor puede combinarse con la enzima libre, de tal modo

que compite con el sustrato normal por unirse al sitio catalítico.
La estructura química de un inhibidor (I), por lo general es
semejante a la del sustrato (S). Por tanto dicho inhibidor se
combina de manera reversible, con la E para formar un complejo
EI, en lugar del complejo ES.
Una característica de este tipo de inhibición está dada por el
hecho de que puede ser revertida aumentando la concentración
de sustrato.
INHIBICIÓN NO COMPETITIVA:

El inhibidor se une a la enzima en un lugar de la molécula

diferente del sitio catalítico, a menduo deformándola de modo
que ésta no forme el complejo ES a su velocidad normal.
- No existe competencia entre el sustrati y el inhibidor.
- El Inh. presenta poco parecido estructural o ninguno con el S.

INHIBICIÓN IRREVERSIBLE:

El inhibidor produce un cambio permanente en la molécula de

enzima, que resulta en un deterioro definitivo de su capacidad
catalítica.
Por lo general estos inhibidores modifican químicamente residuos
de aminoácidos en la enzima que tienen funciones fundamentales
en la catálisis. Ej. los gases nerviosos, como el fluorofosfato de
diisopropilo (DFP) que forma un complejo con la enzima
acetilcolinesterasa.
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA - EJEMPLOS

Droga Target

Inhibición Competitiva

Malonato Succinato deshidrogenasa

Metotrexato Dihidrofolato reductasa

Yodoacetamida Gliecraldehido 3-P-Dhasa

Inhibición no competitiva

Isoleucina Treonina dehidratasa

Inhibición irreversible
Aspirina Prostaglandina sintasa
Penicilina Glucopeptido transpeptidasa
 ENZIMAS REGULATORIAS

• Son grupos de Enzimas que trabajan en conjunto en vías que llevan a cabo procesos
metabólicos.
• Estas enzimas exhiben incrementos o disminuciones en su actividad en respuesta a
ciertas señales.
• Hay 2 grandes clases de enzimas regulatorias en vías metabólicas: regulación alostérica
y modificación covalente.
• La regulación alostérica funciona por uniones reversibles no covalentes a un compuesto
llamado regulador alostérico . Este regulador puede ser tanto inhibitorio o excitatorio.
 MODIFICACION COVALENTE

 La actividad enzimática es afectada por

la adición o remoción de grupos
químicos
Regulación por fosforilación:
- Quinasa = grupo de enzimas que
añaden grupos fosfato
 - Fosfatasa = grupo de enzimas que
remueven grupo fosfato

 La enzima fosforilasa, se encuentra en

el músculo en reposo en un estado de
baja actividad llamada fosforilasa b, la
cual es convertida en fosforilasa a
actva, por aidicón de restos fosfato que
se unen al hidroxilo de residuos serina
en la molécula de la enzima.
 La fosforilasa a a su vez, puede ser
desactivada por eliminación de los
grupos fosfato y revierte a fosforilasa b.
 IMPORTANCIA DE LAS ENZIMAS EN EL DIAGNOSTICO

Enzima sérica Abrev. Enferm. en que está alterada

Aspartato aminotransferasa AST Enfermedades hepáticas

Isquemia miocárdica

Alanina aminotransferasa ALT Enfermedades hepáticas

Isquemia miocárdica

Amilasa Pancreatitis aguda

Creatinfosfocinasa CPK Isquemia miocárdica
Colinesterasa CHE Intoxicación alcohólica aguda
Fosfatasa ácida ACP Carcinoma de Próstata
Fosfatasa alcalina AP Ictericia obstructiva. Tumores
Glutamato Dhasa GLDH Ictericia obstructiva
-Glutamil transferasa GT Cirrosis alcohólica.
Lipasa Pancreatitis aguda