EXTENSIONES O FROTIS
SANGUÍNEO
Consiste en recubrir parcialmente un porta con
una gota de sangre, de tal manera que las células
de ésta se dispongan formando una sola capa de
ellas.
UTILIDAD DE LAS EXTENSIONES
El estudio de las extensiones sanguíneas es
esencial para:
El análisis morfológico de las células hemáticas
Realización del recuento diferencial leucocitario
Distinción de una auténtica trombopenia de una
pseudotrombopenia producida por agregados
plaquetarios.
Comprobación de las alarmas que proporcionan los
autoanalizadores hematológicos
PARTES DE UNA EXTENSIÓN
CABEZA
Es la zona inicial de la extensión.
Es la región más gruesa.
En ella se encuentra una mayor proporción de
linfocitos, y los hematíes forman aglomerados (pilas
de monedas).
PARTES DE UNA EXTENSIÓN
CUERPO
Es la zona media del frotis.
Su espesor es el apropiado.
En ella existe una adecuada proporción entre los
distintos tipos de leucocitos.
Contiene la "zona ideal" de observación, que
corresponde a la porción que limita con la cola
PARTES DE UNA EXTENSIÓN
COLA.
Es la zona final de la extensión.
Suele tener un aspecto redondeado.
Es la región más fina.
En ella se encuentra una mayor proporción de leucocitos
grandes (granulocitos y monocitos), y además. los
hematíes están deformados y presentan una tonalidad
uniforme.
En su porción terminal suelen ser más abundantes las
plaquetas, sobre todo si son grandes.
BORDES.
Contienen una mayor proporción de leucocitos grandes.
Si están deshilachados, en ellos las células son difíciles
de reconocer por estar deformadas o destruidas
PARTES DE UNA EXTENSIÓN
COLA.
CARACTERÍSTICAS DE UNA
BUENA EXTENSIÓN.
La cabeza ha de estar cerca de uno de los
extremos del porta.
La cola debe estar cercana al otro extremo del
porta, pero sin llegar a él.
El borde de la cola tiene que estar finamente
deshilachado. Ese fino deshilachamiento recibe el
nombre de "barbas".
Toda la extensión ha de ser fina y homogénea.
DEFECTOS DE UNA EXTENSIÓN
Excesiva longitud y escaso grosor o escasa
longitud y excesivo grosor:
Inadecuado tamaño de la gota de sangre
Un error en la velocidad
Un fallo en el ángulo de extensión de la misma.
Presencia de escalones o estrías
Falta de uniformidad en el deslizamiento de la gota.
Existencia de abundantes zonas
redondeadas que carecen de sangre
Presencia de restos de grasa o de suciedad en el porta
Extremo final excesivamente dentado.
REALIZACIÓN DE UNA
EXTENSIÓN SANGUÍNEA
TINCIONES
HEMATOLÓGICAS
Son un conjunto de procesos que conducen a la
coloración de las estructuras que componen las
células sanguíneas
Aumentar el contraste entre esas estructuras y el
medio que las rodea
Permite que las células sean visualizadas
microscópicamente con mayor facilidad
TIPOS DE TINCIONES
Pueden clasificarse :
Atendiendo al nivel de vitalidad de las células
que se pretende colorear
Vitales
No vitales
Atendiendo la frecuencia con la que se hacen
dividen en:
Tinciones tradicionales
Tinciones especiales
TINCIONES VITALES Y NO
VITALES
Las tinciones vitales y supravitales se practican
sobre células que están vivas.
Las Tinciones Vitales
La introducción de un colorante en la circulación de
un organismo vivo.
El verde Jano
El azul de metileno.
Las Tinciones Supravitales
Practicada en Células aislados del organismo del que
proceden
Las Tinciones no Vitales:
Se realizan sobre células muertas
TINCIONES TRADICIONALES Y
ESPECIALES.
Colorantes que derivan de la Anilina. Estos
colorantes se reúnen en 4 grupos:
Colorantes ácidos:
Tienen afinidad por las estructuras alcalinas de las
células
El principal de ellos es la eosina.
Colorantes básicos:
Tienen una especial afinidad por las estructuras
ácidas de las células,
Uno de ellos es el Azul de Metileno.
Colorantes neutros:
son sales de un ácido y de una base coloreados.
Tiñen el núcleo de un color y el citoplasma de otro.
Uno de ellos es el eosinato de azul de metileno.
Colorantes indiferentes:
Son los que no tienen afinidad por estructuras ácidas
o básicas.
Son insolubles en el agua
Tiñen a aquellas sustancias que tienen un poder de
disolución superior al del líquido empleado para
preparar la solución colorante.
Uno de ellos es el Sudán III
También
Hay combinaciones de colorantes que dan lugar a
tinciones Polícromas.
Panóptica cuando se utilizan sucesivamente
sustancias colorantes neutras
Pancrómica cuando se aplican todas las
sustancias colorantes neutras juntas
ROMANOWSKY:
Fue el primero que tuvo la idea de realizar una
de estas combinaciones.
Constan :
Colorante ácido (eosina)
Colorantes básicos (tiacinas).
Las Tiacinas son el azul de metileno y sus
derivados obtenidos por Desmetilación
Oxidatiya (colorantes tipo azur).
Las tinciones realizadas con colorantes de tipo
Romanowsky, que más frecuentemente se
emplean en el diagnóstico hematológico
Wright
Giemsa
DENOMINACIÓN DE LAS
ESTRUCTURAS COLOREADAS.
Atendiendo a sus apetencias tintoriales. De las
células
Estructuras acidófilas u oxifilas:
Fijan colorantes de naturaleza ácida
Si captan la eosina, se dice que son eosinófilas
Adquieren un color rosado.
Estructuras basófllas
Fijan colorantes de naturaleza alcalina
Adquieren un color azulado
CAUSAS DE ERROR EN LAS
TINCIONES REALIZADAS A
FROTIS SANGUÍNEOS
Si la tinción es demasiado Rosa
Un pH bajo del colorante.
Un tiempo de coloración insuficiente.
Un lavado excesivamente prolongado
Si la tinción es demasiado Azul
Un grosor excesivo de la extensión
Un pH alto del colorante.
Una coloración excesivamente prolongada.
Un lavado insuficiente.
Si tras la tinción aparecen artefactos o/y
precipitados en la extensión:
Un empleo de portaobjetos sucios.
Una falta de filtración del colorante.
Una coloración excesivamente prolongada.
Un secado del colorante durante la tinción.
Un lavado insuficiente
TINCIONES
TRADICIONALES
TINCIÓN GIEMSA
Es una tinción diferencial:
Utilizan azul de metileno y sus productos de
oxidación (azur A, azur B y azur C) como
colorantes básicos,
Utiliza eosina como colorante ácido
Requiere que la muestra sea fijada previamente
con alcohol metilico
TINCIÓN DE WRIGHT.
Es una solución de:
Eosina
Una mezcla de:
Azul de metileno (del 50 al 75%)
Azur B (del 10 al 25%)
Alcohol Metílico.
No requiere que la muestra sea fijada
previamente con alcohol metilico
TINCIÓN PANÓPTICO RÁPIDO
Este método de tinción diferencial es un sistema
que aúna:
La policromía
la calidad que proporcionan los métodos clásicos
(Giemsa y Wright)
Rapidez de ejecución (15 segundos solamente).
Es un método de inmersión
Usa:
Solución nº 1: Solución alcohólica de triarilmetano.
Solución nº 2: Solución tamponada de xanteno.
Solución nº 3: Solución tamponada de tiazina.
Agua destilada.
Las coloraciones obtenidas en las células
sanguíneas son similares a las de la tinción de
Wright y Giemsa.
NOTA:
Según la proporción de azul de metileno y de
eosina que compongan el colorante tendremos
distintos métodos de tinción.
Entre ellos, los más conocidos son:
El de Giemsa,
El de Wright,
El de Leishman
El pan óptico de Pappenheim
TINCIONES ESPECIALES
TINCIONES ESPECIALES
Peroxidaza
Sudan Black B
Esteraza Especifica
Esteraza Inespecifica
Fosfataza Alcalina Leucocitaria
Fosfataza Acida
Acido Periodico de Schiff
Perls o Azul de Prusia
PEROXIDAZA
Neutrofilos y eosinofilos (mieloperoxidaza)
Monocitos apenas positivos
Lifocitos y hematies nucleados negativos
Se usa para diferenciar las LL de LM
La enzima es sensible a la luz el calor y el
metanol
La peroxidasa no reacciona en cortes parafinados
SUDAN BLACK B
Detecta los fosfolopidos y los lipidos
intracelulares
Neutrofilos y eosinofilos positivo
Monocitos apenas positivos
Lifocitos negativos
Se usa para diferenciar las LL de LM
Se usa e frotis de sangre periferica y medula osea
frescos
La peroxidasa no reacciona en cortes parafinados
ESTERASA ESPECIFICA
Permite identifica los granulocitos
Los monocitos y linfocitos son negativo
Reacciona bien en cortes parafinados
Se usa para diferenciar entre el sarcoma
granulocitico y el linfoma de celulas grandes
(histiocitos) de aspecto similar.
Tmb identifica en hematopoyesis extramedular
Identificacion de mastocitos
ESTERASA INESPECIFICA
Identifica monocitos
Negativo en neutrofilos y eosinofilos
Histiocitos, macrofagos, megacariocitos: positivos
Algunos carcinomas de celulas epiteliales son
positivos
Se usa para identificar monocitos en LM y de
histiocitos tisulares
No reacciona en cortes parafinados
Tendria valos en leucemias megacariociticas.
FOSFATASA ALCALINA LEUCOCITARIA
Tiene actividad en los tejidos hematopoyeticos, en
el citoplasma de los neutrofilos, los osteoblastos,
las celulas endoteliales vasculares, y algunos
linfocitos.
Presente en patologias como:
En los neutrofilos de pacientes con LMC
Hemoglobiniria paroxistica nocturna
Purpura trombocitopenica idiopatica
Mononucleosis infeccionsa
La sarcoidiosis
La anemia pernisiosa
Sindrome mielodisplasico
FOSFATASA ACIDA
Se encuentra en todas las células hematopoyeticas
Mayor actividad en los macrofago y osteoclastos
Identifica leucemia de células vellosas
Acido Periodico de Schiff
Detecta glucógeno intracelular
La mayoría de las células hematopoyeticas son PAS
positivas
No sirve para detectar LLA de la LMA
Podría ser útil para detectar Eritroleucemia
Perls o Azul de Prusia
El hierro celular se dispone en forma de ferritina y
hemosiderina
Permite reconocer el hierro en los hematíes nucleados
(Sideroblastos), los histiocitos y los cuerpos de
Pappenheimer eritrocitario.
Se aplica a los cortes y extendidos de medula ósea
OTRAS TINCIONES
Azul de toluidina
Verde metilo-pironina
Desoxinucleotidil tranferaza terminal.
ESO ES TODO
