Extracción de petróleo en suelos

contaminados empleando bacterias

Profesora: GuiselaYupanqui Siccha
Curso:Microbiología
Integrantes: Anyosa López, Fiorella Marisabel
Calero Cárdenas,AntonyVinceth
Chulluncuy Francisco, EdwinVictor
Lopez Ponte,Kevin Gerson
Quispe Baños,Raúl Favio
Romero Mori,Andrea Mireylla
 Introducción

La remoción de hidrocarburos empleando bacterias ha

mostrado potencialidades para su aplicación en tecnologías
de remediación de ecosistemas impactados, así como en el
aumento de la eficiencia de extracción de petróleo en pozos.
La industria petrolera es la que más terreno tecnológico
exhibe para la introducción de estos biocompuestos, pues
varios estudios han demostrado que la extracción de
hidrocarburos empleando tensoactivos de origen biológico
es un proceso eficiente, por lo que podrían ser empleados
en tecnologías que solucionen dos de los principales
problemas del sector industrial: la contaminación por
hidrocarburos y la eficiencia de extracción.
2
Romero Mori, Andrea Mireylla
El Suelo

Romero Mori, Andrea Mireylla

 Estructura y Componentes del Suelo
El suelo se define como la parte superior de la corteza terrestre, y se trata de un sistema formado por
componentes minerales, componentes orgánicos, gas, y agua envolviendo partículas y el espacio capilar.

Romero Mori, Andrea Mireylla

 Estructura y Componentes del Suelo

Según las proporciones de

arenas (2-0,05 mm
diámetro), limos (2-50 µm
de diámetro), arcillas
(inferior a 2 µm de
diámetro) y materia
orgánica, principalmente
humus y derivados, existe
una gran variedad de tipos
diferentes de suelos.

El agua contenida en los poros del suelo contiene sales minerales y nutrientes y es el medio en el
cual se puede desarrollar la actividad metabólica de los microorganismos que lo colonizan. 5

Romero Mori, Andrea Mireylla

 Las poblaciones microbianas

La red de poros formada como

resultado de la asociación de las
partículas minerales y la materia
orgánica muestra una gran
variedad de tamaños y espacios,
lo que condiciona el tipo y la
diversidad de las poblaciones
microbianas existentes.

En términos generales se encuentran del orden de 106 − 109 bacterias cultivables por gramo de suelo, mientras que
los hongos se encuentran en dos órdenes de magnitud menos como unidades formadoras de colonias. 6

Romero Mori, Andrea Mireylla

 Las poblaciones microbianas
La organización estructural de las partículas del suelo, confiere una heterogeneidad espacial para los microorganismos, que se
caracteriza por la presencia de diferentes sustratos, nutrientes, concentraciones de O2, contenido de agua y de un pH variable.

En un suelo se puedan encontrar una gran variedad de poblaciones microbianas con capacidades
metabólicas distintas, condicionadas también por la biodisponibilidad de las distintas fuentes de carbono y
energía, que a su vez está condicionada por las características fisicoquímicas propias de cada suelo.
Romero Mori, Andrea Mireylla
Destino ambiental de los contaminantes orgánicos en un suelo

La existencia de tres fases en el suelo, así como la gran

diversidad de materiales que pueden constituirlo, lo
convierten en un compartimento ambiental muy complejo.

La distribución de los contaminantes orgánicos se encuentra

condicionada por estas características, pudiéndose encontrar adsorbidos
sobre el particulado o materia orgánica, en disolución, o en fase de vapor.

Al igual que en los medios acuáticos, los contaminantes orgánicos

que se encuentran en la superficie pueden sufrir evaporación o
fotooxidación. De este modo en el conjunto del suelo, los
contaminantes orgánicos pueden ser transformados
fisicoquimicamente o sufrir biodegradación.
Romero Mori, Andrea Mireylla
Destino ambiental de los contaminantes orgánicos en un suelo

El proceso de transformación más importante es la biodegradación.

Los microorganismos suelen estar distribuidos en el suelo formando
microcolonias que se encuentran separadas unos 100 µm, y situadas
en poros pequeños entre 0,8 y 3 µm.

Además los productos de oxidación parcial procedentes de los

compuestos orgánicos (como los HAPs y otros hidrocarburos) pueden
ser movilizados en la fase acuosa (son más polares), pudiendo ser
transportados hasta otros suelos o ambientes acuosos.

Romero Mori, Andrea Mireylla

Anyosa López, Fiorella Marisabel
La contaminación por hidrocarburos es una problemática de carácter mundial y amplia distribución geográfica, teniendo en cuenta que independiente de la zona
afectada (lagos, suelos, zonas freáticas, ríos y playas) por procesos biológicos y físicos, los hidrocarburos tienen como destino final el océano.

En la actualidad existe un creciente interés por la contaminación del suelo con hidrocarburos, por parte Así un suelo contaminado se
de los países dedicados a la explotación de petróleo, organizaciones e instituciones afines al medio define como todo aquel cuyas
ambiente, debido a los riesgos directos que ocasionan a la salud humana y el entorno, además los altos características físicas, químicas y
costos que implican los procesos de limpieza y mitigación de los lugares afectados. Los antecedentes biológicas naturales, han sido
descritos están direccionando sus políticas hacia la disminución y la remediación de la contaminación alteradas debido a actividades
por hidrocarburos. antropogénicas y representa un
riesgo para la salud humana o el
medio ambiente.
Anyosa López, Fiorella Marisabel
La contaminación de suelo por hidrocarburos es dinámica, los componentes individuales pueden separarse de la mezcla original como se detalla a
continuación:

Los Compuestos Orgánicos Volátiles Se solubilizan gracias a la polaridad de

Se absorben en la superficie de la fase
(COVs) se evaporan sus moléculas
sólida del suelo por reacciones químicas.

Son degradados por microorganismos en

el suelo. Como resultado de estas
transformaciones los hidrocarburos se
enriquecen en compuestos pesados, más
difíciles de degradar.
Anyosa López, Fiorella Marisabel
 TIPO DE INDUSTRIA PRINCIPALES CONTAMINTANTES DEL SUELO
Industria petrolera Hidrocarburos aromáticos y alifáticos
Alquitrán, benceno fenoles, hidrocarburos aromáticos policlínicos,
Fábrica de gas
cianuros
Industria textil Hidrocarburos y metales pesados
Estaciones de servicio Hidrocarburos y derivados del petróleo
Centrales termoeléctricas Hidrocarburos, derivados del petróleo y metales pesados
Minería Hidrocarburos aromáticos, metales pesados y cianuro
Industria agropecuaria Hidrocarburos, pesticidas y plaguicidas
Floricultura Pesticidas, plaguicidas e hidrocarburos
Lavadora de vehículos Hidrocarburos
Mecánicas automotrices Hidrocarburos, aceites
Tabla 1. Industria que generan contaminación de suelos con hidrocarburos

Anyosa López, Fiorella Marisabel

 Disminución del rendimiento de los cultivos y pérdida de calidad de los productos
obtenidos.
 Impide o retarda el crecimiento de la vegetación en el área contaminada.
 Alteraciones en la población microbiana del suelo.
 Contaminación de aguas superficiales a través de la escorrentía.
 Contaminación de aguas subterráneas a través de lixiviados.
 Contaminación del aire por combustión, evaporación, sublimación o arrastre por el
viento.
 Envenenamiento a través de la cadena alimenticia.
 Cuando la concentración de los contaminantes sobrepasa la capacidad de aceptación
del suelo, se produce una disminución o anulación de su poder autodepurante.
 Impacto paisajístico en el sector en que se encuentra la matriz contaminada.
 Se impide el intercambio gaseoso con la atmósfera iniciando una serie de procesos
físicos químicos simultáneos. Universidad del Bío-Bío. Red de Bibliotecas - Chile 9
 Los elevados desniveles de salinidad pueden destruir la estructura terciaria de las
proteínas, desnaturalizar enzimas y deshidratar células. Anyosa López, Fiorella Marisabel
  Los constituyentes de los hidrocarburos, de bajo peso molecular (benceno, tolueno,
xileno) afectan el sistema nervioso central, irritación de la piel, dolores de cabeza,
nauseas, hormigueos en manos y pies.
 Cuando la exposición a los hidrocarburos es alta, puede provocar la muerte.
 Los principales peligros provenientes de elevadas concentraciones de hidrocarburos en
general, están relacionados a los hidrocarburos aromáticos (HAPs) principalmente por
sus efectos cancerígenos.
 El benceno es responsable de la leucemia.
 La gasolina y kerosene produce irritación en la garganta y estómago, depresión del
sistema nervioso central, dificultad para respirar y neumonía.
 Compuestos como el Antraceno, Pireno, Fenanteno, benzopirenos, causan la irritación
de la piel, cáncer de piel, testículos y pulmones.
 Los metales pesados (cadmio, cromo, plomo, magnesio, cobalto, cobre) pueden originar
problemas reproductivos y cáncer.

Anyosa López, Fiorella Marisabel

  En las aves se ha presentado efectos negativos sobre la capacidad reproductiva.
 En estudios realizados en patos que han ingerido crudo se ha observado anemia
hemolítica.
 Algunos estudios en ratas han confirmado la presencia de tumores en la piel, por la
exposición al crudo, además se han presentado cambios funcionales en las células
hepáticas de las ratas.
 Destrucción de las fuentes alimenticias de las especies superiores.
 Incorporación de carcinógenos en la cadena alimentaria.
 Persistencia de una mancha de crudo limita el paso de la luz y por lo tanto reduce la
actividad fotosintética de muchas plantas, si la mancha las cubre dificulta también su
función reproductora y fijación.
 Pérdida de parajes con valor natural, recreativo o vocacional.

Anyosa López, Fiorella Marisabel

Anyosa López, Fiorella Marisabel
El petróleo es un combustible natural compuesto de varios tipos de hidrocarburos, es decir, de moléculas que contienen básicamente, carbono e hidrógeno.
Estas moléculas pueden estar formadas de cadenas de átomos de carbono largas o cortas y que pueden adoptar diferentes estructuras. Los hidrocarburos del
petróleo pueden dividirse en cuatro categorías de compuestos:

Saturados Aromáticos Resinas Asfaltenos

Cada una de las categorías agrupa compuestos con características de solubilidad, volatilidad y toxicidad propias. Desde un punto de vista de biodegradabilidad,
los hidrocarburos pueden ordenarse de mayor a menor biodegradabilidad en: alcanos lineales > alcanos ramificados > aromáticos ligeros > alcanos cíclicos
> aromáticos pesados > compuestos polares

Anyosa López, Fiorella Marisabel

Anyosa López, Fiorella Marisabel
El estudio más detallado de los hidrocarburos de un crudo de petróleo agrupa estos compuestos en las siguientes familias:

 Parafinas Volátiles: Representan hasta un 30% del crudo petróleo. Son n – alcanos e
isoprenoides. Es la fracción más volátil del crudo y por lo tanto el más susceptible de
pérdidas abióticas por volatización
 Parafinas No Volátiles: Se definen como aquellos n – alcanos e isoprenoides entre C11
y C40.
 Naftenos: Esta familia está compuesta por las cicloparafinas o cicloalcanos. Los
compuestos más abundantes de esta familia son los ciclopentanos alquilados
(fundamentalmente metilados), que pueden llegar a representar un 31% del crudo.
Esta familia engloba a los hopanos.
 Oleofinas: Son alquenos, los cuales están poco presentes en el crudo del petróleo,
encontrándose en concentraciones traza.
 Aromáticos: El crudo de petróleo contiene una mezcla muy compleja de hidrocarburos
aromáticos. Esta fracción la componen bencénicos en su estructura. Así se encuentran
hidrocarburos monoaromáticos, diaromáticos y poliaromáticos.

Anyosa López, Fiorella Marisabel

 El término TPH se usa para describir a un grupo de sustancias químicas, derivadas del petróleo crudo, debido al gran número de hidrocarburos
involucrados generalmente no es práctico medir cada uno de ellos, sin embargo es útil medir la cantidad total del conjunto de hidrocarburos que se
encuentran en una muestra de suelo contaminada que sirve como indicador general del tipo de contaminación. Uno de los factores que limita la
eliminación de los hidrocarburos contaminantes es la transferencia de masa. Los tratamientos de limpieza del suelo utilizan usualmente métodos que
permitan el arrastre de los hidrocarburos, pero deben vencer para ello, las fuerzas de adsorción sobre las partículas del suelo por modificación de
temperatura, de las interacciones químicas (extracción, emulsificación) o de la tensión de vapor. En el caso de la contaminación con hidrocarburos, se
proponen tratamientos físicos, químicos y biológicos que pueden ser utilizados en complementariedad (Thomassin-Lacroixet al., 2002).

Anyosa López, Fiorella Marisabel

MICROORGANISMOS EN
LA BIORREMEDIACIÓN

Quispe Baños Raul Favio

Pseudomonas Arthrobacter Achromobacte

Micrococcus Vibrio Acinetobacter

Quispe Baños Raul Favio
• Por su diversidad, las bacterias se encuentran regularmente en
comunidades heterogéneas; algunas especies son degradadores
primarios, iniciando la degradación de la materia orgánica en el suelo,
otras crecen en compuesto resultantes de la degradación parcial de
complejos orgánicos o productos residuales de degradadores
primarios. Tienen tres apariencias físicas generales:
 Esféricas (Cocos).
Forma de bastones (Bacilos).
Forma de espiras (espirilos).

Quispe Baños Raul Favio

HONGOS
• Son altamente protistas, no poseen movimiento de taxis, y emplean
materia orgánica como fuente de carbono y energía.
• Algunos de los más conocidos son los mohos, levaduras y setas.
• En comparación con las bacterias, los hongos son menos numerosos y
crecen a velocidades considerablemente bajas; además, los procesos
metabólicos de estos son menos diversos.
• Como grupo, tienden a ser más tolerantes a los ácidos que las
bacterias, y son más sensibles a la variación en la humedad.

Quispe Baños Raul Favio

Un hongo que tiene un considerable potencial en
el tratamiento de compuestos orgánicos, es el
Phanerochaete chrysosporium, hongo de la
podredumbre blanca. Este organismo produce una
enzima extracelular peroxidasa, que degrada la
lignina en presencia del peróxido; se ha
encontrado que degrada una alta variedad de
compuestos altamente clorados y recalcitrantes.
En general, los microorganismos aislados en
suelos, poseen actividades de peroxidasas y
oxigenasas, que permiten la oxidación de algunas
fracciones del petróleo. Esta oxidación cambia las
propiedades de los compuestos, haciéndolos
susceptibles a ataques secundarios, y facilitando
su conversión a bióxido de carbono y agua.
Quispe Baños Raul Favio
 MÉTODOS DE BIORREMEDIACIÓN
• Bioaireación o Bioventeo: Consiste en estimular la biodegradación natural de los
contaminantes de forma pasiva, estimulando la actividad microbiana a través de gases, como
el metano y el oxígeno. Se usa principalmente para tratar suelos orgánicos semi volátiles o no
volátiles.
VENTAJAS:
Es una técnica altamente efectiva para tratar contaminaciones con compuestos con baja
presión de vapor (menos de 1 mmHg), ya que su tasa de degradación es mucho mayor que la
de volatilización.
Como todos los tratamientos “In situ”, cuando los costos de excavación son altos, el bioventeo
puede ser una alternativa económicamente interesante. No requiere área adicional para llevar a
cabo el tratamiento, ni el uso de maquinaria pesada.
DESVENTAJAS:
Pérdida de nutrientes en el subsuelo.
Najo contenido de humedad del suelo y la dificultad de lograr el caudal de aire a través de la
zona contaminada.
Requiere largos periodos de tiempo para obtener la concentración final de hidrocarburos
deseada.
La descontaminación puede llevarse a cabo por efecto de la volatilización de compuestos más
que por su biodegradación.
Quispe Baños Raul Favio
• Bioestimulación: Radica en adicionar soluciones acuosas que
contengan nutrientes, como el nitrógeno y fósforo, para mejorar la
biodegradación de contaminantes orgánicos o la inmovilización de los
inorgánicos. Se aplica en suelos contaminados con pesticidas y se ha
comprobado buenos resultados con desechos de municiones.
VENTAJAS:
Es muy útil en el tratamiento de zonas extensas contaminadas de
centros industriales.
DESVENTAJAS:
Esta tecnología no es recomendable para suelos arcillosos, altamente
estratificados o demasiado heterogéneos, ya que pueden provocar
limitaciones en la transferencia de O2.

Quispe Baños Raul Favio

• Bioaumentación: Aplicable cuando los microorganismos de la
microflora son insuficientes para degradar los contaminantes, y
cuando se requiere el tratamiento inmediato del sitio contaminado,
consiste en la adición de una alta concentración de microorganismos
vivos capaces de degradar los contaminantes. Usado para tratar suelos
contaminados con insecticidas, herbicidas y con desechos con altas
concentraciones de metales.
VENTAJAS:
No requiere área adicional para llevar a cabo el tratamiento, ni el uso
de maquinaria pesada.
DESVENTAJAS:
El tamaño de la población de microorganismos degradadores crece
rápidamente como respuesta a la contaminación del medio y es muy
difícil, si no imposible, incrementar la población microbiana más allá
de esos valores.

Quispe Baños Raul Favio

 • La biodegradabilidad de una
mezcla de hidrocarburos presente
en un suelo contaminado depende
de diversos factores como son: la
presencia de una población
microbiana degradadora
potencialmente activa, la
estructura molecular del
contaminante, su concentración y
biodisponibilidad, y factores
ambientales como el pH,
temperatura, humedad del suelo,
presencia de aceptores de
electrones disponibles, y la
existencia de nutrientes
inorgánicos (fuente de N y P)
Factores que condicionan la disponibles.
biorremediación de un suelo 31
Lopez Ponte, Kevin Gerson
 Factores que condicionan la biorremediación de un suelo
1. El pH La variación del pH del suelo afecta a la actividad microbiana y también a la
solubilización y adsorción/absorción de los contaminantes y de los iones.

• Las formas catiónicas (NH4+, Mg2+, Ca2+) son

más solubles a pH ácido mientras que las
formas aniónicas (NO3 - , NO2 - , PO4 3- Cl- )
son más solubles a pH alcalino.
• El pH óptimo para las bacterias heterótrofas
es neutro (pH 6-8), mientras que es más ácido
para los hongos (pH 4-5).
• El pH óptimo establecido para procesos de
biodegradación es neutro (pH 7,4-7,8).
• Verstraete(1976) consiguieron duplicar la
biodegradación de un suelo contaminado con
gasolina incrementando el pH de 4,5 a 7,4.
32
Lopez Ponte, Kevin Gerson
Factores que condicionan la biorremediación de un suelo
2. Temperatura La temperatura es uno de los factores ambientales más importantes que afecta
la actividad metabólica de los microorganismos y la tasa de biodegradación.

Las condiciones mesofílicas (20-30ºC) son las

óptimas para la biorremediación de suelos
contaminados.
No obstante, también se ha descrito
biodegradación de hidrocarburos temperaturas
extremas:
• 10ºC en suelos subárticos y subalpinos
• 5ºC en suelos árticos
• Hasta 60ºC por una cepa termófila de 152
Bacillus stearothermophilus aislada de un
suelo contaminado con crudo de petróleo del
desierto kuwaití. 33
Lopez Ponte, Kevin Gerson
 Factores que condicionan la biorremediación de un suelo
3. Humedad La humedad del suelo puede limitar de forma severa la biodegradación, fundamentalmente
en suelos superficiales afectados por oscilaciones importantes en el contenido de agua.

• El nivel óptimo de humedad depende de las

propiedades de cada suelo, el tipo de
contaminación y si la biodegradación es
aeróbica o anaeróbica.
• Un déficit de agua puede disminuir el
transporte de nutrientes y de contaminantes,
así como también la migración bacteriana a
través del suelo.
• El exceso de agua desplaza el aire residente
en los poros del suelo, generándose con
mayor facilidad condiciones anaeróbicas, al
agotarse el oxígeno disuelto en agua. 34
Lopez Ponte, Kevin Gerson
 Factores que condicionan la biorremediación de un suelo

• Los n-alcanos y los alcanos ramificados de cadena 4. Estructura química

intermedia son los sustratos más fácilmente
degradables por los microorganismos del suelo, y que
por lo tanto tienden a ser eficazmente biodegradados.
• Sin embargo, los alcanos de cadena larga son más
difíciles de degradar debido a su elevado peso molecular
y su baja solubilidad en agua.
• Los cicloalcanos, por norma general, se degradan más lentamente que los n-alcanos y alcanos ramificados.
• Asimismo, los HAPs que contienen de 2 a 3 anillos aromáticos pueden ser biodegradados eficazmente en el suelo
en condiciones ambientales óptimas, mientras que los de 4 anillos y los de 5 o más anillos bencénicos presentan
una mayor recalcitrancia inherente y una baja solubilidad.
• Las fracciones de resinas y asfaltenos son las que presentan una menor degradabilidad debido a la complejas
estructuras químicas y al elevado peso molecular de sus moléculas.
35
Lopez Ponte, Kevin Gerson
Factores que condicionan la biorremediación de un suelo

5. La Biodisponibilidad

• La tasa de degradación depende tanto de la capacidad de transporte y del metabolismo microbiano, como de la
transferencia de masas del compuesto. La relación entre estos factores se conoce como biodisponibilidad.
• En los suelos uno de los factores limitantes para la biodegradación es la transferencia de masas, ya que los
microorganismos de los suelos contaminados, suelen tener amplias capacidades biodegradativas al estar
expuestos a una gran variedad de compuestos orgánicos diferentes.
• Por lo tanto la adsorción, la absorción, desadsorción, disolución y la difusión son fenómenos, propios de la
transferencia de masas, que condicionan la biodisponibilidad de los contaminantes.
• Un fenómeno que afecta de forma negativa a la biodisponibilidad de los contaminantes es el envejecimiento o
ageing que se define como la pérdida de la biodegradabilidad de los compuestos a lo largo del tiempo en el
suelo, el cual es más importante en suelos con elevado contenido en materia orgánica.

Lopez Ponte, Kevin Gerson

Factores que condicionan la biorremediación de un suelo

6. Presencia de aceptores de electrones

La mayor parte de hidrocarburos presentes en

los productos petrolíferos son degradados con
mayor extensión y rapidez de forma aeróbica (O2
como aceptor final de electrones), ya que en
ausencia de O2, y en presencia de aceptores de
electrones alternativos (NO3 - , SO4 2-, CO2,
Mn4+ y Fe3+) los hidrocarburos pueden ser
degradados, pero con unas tasas de
biodegradación muy inferiores a las aeróbicas.

37
Lopez Ponte, Kevin Gerson
 Factores que condicionan la biorremediación de un suelo

• Las concentraciones de nitrógeno y fósforo 7. Nutrientes inorgánicos

asimilables presentes en el suelo, suelen ser
limitantes para un incremento y activación de la
población microbiana, mientras que otros
nutrientes esenciales como el Ca2+, Na+ , Fe2+ y
SO4 2- ya están presentes en cantidades
suficientes en el suelo.
• La adición de fuentes de N y P inorgánicas, generalmente tiene un efecto positivo incrementando las
poblaciones microbianas y las tasas de biodegradación de hidrocarburos en suelos contaminados.
• Aunque en general la adición de fuentes inorgánicas de N y P al suelo es beneficiosa para los procesos de
biodegradación, existen estudios que han descrito efectos inhibitorios en la adición de nutrientes inorgánicos.
• Para evitar el exceso de nutrientes, así como la pérdida de los mismos por lixiviación, también se han utilizado
fertilizantes inorgánicos oleofílicos de liberación lenta para la biorremediación de suelos contaminados.
38
Lopez Ponte, Kevin Gerson
Fases necesarias para la aplicación de la tecnología
de la biorremediación
Para la implantación de una tecnología de biorremediación se deben llevar a cabo una serie de etapas. En cada
una de ellas están implicados distintos profesionales que deberán trabajar de forma coordinada.

Deben cumplirse las siguientes etapas:

I. Investigación del emplazamiento en relación con los
contaminantes, el tipo de suelo y el entorno
(caracterización fisicoquímica del suelo, estudio
geotécnico e hidrogeológico y análisis de riesgos).
II. Desarrollo de ensayos de tratabilidad a escala de
laboratorio
III. Desarrollo de ensayos a escala piloto
IV. Implantación de la tecnología de biorremediación
escogida
39
Romero Mori, Andrea Mireylla
 Los ensayos de tratabilidad en la biorremediación
de suelos contaminados
Para evaluar si un tratamiento biológico es apropiado para la descontaminación de un suelo, es necesario
caracterizar tanto las poblaciones microbianas como la biodegradabilidad de los contaminantes del suelo. .

• En primer lugar se debe llevar a cabo una caracterización microbiológica, y determinar la cantidad de población
microbiana degradadora de los contaminantes y su proporción respecto a la población total heterótrofa de la
microbiota indígena del suelo contaminado.
• Además es necesario evaluar si la población microbiana autóctona está metabólicamente activa o es activable
en condiciones de bioestimulación.
• Una vez caracterizado el suelo, los contaminantes y la población microbiana, es necesario determinar la
biodegradabilidad de los contaminantes mediante ensayos rápidos de biodegradabilidad (fase I) y en caso
afirmativo evaluar los factores fisicoquímicos y biológicos que afectan a la biodegradación (fase II), en ensayos
de microcosmos.

Romero Mori, Andrea Mireylla

Calero Cárdenas Antony Vincenth
 BIORREMEDIACION MICROBIANA

• Se refiere al uso de microorganismos directamente en

el foco de la contaminación Estos microorganismos
pueden ya existir en ese sitio o pueden provenir de
otros ecosistemas, en cuyo caso deben ser inoculados
en el sitio contaminado (proceso de inoculación)

• Hay bacterias y hongos que pueden degradar con

relativa facilidad petróleo y sus derivados, benceno,
tolueno, acetona, pesticidas, herbicidas, éteres,
alcoholes simples, entre otros.

Calero Cárdenas Antony Vincenth

• Existen contaminantes difíciles de degradar y para los
cuales no se han encontrado microorganismos capaces
de transformarlos. La biotecnología moderna puede
solucionar en parte este problema, generando
organismos genéticamente modificados con nuevas
capacidades para eliminar tales contaminantes.

• La base de esta estrategia se basa en la búsqueda de

las enzimas adecuadas y la posterior transferencia de
los genes correspondientes a los microorganismos que
se inocularán en el lugar contaminado.

Calero Cárdenas Antony Vincenth

Aplicaciones en curso relacionados con la
remediación microbiana:
•Bacterias capaces de degradar algunos de los componentes
del petróleo.
•Bacterias capaces de reducir las formas altamente
tóxicas de mercurio en otras menos tóxicas y volátiles.
•Bacterias que transforman metales del suelo (como el
cromo) en formas menos tóxicas o insolubles.
•Microorganismos capaces de degradar TNT, un explosivo
de gran potencia y muy agresivo para el entorno.
•Bacterias que pueden eliminar el azufre de los
combustibles fósiles, como en el caso del carbón o del
petróleo, para permitir combustiones más limpias.

Calero Cárdenas Antony Vincenth

 BIODEGRADACION DE HIDROCARBUROS
EN LAS BAHIAS DE CHILE
Tres derrames de petróleo han afectado la bahía desde
2014, con vertimientos que superan los 38 000 litros.
Estudios gubernamentales han arrojado altos niveles de
arsénico y mercurio en mariscos de la costa.
El 24 de septiembre de 2014, la rotura de una conexión
entre el buque LR Mimosa y el terminal de puerto produjo,
según un informe de la Gobernación Marítima, el
vertimiento de 38 700 litros de petróleo al océano. Fue el
primero de una seguidilla de derrames, separados uno del
otro en promedio por 10 meses hasta 2016.
El segundo ocurrió en agosto de 2015, mientras el buque
tanque Doña Carmela reponía combustible. En esa
oportunidad cerca de 500 litros cayeron al mar. El último
Bahía de Quintero-Ventanas fue en mayo de este año, cuando de la nave Ikaros se
empezó a filtrar aceite decantado (slurry oil) por el
desprendimiento de un flexible (tubos de acero revestido).

Calero Cárdenas Antony Vincenth

BIODEGRADACION DE HIDROCARBUROS
EN LAS BAHIAS DE CHILE

Entre 2008 y 2014, se registraron más de 50 varamientos

de carbón combustionado en las playas de la bahía, sin
que las empresas se hayan hecho responsables.
En la actualidad la mayoría de los locales sufren
problemas de salud. Las enfermedades respiratorias,
irritación de las vías respiratorias, asfixia, mareos y
dolores de cabeza aumentaron.

Calero Cárdenas Antony Vincenth

 BIODEGRADACION DE HIDROCARBUROS
EN LAS BAHIAS DE CHILE

Gran
capacidad Contener Eliminan Gran
para degradar metales agentes capacidad
hidrocarburos pesados nocivos para colonizar
del petróleo

Imágenes de la bacteria marina Cobetia marina en la ventana

de agua a λ 3 = 2.68 nm usandoMicroscopía holográfica de
rayos X

Calero Cárdenas Antony Vincenth

BIODEGRADACION DE HIDROCARBUROS
EN LAS BAHIAS DE CHILE

Un grupo de científicos de la universidad de

Valparaíso liderados por El microbiólogo
Alejandro Dinamarca director del proyecto
Apoyan a los pescadores para que recuperen
la bahía de los hidrocarburos.
En virtud de un convenio entre los científicos
y el sindicato de pescadores será transferido
a estos quienes la ofrecerán como un
producto o servicio a las industrias que
desean recuperar las zonas dañadas por la
contaminación.

Calero Cárdenas Antony Vincenth

 PROCEDIMIENTOS PARA LA
BIORREMEDIACION MICROBIANA EN
COLOMBIA

Actualmente en Colombia se esta

patentando procedimientos para la
biorremediacion por el Centro de
Investigaciones Microbiológicas (Cimic) de la
privada Universidad de Los Andes de
Bogotá, porJenny Dussan, directora del
Cimic.

El microorganismo, llamado Lysinibacillus

sphaericus es utilizado en campos
petroleros. “Empezamos en la década de
1990 a estudiar la bacteria y llevamos tres
años aplicándola en campo con industrias
petroleras, con muy buenos resultados”, dijo
Jenny Dussan, directora del Cimic.

Calero Cárdenas Antony Vincenth

 EXTRACCIÓN DE PETRÓLEO EN SUELO
CONTAMINADO EMPLEANDO
RAMNOLÍPIDOS PRODUCIDOS POR
Pseudomonas aeruginosa ORA9

• Biorremediación
Es llamado a cualquier proceso que utilice
microorganismos, hongos, plantas o las
enzimas derivadas de ellos para retornar a un
medio ambiente alterado por contaminantes a
su condición natural.

Chulluncuy Francisco Edwin

Chulluncuy Francisco Edwin
 BIOSURFACTANTE: RAMNOLIPIDOS:

Los biosurfactantes (BS) son un grupo de moléculas de origen

microbiano que se caracterizan por ser anfipáticas, es decir que sus
moléculas presentan dos partes diferentes, una hidrofóbica y otra
hidrofílica. Son un grupo estructuralmente diverso de moléculas
tensoactivas, que presentan en general menor toxicidad y mayor
biodegradabilidad que los surfactantes sintéticos.

Chulluncuy Francisco Edwin

 MÉTODOS

BIOSURFACTANTE EMPLEADO: ESTUDIO DE ESTABILIDAD:

Se utilizó la mezcla de ramnolípidos Se estudió la influencia de la

producidos durante el cultivo de temperatura, el pH y la fuerza
Pseudomonas aeruginosa ORA9 en un iónica sobre la tensión superficial
medio mineral (Ramsay et al. 1990), del sobrenadante libre de células
empleando aceite de soja frito al 2 % con una concentración de
como única fuente de carbono. En todos ramnolípidos de 22.5 mg/L. Para
los experimentos se utilizó el medio de medir la tensión superficial se  Influencia de la
cultivo libre de células obtenido por empleó un tensiómetro de anillo temperatura
centrifugación (10 000 rpm, 10 min). La de Du Noüy (Krüss, Alemania), con
 Influencia del pH
concentración de ramnolípidos se un error instrumental de 1 mN/m.
determinó mediante el método Cada medición de la tensión  Influencia de la fuerza
espectrofotométrico, validado para la superficial se realizó cinco veces. iónica
determinación en un medio de cultivo

Chulluncuy Francisco Edwin

ENSAYOS DE REMOCIÓN DE PETRÓLEO EN SUELO CONTAMINADO

Para la realización de los ensayos de remoción de

hidrocarburos totales del petróleo se emplearon muestras de
un suelo contaminado con petróleo (0.12 g de
hidrocarburos/g de suelo) de la zona industrial de Santiago de
Cuba. El suelo se tamizó a través de una malla de 2 mm. Se
pesó 1 g de suelo, se transfirió a un matraz Erlenmeyer y se
añadieron 4 mL de medio de cultivo libre de células, con una
concentración de ramnolípidos de 332 mg/L, se agitó a 200
rpm y luego se decantó. La fracción de petróleo presente en el
suelo no emulsionada por el biosurfactante (Hs no extraídos)
se extrajo con diclorometano. Luego de evaporar el solvente
se pesó el residuo. El petróleo total presente en las muestras
de suelo contaminado (Hs en el suelo) se determinó por
extracción con el mismo solvente El porcentaje de extracción
se calculó según la ecuación

Chulluncuy Francisco Edwin

 RESULTADOS
Estudio de estabilidad de los ramnolípidos considerando los factores temperatura, pH y fuerza iónica.

INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA INFLUENCIA DEL PH INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA

La figura 1 muestra la tensión superficial del

sobrenadante libre de células ante las La figura 2 muestra la tensión superficial ante los La figura 3 muestra la tensión superficial
temperaturas de experimentación. Se observan valores de pH ensayados durante el estudio de a las diferentes concentraciones de NaCl
valores similares de tensión superficial entre estabilidad. Los valores de tensión superficial son ensayadas. En este caso, el ANDEVA
cada temperatura ensayada, no existiendo similares. arrojó un valor p (0.0018) inferior al nivel
diferencias estadísticamente significativas (p = El ANDEVA arrojó un valor p (0.0876) superior al de significancia (0.05), evidenciando que
0.13, α = 0.05) entre las tensiones superficiales. nivel de significación (0.05), evidenciando que no existen diferencias estadísticamente
Esto demuestra que los ramnolípidos son existen diferencias estadísticamente significativas significativas entre las tensiones
estables ante cambios de temperatura en el entre las tensiones superficiales y demostrando la superficiales a cada concentración de
rango estudiado. estabilidad de los ramnolípidos ante los cambios de NaCl.
pH.
Chulluncuy Francisco Edwin
 REMOCIÓN DE HIDROCARBUROS TOTALES DE PETRÓLEO
EN SUELO CONTAMINADO

El cuadro se muestra los experimentos de remoción de petróleo del diseño Box-Behnken con los correspondientes
resultados.

Chulluncuy Francisco Edwin

 EVALUACIÓN DE LA INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA, PH Y TIEMPO DE
CONTACTO, EN LA REMOCIÓN DE PETRÓLEO DE SUELO CONTAMINADO

la relación entre el porcentaje de remoción y las

tres variables estudiadas está dado por la
ecuación

La figura 4 muestra el gráfico de efectos

principales. Al aumentar la temperatura y el
tiempo de contacto en agitación, aumenta
la extracción de hidrocarburos, en cambio,
al aumentar el pH disminuye el resultado de
la extracción.

Chulluncuy Francisco Edwin