Bacillus thuringiensis

Bacillus
thuringiensis
 Bacillus thuringiensis

Familia Bacillaceae
Género Bacillus

Bacteria esporulada

Gram positiva

Aerobia facultativa y móvil

 Bacillus thuringiensis

ES COSMOPOLITA, SIN
EMBARGO LA RAZÓN
DE ESTA DIVERSIDAD
NO ES CONOCIDA
 Bacillus thuringiensis

•FORMA INCLUSIONES
CRISTALINAS VISIBLES AL
MICROSCOPIO ÓPTICO
DURANTE LA
ESPORULACIÓN

•ESTAS INCLUSIONES
CRISTALINAS ESTÁN
COMPUESTAS POR
PROTOXINAS, QUE
CONTIENE DELTA
ENDOTOXINAS, TÓXICAS
PARA LOS INSECTOS
 Bacillus thuringiensis

LA δ− ENDOTOXINA PUEDE VARIAR EN

TAMAÑO Y EN FORMA, PRESENTANDO
DIFERENTES FORMAS EN SUS CRISTALES

•ROMBOIDAL (65 KDA),

•AMORFO ENTRE (130 Y 140 KDA)
•HETEROGÉNEO (63 KDA)
•BIPIRAMIDAL (130 Y 65 KDA )
 Bacillus thuringiensis

CLASIFICACIÓN DE LOS CRISTALES

SEGUN SU ESPECTRO DE ACTIVIDAD
INSECTICIDA

•Cry I tóxicos para lepidópteros

•Cry II para lepidópteros y dípteros
•Cry III para coleópteros
•Cry IV para dípteros
Bacillus thuringiensis
 Bacillus thuringiensis

ECOLOGÍA DE Bt

HAY VARIAS HIPÓTESIS PARA EXPLICAR SU

ROL EN EL AMBIENTE, LAS CUALES ESTÁN
BASADAS PRINCIPALMENTE EN:

1. SE HA PROPUESTO QUE Bt CRECE EN

SUELOS SOLO BAJO CONDICIONES
ESPECIALES, Y EL ORIGEN DE LAS ESPORAS
PODRÍA VENIR DE LA ACTIVIDAD DE
INSECTOS Y/O CAÍDA DE HOJAS DE PLANTAS,
ACTUANDO COMO UN SUMIDERO PARA LA
ESPORA DE Bt
 Bacillus thuringiensis

ECOLOGÍA DE Bt

2. ASOCIACIÓN A ESTRUCTURAS DE LAS PLANTAS,

YA QUE HA SIDO AISLADO DE HOJAS DE RESIDUOS Y
CONÍFERAS EN NORTE AMÉRICA (SMITH & COUCHE,
1991 CITADO POR VALLEJO ET AL., 1995) Y DE
RAÍCES DE HIDRÓFITOS. SEGÚN SMITH & COUCHE
(1991)
 Bacillus thuringiensis
ECOLOGÍA DE Bt

3. LA ALTITUD Y LA TEMPERATURA JUEGUAN UN

PAPEL IMPORTANTE EN LA DISTRIBUCIÓN
GEOGRÁFICA DE Bt, YA QUE EN EL ANÁLISIS DE
LOS AISLAMIENTOS REALIZADOS EN DIFERENTES
REGIONES DE COLOMBIA, SE REPORTÓ QUE UN
74% DE ESTOS AISLADOS, FUERON OBTENIDOS EN
ZONAS CON ALTITUDES SUPERIORES A 1450
m.s.n.m Y TEMPERATURAS INFERIORES A 20ºC, NO
ENCONTRÁNDOSE EN LAS ZONAS DESÉRTICAS
MUESTREADAS

•B. cereus SE HA AISLADO COMÚNMENTE DEL

SUELO JUNTO CON Bt. ENCONTRÁNDOSE EN UN
NÚMERO MÁS ALTO, LO QUE PODRÍA INDICAR QUE
ESTÁ MÁS ADAPTADO A LAS CONDICIONES DEL
SUELO.
 Bacillus thuringiensis

ECOLOGÍA DE Bt

4. LA MAYOR DIFERENCIA ENTRE Bt Y BC, ES LA

PRODUCCIÓN DE CRISTALES δ- ENDOTOXINAS
POR Bt.

•LAS INCLUSIONES PARAESPORALES CONTIENE

VARIAS δ- ENDOTOXINAS, Y ES ESTA
DIVERSIDAD LO QUE DETERMINA LA
SELECTIVIDAD DE LA ACTIVIDAD INSECTICIDA
DE CADA CEPA

•ESTAS TOXINAS SON SELECTIVAS, PERO NO

ESPECÍFICAS, YA QUE PUEDEN ACTUAR SOBRE
DIFERENTES GRUPOS DE INSECTOS EN MENOR
PROPORCIÓN
 Bacillus thuringiensis

MECANISMO DE ACCION DE LA δ -ENDOTOXINA

 Bacillus thuringiensis

•LA INGESTION DEL CRISTAL POR UN INSECTO SE DA

EN FASE LARVARIA
•ESTE LLEGA A SU INTESTINO MEDIO, SE DISUELVE
POR LA ACCIÓN DE LOS JUGOS INTESTINALES A pH
ALCALINO
•LA δ -ENDOTOXINA SUFRE UNA PROTEOLISIS
ENZIMÁTICA Y DA ORIGEN A LA TOXINA ACTIVA
 Bacillus thuringiensis

•ESTA SE UNE A UN RECEPTOR ESPECÍFICO DE LAS

MEMBRANAS EPITELIALES DE LAS CÉLULAS DEL
INTESTINO
•GENERA POROS QUE DESEQUILIBRAN SU BALANCE
OSMÓTICO Y PROVOCAN LA LISIS CELULAR DE ESTA
PARTE DEL APARATO DIGESTIVO
 Bacillus thuringiensis

•POSTERIORMENTE CAUSA DIARREA Y

VÓMITOS EN EL INSECTO, LO QUE PUEDE
PROVOCAR EVENTUALMENTE SU MUERTE
POR UNA DESHIDRATACIÓN SEVERA
Bacillus thuringiensis
 Bacillus thuringiensis

FACTORES DE VIRULENCIA

•ES UN PATÓGENO OPORTUNISTA DE INSECTOS

•SUS CRISTALES Y ESPORAS SON
EXTREMAMENTE SUSCEPTIBLES A INACTIVACIÓN
POR RADIACIÓN ULTRAVIOLETA
•LOS CRISTALES SE LIBERAN CONJUNTAMENTE
CON LA ESPORA
•SUS ESPORAS, QUE REQUIEREN CONDICIONES
MUY ESPECIFICAS PARA GERMINAR EN SUELOS O
AGUAS, SON PARTE DE LA DIETA DE NEMATODOS
Y OTROS ORGANISMOS
 Bacillus thuringiensis
FACTORES DE VIRULENCIA

EL CICLO DE VIDA DE Bt PUEDE SER DIVIDIDO EN

CUATRO FASES:

6. FASE PREVIA LOG

7. ETAPA DE CRECIMIENTO
EXPONENCIAL
9. ESTADO DE TRANSICIÓN
[Link] DE EXPRESIÓN
DE GENES QUE
CODIFICAN LAS
δ- ENDOTOXINAS
 Bacillus thuringiensis

DURANTE EL CRECIMIENTO EXPONENCIAL, Bt

PRODUCE EXOTOXINAS SOLUBLES DE VARIOS
TIPOS, ENTRE ELLAS:

α - EXOTOXINAS (HEMOLISINA I Y II, THURINGIOLISINA),

PROTEÍNAS CITOLÍTICAS DE 29-47 KDA.

β - EXOTOXINA ( THURINGIENSINA), ANÁLOGO

NUCLEOTÍDICO DEL ATP SINTETIZADA POR PROTEÍNAS
CODIFICADAS EN PLÁSMIDOS CONJUGATIVOS

COMPITE POR LAS RNA- POLIMERASAS Y ASÍ BLOQUEA LA

SÍNTESIS DE rRNA EN MAMÍFEROS AL INHIBIR LA
TRANSCRIPCIÓN Y EJERCER ACTIVIDAD MUTAGÉNICA
( CARBERG ET AL., 1995)
 Bacillus thuringiensis

FOSFOLIPASAS C, PROTEÍNA CITOTÓXICA DE DOS

TIPOS, UNA ESPECÍFICA PARA HIDROLIZAR
FOSFATIDIL-COLINA Y OTRA PARA FOSFATIDIL-
INOSITOL

ENTEROTOXINA, PROTEÍNA CITOTÓXICA SEMEJANTE

A LA ENCONTRADA EN B. cereus (40 KDA).

THURICINA (PÉPTIDO ANTIBACTERIANO),

BACTERIOCINA SEMEJANTE A LA CEREINA (B. cereus)
Y A LA MEGACINA (B. megaterium), ESTA CODIFICADA
EN UN PLÁSMIDO DE 150 MDA ( DAMGAARD, 1996).
 Bacillus thuringiensis

FACTORES DE VIRULENCIA

•LAS δ-ENDOTOXINAS SE SINTETIZAN COMO

PROTOXINAS Y AL SER ACTIVADAS SE LIBERAN LOS
FRAGMENTOS TÓXICOS CARACTERIZADOS POR UN
PATRÓN FUNCIONAL DE TRES DOMINIOS

•ESTRUCTURALMENTE MUESTRA UN PATRÓN

FAVORECIDO POR LA ADICIÓN DE RESIDUOS
GLÚCIDOS E INTERACCIONES ENTRE LOS GRUPOS
DISULFURO

•QUE EN LUGAR DE ESTRUCTURAS CUATERNARIA

ALGUNA, LAS PROTEÍNAS SE AGREGAN EN UN
PATRÓN REGULAR ( CELDA CRISTALINA)
 Bacillus thuringiensis

EPRESENTACIÓN DE LOS TRES DOMINIOS DE LA PROTEÍNA TOXICA

ry 3A
. PRODUCIDA POR Bt Subsp. Kurstaki
PRODUCIDA POR Bt Subsp. Morrisoni
 Bacillus thuringiensis
CLASIFICACIÓN DE LOS GENES Cry DE ACUERDO A SU SECUENCIA
NUCLEOTÍDICA
TIPO DE ACTIVIDA PESO MOLECULAR
OCURRENCIA
GENES D kDa
kur, sot, aiz, ent, thu, ale, dar.
Cry 1 L 130-140
tol, gal, ken
Cry 2 L/D 70
kur
Cry 3 C 73
mor (ten, san), tol
Cry 4 D 70-134
aiz, mor, isr, med, tou, dar
Cry 5 N 80
5 cepas patentadas por Micogen
Cry 6 N 128
5 cepas patentadas por Micogen
Cry 7 C ND
mor
Cry 8 C/L ND
ND
Cry 9 L ND
kur, aiz, mor
Cry 10 D ND
mor, isr, med, tou
Cry 11 D ND
mor, isr, med, tou
Cry 12 N ND
ND
Cry 13 N ND
ND
Cry 14 N ND
ND
Cry 15 ND ND
ND
Cry 16 D ND
isr, mor
Cry 17 D ND
isr, mor
Cry 18 ND ND
ND
Cry 19 D ND
isr, mor
Cyt D/Cytol 88.5
isr, mor

Especificidad del rango de huésped: L,Lepidoptera; C, Coleoptera; D,Diptera; N, Nematoda; Cytol, citolítico.
kur, kurstaki;
kurstaki; thu, thuringiensis; sot,sotto;
sot,sotto; aiz, aizawai; ent, entomocidus; ale, alest; dar, darmstadiensis;
darmstadiensis;
tol,tolwarthi
tol,tolwarthi;; ken, kenya, gal, galieriae;
galieriae; mor, morrisoni;
morrisoni; ten, tenebrionis;
tenebrionis; san, sandiego;isr,
sandiego;isr, israelensis;
israelensis; med,
Medellín;
Medellín; ND, no disponible. Tomada de Galán et al (1995a) y Bravo et al (1998).
 Bacillus thuringiensis

Protein
Gene Crystal shape Insect activity
size(kDa)
cry I [several subgroups:
lepidoptera
A(a), A(b), A(c), B, C, D, bipyramidal 130-138
larvae
E, F, G]
lepidoptera and
cry II [subgroups A, B, C] cuboidal 69-71
diptera
cry III [subgroups A, B,
flat/irregular 73-74 coleoptera
C]
cry IV [subgroups A, B, C,
bipyramidal 73-134 diptera
D]

cry V-IX various 35-129 various

 Bacillus thuringiensis

ESPECIFIDAD

LAACTIVIDAD TÓXICA SOLO ES POSIBLE SI LOS

CRISTALES INGERIDOS SON SOLUBILIZADOS Y SUS
PROTEÍNAS DIGERIDAS SON RECONOCIDAS POR EL
INSECTO-BLANCO (ELLAR, 1996)

INICIALMENTE LOS CRISTALES SE DISUELVEN BAJO

CONDICIONES FISICOQUÍMICAS ESPECÍFICAS DEL
INSECTO DE LAS LARVAS

LUEGO SUCEDE LA ACTIVACIÓN PROTELÍTICA DE

LAS PROTOXINAS LIBERANDO EL FRAGMENTO
ACTIVO
 Bacillus thuringiensis

ESPECIFIDAD

POSTERIORMENTE ESTE INTERACTÚA CON

RECEPTORES A NIVEL DE LAS MEMBRANAS
VELLOSAS DEL INTESTINO MEDIO

DESPUÉS OCURREN CAMBIOS QUE DAN

LUGAR A LA FORMACIÓN DE CANALES
IÓNICOS POR MODIFICACIÓN DE LA
ESTRUCTURA DE LAS MEMBRANAS CELULAR
 Bacillus thuringiensis

ESPECIFIDAD

ELMECANISMO DE ACCIÓN DE LAS

PROTEÍNAS CRISTALINAS EXPLICA SU
SELECTIVIDAD DADA QUE INVOLUCRA A LA
VEZ LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DEL
FRAGMENTO TÓXICO Y FACTORES
INHERENTES AL INSECTO ( CONDICIONES
QUÍMICAS ESPECIALES Y UN RECEPTOR
ESPECÍFICO)

ADEMÁS SE HAN ENCONTRADO CASOS

SINGULARES DE SINERGISMO ENTRE
TOXINAS COMO EL QUE SE PRESENTA EN Bt
subsp. israeliensis
 Bacillus thuringiensis

USO COMERCIAL DE LAS δ- ENDOTOXINA

COMO INSECTICIDAD

LAS VENTAJAS DE SU USO

A)ALTA ESPECIFICIDAD
D)ASPECTO INOFENSIVO PARA EL MEDIO AMBIENTE, LA
FAUNA BENÉFICA Y DEMÁS ORGANISMOS
VIVOS, INCLUYENDO AL HOMBRE
C)ADAPTABLE A MÚLTIPLE TIPOS DE
FORMULACIONES.
 Bacillus thuringiensis

D) LA ALTA PROBABILIDAD DE
DISMINUCIÓN DE LOS COSTOS DE
PRODUCCIÓN DEBIDO A LOS AVANCES
TECNOLÓGICOS, MICROBIOLÓGICOS
Y GENÉTICOS, LO QUE LO HACE
COMERCIALMENTE COMPETITIVO
FRENTE A LOS INSECTICIDAS
QUIMICOS
 Bacillus thuringiensis

CEPA DE COMPAÑIAS
HUÉSPED PRODUCTO
Bt. PRODUCTORAS
Bactospeine
Duphar
Bactuside
Compagina di Ricerca
Bernan Bt.
Chim
Biobit
Bactec
Foray
kurstaki Lepidoptera Novo
Dipel
Novo
Delfin
Abbott
Javelin
Sandoz
Thuricide
Sandoz

aizawai Lepidoptera Certan Sandoz

Bactimos Dopar
Skeetai Novo
israelensis Diptera Teknar Sandoz
Vecobac Abbott

M-One Mycogen
sandiego Coleoptera
M-One-Plus Mycogen
Trident Sandoz
tenebriosis Coleoptera
Novodor Novo
Lepidopteral
Foie Ecogen
conjugado Coleoptera
Agrree Ciga-Giegy
Lepidoptera

PRODUCTOS BASADOS EN Bt DISPONIBLE COMERCIALMENTE A NIVEL MUNDIAL

 Bacillus thuringiensis
AGENTE DE CONTROL Tipo de
PATOGENO PRODUCTOS COMERCIALES
BIOLÓGICO ACB
Doom, Japidemic (Fairfax
Bacillus popillae Bacteria Popilla japonica
Biological Labs)
Bacillus thuringiensis var. B 401(Sandoz), Agree (Certis),
Bacteria Galleria melonella
aizawai Design (Abbott), Mattch (Mycogen)

Larvas de dípteros (mosquitos, Vectobac, Gnatrol (Abbott), Skeetal

var. israelensis Bacteria
mosca negra) (Novo Nordisk), Teknar (Certis)*

Larvas de lepidópteros y
EG 2424 Bacteria Foil (Ecogen)
coleópteros
Pseud. fluorescens+B.t.
Bacteria Lepidópteros (orugas) MVP (Mycogen)
kurstaki toxin
Pseud. fluorescens+B.t. San Escarabajo de la patata
Bacteria M-Trak (Mycogen)
Diego toxin (Leptinotarsa decemliniata)
Pseud. fluorescens+B.t. toxin Bacteria Piral del maíz (Ostrinia nubilaris) M-Peril (Mycogen)
Nosema locustae Protozoo Saltamontes, langostas Nolo Bait (Evans BioControl)
Naturalis (Agrichem), Botanigard y
Beauveria bassiana Hongo Mosca blanca
Mycotrol (Mycotech)
Verticillium lecanii Hongo Mosca blanca (Bemisia tabaci) Mycotal(Koppert)
Mosca blanca (Trialeurodes
Paecilomyces fumosoreus Hongo PreFeRal (Biobest)
vaporariorum)
Pine sawfly nuclear Virox (Novo Nordisk), Noecheck
Virus Diprion similis
polyhedrosis virus (USDA Forest Service)
Heliothis nuclear
Virus Helioicoverpa zea Elcar (Sandoz), Condor (Ecogen)
polyhedrosis virus
Gypsi moth nuclear
Virus Lymantria dispar Gypcheck (USDA Forest Service)
polyhedrosis virus
Spod-X (Crop Genetics
Spodeptera exiqua virus Virus Spodoptera exigua
International)

BIOINSECTICIDAS QUE CONTIENEN COMO INGREDIENTE ACTIVO BACTERIAS,

PROTOZOOS, HONGOS O VIRUS, COMERCIALIZADOS EN DIFERENTES PAÍSES.
 Bacillus thuringiensis

PARA REALIZAR UNA IDENTIFICACIÓN GENERAL

DE CÉLULAS BACTERIANAS, SE PUEDEN SEGUIR
PROCEDIMIENTOS SIMPLES COMO:

•DESCRIPCIÓN DE SU MORFOLOGÍA CELULAR

•COLORACIÓN GRAM
•ANÁLISIS DE SU CAPACIDAD PARA CRECER EN
CONDICIONES AEROBIAS O ANAEROBIAS
•REQUERIMIENTOS DE SUSTRATOS ESPECIALES
PARA SU CULTIVO UTILIZANDO TÉCNICAS
CONVENCIONALES
•IDENTIFICARSE CON BASES EN LAS PROPIEDADES
BIOQUÍMICAS
•ANÁLISIS SEROLÓGICOS DE ANTÍGENOS
FLAGELARES (ANTÍGENO H) DE CÉLULAS
VEGETATIVAS
 Bacillus thuringiensis

•DENTRO DEL GÉNERO Bacillus, ESPECIES COMO

B. sphaericus (Bsph) Y B. popilliae (Bp)
PRODUCEN, AL IGUAL QUE Bt, TOXINAS
INSECTICIDAS DE TIPO PROTEICO QUE SON
SINTETIZADAS DURANTE LA ESPORULACIÓN Y
SE DEPOSITAN COMO INCLUSIONES
CRISTALINAS PARAESPORALES

•COMO LO REPORTA ARONSON Bsph ES UN

BACILO GRAM POSITIVO; POSEE ESPORAS
ESFÉRICAS QUE DEFORMA NOTABLEMENTE EL
CUERPO DEL BACILO Y CUYA UBICACIÓN PUEDE
SER TERMINAL O SUBTERMINAL.

•PERTENECE A LAS CLASIFICACIONES GRUPALES

PARA BACILLUS II Y IV.
 Bacillus thuringiensis

AISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICAS

FASE 1:
•SELECCIÓN CON ACETATO DE SODIO – CHOQUE TÉRMICO
•CADA MUESTRA FUE PESADA Y MACERADA
•COLOCÁNDOSE 500 MG EN 10 ML DE CALDO L. BROTH
ACETATO 0.25 M

FASE 2:
ESPORULACIÓN Y DETERMINACIÓN MORFOLÓGICA

TODAS LAS COLONIAS PREDOMINANTES Y CON

MORFOLOGÍA MACROSCÓPICA DE Bacillus spp FUERON
ANALIZADAS SEGÚN:
•LA FORMA DE CRECIMIENTO
•ELEVACIÓN
•CONSISTENCIA DE LA COLONIA
•CARACTERÍSTICAS DE LOS BORDES Y PIGMENTACIÓN
 Bacillus thuringiensis

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS AISLADOS

ENDÉMICOS DE Bt

CARACTERÍSTICAS DESCRIPCIÓN
Tamaño Grande
Forma de crecimiento Irregular
Elevación de la colonia Plana
Forma de los bordes Lobulado
Consistencia de la colonia Cremosa
Aspecto Opaco- mate
Pigmentación Blanco cremoso
 Bacillus thuringiensis

CARACTERÍSTICAS
MICROSCÓPICAS
DE Bt
 Bacillus thuringiensis

AISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICAS

•SE REALIZO COLORACIÓN DE GRAM POSITIVOS PARA

BACILOS,
•POSTERIORMENTE FUERON REPICADAS LAS COLONIAS
AISLADAS CON UN PALILLO DE MADERA ESTÉRILES A
CAJAS DE PETRI CON MEDIO DE ESPORULACIÓN T3
UTILIZANDO EL MÉTODO DE LA CUADRÍCULA (MILLER,
1992)
•POSTERIORMENTE SE INCUBARON A 30 ºC POR 5 DÍAS
PARA ESPORULACIÓN
•PARA DETERMINAR LA PRESENCIA O AUSENCIA DE
CRISTALES PARAESPORALES SE UTILIZARON LA
TINCIÓN DIFERENCIAL DE WIRTZ Y LA TINCIÓN
VIOLETA –SAFRANINA /OH
 Bacillus thuringiensis

AISLAMIENTO DE COLONIAS ENDÉMICAS

•LA VISUALIZACIÓN DE LAS BACTERIAS SE REALIZO POR

MEDIO DE UN MICROSCOPIO DE LUZ CON OBJETIVO DE
INMERSIÓN 100X
•SE TOMO REGISTRO DE LA FORMA, POSICIÓN
PREDOMINANTE DE LA ESPORA Y DEFORMACIÓN DEL
ESPORANGIO Y FORMACIÓN DE CRISTALES
PARAESPORALES.

FASE 3:
REVISIÓN FINAL DEL COMPLEJO CRISTAL – ESPORA

•TODAS LAS COLONIAS FORMADORAS DE ESPORA

FUERON REPICADAS PARA UNA ÚLTIMA REVISIÓN
SELECTIVA DEL CRISTAL, AL MEDIO AGAR TRÍPTICO DE
SOYA, SEGÚN LO PROPUESTO POR KABLIN ET AL., 1994
 Bacillus thuringiensis
MEDIOS PARA CULTIVO DE Bt
INGREDIENTES CANTIDAD/LITRO CONCENTRACIÓN

L. broth Acetato(CLA)
20 g
NaCl
10 g
Extracto de Levadura 1X
10 g
Triptona
20.6 g
Acetato de Sodio
Agar Luria Bertani ( LB)
NaCl 10 g
Extracto de Levadura 5g
1X
Triptona 10 g
Agar-agar 15 g

Medio T3
3g
NaCl
2g
Extracto de Levadura
1.5 g
Triptona 1X
5 mg
MnCl
6.9 g
Fosfato de Sodio pH 6.8
15 g
Agar-agar
Agar Tríptico de Soya
( TSE) 5g
Peptona de Soya 5g
1X
NaCl 1.5 g
Extracto de Levadura 15 g
Agar-agar
 Bacillus thuringiensis

METODOLOGÍA PARA AISLAR E IDENTIFICAR Bt ENDÉMICO

FASE
1 Lavar 2 Tomar
veces 1.5ml

Muestra de Colocar en Incubar Pasar a tubo Centrifugar Resuspender

suelo 10ml de caldo 30ºC a 200 de 1’ 2000 en 10ml de Pasar a tubos Calentar a Sembrar por
500mg LB con acetato rpm por 4 polipropiler rpm agua de 80ºC por 10 Extensión
de sodio horas estériles destilada microcentrífu min en 1 Agar
estéril ga
FASE
2

Observación
Incubar a Picar a media Observar a Aislamiento Resultado
a 100X Incubar
30ºC por 5 T3 100X Tinción por de colonias
Forma y 30ºC por
días Método de la de GRAM(+) agotamiento en la
Posición de 24 horas
cuadrícula por estrías superficie
la espora
FASE
3

Incubar Revisar a Determinaci

Agar TSE 30ºC por 2 100X ón del
días complejo
Espora -
Cristal
 Bacillus thuringiensis

CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS DE LOS

AISLADOS DE Bt, COMO SON:

•PRODUCCIÓN DE CATALASA
•HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN Y CASEINA
•CRECIMIENTO EN NaCl AL 7%
•FORMACIÓN DE CRISTALES PARAESPORAL

BIOQUÍMICAMENTE SE CARACTERIZA POR TENER

UN METABOLISMO ESTRICTAMENTE OXIDATIVO
NO UTILIZA AZÚCARES COMO FUENTE DE
CARBONO Y DE ENERGÍA, SINO QUE UTILIZA
ACETATO O AMINOÁCIDOS COMO GLUTAMATO
 Bacillus thuringiensis

•Bp ES TAMBIÉN UN BACILO POSITIVO QUE POSEE

ESPORA ELIPSOIDAL EN POSICIÓN TERMINAL Y
PERTENECE EN AMBOS CASO AL GRUPO I.

•SE DESTACA BIOQUÍMICAMENTE POR PRESENTAR

REACCIÓN NEGATIVA PARA CATALASA, VOGES
PROSKAUER E HIDRÓLISIS DE CASEÍNA

•HASTA AHORA HA SIDO AISLADO ÚNICAMENTE DE

ESCARABAJOS DISECADOS.
 Bacillus thuringiensis

CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS PARA BACILLUS

PERTENECIENTES AL GRUPO 1A
ESPECIES DE Bacillus
CARACTERÍSTICA B. B. B. B. B. B.
Bt.
subtilis cereus licheniformes pumilis megaterium coagulans

CATALASA + + + + + + +

VOGES PROSKAUER (VP) + + + + + - +

CRECIMIENTO
+ + + + - - +
ANAERÓBICO
CRECIMIENTO
- + - + + - +
ANAERÓBICO A 50 C

CRECIMIENTO EN NaCl 7% + + + + + + -

FORMACIÓN DE ÁCIDO Y
GAS A PARTIR DE - - - - - - -
GLUCOSA
REDUCCIÓN DE NO3 A NO2 + - + + - V V

HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN + + + + - + +

CRECIMIENTO A 65 C - - - - - - -

pH EN VP MEDIO 6.0 - V - V - V -

FORMACIÓN DE ÁCIDO DE
+ + + + + + -
GLUCOSA

HIDRÓLISIS DE CASEINA + + + + + + V

FORMACIÓN DE CRISTAL
+ - V - - - -
PARAESPORAL
 Bacillus thuringiensis

Resumen comparativo de los caracteres usados para identificar

especies de Bacillus formadores de inclusiones cristalinas
ESPECIE DE Bacillus
CARACTERÍSTICA
Bt. B. sphaericus B. popilliae

GRUPO II IV I

POSICIÓN Y FORMA DE LA ESPORA C, PC y O, N ST, T y R, S TyO

CATALASA + + -

VOGES PROSKAUER (VP) + - -

CRECIMIENTO ANAERÓBICO EN
+ - +
AGAR
CRECIMIENTO EN NaCl 7% + V -
FORMACIÓN DE ÁCIDO Y GAS A
+ - +
PARTIR DE GLUCOSA
REDUCCIÓN DE NO3 A NO2 + - -

HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN + - -
FORMACIÓN DE ÁCIDO DE
+ - +
GLUCOSA
HIDRÓLISIS DE CASEINA + V -

C: central, PC: paracentral; ST: subterminal; T: terminal; O: ovalada, R: redonda; N: no deforma el cuerpo del bacilo;
S: si deforma el cuerpo del bacilo; V: carácter variable.
 Bacillus thuringiensis

PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA ALGUNAS

SUBESPECIES DE Bt
SUBESPECIES DE Bt
CARACTERÍSTICAS Israeliensis Morrisoni
darmstadiensis
1889 serotipo 8a: 8b
ARGININA + - -
ESCULINA + - +
UREA - - -
CATALASA + - -
SACAROSA - - +
CASEINA + + ND
HEMOLISIS EN AGAR
Β β β
SANGRE
(+) = reacciones positivas; (-) = reacción negativa; (ND)= dato no obtenido;
( β)= hemólisis beta en agar sangre.
Fuente Slepcky & Hemphill, 1992.
Bacillus thuringiensis
 Bacillus thuringiensis

•LAS CÉLULAS DE LAS PLANTAS Bt

TRANSFORMADAS PRESENTAN LOS GENES Y
LOS REGULADORES (PROMOTORES,
PROCESAMIENTO DEL ARN MENSAJERO,
TRADUCCIÓN, LOCALIZACIÓN SUBCELULAR)
INVOLUCRADOS EN LA EXPRESIÓN DEL
MISMO
•LAS PLANTAS SE TRANSFORMAN ASÍ EN
“PRODUCTORAS DE INSECTICIDA”, LO QUE
LAS HACE ALTAMENTE RESISTENTES A UN
AMPLIO RANGO DE LEPIDÓPTEROS Y
COLEÓPTEROS
 Bacillus thuringiensis

•LAS PLANTAS TRANSGÉNICAS BT FUERON

CREADAS PARA REDUCIR LA DEPENDENCIA
DE LOS INSECTICIDAS CONVENCIONALES
DE AMPLIO ESPECTRO Y REDUCIR DE ESTA
FORMA EL IMPACTO QUE ÉSTOS TIENEN EN
EL AMBIENTE POR SER NO ESPECÍFICOS Y
EN ALGUNOS CASOS DE GRAN TOXICIDAD
•OTRA VENTAJA QUE PRESENTARÍAN ES
QUE SE REDUCIRÍAN LOS COSTOS DE
APLICACIÓN DE AGROQUÍMICOS, LO QUE
IRÍA LIGADO A UN AUMENTO EN LA
PRODUCCIÓN
 Bacillus thuringiensis

PLANTAS “Bt”

•“Bt" Bacillus thuringiensis, una bacteria del suelo

cuyas esporas contienen una proteína cristalina
(Cry).
•En el intestino del insecto, la proteína se
Barrenador del
descompone y libera una toxina llamada endotoxina maíz
delta.
•Se han identificado distintas versiones de los
genes Cry, también llamados "genes Bt".
•Insecticidas que contienen Bt y sus toxinas (Dipel,
Thuricide, Ventobac).
•En las plantas “Bt” se ha incorporado una versión
modificada del gen Cry bacteriano en el ADN de la
propia planta, de tal modo que la maquinaria celular
de la planta produce la toxina.
Gusano del copo del
algodón
 Bacillus thuringiensis

LOS CULTIVOS BT RESISTENTES A LOS INSECTOS

ACTUALMENTE EN EL MERCADO INCLUYEN:

Maíz: básicamente para el

control del barrenador
europeo del maíz y el
barrenador grande del maíz.

Algodón: para el control del

gusano de las yemas del
tabaco y el gusano del copo
de algodón.

Papa: para el control del

escarabajo de la papa de
Colorado.
 Bacillus thuringiensis

CARACTERISTICAS INCORPORADAS

100
resistencia a
80 herbicidas
60 resistencia a
insectos
40 resistencia a
virus
20
calidad del
0 producto
1985 1990 1995 2000 2003

A partir de: http/[Link]

 Bacillus thuringiensis

APLICACIONES

Evaluación de dos insecticidas, uno

químico (Diazinón y otro biológico
(Bacillus thuringiensis var. kurstaki), en
base a sus efectos sobre las poblaciones
de larvas de Spodoptera frugiperda (S.)
ROSA I. FERNANDEZ B. y SANTIAGO CLAVIJO A.

Bol. Entomol. Venez. 4(8): 61-70. 30 octubre 1985

 Bacillus thuringiensis

APLICACIONES

•CON EL FIN DE DETERMINAR EL EFECTO DE

DOS INSECTICIDAS (DIAZINÓN Y Bacillus
thuringiensis ber), SOBRE LAS POBLACIONES
DE LARVAS DE S. frugiperda SE SEMBRÓ UN
ENSAYO CON EL HÍBRIDO "ARICHUNA BLANCO"
DE MAÍZ, EN LA ESTACIÓN EXPERIMENTAL
"SAMÁN MOCHO" DE LA FACULTAD DE
AGRONOMIA (U.C.V.), EN UN DISEÑO DE
BLOQUES AL AZAR.
 Bacillus thuringiensis

Spodoptera frugiperda
 Bacillus thuringiensis

APLICACIONES

•LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN EL MISMO,

PARECEN REFLEJAR, EN EL CASO DE LAS
PARCELAS TESTIGOS Y LOS TRATADOS CON B.
thuringiensis, EL DESARROLLO EN EDAD DE
UNA POBLACIÓN LIBRE DE INSECTICIDA
•ADEMÁS, EN EL TRATAMIENTO CON B.
thuringiensis LA MEDIA PARA EL PORCENTAJE
DE LARVAS PEQUEÑAS ES MENOR QUE EN EL
TESTIGO Y TRATAMIENTO CON DIAZINÓN, LO
CUAL PUEDE DEBERSE A QUE EL BACILUS HAYA
EJERCIDO CIERTO CONTROL SOBRE LARVAS
PEQUEÑAS DE S. frugiperda
 Bacillus thuringiensis

APLICACIONES

•B. thuringiensis SUPRIME LA VIRULENCIA POR

PARTE DE Erwinia carotovora A TRAVÉS DE UNA
NUEVA FORMA DE ANTAGONISMO BACTERIANO,
COMO LAS SEÑALES DE INTERFERENCIA

•E. carotovora PRODUCE Y RESPONDE A LA

LACTONA ACIL-HOMOSERINA (AHL) QUE
REGULAN LA PRODUCCIÓN DE ANTIBIOTICOS Y
LA EXPRESIÓN DE LOS GENES DE VIRULENCIA
Bacillus thuringiensis

Erwinia
carotovora
 Bacillus thuringiensis

APLICACIONES

•MIENTRAS QUE B. thuringiensis POSEE LA

ENZIMA AHL-LACTONASA, QUE DEGRADA LA
ACIL-HOMOSERINA LACTONA

•B. thuringiensis PARECE QUE NO INTERFIERE

CON EL NORMAL CRECIMIENTO DE E. caratovora,
SI NO QUE INTERVIENE ELIMINANDO LA
ACUMULACIÓN DE AHL, QUE ACTUA COMO SEÑAL.

•EN PLANTAS DE PAPA, B. thuringiensis

DISMINUYE LA INCIDENCIA DE LA INFECCIÓN Y
LOS SÍNTOMAS POR PARTE DE E. caratovora
 Bacillus thuringiensis

APLICACIONES

•EL GEN cryIAc7 DE B. thuringiensis CEPA 234, QUE

MUESTRA ACTIVIDAD CONTRA EL GUSANO
BARRENADOR DE LA CAÑA DE AZUCAR Eldana
saccharina , FUE CLONADO BAJO EL CONTROL DEL
PROMOTOR tac

•LA FUSION FUE INTRODUCIDA DENTRO DE UN

PLASMIDO pKT240 Y EN EL VECTOR DE INTEGRACION
pJFF350, TAMBIÉN SE UTILIZARON PLASMIDOS PERO
SIN LA PRESENCIA DEL PROMOTOR tac, Pml122 y
pKmM0
 Bacillus thuringiensis

Eldana saccharina
 Bacillus thuringiensis

APLICACIONES

•ESOS PLASMIDOS FUERON INTRODUCIDOS EN

Pseudomonas fluoresecens Y LA BACTERIA
ENDOFITICA Herbaspirillum seropediacae.

•EN EL RESULTADO DE LOS BIOENSAYOS SE

OBSERVO UNA ALTA MORTALIDAD DE LARVAS
E. saccharina AL INOCULAR CON H.
seropediacae TRANSFORMADA, MIENTRAS QUE
LA MORTALIDA POR PARTE LA P. fluorescens
NO FUE IGUAL DE ALTA
 Bacillus thuringiensis

APLICACIONES

RESIDUALIDAD DE UN FORMULADO SÓLIDO DEL

INSECTICIDA
MICROBIANO BTI (H-14) EN EL CONTROL DE LARVAS DE
Aedes aegypti (DIPTERA CULICIDAE)

Masuh H1, Seccacini E1, de Licastro S1, Zerba E2.

Revista Peruana de Epidemiología. Vol. 10 • Nº 7 • 2002

 Bacillus thuringiensis

APLICACIONES

Aedes
aegypti
 Bacillus thuringiensis

APLICACIONES

OBJETIVO: EVALUAR LA RESIDUALIDAD DE UN

FORMULADO SÓLIDO DE LIBERACIÓN LENTA
DEL BIOINSECTICIDA BTI (H-14) PARA EL
CONTROL DE LARVAS DE Aedes aegypti

MATERIAL Y MÉTODOS: ESTUDIO

DESCRIPTIVO TRANSVERSAL. SE UTILIZARON
LARVAS DE Aedes aegypti DEL III ESTADIO
TARDÍO Ó IV TEMPRANO (CEPA SUSCEPTIBLE
CIPEIN) QUE EN ENSAYOS DE LABORATORIO
DEMOSTRARON UNA ACTIVIDAD RESIDUAL A
DOSIS DE USO RECOMENDADAS POR EL
FABRICANTE (14,4 MG/CM2)
 Bacillus thuringiensis

APLICACIONES

RESULTADOS: EN TODOS LOS CASOS PARA ESTA

CONCENTRACIÓN RECOMENDADA DE USO (14,4
MG/CM2) SE OBSERVÓ EL 100% DE
MORTALIDAD INMEDIATAMENTE LUEGO DE LA
APLICACIÓN DEL FORMULADO Y PARA 24
HORAS DE EXPOSICIÓN DE LARVAS

CONCLUSIONES: LA NUEVA FORMULACIÓN

SÓLIDA DE LIBERACIÓN LENTA DE BTI, DEBIDO
A SU RESIDUALIDAD REPRESENTA UNA BUENA
ALTERNATIVA PARA EL REEMPLAZO DEL
TEMEFOS EN EL CONTROL DE LARVAS DE Aedes
aegypti