“OBTENCION DE ETANOL POR FERMENTACION A PARTIR DE
CASCARAS DE PIÑA EVALUANDO DOS DE SUS PRINCIPALES
VARIABLES (pH y GRADOS BRIX) USANDO COMO
MICROORGANISMO PRODUCTOR Saccharomyces
cerevisiae. ”
INTEGRANTES :
ALEJANDRO CABRERA GLEISER
CORONADO LEZMA CARLOS
ESPINOZA CHIRIBOGA JEAN
PIERRE
PRESENTACIÓN DEL PROBLEMA
¿Cómo obtener etanol por fermentación a partir de
cáscaras de piña usando Saccharomyces cerevisiae ?
OBJETIVO GENERAL
Obtener etanol por fermentacion a partir de cáscaras de piña usando
Saccharomyces cerevisiae.
Definición de variables de investigación
Y = Etanol por fermentación a partir de cáscaras de piña usando
Saccharomyces cerevisiae.
X= f(X1, X2)
X1 = Parámetros óptimos de fermentación del mosto para la obtención de
etanol
X2= Características fisicoquímicas iniciales del mosto para una optima
fermentacion.
OBJETIVO GENERAL HIPÓTESIS GENERAL
Obtener etanol por vía .
fermentativa a partir de cáscaras
de Ananas comosus (Piña)
usando Saccharomyces
cerevisiae. .
OBJETIVOS ESPECÍFICOS HIPÓTESIS ESPECÍFICAS
a) Determinar los parámetros de la .
biodegradación de la cascara de
piña por procesos fermentativos
de Saccharomyces cerevisiae para
la obtención de etanol.
b) Obtener etanol por vía
fermentativa a partir de cáscaras
de Ananas comosus (piña)
evaluando el pH y grados Brix.
METODOLOGIA( FALTA)
DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN
PRIMERA ETAPA DE LA
INVESTIGACIÓN:
IDENTIFICAR “X1”
MÉTODO :
Anàlisis de laboratorios
TERECERA ETAPA:
Establecer “Y" TESIS
PLANTEADA
MÉTODO:
SEGUNDO ETAPA DE LA Ensayos de
INVESTIGACIÓN: laboratorios
IDENTIFICAR “X2”
FALTAc
MÉTODO:
Revisando normas técnicas
ETAPAS DE LA PARTE EXPERIMENTAL
“ B1
B2
B8
”
.
FALTAc
“
FALTA
”
FALTAc
VI. RESULTADOS
“ 6.1 Resultados parciales
Se presentan mediante cuadros. Para cada objetivo
específico se darán resultados. Ejemplo:
Cuadro 6.1
Características químicas y fisicoquímicas del
aceite recuperado de fritura.
Característica Medida
”
Índice de Yodo 1.24 gI/100g
Índice de 4.8 Mg KOH/gr
saponificación
Índice de 3.70 Mg KOH/gr
Peróxidos
“ FALTAc
Cuadro 6.2
Características técnicas que debe cumplir los barnices para puerta de
interiores de viviendas.
Característica Medida
Viscosidad 6-8 poises
Contenido de volátiles 4.8 %
Tono de color
6.2 Resultados Finales
Gardedner 25
”
Se dan resultados que han satisfecho el objetivo general. Ejemplo;
“ Materiales :
•
•
0.1 g de Saccharomyces Cerevisiae
2 g de extracto de malta
• 2 g de sulfato de amonio
• 2g de sulfato de magnesio heptahidratado
• 2g de biofasto de amonio
• HCl 0.1 N
•
•
•
NaOH 0.1N
Matraces Erlenmeyer de 250ml y 1l
Tubos de ensayo
”
Equipos :
• Espectrofotómetro
• Equipo de filtración al vacío.
• Mechero Bunsen
“
PROCEDIMIENTO
Preparación y estandarización del Saccharomyces cerevisiae
• Pesar 0.1 gramos de Saccharomyces cerevisiae comercial liofilizada,
en balanza digital.
• Adicionar en 10 mL de agua estéril contenidos en un tubo de ensayo
de aproximadamente 20 mL de capacidad a una temperatura de 35 ºC
± 2ºC y agitar hasta una completa homogenización de la levadura.
• Preparar 100 mL de extracto de malta, disolviendo 1.96 g de extracto
de malta en polvo en 100 mL de agua estéril y agitar hasta una
completa homogenización.
”
• Incorporar 10 mL de levadura diluida a los 100 mL de extracto de
malta en caldo , agitar e incubar por un tiempo de 48 horas con
agitación, luego observar en el microscopio al cabo del tiempo para
identificar el crecimiento de la levadura .
• Estandarizar en un espectrofotómetro 25% de transmitancia a λ de
580 nm usando como blanco extracto de malta.
Ensayo con modificación de la variable de grados Brix
“ • De un fruto de piña fresco de la variedad golden, maduro y limpio
cortar sus cáscaras completamente.
• Licuar las cáscaras utilizando una pequeña cantidad de agua.
• Realizar un filtrado con un equipo de filtración al vacío y recoger el
filtrado en un Erlenmeyer de 1000 mL.
• Determinar los grados Brix con el espectrofotómetro (el medio de
producción madre, ajustar a 25.0 , 20.5, 18.5, 14.5 y 4 Brix luego
colocar 100 mL del medio de producción en Erlenmeyer de 250 mL.
(realizar por duplicado respectivamente cada producción madre)
• Agregar a cada uno de los Erlenmeyer con diferentes grados Brix cada
una de las siguientes sales para favorecer la fermentación: 0.1 gramo
”
de (NH4)2SO4 (sulfato de amonio), 0.1 gramo de MgSO4 7H2O (sulfato
de magnesio heptahidratado), 0.1 gramo de (NH4)2HPO4 (bifosfato de
amonio). Y Agitar hasta una completa disolución.
• Esterilizar el medio de producción
• Inocular cada uno de los diferentes Erlenmeyer a diferentes grados
Brix, con 10.0 mL de Saccharomyces cerevisiae
• Incubar a una temperatura aproximada de 30ºC ± 2ºC por 48 horas
• Colocar un Erlenmeyer de 250 mL, con 100 mL de medio de producción
sin inocular microorganismo.
“
Ensayo con modificación de la variable de ph
• De un fruto de piña fresco de la variedad golden, maduro y limpio
cortar sus cáscaras completamente.
• Licuar las cáscaras utilizando una pequeña cantidad de agua.
• Filtrar con papel filtro poro grueso evitando la acumulación de sólidos
en el filtrado, recolectar el filtrado en un Erlenmeyer de 1000 mL,
para el filtrado (aproximadamente 1000mL).
• Filtrar el licuado de cascaras haciendo uso de un equipo de filtración
al vacío.
• Agregar al medio de producción las siguientes sales para favorecer la
fermentación: 1.0 gramos de (NH4)2SO4, (sulfato de amonio) 1 gramo
”
de MgSO4. 7H2O (sulfato de magnesio heptahidratado), 1 gramo de
(NH4)2HPO4 (bifosfato de amonio).Agitar hasta una completa
disolución.
• Regular con el espectrofotómetro , el medio de producción a 20º Brix
regulando con agua desmineralizada cuando es mayor a este valor.
• Dividir en 3 grupos el medio de producción agregando 100 mL en
Erlenmeyer de 250 mL. (realizar por duplicado).
“ • El primer set de Erlenmeyer (2) regular el pH a 3.0 con 1.0 mL de
HCL 0.1 N, verificar el pH con tiras de papel escala pH.
• El primer set de Erlenmeyer (2), regular el pH a un valor de 4.0, y
verificar el pH con tiras de papel escala pH.
• Al segundo set de Erlenmeyer (2), regular el pH a 5.0 con 1.2 mL de
NaOH 0.1 N cuando sea necesario, y verificar el pH con tiras de
papel escala pH.
• Al tercer set de Erlenmeyer (2), regular el pH a 6.0 con 2.1 mL
NaOH 0.1 N cuando sea necesario y verificar el pH con tiras de
papel escala pH.
• Esterilizar el medio de producción
”
• Inocular en cada uno de los Erlenmeyer de los diferentes pH con
10.0 mL de Saccharomyces cerevisiae.
• Incubar a una temperatura aproximada de 30ºC ± 2ºC
(temperatura ambiente) por 48 horas.
• Colocar un Erlenmeyer de 250 mL, con 100 mL de medio de
producción sin inocular microorganismo.
Realización de la cinética de fermentación con el ensayo del cual se hayan
obtenido mayores rendimientos
“
• Filtrar con un equipo de filtración al vacío las cascaras de piña, recoger el
filtrado (aproximadamente 1500 mL) en un vaso de 2000ml.
• Agregar las siguientes sales para favorecer la fermentación: 1.5 gramos
de (NH4)2SO4 (sulfato de amonio), 1.5 gramos de MgSO4 7H2O (sulfato de
magnesio heptahidratado), 1.5 gramos de (NH4)2HPO4 (bifosfato de
amonio). Y agitar hasta una completa disolución.
• Regular con el espectrofotómetro el medio de producción a los grados
Brix de máxima producción de etanol igual a 20).
• Regular el pH de acuerdo a la máxima producción de etanol según ensayo
anterior (pH = 4).
”
• Dividir el medio de producción madre en 10 Erlenmeyer de 250 mL
(ensayo por duplicado), rotular según los tiempos de fermentación
involucrados en la cinética (0 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96
horas, 120 horas y blanco).
• Esterilizar cada uno de los Erlenmeyer
• Inocular a cada uno de los Erlenmeyer 10.0 mL de Saccharomyces
cerevisiae
• Incubar a una temperatura aproximada de 30ºC ± 2ºC por los tiempos de
acuerdo a la cinética de fermentación. (0 horas, 24 horas, 48 horas, 72
horas, 96 horas, 120 horas y blanco).
Determinación del índice de refracción y grados Brix
“ • Encender el equipo y se dejó que se estabilice.
• Abrir los prismas del refractómetro.
• Limpiar cada uno de los primas del refractómetro con un
algodón impregnado con alcohol 99º.
• Colocar con un gotero la muestra en el prisma inferior
• Cerrar los prismas del refractómetro asegurándose que estén
bien fijados.
• Tomar el índice de refracción, los grados Brix y la temperatura
a la que fue tomada la lectura.
Determinación del grado alcohólico de la muestra de etanol obtenido
”
por destilación
• Colocar la muestra de alcohol etílico en una probeta de 100 mL, o un
cilindro de volumen adecuado para poder colocar el alcoholímetro
junto con la muestra de etanol.
• Sumergir el alcoholímetro verificando que esté limpio y seco dentro
de la probeta que contiene la muestra.
• Verificar que el líquido muestra cubra por completo el alcoholímetro.
• Realizar la lectura y anotar el valor del grado alcohólico de la muestra
“ a) El
VI. CONCLUSIONES
grado del etanol obtenido mediante el proceso fermentativo
desarrollado en esta investigación es etanol al 50% el cual se comprobó
usando el alcoholímetro de Gay-Lussac.
b)Tomando en cuenta las variables optimas de fermentación demostrada”
en los análisis anteriores, se procede a calcular cual es el tiempo de
máxima producción de etanol, para ello se rotularon en erlenmeyer de
250 mL los diferentes tiempos de fermentación que van desde 0 horas
hasta 120 horas realizando cada uno de los tiempos por duplicado y
dejando un erlenmeyer con sustrato como blanco de referencia (no está
inoculado con Saccharomices cerevisiae)
.
“ c)El ensayo de la variable óptima de grados Brix se determinó a las
condiciones de 4.0, 14.5, 18.5, 20.5, 21.0 y 25 grados Brix, un pH de 4
y una concentración de microorganismo de 106 Cel/mL (25 % de
Transmitancia), a partir del jugo de las cáscaras de piña haciendo las
diluciones respectivas para ajustarlo a estas condiciones, cada uno de
los erlenmeyer se les adicionan las sales como (NH4)2SO4 (sulfato de
amonio), MgSO4 7H2O (sulfato de magnesio heptahidratado) y
(NH4)2HPO4 (bifosfato de amonio) las cuales favorecen al sustrato de
fermentación aportando una cantidad suficiente de nitrógeno,
magnesio y fosforo facilitando las reacciones bioquímicas del
”
microorganismo las proporciones a las cuales se añaden las sales son
de alrededor de 0.1% .
