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Técnicas de Inmunohistoquímica

Este documento describe la inmunohistochemica, la cual detecta antígenos mediante anticuerpos. Explica que ha habido avances en la técnica, incluyendo un gran número de anticuerpos disponibles y técnicas sensibles de recuperación antigénica. También describe conceptos clave como antígenos, epitopos, anticuerpos policlonales y monocolonales, y métodos para recuperar antígenos como la digestión enzimática y calentamiento térmico.

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Técnicas de Inmunohistoquímica

Este documento describe la inmunohistochemica, la cual detecta antígenos mediante anticuerpos. Explica que ha habido avances en la técnica, incluyendo un gran número de anticuerpos disponibles y técnicas sensibles de recuperación antigénica. También describe conceptos clave como antígenos, epitopos, anticuerpos policlonales y monocolonales, y métodos para recuperar antígenos como la digestión enzimática y calentamiento térmico.

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INMUNOHISTOQUIMICA

ELVIS ALARCON VALDIVIA


MR1 ANATOMIA PATOLOGICA
INMUNOHISTOQUIMICA

 DETECTA ANTIGENOS MEDIANTE


ANTICUERPOS
 AVANCE INMUNOHISTOQUIMICA:
 GRAN NUMERO DE ANTICUERPOS
 TECNICAS DE RECUPERACION
ANTIGENICA
 SISTEMAS DE DETECCION MUY SENSIBLES
ANTIGENO EPITOPO

Molécula que induce la


formación de un anticuerpo
y que tiene uno o más
lugares donde un
anticuerpo puede unirse a
ella
Reacción Antígeno/Anticuerpo típica: una bacteria
gram-negativa patógena podría tener varios antígenos
o inmunógenos (flagelos, fimbrias y pared celular)
 DETERMINANTES ANTIGENICOS:
 CONTINUOS
 DISCONTINUOS  MAS FRECUENTES
 HAPTENO MOLECULAS DE
PEQUEÑO TAMAÑO
INCAPACES DE PRODUCIR
RESPUESTA INMUNE
ANTICUERPO
IgG
PARATOPO
ANTICUERPOS POLICLONALES
VENTAJAS

 GRAN AVIDEZ POR EL ANTIGENO, YA QUE LOS


LUGARES DE UNION AL MISMO SON MULTIPLES
 ALTA SENSIBILIDAD
INCONVENIENTES

 LOS ANTICUERPOS PRESENTAN UN AMPLIO RANGO DE


ESPECIFICIDAD, PUDIENDO DAR ORIGEN A REACCIONES CRUZADAS
CON OTRAS MOLECULAS.
 POCA REPRODUCIBILIDAD.
 DISPONIBILIDAD LIMITADA.
ANTICUERPOS MONOCLONALES
VENTAJAS
INCONVENIENTES
 ESPECIFICIDAD • MENOR
 REPRODUCIBILIDAD SENSIBILIDAD
 DISPONIBILIDAD • POSIBILIDAD DE
OBTENCION DE
FALSOS
NEGATIVOS
ALMACENAMIENTO

Los anticuerpos en forma líquida


pueden almacenarse a 4°C durante
unos meses o bien congelados (a -
20°C o -80°C) durante años.
Mezclar el anticuerpo con
glicerol a partes iguales. El
glicerol es una sustancia inerte
que disminuye el punto de
congelación, de forma que
tendremos el anticuerpo frio( a
-20° C), pero no congelado,
con lo que podremos usarlo las
veces que queramos sin
necesidad de alicuotarlo y sin
que se altere
RECUPERACION ANTIGENICA

La fijación mediante
agentes reticulantes
como el formaldehído
induce la formación
de enlaces
hidroximetileno entre
los aminoácidos
RECUPERACION ENZIMATICA

 PRONASA O TRIPSINA
 LA DIGESTION ENZIMATICA INDUCE UNA ROTURA DE ENLACES
CRUZADOS QUE FACILITA EL ACCESO DEL ANTICUERPO
PRIMARIO AL ANTIGENO
 PARAMETROS A TENER EN CUENTA:
 TIPO DE ENZIMA
 CONCENTRACION DE LA ENZIMA
 TEMPERATURA
 TIEMPO DE INCUBACION  5 – 30 MIN
RECUPERACION TERMICA

 MECANISMO DE ACCION

 ROTURA DE ENLACES CRUZADOS

 EXTRACCION DE COMPLEJOS DE CALCIO

 MOVILIZACION POR EL CALOR DE RESTOS DE PARAFINA


FACTORES QUE INTERVIENEN EN
RECUPERACION TERMICA

1. TAMPON DE INCUBACION
 CITRATO SODICO (PH:6) , ETILEN-DIAMINO TETRAACETICO(EDTA) (PH:9) 
SUST. QUELANTES DE CALCIO
 AG MUESTRAN INMUNOREACTIVIDAD MAS INTENSA A MAYOR PH(9)
2. METODOS DE CALENTAMIENTO
 MICROONDAS, OLLA A PRESION, BAÑO TERMOSTATICO, AUTOCLAVE

 PARA DISTINTOS ANTICUERPOS LA RECUPERACION OPTIMA PUEDE


CONSEGUIRSE EMPLEANDO UNO U OTRO DE LOS APARATOS
MENCIONADOS

3. TEMPERATURA Y TIEMPO
MICROONDAS  100°C, 10-20 MIN
BAÑO TERMOSTATICO  95-99° C, 20-40 MIN
OLLA A PRESION  120°C, 2-5 MIN

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