Nutrición Bacteriana
CONCEPTOS BASICOS
La nutrición es el proceso por el que los seres vivos
toman del medio donde habitan las sustancias
químicas que necesitan para crecer.
• Se requieren para dos objetivos:
Fines energéticos (reacciones de mantenimiento);
Fines biocinéticas (reacciones de anabolismo).
Nutrición Bacteriana
El estudio de la nutrición microbiana se puede
desglosar en varios apartados: así, podemos
considerar los tipos de nutrientes requeridos, los
aspectos cuantitativos, e incluso podemos abordar
los aspectos ambientales (en cuyo caso entramos
dentro del campo de la Eco fisiología). Igualmente
podemos estudiar la aplicación práctica de la
nutrición bacteriana, que se plasma sobre todo en
el diseño de medios de cultivo para manejar los
microorganismos en el laboratorio.
Nutrición bacteriana
Desde el punto de vista de los fines de
aprovisionamiento de energía, las bacterias se
pueden dividir en:
Litótrofos: son aquellas que sólo requieren
sustancias inorgánicas sencillas (SH2 S0, NH3,
NO2-, Fe, etc.).
Organotrofas: requieren compuestos orgánicos
(hidratos de carbono, hidrocarburos, lípidos,
proteínas, alcoholes...).
Nutrición bacteriana
Desde el punto de vista biosintético (para sus necesidades
de crecimiento), las bacterias se pueden dividir en:
• autotrofas: crecen sintetizando sus materiales a partir
de sustancias inorgánicas sencillas. Ahora bien,
habitualmente el concepto de autotrofía se limita a la
capacidad de utilizar una fuente inorgánica de carbono,
a saber, el CO2.
• heterotrofas: su fuente de carbono es orgánica (si bien
otros elementos distintos del C pueden ser captados en
forma inorgánica).
Nutrición Bacteriana
• Sean autótrofas o heterótrofas, todas las
bacterias necesitan captar una serie de
elementos químicos, que se pueden clasificar
(según las cantidades en que son requeridos)
como
• macronutrientes (C, H, O, N, P, S, K, Mg), y
• micronutrientes o elementos traza (Co, Cu, Zn, Mo...)
Clases de nutrientes
Podemos clasificar los nutrientes en las
siguientes categorías:
• Universales
• Particulares
• Factores de crecimiento
Nutrientes universales
Agua: El principal constituyente del protoplasto
bacteriano.
• Las fuentes de agua pueden ser:
• endógena: procedente de procesos de oxido-reducción;
• exógena (la más importante): procedente del medio, y
que difunde a través de las membranas.
CO2, fosfatos y sales minerales
Nutrientes universales
CO2 El anhídrido carbónico es requerido por todo
tipo de bacterias.
• El origen del CO2 puede ser:
• endógeno: procedente de descarboxilaciones que ocurren al
degradar la fuente orgánica de carbono;
• exógeno: el CO2 de la atmósfera o disuelto en las soluciones
acuosas.
Normalmente, las bacterias crecen a la
concentración de CO2 atmosférico (0.03%), pero
algunas bacterias (Neisseria, Brucella), cuando se
aíslan por primera vez, requieren atmósferas
enriquecidas, con 5-10% de CO2.
Nutrientes Universales.
Fósforo.-Suele requerirse en forma de fosfatos,
sea orgánico o inorgánico. Los fosfatos orgánicos
son hidrolizados por fosfatasas extracelulares o
(en las Gram-negativas) periplásmicas. El fósforo
se usa principalmente para la síntesis de los
ácidos nucleicos y los fosfolípidos, pero aparece
también en coenzimas y en proteínas.
Nutrientes Universales
Sales minerales.-
Las sales minerales son la fuente de aniones (p.
ej. el Cl-) y de cationes para la célula.
Los siguientes cationes, concretamente, se
necesitan en cantidades relativamente grandes:
K+, Mg++, Ca++, Fe++.
Nutrientes Universales
El ión potasio (K+): Interviene en la activación de una
variedad de enzimas, incluyendo las que participan en la
síntesis de proteínas. En Gram-positivas está asociado con
los ácidos teicoicos de la pared.
El ión magnesio (Mg++): Estabiliza ribosomas, membranas
y ácidos nucleicos; como cofactor en muchas reacciones,
especialmente las que implican transferencia de grupos
fosfato. Por ejemplo, en las reacciones que requieren ATP,
el Mg++ puede unir la enzima al sustrato durante el
mecanismo de acción de la primera.
Nutrientes Universales
El ión calcio (Ca++):Es un cofactor de ciertas
enzimas, como proteinasas.
El hierro (principalmente como ión ferroso, Fe++).
El hierro participa en muchas moléculas
implicadas en procesos de respiración, como
citocromos y ferroproteínas no hémicas (proteínas
con Fe-S); interviene como cofactor en ciertas
enzimas.
NUTRIENTES PARTICULARES
Los elementos N y S (que requieren todos los seres
vivos) pueden ser captados por las bacterias de
modos muy distintos, dependiendo de sus
capacidades biosintéticas.
El radical -NH2 forma parte de los aminoácidos (que
a su vez son los sillares de las proteínas) y de las
bases nitrogenadas (que participan en los ácidos
nucleicos y en algunas coenzimas); El radical -SH
interviene en determinados aminoácidos y en
coenzimas como la CoA.
NUTRIENTES PARTICULARES
Muchas bacterias heterótrofas pueden usar
alguna forma reducida:
• de N inorgánico: amonio (NH4+)
• de S inorgánico: sulfuros (S=, SH-)
• de N orgánico: aminoácidos, péptidos
• de S orgánico: cisteína.
FACTORES DE CRECIMIENTO
Los factores de crecimiento son moléculas
orgánicas específicas que, en muy pequeña
cantidad, algunas bacterias necesitan para
crecer.
Suelen ser coenzimas o sus precursores,
vitaminas, que determinadas bacterias no
pueden fabricar por sí mismas, al carecer de
parte o toda de una ruta biosintética.
FACTORES DE CRECIMIENTO
Ejemplos:
Biotina, niacina, tiamina y ácido pantoténico.
grupos hemo y piridín-nucleótidos.
MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es una solución acuosa
(bien como tal, o bien incorporada a un coloide
en estado de gel) en la que están presentes
todas las sustancias necesarias para el
crecimiento de un(os) determinado(s)
microorganismo(s).
CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS
DE CULTIVO
Los medios de cultivo pueden clasificarse
según diferentes criterios, pero los más
importantes son aquellos que se basan en:
a) Su consistencia
b) Su utilización
c) Su composición
d) Su origen
SEGÚN SU ESTADO FÍSICO (CONSISTENCIA).
1) Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado,
denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado
es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto
de carne, peptona y agua.
2) Medios sólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos,
agregándoles un agente gelificante, Como: La gelatina( poco
conveniente ) y Agar-agar: es un polímero de azúcares obtenido de
algas marinas. Se trata de una molécula insoluble en agua pero
soluble en agua caliente; una solución al 1,5% p/v forma un gel firme
entre 32 y 39ºC y no se funde por debajo de 85ºC. Funde a 90ºC y
solidifica una vez fundido alrededor de los 45ºC.
3) Medios semisólidos: Se preparan a partir de los medios líquidos,
agregando a éstos un agente solidificante en una proporción menor
que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la
investigación de la movilidad de las bacterias
SEGÚN SU UTILIZACIÓN.
Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes
mínimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que
no necesiten requerimientos especiales: agar nutritivo, agar-agar, de
soja- tripticase.
Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las
sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores
indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes.
Este enriquecimiento se hace por adición de sangre, suero, leche,
huevo, bilis, etc. que aportan dichos factores : agar chocolate.
SEGÚN SU UTILIZACIÓN.
Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el
crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población
polimicrobiana, facilita nutricionalmente el crecimiento de
una población microbiana específica. El caldo selenito, que se
utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el
del resto de enterobacterias.
Medios inhibidores: Cuando las sustancias añadidas a un
medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una
población microbiana, se denomina inhibidor. Los medios
inhibidores se consiguen habitualmente por adición de
sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba
completamente el desarrollo de una población determinada.
Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el
crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el
crecimiento de los Gram positivos
SEGÚN SU UTILIZACIÓN
Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características
bioquímicas que ayuden a diferenciar géneros o especies. La adición de un
azúcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El
medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los
gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. También
lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemólisis), el
SS (que es doblemente diferencial), etc.
Medios de identificación: Son los destinados a comprobar alguna cualidad
específica que puede servirnos para reconocer la identidad de un
microorganismo deben poseer los elementos necesarios para asegurar el
crecimiento de los microorganismos, el sustrato específico que vaya a ser
metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. El agar Kligler, el
medio de Simmons y en general, cualquier medio al que se le haya añadido
un elemento diferencial de un microorganismo, son medios utilizados en
identificación.
SEGÚN SU UTILIZACIÓN
Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de
células a partir de un microorganismo ya aislado. Se emplean en la
obtención de vacunas, en la investigación y en la industria. Los medios
más adecuados para la multiplicación suelen ser líquidos. El caldo-
infusión cerebro-corazón (BHI), es un ejemplo típico de estos medios.
Medios de conservación: Se utilizan para conservar una cepa que, por
diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan
como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en el
Laboratorio de Microbiología. En el laboratorio se pueden conservar las
cepas de tres formas:
a) haciendo pases periódicos de placa a placa,
b) mediante liofilización de una suspensión bacteriana, y
c) congelando las cepas en leche descremada estéril al 0,1%.
SEGÚN SU UTILIZACIÓN
Medios de transporte: Se usan para el transporte
de muestras clínicas que no pueden sembrarse
inmediatamente. Subutilización debe hacerse
introduciendo la torunda con la que se obtuvo la
muestra en el interior del medio (generalmente
en un tubo). Son ejemplos típicos de este grupo
los medios de Stuart-Amies, Cary-Blair, etc.
Según su origen
1) Medios complejos o indefinidos: su composición
química exacta se desconoce, ya que son el
producto de realizar infusiones y extractos de
materiales naturales complejos:
Ejemplos:
• Digeridos crudos de extracto de carne
• Digeridos de extracto de levadura
• Digeridos de peptona de carne o de soja
• Digeridos de caseína (de la leche).
Estos medios contienen fuentes variadas de C y N orgánicos, sales minerales y
micronutrientes.
Según su origen
2) Medios sintéticos o definidos: se obtienen
disolviendo en agua destilada cantidades concretas
de distintas sustancias químicas puras, orgánicas
y/o inorgánicas. La composición concreta de un
medio sintético dependerá de la bacteria que
queramos cultivar: lógicamente, un medio definido
para una bacteria con grandes capacidades
biosintéticas será más sencillo que el medio
definido de otra bacteria con menores posibilidades
biosintéticas.
Según su origen
3) Medio semisintético: "mezcla" de los
anteriores, llevan algunas sustancias químicas
cuya naturaleza y cantidad conocemos, junto
con sustancias de naturaleza y composición
indefinidas.
DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
Agar nutritivo : para el cultivo de gérmenes que
no presentan exigencias particulares. No es
diferencial.
Agar sangre : Es un medio enriquecido que se
utiliza además para la investigación de los
diversos tipos de hemólisis (α, ß ó gamma). Se
utiliza para el crecimiento de estreptococos.
DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
El agar chocolate :Contiene hemoglobina, que aporta al
medio un importante elemento para el crecimiento: el
factor X o hemina termoestable. El agar chocolate es un
medio destinado principalmente al aislamiento de
Neisseria (gonococos y meningococos) y Haemophilus.
Thayer-Martin: Utilizado para el aislamiento del gonococo
y que no es otra cosa que un agar chocolate enriquecido
al cual se ha añadido una mezcla de tres antibióticos
específicos que impedirán el crecimiento del resto de la
flora acompañante.
DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
Agar Levine/EMB: Se utiliza para aislamiento de
enterobacterias, pues impide el crecimiento de Gram
positivos y diferencia muy bien a E. coli.
Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el
aislamiento e identificación de enterobacterias. Es un
medio inhibidor de los gérmenes Gram positivos por su
contenido en cristal violeta y selectivo para
enterobacterias por su contenido en sales biliares. En su
composición lleva un azúcar (lactosa) y un indicador (rojo
de metilo) que lo convierten en un medio diferencial.
DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrólito Deficiente) está
recomendado para el recuento e identificación presuntiva de los
microorganismos de las vías urinarias. Su bajo contenido en
electrolitos evita la invasión de los cultivos por Proteus. azul de
bromotimol como indicador. Las colonias lactosa positivas aparecerán
de color amarillo y las lactosa negativas lo harán con un color verdoso,
blanco o azulado.
Agar S.S: El agar SS es un medio selectivo empleado para el
aislamiento de Salmonella y Shigella a partir de muestras fecales. El
medio contiene sales biliares y verde brillante para impedir el
crecimiento de coliformes y gérmenes Gram positivos. La presencia de
lactosa y rojo de metilo nos permiten diferenciar las colonias que
fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no lo hacen
(incoloras).Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la
lactosa por lo que este medio es excelente para descartar todas las
colonias que no cumplan este requisito.
DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
Agar Mueller-Hinton: Es el medio
universalmente aceptado para la realización de
los antibiogramas o pruebas de sensibilidad a
los antimicrobianos.
Agar Tripticasa de soja: Es un medio utilizado
para el crecimiento de gérmenes exigentes,
como Brucella, Neisseria o Streptococcus. Es un
medio muy enriquecido, pero no es diferencial.
DESCRIPCIÓN Y UTILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO
Agar Kligler: Medio específico para pruebas de
identificación de enterobacterias. permite conocer el
comportamiento del microorganismo ante dos azúcares
(glucosa y lactosa), investigar la formación de gas y
comprobar si el microorganismo puede producir sulfato
ferroso a partir del tiosulfato sódico.
Löwenstein-Jensen: Este medio se utiliza para el cultivo
de Mycobacterium tuberculosis. Contiene verde
malaquita para inhibir parcialmente el crecimiento de
otras bacterias. El huevo se utiliza como sustancia de
enriquecimiento.
