Cintica de crecimiento.
Cultivo continuo y lote
alimentado.
Ms. Augusto Mechato Anastasio
mechato@[Link]
Mtodos de cuantificacin del crecimiento
microbiano
Los mtodos para el seguimiento de la evolucin
de un cultivo microbiano pueden clasificarse en
DIRECTOS INDIRECTOS
Mtodos de cuantificacin del crecimiento
microbiano
Los mtodos directos se basan en la medida de la evolucin del
nmero de clulas vivas (tcnicas de plaqueo) o del nmero de
partculas (tcnicas microscpicas y de contadores de partculas).
Mtodos de cuantificacin del crecimiento
microbiano
Los mtodos indirectos se
basan en la medida de
algn parmetro del
cultivo que nos permite
deducir informacin sobre
la evolucin del nmero
de microorganismos.
La eleccin de un mtodo
de seguimiento del cultivo
en concreto depende de
las caractersticas del
cultivo y del proceso.
Mtodos de cuantificacin del crecimiento
microbiano
Mtodos de cuantificacin del crecimiento
microbiano
RECUENTO EN PLACA
Cada una de las clulas aisladas dar lugar, despus
de la incubacin correspondiente, a una colonia de
forma que el nmero de estas nos permitir
Tcnicas de recuento en placa, basadas estimar el nmero de clulas presentes en la
en colocar en un medio de cultivo muestra plaqueada (sembrada).
adecuado un volumen determinado de
muestra.
MTODOS DE CUANTIFICACIN DEL CRECIMIENTO
MICROBIANO
TCNICAS
TURBIDIMETRICAS.
Basada en la medida de la turbidez de los medios de
cultivo en los que crecen microorganismos
unicelulares. La turbidez es proporcional a la masa de
las partculas en suspensin (clulas) y su medida nos
permite observarlas.
Mtodos de cuantificacin del crecimiento
microbiano
MEDIDA DE PESO SECO.
El sistema consiste en la filtracin del cultivo a travs
de una membrana que retenga las clulas y su
posterior desecacin hasta peso constante.
Cintica de cultivos por lotes
El conocimiento de la cintica de un cultivo permite la
prediccin del transcurso de la fermentacin, la
evaluacin de las velocidades, rendimientos y
productividades y entrega informacin til para
establecer estrategias de produccin y optimizacin del
proceso.
Cintica de Cultivo por Lotes
Curva de crecimiento en cultivo por Lotes
5
a b c d e
4
LN CONC. CELULAR, X
Fase de
Estacionaria
3
1
Fase de
latencia
0
0 1 2 3 4 5 6
TIEMPO, t
Fase de Latencia (a): Se produce inmediatamente despus de inoculado el cultivo.
Durante ella no hay iniciacin de replicacin de ADN ni separacin de nuevas
clulas. Se reproduce el reacomodo de la composicin macromolecular al nuevo
ambiente en que se encuentran las clulas inoculadas.
LN CONC. CELULAR, X
TIEMPO, t
Si la curva se construye utilizando el nmero de clulas en vez de la biomasa,
puede haber una cierta disminucin en el recuento de clulas viables.
Fase de Crecimiento exponencial o Logartmico (b): Las clulas se encuentran en
plena reproduccin a una velocidad que es mxima para el juego de condiciones
existentes, por no existir limitacin de nutrientes.
LN CONC. CELULAR, X b
TIEMPO, t
Fase Estacionaria (c): Se alcanza cuando se agota un nutriente, razn por la cual se
detiene el crecimiento.
En esta fase tambin puede presentarse una leve pendiente positiva, si el nutriente
agotado es la fuente de nitrgeno. Por el catabolismo de carbohidratos y
compuestos de reserva.
LN CONC. CELULAR, X
c
TIEMPO, t
Fase de muerte o decaimiento (d): Esta fase se presenta en aquellos cultivos en los
que se inducen enzimas autolticas en condiciones de inanicin.
LN CONC. CELULAR, X
d
TIEMPO, t
Fase de crecimiento crptico (e): En algunos de los cultivos es posible apreciar una
zona de crecimiento lento despus de la fase de muerte. El contenido
citoplasmtico liberado por las clulas lisadas proporciona los nutrientes
requeridos para el crecimiento.
LN CONC. CELULAR, X
e
TIEMPO, t
CINTICA DE CULTIVO POR LOTES
MODELAMIENTO DEL CRECIMIENTO CELULAR
EL crecimiento de una poblacin bacteriana puede ser representada
por:
= (1)
: VELOCIDAD ESPECIFICA DE CRECIMIENTO (H-1)
1
= = (2)
DURANTE LA FASE EXPONENCIAL ES POSIBLE INTEGRAR LA ECUACION (1) RESULTANDO:
= . (3)
Cintica de cultivo por lotes
2
=
La Tabla N01 de entrega de valores de . Estos valores no son ni mximos ni mnimos
sino que cifras tpicas
Tabla N01: Valores de td
Tipo de clula
bacterias 0.3 2.5
levaduras 1.0 4.0
Hongos filamentosos 1.5 - 7.0
micro algas 18 - 35
Clulas animales 20 - 40
Descripcin Cuantitativa
Equipos y modalidades de operacin en cultivo continuo
Tipo de Fermentador
Tanque agitado
Tubular flujo piston (tapn)
Columna tubo de tiraje (air-lift)
Rellena
Platos
Circulacin (loop)
Modalidad de Operacin
Quimiostato simple de una etapa
Quimiostato multietapa
Quimiostato con recirculacin de clulas
Quimiostato con recirculacin de lquido
Quimiostato con retencin de clulas
Turbidostato
pH estato
CO2 estato
Auxostato
Otros
Descripcin Cuantitativa
X 0 S0 P 0 X S P
V X
S
P
A continuacin se plantean los balances de clulas, nutriente limitante y
producto de acuerdo a la ecuacin general:
Variacin de composicin = entradas salida + produccin consumo
Para saber cuantas ecuaciones independientes son necesarias para describir
totalmente el comportamiento del sistema, se debe saber cules son las
incgnitas: X, S, y P. Se considera que durante una operacin no varan los
valores de Xo, F, V e Yx/y.
Estrictamente el rendimiento es funcin de y de considerarse necesario se
puede incluir esta dependencia.
1 1 1 1 1 q 1
m. m 0P . 4
0 0
YX / S Y
X /S YX / S Y
X /S YP / S
Balance de clulas
d ( XV )
FX o FX XV 5
dt
Dado que se operar a volumen constante
dX F
( X o X ) X 6
dt V
Se define D, velocidad de dilucin:
F
D 7
V
Se debe notar D es el valor reciproco del tiempo de residencia en el
fermentador, si la densidad del lquido es constante.
Si establecemos que la alimentacin es estril, entonces Xo = 0
dX
DX X 8
dt
Balance de nutriente limitante
dS X
D( S 0 S ) 9
dt YX / S
Balance de nutriente limitante
dP
DP Qp 10
dt
Para completar la descripcin del quimiostato se recurre a una expresin
cintica del tipo:
f (S , t ) 11
Tanto en rgimen estacionario la ecuacin estacionario la ecuacin (8) se
reduce a:
dX
DX X X DX 12
dt
D 13
De la ecuacin (9):
dS X Yx / s D
D( S 0 S ) X (So S ) 14
dt YX / S
Con la ecuacin (13) en (14):
Yx / s D
D X (So S )
X Yx / s ( So S ) 15
Con la ecuacin (10):
QP DP 16
El sistema de ecuaciones algebraicas (13) y (16), representan la operacin de
quimiostato en estado estacionario. Se debe notar que si el cultivo no produce un
producto P, las ecuaciones (10) y (16) no rigen, pero el resto de las ecuaciones no
se ven afectadas.
La solucin del sistema de ecuaciones es:
DK S
D QP DP S 17
M D
dP DK S
DP Qp X Yx / s S0 18
dt M D
1
P QP 19
D
Perfiles Caractersticos de un quimiostato simple de una etapa en
funcin de la velocidad de dilucin.
Se representa el comportamiento de X, S y Qx (Qx = X =DX) en funcin
de D.
CONCENTRACIN
PRODUCTIVIDAD
Qx
Dcrit
VELOCIDAD DE DILUCIN
So
Dcrit M 20
K s So
Dcrit es conceptualmente distinto a M, aunque numricamente puedan ser
casi iguales, ya que normalmente So > Ks
Determinacin de Parmetros
Para determinar M y Ks se deben obtener datos de varios estados estacionarios, lo
que permite construir experimentalmente un grfico de Monod.
De este grfico se podra calcular Ks como el valor de S al cual = M/2 ya que:
M S
M 21
Ks S
Vel. Esp. Crecim.
2
S
M
KS S
S KS 22
Conc. Sustrato, S
En al situacin de lavado rige la ecuacin diferencial (8) y dado que D > Dcrit
las clulas crecern a su mxima velocidad M.
dX dX
DX X DX M X 23
dt dt
1 dX d ln X
M D D 24
X dt dt
La figura muestra que Qx presenta un mximo a una determinada D. El valor al que
se presenta ese mximo, DM se puede determinarse derivando la expresin
analtica de Qx respecto a D y hacindola igual a cero:
DK S
X
CONCENTRACIN QX X DX DYX / S So 25
PRODUCTIVIDAD
Qx M D
dQ X
Dcrit 0 26
VELOCIDAD DE DILUCIN
dD
K
1/ 2
DM M 1 S
27
( So K S )
El signo positivo de la raz se descarta porque DM no puede ser mayor que M.
Introduccin el valor de DM en la ecuacin (18) se calcula XM, el valor de X al cual
se presenta el mximo de productividad, QM.
X M YX / S So K S K S So K S
1/ 2
28
y luego
QM DM X M 29
Es posible demostrar que QM es siempre mayor que el valor mximo de Ox que se
obtiene en cultivo por lotes y que esta diferencia es tanto mayor mientras mas
prolongado sea el periodo de operacin continua.
Esta propiedad constituye una importante ventaja de las fermentaciones continuas
respecto a la modalidad por lotes.
1. En el desarrollo de una tecnologa microbiana para tratar un efluente industrial
se requiere operar un quimiostato de 120 litros de volumen de trabajo con un
flujo de 20 L/h. La poblacin presenta un M de 0.22 hr-1, un Ks de 1000 ppm y
un rendimiento de sustrato en clulas de 0.28 g/g. Los ensayos preliminares
hacen recomendable trabajar a una velocidad de dilucin equivalente a un 82 %
del valor crtico. Determinar la concentracin de sustrato en la alimentacin, en
la descarga y la concentracin celular en estado estacionario.
F F
F = 20 l/h
So V = 120 L
M = 0.22 h-1
Ks = 1000 ppm = 1g/L
Yx/s = 0.28 g/g
D = 0.82 Dcrit
Sabemos que: F 20
D 0.167 h 1
V 120
D 0.167
Entonces:
D 0.82 Dcrit Dcrit 0.203 h 1
0.82 0.82
So
Dcrit M 20
K S So
Dcrit K S (0.203) (1)
So 12.136
M Dcrit (0.22) (0.203)
DK S
S 17
M D
(0.167) (1)
S 3.15 g/L
(0.22) (0.167)
X Yx / s ( So S ) 15
X (0.28) (12.136 3.15) 2.517 g/L
