UNIVERSIDAD DE SAN MARTIN DE PORRES

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR

LISOSOMAS, DEGRADACION Y
MUERTE CELULAR

USMP-FMH-BCM-2016-II
2016
H. Lezama 1
H. LEZAMA
 LISOSOMAS
• ORGANELAS CITOPLASMÁTICAS
LIMITADAS POR UNA SOLA MEMBRANA.
• DESCUBIERTAS POR CHRISTIAN DE
DUVE.
• PRESENTES EN TODAS LAS CÉLULAS
EUCARIOTAS.
• CONTIENEN 50-60 ENZIMAS
HIDROLÍTICAS.
• SON LOS DEGRADADORES DE RESIDUOS
O DESECHOS DE LA CÉLULA.
• SU FUNCION CATABÓLICA ES
COMPLEMENTADA POR ORGANELAS
2
ASOCIADAS A LOS LISOSOMAS (LRO
USMP-FMH-BCM-2016-II
S).
H. Lezama
 LISOSOMAS

• MATRIZ LISOSOMAL ÁCIDA (PH

4,8) FAVORABLE PARA
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA.
• 2 CLASES DE PROTEÍNAS SON
ESENCIALES PARA SU
FUNCIONAMIENTO:
• HIDROLASAS LISOSOMALES.
• PROTEÍNAS INTEGRALES DE
LA MEMBRANA LISOSOMAL
(LMPs)
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 3
 LISOSOMAS
• ENZIMAS HIDROLÍTICAS SON
ELABORADAS EN EL RE Y MODIFICADAS
EN EL APARATO DE GOLGI.
• 50-60 ENZIMAS HIDROLÍTICAS.

• DEGRADAN MATERIAL PROCEDENTE DE:

• ENDOCITOSIS
• FAGOCITOSIS
• AUTOFAGIA
• PARTICIPAN EN:
• DEGRADACIÓN EN VOLUMEN
• PROCESAMIENTO PRO-PROTEÍNAS
• PROCESAMIENTO DE ANTÍGENOS
• DEGRADACIÓN DE LA MATRIZ
EXTRACELULAR
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 4

• INICIACIÓN DE APOPTOSIS
 LISOSOMAS
• PROTEÍNAS INTEGRALES DE LA
MEMBRANA LISOSOMAL (LMPs), APROX. 25
EN LISOSOMAS DE MAMÍFERO.
• CUMPLEN DIVERSAS FUNCIONES:
• ACIDIFICACIÓN DEL LUMEN LISOSOMAL.
• IMPORTACIÓN DE PROTEÍNAS DESDE EL
CITOSOL.
• FUSIÓN DE MEMBRANAS.
• TRANSPORTE DE PRODUCTOS DE
DEGRADACIÓN AL CITOPLASMA.
• LAS MÁS ABUNDANTES:
• PROTEÍNA DE MEMBRANA ASOCIADA AL
LISOSOMA 1 (LAMP1).
• PROTEÍNA DE MEMBRANA ASOCIADA AL
LISOSOMA 2 (LAMP2).
• PROTEÍNA INTEGRAL DE MEMBRANA
LISOSOMAL 2 (LIMP2).
• TETRASPANIN CD63.
•USMP-FMH-BCM-2016-II
BOMBA DE PROTONES TIPO VACUOLAR.
H. Lezama 5
CELULAS
ESPECIALIZADAS
EN FAGOCITOSIS
TIENEN GRAN
CANTIDAD DE
LISOSOMAS.
MACROFAGO DE
MEDULA OSEA

USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 6

EVENTOS DURANTE LA FAGOCITOSIS: FORMACION DEL

FAGOLISOSOMA (M.E.)
 ACTIVIDAD EN LOS FAGOLISOSOMAS

USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 7
 LAS ENZIMAS
DESTRUYEN EL
CONTENIDO DEL
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama FAGOLISOSOMA8
 LISOSOMAS
BIOGÉNESIS LISOSOMAL:

• REQUIERE INTEGRACIÓN DE VÍAS

ENDOCÍTICA Y BIOSINTÉTICA.
• FRECUENTEMENTE EMERGE DEL
APARATO DE GOLGI.
• EN ALGUNOS CASOS SE
DESARROLLA GRADUALMENTE A
PARTIR DE ENDOSOMAS TARDÍOS
.

FOR AN ANIMATED LOOK AT LYSOSOMAL FUNCTION.

HTTP://HIGHERED.MCGRAW-
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 9
HILL.COM/SITES/0072507470/STUDENT_VIEW0/CHA
PTER3/ANIMATION__LYSOSOMES.HTML
LAS CÉLULAS CONTIENEN MÚLTIPLES
SISTEMA PARA
DEGRADAR PROTEÍNAS.

l El Sistema Ubiquitin-proteasoma
l El Sistema Lisosomal
l El Sistema Intra-mitochondria
l Calpains (Ca2+-dependiente de proteases)
l Caspasas
l Proteasas de membranas
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 10

9
 DEGRADACIÓN DE
PROTEINAS MAL PLEGADAS

• MAL PLEGADA = NO
FUNCIONAL.
DESNATURALIZACION.
• ROMPE ENLACES COVALENTES,
NO COVALENTES, DISULFURO.
• CHAPERONA-N GLUCANASA-
UBIQUITINA.
• PROTEOSOMA.
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 11
 IMPORTANCIA CLINICA
Muchas enfermedades neurológicas y otras son causadas por la
acumulación, mas que por la degradación de proteínas con estructuras
anormales.

 Enfermedad de Alzheimer (b-amyloid, tau)

 Enfermedad de Huntington (Huntingtin)
Tau aggregates  Enfermedad de Parkinson (a-synuclein)
(Azheimer’s disease)

 Enfermedad de ALS “Lou Gerhig’s” (SOD)

 Enfermedad de la espina-Bulbar y atrofia
muscular (receptores de andrógenos).
USMP-FMH-BCM-2016-II
Lewy Bodies
(Parkinson’s Disease)
Enfermedad
H. Lezama
por Priones “Mad Cow disease” (prion)
12
ROL FISIOLÓGICO DE LA DEGRADACIÓN
INTRACELULAR DE PROTEÍNAS

Control de calidad

Procesamiento antigénico

Regulación en funciones celulares

Adaptación a estadios fisiológicos

o patológicos

USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 13
 EL MODELO UBIQUITIN-PROTEASOMA
PARA LA DEGRADACIÓN DE PROTEÍNAS
TIENE DOS FASES.

Proteina

ATP Modificación del substrato

ADP por ubiquitin

Ub
ATP Degradación del substrato
ADP Por el proteasoma

Péptidos y
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 14
amino ácidos
 UBIQUITINA

O  76 amino acids
=
Gly-C-OH
Carboxyl terminus
 Mr = 8,000
(glycine 76)

 Altamente conservada
 Ampliamente distribuida

USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 15
(glycine 76)
 Proteínas Ubiquitinadas son degradadas
Por el proteasoma.

Proteolisis

Peptides and
ATP ADP amino acids

Not degraded
Proteasome
Reconoce la cadena
USMP-FMH-BCM-2016-II
Poliubiquitin y no la proteina
H. Lezama Monoubiquitin
16
LA ESPECIFICIDAD PARA UBIQUITINACION SE LLEVA A
CABO CON MÚLTIPLES ENZIMAS DE CONJUGACIÓN.
degron
E3(n)

Ubiquitin E3(n)
O E1 E2(n)
E2(n)
=

-C-OH
ATP

G76
E1 E2(n)

PREMIO NOBEL 2004

USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 17
 ESTRUCTURA DE UN
PROTEOSOMA

a) Imagen de microscopía
electrónica del
proteosoma 26 S de
levadura S. cerevisae

b) Representación
esquemática de la
estructura y función del
proteosoma 26 S
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 18
 MUERTE CELULAR
APOPTOSIS
AUTOFAGIA
 CORNIFICACIÓN

NECROSIS
• MODALIDADES ATÍPICAS (EN ESTUDIO):
• CATÁSTROFE MITÓTICA (MUERTE CELULAR
PRECEDIDA POR MULTINUCLEACIÓN O MUERTE
CELULAR DURANTE METAFASE)
• ANOIKIS
• EXCITOTOXICIDAD
• DEGENERACIÓN WALLERIANA
• PARAOPTOSIS
• PIROPTOSIS
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 19
• PIRONECROSIS
• ENTOSIS
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 20

MUERTE CELULAR
Hotchkiss R et all. Cell death. N Engl J Med 2009; 361: 1570-83 .
 APOPTOSIS
• PRIMERA DENOMINACIÓN: NECROSIS POR
CONTRACCIÓN (SHRINKAGE NECROSIS).
• 1972 KER LA DENOMINÓ APOPTOSIS.
• “CAER O MORIR COMO CAEN LOS PÉTALOS O LAS
HOJAS EN OTOÑO” (GRIEGO).
• OCURRE DURANTE TODA LA VIDA.
• FUNDAMENTAL EN LA HOMEOSTASIS.
• DE CRUCIAL IMPORTANCIA DURANTE EL
DESARROLLO.
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 21
 APOPTOSIS
• H. ROBERT HORVITZ (1986) INVESTIGO EL MODELO GENÉTICO
IMPLICADO EN LA MUERTE CELULAR PROGRAMADA.
• USANDO UN SISTEMA MODELO CONOCIDO Y CARACTERIZADO,
EL NEMATODO CAENORHABDITIS ELEGANS.

• LA APOPTOSIS, A DIFERENCIA DE LA NECROSIS, CONSUME ATP, CUYA

ENERGÍA ES UTILIZADA PARA LA ACTIVACIÓN DE UNAS ENZIMAS

LLAMADOS CASPASAS, CUYA ACTIVACIÓN EN CASCADA

USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 22

PRODUCEN LOS EFECTOS QUE PODEMOS VER EN LA CÉLULA.

USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 23
 Mechanisms of caspase activation
a. Proteolytic cleavage e.g.
pro-caspase 3

b. Induced proximity, e.g.

pro-caspase 8

c. Oligomerization, e.g. cyt c,

Apaf-1 & caspase 9
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 24

Back
 APOPTOSIS
• NO INDUCE RESPUESTA INFLAMATORIA.
• CAMBIOS MORFOLÓGICOS:
• PÉRDIDA DE ADHESIÓN CELULAR
• CONTRACCIÓN CELULAR POR PÉRDIDA DE AGUA Y
Na+
• CONDENSACIÓN DE CROMATINA A NIVEL NUCLEAR
(ESTRUCTURAS EN MEDIA LUNA)
• NÚCLEO SE ROMPE EN MÚLTIPLES FRAGMENTOS
• FRAGMENTACIÓN DEL DNA (PIEZAS DE 180-200 PB)
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 25
 APOPTOSIS
• CAMBIOS MORFOLÓGICOS:
• SE MANTIENE INTEGRIDAD DE LA MEMBRANA
PLASMÁTICA
• FORMACIÓN DE CUERPOS APOPTÓTICOS QUE SON
RÁPIDAMENTE RECONOCIDOS Y FAGOCITADOS POR
MACRÓFAGOS O POR CÉLULAS VECINAS SIN PÉRDIDA
DE SU CONTENIDO.
• MORFOLÓGICA: ENCOGIMIENTO NUCLEAR Y CELULAR,
CONDENSACIÓN DE CROMATINA (PICNOSIS), FORMACIÓN DE
YEMAS, FRAGMENTACIÓN NUCLEAR (CARIORREXIS) Y FORMACIÓN
DE CUERPOS APOPTÓTICOS.
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 26
• BIOQUÍMICA: PERMEABILIZACIÓN DE LA MEMBRANA MITOCONDRIAL
(PMM) Y/O ACTIVACIÓN MASIVA DE LA CASPASAS.
PROCESOS EN LOS QUE INTERVIENE
LA APOPTOSIS

1.- En toda etapa del desarrollo o

reparación tisular en donde se
produzcan células en exceso.
2.- Eliminación de linfocitos.
3.- Eliminación de células infectadas
y tumorales
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 27
ETAPAS DE LA APOPTOSIS:
1.- Activación (inducción negativa/positiva)

*Receptores
a.- de muerte (Fas, TNF)
b.- normales (glutamato)
*Rutas de transducción celular (mensajeros: Ca2+,
radicales libres, proteínas codificadas por genes
supresores)

2.- Decisión (mitocondria)

3.- Ejecución (degradación de proteínas y ácidos nucleicos)
Caspasas
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 28
VÍAS QUE CONDUCEN A LA APOPTOSIS
• VÍA INTRÍNSECA (MITOCONDRIAL)

• VÍA EXTRÍNSECA (RECEPTOR DE MUERTE)

USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 29
 VÍAS QUE CONDUCEN A LA
APOPTOSIS
VÍA INTRÍNSECA (MITOCONDRIAL)
• CONTROLADA POR LA INTERACCIÓN DE PROTEÍNAS PRO-
APOPTÓTICAS Y ANTI-APOPTÓTICAS DE LA FAMILIA BCL2.
• REGULADA POR LA CASPASA 9 (DAÑO CELULAR
ABRUMADOR).
• INICIADORES DE LA VÍA:
• INCREMENTO INTRACELULAR DE ROS
• DNA DAÑADO
• RESPUESTA DE PROTEÍNAS NO PLEGADAS
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 30

• DEPRIVACIÓN DE FACTORES DE CRECIMIENTO

 FAMILIA DE PROTEÍNAS BCL2
ANTI-APOPTÓTICO PRO-APOPTÓTICO
• BCL2 • BAX
• BCL-XL • BAK
• BCLW • BIM
• MCL1 • BID
• A1 • PUMA
• BOO/DIVA
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 31
 VÍAS QUE CONDUCEN A LA APOPTOSIS
• VÍA EXTRÍNSECA (RECEPTOR MUERTE):

INICIA CUANDO MIEMBROS DE LA SUPERFAMILIA TNF SE UNEN A

RECEPTORES MUERTE DE LA SUPERFICIE CELULAR.
• RECEPTORES DE MEMBRANA DE SUPERFAMILIA DE
RECEPTORES TNF (CD95, DR3 Y DR4), INDUCEN EL
RECLUTAMIENTO PROXIMAL DEL COMPLEJO ACTIVADOR DE
CASPASA.
• SE ACTIVA LA CASPASA-8.

• CASPASA 8 Y CASPASA 9 ACTIVADAS MOVILIZAN A SU VEZ A LAS

CASPASAS 3, 6 Y 7, PROTEASAS QUE INICIAN LA DEMOLICIÓN DE
LA USMP-FMH-BCM-2016-II
CÉLULA A TRAVÉS H.DELezamaLA DEGRADACIÓN DE NUMEROSAS
32

PROTEÍNAS Y LA ACTIVACIÓN DE DNASAS.

 VÍAS DE LA
APOPTOSIS

USMP-FMH-BCM-2016-II
33
H. Lezama
 Apoptosis signal to kill infected cells
Cytolytic lymphocyte/CTL (& natural killer lymphocyte) presents
Fas ligand/CD178 on its surface to tell the infected cell to die

Fas ligand

Externally driven
Apoptotic signals
Cytochrome c

Initiator caspases
The immunological synapse
holds the cells much tighter
together than shown here
Execution caspases

USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 34
Apoptosis events
Fas/ CD95 is the
‘death receptor’
 NECROSIS
• CUANDO LAS CÉLULAS SUFREN DAÑOS TALES COMO
QUEMADURAS, ACCIDENTES, RADIACIONES, TRAUMAS,
INFECCIONES, ETC. SE PRODUCE NECROSIS.
• LA MUERTE NO OCURRE DE FORMA ORDENADA, DE MANERA
GENERAL EL NÚCLEO NO PRESENTA CAMBIOS APARENTES,
LAS MITOCONDRIAS APARECEN DAÑADAS, EL AGUA Y IONES
FLUYEN HACIA EL CITOPLASMA Y LA CÉLULA SE HINCHA, CON
LO QUE TERMINA POR ROMPERSE LIBERANDO EL CONTENIDO
CELULAR QUEDANDO EN EL MEDIO PROTEASAS Y SEÑALES
QUE ATRAEN CÉLULAS DEL SISTEMA INMUNITARIO, POR LO
QUE TIENE LUGAR UNAH. Lezama
USMP-FMH-BCM-2016-II
REACCIÓN INFLAMATORIA EN LA 35
ZONA.
 NECROSIS
• CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS:
• EDEMA NUCLEAR Y MITOCONDRIAL.
• FORMACIÓN DE PROLONGACIONES EN LA
SUPERFICIE CELULAR.
• DESAGREGACIÓN DE RIBOSOMAS.
Características morfológicas (si persiste la noxa):
Se acentúan más los cambios.
“Burbujeo” extremo en la superficie celular.
Gran dilatación mitocondrial.
Ruptura de la membrana.
Disolución de las organelas y núcleo.
Degeneración lisosomal
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 36
 NECROSIS
• “CADAVER” (GRIEGO).
• RESPUESTA A UNA
NOXA.
• EL ESTÍMULO DE LA
MUERTE ES LA CAUSA
DIRECTA DE LA
DEFUNCIÓN CELULAR.

USMP-FMH-BCM-2016-II
37
H. Lezama
 NECROSIS
• MUERTE CELULAR POR
AGRESIÓN EXTERNA
(FÍSICA, QUÍMICA O
BIOLÓGICA).
• GRAN RESPUESTA
INFLAMATORIA EN EL
LUGAR DE LA INJURIA.
• CAMBIOS
GENERALMENTE DESDE
PARTE EXTERNA HACIA
LA INTERNA.
USMP-FMH-BCM-2016-II
38
H. Lezama
USMP-FMH-BCM-2016-II
39
H. Lezama
USMP-FMH-BCM-2016-II
40
H. Lezama
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 41
 AUTOFAGIA
• “COMERSE UNO MISMO” (GRIEGO).
• PROCESO POR EL CUAL LA CÉLULA RECICLA SUS
PROPIAS ORGANELAS Y COMPONENTES
MACROMOLECULARES NO ESENCIALES, REDUNDANTES O
DAÑADOS.
• RESPUESTA ADAPTATIVA AL STRESS SUB-LETAL.
• PARTICIPA EN:
• SUPRESIÓN DEL CRECIMIENTO DEL TUMOR.
• SUPRESIÓN DE PROTEÍNAS TÓXICAS MAL PLEGADAS.
• ELIMINACIÓN
USMP-FMH-BCM-2016-II DE MICROORGANISMOS
H. Lezama INTRACELULARES. 42
• PRESENTACIÓN DE ANTÍGENOS.
• A LO LARGO DEL DESARROLLO CUALQUIER
ORGANISMO NECESITA LA DESHACERSE DE CIERTAS
ESTRUCTURAS Y CREAR OTRAS
• DURANTE UN PROCESO DE METAMORFOSIS.

USMP-FMH-BCM-2016-II
43
H. Lezama
 AUTOFAGIA
TRES FORMAS:

1. MACROAUTOFAGIA
2. MICROAUTOFAGIA
3. AUTOFAGIA MEDIADA POR
CHAPERONAS

REGULA FORMACIÓN DE AUTOFAGOSOMA:

• FOSFATIDILINOSITOL 3 KINASA (PI3K)

• BECLIN-1 (BECN1)
• MTOR (SIROLIMUS)
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 44
 ASPECTOS FISIOLÓGICOS Y
MOLECULARES
 ESTADIOS:

1. VESÍCULAS NUCLEARES
2. ELONGACIÓN
VESICULAR
3. FUSIÓN DE UNA DOBLE
MEMBRANA (AUTO-
FAGOSOMA/LISOSOMA)
FORMACIÓN DEL AUTO-
LYSOSOMA.
USMP-FMH-BCM-2016-II H. Lezama 45