UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y DE

RECURSOS NATURALES
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

DOCENTE
• Blga. Beatriz Mónica Suyo Loayza

INTEGRANTES

• ARELLANO RUIZ, Allison

• BERROSPI RODRIGUEZ, Liz
• ESTACIÓN ESTACIÓN, Edwins
• PUMARRUMI MEDINA, Gianella
• VALERIANO QUISPE, Ruth
Generalidades:

Definición
 Estructura rígida Constituida
y resistente principalmente
 La pared por
bacteriana rodea peptidoglucano
la frágil (que forman una
membrana malla que
citoplasmática envuelve la
protegiendo el bacteria)
interior celular Localizada en el
de los cambios exterior de la
en el medio membrana
ambiente plasmática
Dos grupos de bacterias carecen de pared celular:

• los Mycoplasma que poseen solamente membrana.

• las formas L derivadas de bacterias que perdieron su habilidad de sintetizar su
pared celular.
funciones

Prevenir la
ruptura de Anclaje a
las los
bacterias flagelos
Dar forma

Regulación
del paso de
iones
 Morfología y Estructura

Tamaño
Solo son visibles entonces, al
microscopio óptico o microscopio
• oscila entre las 0.5 y 3 µm electrónico.
• algunos tipos a 10 µm Para observarlas con el microscopio
óptico se usa el objetivo de inmersión
(100X), sumergiendo esta lente en
una gota de aceite (aceite de
inmersión) en el preparado a
observar.
Morfología:
• Microscópica
La forma de las bacterias al
microscopio está determinada por
la rigidez de su pared celular.
Básicamente, se diferencian según
su forma en cocos, bacilos y
espirilos; dentro de estas últimas se 1. cocos; 2.diplococo; 3. cocos en cadenas;
encuentran: Treponema, Borrelia y 4. cocos en racimos; 5. cocos en tetradas; 6.
Leptospira cocobacilos; 7. bacilos;8. bacilos bordes
redondeados; 9.bacilos bordes rectos; 10.
bacilosfusiformes; 11, 12. bacilos curvos;
13 al 15. espiroquetas
• Macroscópica

Son visibles
La mayoría de como colonias
las bacterias se cuando se las
multiplican siembra en
rápidamente medios de
cultivo sólidos
Atmósfera que
Requieren una
favorezca su
incubación de
desarrollo, a
aproximadamente
temperatura
24 horas
óptima
• Estructura bacteriana
Las podemos dividir, según sean constantes en las células o no, en estructuras
permanentes o variables. Dentro de las primeras se destaca: la pared celular, la
membrana celular, los ribosomas y el material genético.
Las estructuras variables son: los flagelos, las fimbrias o pilis, la cápsula y los
esporos.

Grampositiva Gramnegativa
Bacterias, cuya pared celular
poseen ácidos micólicos de
cadenas carbonadas
especialmente alargadas, se
les conoce como bacterias
debido a que los ácidos
grasos presentes en la pared
celular retienen el colorante
cuando son decolorados
con alcohol y acido.
Mycobacterium
• M. Tubesculosis
• M. Leprae

• Micobacterias atípicas

Nocardia
Mycobacterium
La alta concentración de acido
micólico en la pared celular es la
causante de la baja absorción y alta
retención de la tinción (fucsina).

 son bacilos finos, largos

e inmóviles.
 Son resistentes a la
decoloración debido a
la alta concentración
de acido micólico en
la pared celular.
 Son teñidas
adecuadamente con
el método de ziehl-
Neelsen.
Nocardia
Características generales:
 Son actinomicetos aeróbicos,
ubicuos, saprófitos del suelo, en el
agua o sobre materia orgánica en
descomposición.
 Son inmóviles, no capsuladas, no
esporuladas.
 Son productoras de catalasa
-Son resistentes a la
decoloración de la
fucsina debido a la alta
concentración de
acido micólico.
-Para su visualización se
usa tinciones
especificas.
Tinción de Ziehl - Neelsen

La coloración clásica de Ziehl-

Neelsen requiere un
calentamiento para que la
coloración atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras.
Al suspender el calentamiento
y enfriar con agua, provoca
una solidificación de los ácidos
grasos de modo que el
colorante ya no puede salir de
las bacterias.
Las bacterias que
resisten la
decoloración son de
color rojo y la que no
se ve de color azul, ya
que se utiliza azul de
metileno como tinción
de contraste.

La tincion acido-alcohol resistente se

utiliza para identificar a Mycobacterium.
La microfotografia muestra masa de
celulas de M. leprae en el interior de la
celulas hospederas.
Pared celular de las Gram positivas:

-La pared esta constituida por

peptidoglucano. En caso de las Gram + el
peptidoglucano es muy grueso y a el se le
asocian proteínas.

-Aquellas bacterias que se tiñen de azul

oscuro o violeta por la tinción de Gram.
 PARED CELULA DE LAS GRAM
NEGATIVAS

◦ Las bacterias GRAM negativas no

retienen casi nada de tinte y aparecen
en la tinción con un color rosa pálido
(debido a que retienen la safranina del
tinte). Esto es debido a la fina capa de
peptidoglucano que tienen.
 Metanogénicas

◦ Las arqueobacterias metanógenas

poseen la pared celular formada
por un compuesto similar al
peptidoglicano de las bacterias,
por lo que
denomina pseudopeptidoglicano,
con enlaces glucosídicos 1,3 en
lugar de los 1,4 de los
Methanococcus jannischii
peptidoglicano.
 Estructura química del
pseudopeptidoglucano
 Halófilas

Halobacterium
◦ El componente principal de la pared celular
de Halobacterium es una gran glicoproteína
ácida. Su componente de glicano consistente
en 22 a 24 disacáridos enlazados por enlaces
O-glicosídicos a residuos de treonina; de 12 a
14 trisacáridos enlazados de la misma manera
también a treoninas; y un solo
heterooligosacárido unidos con enlace N-
glucosídico a asparagina.
 Halococcus

◦ La pared de Halococcus es química y

estructuralmente diferente de la de
Halobacterium. Se parece a la de las
bacterias gram positivas .
◦ Químicamente, sin embargo, la pared de
Halococcus tiene escaso parecido con las
paredes bacterianas. Su constituyente
principal es un heteropolisacárido sulfatado
completo compuesto de varios azúcares
neutros, ácidos urónicos y aminoazúcares.
 Termoacidófilas

Sulfolubus

◦ La pared celular de Sulfolubus

se compone principalmente de
lipoproteina y carbohidrato (con
azúcares neutros y aminados)
que forman una capa distintiva
en el exterior de la membrana
celular.
 Thermoplasma

Las especies del género Thermoplasma no

poseen una pared celular rígida, pero su
membrana presenta grandes cantidades de
lipopolisacarido y glicoproteína
conteniendo ambos manosa y glucosa
como principales monómeros de azúcar.

Thermoplasma acidophilum
COLORACIONES
 Son sustancias de origen químico o biológico
que usualmente se utilizan en la microbiología y
COLORANTE medicina para resaltar estructuras en tejidos
biológicos que van a ser observados con la
ayuda de diferentes tipos de microscopios.

Cromóforo Auxocromo
Hacen que la molécula “aumentar color“, grupos
absorba en la región cargados positivamente
visible del espectro que intensifican al
electromagnético, dando cromóforo en la síntesis
la propiedad del color . de colorantes.
 CLASES DE COLORANTE

Son básicamente
Naturales
histológicos.
De acuerdo a su
origen
Obtenidos
Artificiales mayormente como
derivados del
alquitrán de hulla.
 Naturales Artificiales

◦ Ácido carmínico, insecto Dactylopius ◦ Azul de metileno

coccus. ◦ Safranina
◦ Rivoflavina, fermentación de levadura, ◦ Azul de anilina
color amarillo.
◦ Eritrosina
◦ Antocianina, vacuaolas de célula
vegetal. ◦ Índigo
◦ Clorofila, hojas y plantas. ◦ Cristal violeta
◦ Xantofila, resistencia a la oxidación.
◦ Carotenoides, algas, hongos y plantas.
◦ Carbón vegetal, carbonización de la
madera, hulla.
◦ Óxido de hierro, al oxidarse, color
marrón.
 CLASES DE COLORANTE

Se mezcla con los

Liposuble lípidos celulares
tiñéndolos.
Presentan cargas
De acuerdo a su Colorante positivas penetrando
carga el interior de las
catiónico
células y pudiéndolas
teñir.

Presenta carga
Colorante
negativa no tiñen la
aniónico
célula sino el entorno.
 CLASES DE COLORANTE
Tiene apetencia en
Ácido estructura proteicas
en el citoplasma
celular.
De acuerdo a su Apetencia por
comportamiento Básico sustancias ácidas
químico como el ADN o
componentes.

Un mismo color tiñe

Neutro las partes ácidas
como básicas.
MÉTODOS DE COLORACIÓN
 PROCEDIMIENTO PARA TODA COLORACIÓN

LAVADO
EXTENSIÓN LAVADO
FINAL

FIJACIÓN DIFERENCIACIÓN SECADO

COLORACIÓN RECOLORACIÓN
 TINCIÓN SIMPLE

Permite observar la presencia de

microorganismos, forma, tamaño, disposición de
las células microbianas, usa un solo colorante
básico o ácido en solución acuosa,
ocasionalmente puede añadirse una mordiente.

Directa, para teñir la Indirecta, tiñe el entorno

estructura microbiana que rodea la estructura
mientras el medio microbiana mientras esta
permanece sin colorear. permanece sin teñir.
 COLORACIÓN CON AZUL DE METILENO

Frotis: hacer un extendido a partir de un cultivo bacteriano es un portaobjetos.

Fijar la preparación exponiendo el portaobjetos rápidamente a la llama del mechero

evitando excesivamente calentamiento.

Cubra el extendido con una pequeña cantidad de azul de metileno y déjelo actuar
por un minuto.

Lave con agua hasta eliminar el exceso de colorante.

Seque la preparación al aire o al mechero.

Examine las preparaciones teñidas del microscopio, con el lente de inmersión.

 Núcleo

Células de epiteliales de la
mucosa bucal
 COLORACIÓN CON TINTA CHINA

Hacer un extendido a partir de un cultivo

bacteriano en un portaobjetos.
No son una verdadera
tinción. Se llaman así
porque lo que realmente
Cubra el extendido con tinta china.
se tiñe es el fondo sobre
el que están los
microorganismos
Cubrir con cubreobjetos. apareciendo los
microorganismos sin
teñir.

Observar Tinción indirecta

Cápsula

Meningitis Neumonía, otitis media.

 COLORACIÓN CON AZUL DE LACTOFENOL

Hacer un extendido a partir de un cultivo

bacteriano en un portaobjetos.
Es útil para la
Cubra el extendido con azul de identificación de
estructuras y esporas
lactofenol. de hongos, tiene la
capacidad de
adherirse a las hifas
Cubrir con cubreobjetos. y conidios de los
hongos microscópicos

Observar Tinción directa

 Fotomicrografía
de
hongos
filamentosos

Exserohilum sp Mucor spp

Aspergillus
 COLORACION DIFERENCIAL
Las tinciones diferenciales son aquellas tinciones que se usan para
diferenciar de manera mas explicita los microorganismos. Estas tinciones
utilizan los colorantes diferenciales, que se componen de más de una
sustancia tintórea.
La morfología de la bacteria es visible debido a que los colorantes
utilizados en el proceso tiñen la superficie permitiendo cambiar de color a
las bacterias, esto ayuda a tener una definición clara al momento de
observar en el microscopio óptico.
Esta tinción requiere de más de un tipo de colorante, consiste en tres
pasos fundamentales: primero un colorante primario, el cual se utiliza para
teñir a todas las células en la tinción; después se procede a la
decoloración, el cual remueve el colorante solo de ciertos tipos de células
y finalmente un colorante de contraste, este tiñe las células que se
decoloraron.
 TINCIÓN DE GRAM

En 1884 , Hans Chistian Gram, bacteriólogo danés, desarrollo una técnica

de tinción, la cual se le atribuye a su apellido, esta técnica permitió
separar a la bacterias en dos grandes grupos las gram postivas y las gram
negativas, dependiendo si retienen el colorante en su pared o no, después
del proceso de decoloración.

La tinción Gram está basada en la diferenciación de la composición

química de la pared celular bacteriana; para lo que se emplea 4
compuestos: cristal violeta, mordiente-lugol, decolorante alcohol-cetona y
colorante de contraste safranina.
 FUNDAMENTO TÉCNICO
En el primer paso de la coloración, cuando los microorganismos presentes en el
frotis son expuestos a la acción colorante de la violeta de genciana, todos los
géneros que se encuentran en el frotis se tiñen de color violeta. Al adicionar el
lugol, no se produce ningún cambio de color, ya que el lugol no es un colorante,
sino un mordiente, que se adiciona con el objetivo de formar un complejo violeta-
lugol, para fijar el color en la bacteria. Al adicionar el decolorante (alcohol
etilicio o alcohol acetona) algunos géneros no son afectados por estos solventes,
reteniendo por consiguiente el color violeta aplicado inicialmente, en tanto que
otros son decolorados quedando la bacteria nuevamente incolora. Al echar
finalmente la solución de safranina (que es de color rojo ) las especies que no
fueron decoloradas, mantienen la coloración violeta ya que la safrania es un
colorante mas débil que la violeta y su adición no influye significativamente en
cambio de color, en tanto que los géneros que fueron decolorados por el alcohol,
se tiñen con la safrina.
 PROCEDIMIENTOS PARA LA TINCIÓN DE GRAM
1. Preparar un extendido de la muestra
2. Fijar la muestra por calentamiento de forma suave
3. Cubra el extendido con la solución de violeta
cristal(colorante primario) y deje actuar por un
minuto.
4. Lavar con agua
5. Cubrir el preparado con Lugol(mordiente) y deje
actuar por un minuto
6. Lave con agua corriente
7. Decolore con alcohol-cetona(decolorante) hasta que
no se desprenda mas colorante de la preparacion(15
segundos)
8. Lave con agua corriente. Aplique una solucion de
fucsina básica(contraste) y déjela actuar por 30-60
segundos
9. Lavar con agua
10.Secar la preparación y observar con el objetivo de
inmersión.
 ¿POR QUÉ LAS GRAM + SE TIÑEN DE AZUL/VIOLETA?

Gram positivas:

Resistencia a la decoloración
Capas péptidoglicano gruesa

Compuesto CV-I demasiado Clostridium

grande para escapar perfringens
 ¿POR QUÉ LAS GRAM - SE TIÑEN DE ROJO/ROSA?

Gram negativas:

Membrana soluble solventes

orgánicos, lipopolisacáridos

Capas péptidoglicano fina

Retiene la safranina

Escherichia coli
 TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN
Se denomina también tinción ácido-alcohol resistente y es específica para una serie
de bacterias con estructura de pared particular, las micobacterias. La pared de las
micobacterias no está basada en peptidoglicano como las bacterias Gram. positivas y
gram negativas, sino en ácidos micólicos. Esta particularidad las hace resistentes a la
decoloración con ácido y alcohol que no se produce en casi ningún otro tipo
bacteriano.
Las micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y M. marinum se caracterizan
por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl-
Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana
que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una
nueva solidificación de lo ácidos grasos de modo que el colorante ya no puede salir de
las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energía cinética de las
moléculas del colorante lo cual también facilita su entrada a las bacterias. Las
bacterias que resisten la decoloración son de color rojo y las que no, se ven de color
azul ya que se utiliza azul de metileno como tinción de contraste.
 PROCEDIMIENTOS PARA LA TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN
1. Preparar un extendido de la muestra
2. Fijar la muestra por calentamiento de forma
suave
3. Coloque la lamina en el soporte apropiado y
cubra el extendido con fucsina fenicada
4. Caliente suavemente hasta la emisión de
vapores. No debe dejarse hervir el colorante
5. Lave con agua corriente
6. Decolore con alcohol clorhídrico
7. Lave con agua corriente. Mycobacterium tuberculosis
8. Cubra el extendido con la solución de azul de
metileno y déjelo actuar por 1 minuto
9. Lave nuevamente con agua corriente,
escúrralo y deje secar al aire.
10.Examine con el objetivo de inmersión
 COLORACION ESPECIAL
Son aquellas que utilizan más de un colorante, sirven diferenciar
distintas estructuras bacterianas. Se puede teñir selectivamente las
esporas, los flagelos o las capsulas.

COLORACIÓN DE ESPORAS

La pared de las esporas es relativamente

impermeable, sin embargo, los colorantes pueden
penetrarla si se calienta la preparación y la misma
impermeabilidad sirve para prevenir
la decoloración. Las esporas se tiñen con verde de
malaquita o carbofuxina.
 TINCIÓN DE WIRTZ-CONKLIN
•El verde de malaquita es un colorante débilmente básico (tiene una carga
positiva débil) y por tanto, se une débilmente a la bacteria. Penetra en las
células vegetativa . Cuando se calienta la preparación también penetra las
esporas
•Decoloración Durante el lavado con agua, el verde de malaquita se elimina de
las células vegetativas, pero no de la espora.
•Safranina El colorante de contraste (la safranina) solo puede teñir a las células
vegetativas (decoloradas por el agua)
Esporas

Bacterias
 COLORACIÓN DE CÁPSULA
COLORACIÓN HISS

•Las capsulas, por su características químicas, no se tiñen normalmente

con colorantes como el cristal violeta o la safranina. Pero pueden
observarse con una tinción negativa, solamente se tiñe el medio
circundante.
Las cápsulas se observan como
aureolas de color celeste o azul
pálido alrededor de las células
azul oscuro o rosado.
 COLORACIÓN DE ESPIROQUETAS
COLORACIÓN VAGO

•Las bacterias fusoespirales y espiroquetas comúnmente no se tiñen con

las técnicas usuales el método se basa primeramente en la impregnación
con mercurio cromo a nivel de la pared celular de dichos microorganismos
y solo así se podrán teñir con violeta de genciana
 COLORACIÓN DE FLAGELOS

COLORACIÓN RYU

• Las bacterias y sus flagelos deben

teñirse de color morado
 COLORACIÓN DE CORPÚSCULOS METACROMATICOS

COLORACIÓN ALBERT

Algunas bacterias de los géneros Lactobacillus y

Spirillum, presentan gránulos o inclusiones con
diferentes capacidad tintorial al resto de la célula.

Los gránulos metacromaticos son inclusiones de

gran tamaño que se llaman asi por que a veces
se tiñen de rojo con ciertos colorantes azules)
como el azul de metileno.
 Naranja de Acridina

El naranja de acridina ha sido

empleado como colorante vital,
que da una fluorescencia verde
si el microorganismo está vivo y
roja si está muerto.
Es un colorante catiónico que
posee fluorocromo
 Auramina-Rodamina

Tras la tinción, los microorganismos

aparecen como puntos amarillos o
amarillo-verdosos brillantes sobre
fondo negro. Es una tinción
equivalente a la de Ziehl-Neelsen,
aunque mucho más sensible y
específica.
Mycobacterium tuberculosis sobre un fondo
negro-verdoso al utilizar permanganato de
potasio como colorante de contraste