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MAS SALUD PARA MAS PERUANOS
ANTIGENOS PLAQUETARIOS
HUMANOS Y PRUEBA DE
COMPATIBILIDAD
PLAQUETARIA
Prof. Boris Valdivia V
UNMSM - 2015
Antecedentes
Pbas pretransfusionales
solo se realizan para los
hematies
Uso de Plaquetas
sobrepasa en promedio
el uso de clulas rojas.
1971-1980 uso de
plaquetas aumento de
0.41 a 2.86 millones.
Antecedentes
1992: 7.3 millones de
unidades de plaquetas
fueron transfundidas.
HNGAI: 12000-15000
plaquetas/ao
1910, Duke: eficacia
transfusion plaquetas
Nuevos tratamientos y
uso de componente
ANTIGENOS PLAQUETARIOS
ABO
LEWIS
ANTIGENOS PLAQUETARIOS ESPECIFICOS
o
HPA 1 (PL A1)
HPA 2, etc.
ANTIGENOS HLA CLASE I
Antigenos Plaquetarios
Categoria I
Antgenos de ABO
Antgenos Le, Ii &P ( Insignificantes)
Antgenos HLA, Clase I- son sintetizados endgenamente
y son parte de la membrana plaquetaria.
Categoria II
Llamados HPA (Human Platelet Antigens)
Antgenos exclusivos de plaquetas y megakariocitos
Son producto de genes allicos
Inmunologa Plaquetaria
Las GP figuran prominentemente como aloantgenos,
autoantgenos y blanco de anticuerpos dependientes de
frmacos
Los aloantgenos asociados a plaqueta pueden ser clasificados
en 2 grupos :
Antgeno plaquetario no especfico, presente en las plaquetas
y otros tipos celulares
Antgeno especfico plaquetario, unicamente expresado sobre
las plaquetas
Antigenos Plaquetarios Especficos
De las docenas de GP de membrana plaquetaria reconocidas, al
menos 5 ( GP Ia, Ib ( alfa y beta ), IIb, IIIa, y CD 109 ) son
polimrficas y est demostrado que son aloimnunognicas
En la actualidad se han descrito 23 APE, incluyendo su localizacin
estructural en la GP de membrana plaquetaria, cuantificacin de
densidad antignica sobre la superficie plaquetaria y determinacin
de polimorfismo de ADN en los genes que codifican los antgenos.
Puede presentarse isoinmunizacin a una sexta glicoprotena la GP
IV ( CD 36 ) que est ausente en algunos individuos.
Aprox. 3 5 % de asiaticos y negros presentan ausencia de esta GP y
pueden ser sensibilizdos a GPIV a travs de transfusin o embarazo.
Antgeno plaquetario no especfico :
Estos aloantgenos no estn restringidos a linaje plaqueta
megacariocito e incluyen el HLA y los determinantes de grupo
sanguneo ABO
Las plaquetas expresan antgenos HLA clase 1 y no hay
evidencia de expresin de que exista molculas HLA II
Los Ag HLA Clase 1 son altamente polimrficos y son
clasificados como Antgenos A, B, y C
La expresin de estos antgenos sobre las plaquetas vara y es
influenciado por el dosaje de genes
La cantidad de Antgenos HLA A y HLA B, es al
menos 10 veces mayor que la de HLA C, que cuenta para
la baja inmunogenecidad de antgenos HLA C
plaquetarios
Esto hace innecesario testear antgenos del locus HLA C
en la transfusin de plaquetas
Antgenos del grupo ABH son expresados por un nmero
de GP plaquetarias tales como GP Ib V- IX
Sistema Antignico HLA HPA
Varios antgenos plaquetarios, algunos de los cuales son
compartidos por otros linajes celulares, tal como ABO y HLA.
Estos Ag son una parte intrinseca de la membrana celular.
El grupo mas grande de anticuerpos reactivos esta dirigido contra
antgenos HLA 1, compartido por plaquetas y clulas blancas
Estos Acs son los mas asociados con refractariedad plaquetaria, que
es la falla para obtener un adecuado aumento de plaquetas luego
de una transfusin
Se detectan por pruebas de linfocitotoxicidad
Acs anti HLA se producen en pacientes politransfundidos y
mujeres multparas
Previene aloinmunizacin :
Deplecin de leucocitos
Radiacin UV
Exposicin limitada a mltiples donadores por uso de afrersis
Acs anti HLA pueden ser diferenciados de Acs antiplaquetarios
reactivos por el test MAIPA, que es un ensayo especfico para GP
plaquetaria
adems se demostr que es ms sensible que la LCT en la deteccin de
Acs anti HLA reactivo a plaquetas
ANTIGENOS
PLAQUETARIOS
ANTIGENOS ESPECIFICOS
INICIALMENTE FUERON ENCONTRADOS EN PLAQUETAS. TAMBIEN
SE HA DEMOSTRADO EN CELULAS ENDOTELIALES Y MUSCULO LISO.
SON GP DE LA SUPERFAMILIA DE LAS INTEGRINAS.
ANTIGENOS PLAQUETARIOS
Estructuras superficiales de MP, expresadas por Polisacaridos asociados a GP
* Mayor parte determinantes antignicos se localizan en las GP
Son responsables de la aparicin de diversos cuadro clnicos:
Trombocitopenia neonatal alo inmune
Prpura trombocitopenica post-transfusional
Reacciones febriles no hemolticas post- transfusionales
Refractariedad a la transfusin de plaquetas
Prpura trombocitopenica auto-inmune
Trombocitopenia inmuno alrgica causada por
medicamentos
ANTIGENOS PLAQUETARIOS
ISOANTIGENOS
CLASIFICACION:
ISOANTIGENOS QUE SIMULAN ALOANTIGENOS : todas las
plaquetas son incompatibles
AUTOANTIGENOS : relacionados con GP IIb-IIIa
CRIPTOANTIGENOS : Ag Tn(def. N-acetilgalc-tra)
XENOANTIGENOS : definidos por sueros de procedencia
animal
ISOANTIGENOS RELACIONADOS CON MEDICAMENTOS : inducida por algn medicamento(inmunocomplejos, adsorcin y
por accin autoinmune.
ANTIGENOS PLAQUETARIOS
ALOANTIGENOS
HPA-1
HPA-4
HPA-6
HPA-7
HPA-8
HPA-10w
HPA-3
Complejo glicoproteico
IIb / IIIa
IIb 3
Aloantigeno MAX
HPA-5
HPA-2
GP Ia / IIa
3 1
GP Ib
ANTIGENOS PLAQUETARIOS
Sistema
Antigeno
Glicoproteina
Aminoacido
Posicion
Base
Codon
HPA-1
HPA-1a
HPA-1b
IIIa
Leucina
Prolina
(33)
(33)
T
C
CTG
CCG
HPA-2
HPA.2a
HPA-2b
Ib
Treonina
Metionina
(145)
(145)
C
T
ACG
ATG
HPA-3
HPA-3a
HPA-3b
IIb
Isoleucina
Serina
(843)
(843)
T
G
ATC
AGC
HPA-4
HPA-4a
HPA-4b
IIIa
Arginina
Glutamina
(143)
(143)
G
A
CGA
CAA
HPA-5
HPA-5a
HPA-5b
Ia
Glutamina
Lisina
(505)
(505)
G
A
GAG
AAG
HPA-6
HPA-6a
HPA-6b
IIIa
Arginina
Glutamina
(489)
(489)
G
A
CGG
CAG
HPA-7
HPA-7a
HPA-7b
IIIa
Prolina
Alanina
(407)
(407)
C
G
CCC
GCC
Los antgenos representados en la membrana
plaquetaria se encuentran distribuidos en tres
sistemas:
Aquellos que se expresan exclusivamente en
plaquetas los llamamos HPA (Antgenos Plaquetarios
Humanos ) y lo constituyen 24 aloantgenos .
Los presentes tambin en leucocitos en un total de 85
llamados HLA del tipo I (A, B y C) .
Antgenos que se hallan distribuidos en otras clulas,
como por ejemplo en los eritrocitos, llamados
genricamente antgenos no plaquetarios especficos
(ANPE) en un total de 6 sistemas
Los aloantgenos de plaquetas se agrupan en 2 grandes
categoras:
Los especficos de estas clulas, entre los que se encuentran los
Ags HPA-1, HPA-2 HPA-3, HPA-4, HPA-5, HPA-6, HPA-7,
HPA-8
y HPA-10w que estn localizados en las glicoprotenas de
membrana IIb IIIa y Ia Iia
Los compartidos con otros tejidos como los antgenos
eritrocitarios ABO y las molculas HLA clase I
Importancia de los Antgenos Plaquetarios
Tienen importancia fundamental en el campo de la
inmunohematologa y transplante de rganos.
Adems son responsables de una gran diversidad de
trastornos que van desde las aloinmunisaciones fetomaternas
y transfusionales hasta las citopenias autoinmune.
Son anticuerpos que se unen a las plaquetas, lo que puede
ocasionar un aumento en la destruccin de las mismas. Esto
provoca un bajo conteo de plaquetas (trombocitopenia) y
puede estar asociado con sangrado.
Importancia de los Antgenos Plaquetarios
En el caso de las drogas estas se unen a las protenas de la
membrana plaquetaria modificando su estructura lo que hace
que el sistema inmune no las reconozca.
Estos anticuerpos pueden ser inducidos por el uso de algunos
medicamentos(heparina) o la sensibilizacin.
Estos actan como crioglutininas ya que la mayora de las veces
solo se activan a temperatura ambiente y no a 37C
Aloinmunizacin Plaquetaria
factores a tener en cuenta :
Frecuencia y cantidad de hemocomponentes transfundidos
Combinacin de hemocomponentes transfundidos
Diagnstico del paciente
Medicamentos inmunosupresores usados
Factores genticos usados
Dficultad en diagnosticar factores que afectan la respuesta a
transfuciones de plaquetas
Necesidad de diferenciar entre pacientes que son refractorios
debido a mecanismos Inmunes o No-Inmunes
REFRACTARIEDAD.- Causas
NO INMUNES
Esplenomegalia
Fiebre, Infeccion
CID
Hemorragia
Calidad de plaquetas
transfundidas
Sepsis
Drogas
INMUNE
AloInmunizacin a:
HLA
Plaquetarios
ABO
Autoanticuerpos
Medicamentos
Complejos inmunes
circulantes
Diagnstico de aloinmunizacin
Es basado en la deteccin de anticuerpos contra
plaquetas y leucocitos homlogos
Presencia
de
anticuerpos
linfocitotxicos
evidencia aloinmunizacin contra antgenos del
sistema HLA.
Anticuerpos antiplaquetarios son de naturaleza
Aloinmune o Autoinmune
Identificacin de Anticuerpos Antiplaquetarios
Inmovilizacin de anticuerpos monoclonares
(MAIPA)
Adherencia a eritrocitos en fase slida
Enzimo inmunoensayos (ELISA)
Densitometra de flujo
Correlacin con la clnica
Principales reacciones post-transfucionales
debidas a anticuerpos o antgenos
plaquetarios
Reaccin Febril No Hemoltica
Purpura Trombocitopnica Post
Transfusional
Patologas Producidas por Anticuerpos
Antiplaquetarios
La trombocitopenia autoinmune (TAI)
La trombocitopenia neonatal aloimune (TNAI)
Prpura trombocitopenia postransfusional (PTP)
Refractariedad a las transfusiones de plaquetas
La trombocitopenia inducida por frmacos
Mtodos de Laboratorio para Investigar
el Sistema HLA
Mediante anticuerpos
SEROLOGIA (Microlinfocitotoxicidad, ELISA,
Citometra de Flujo,etc)
BIOLOGIA MOLECULAR:
PCR-SSP, PCR-SSO
Microlinfocito toxicidad
TIPIFICACION HLA CLASE I
TIPIFICACION HLA CLASE II
PRUEBA CRUZADA TISULAR (CROSS MATCH)
PANEL DE ANTICUERPOS REACTIVOS (PRA)
Tecnologa de Fase Slida
Tecnologa esta basada en las propiedades que poseen los
plsticos para irreversiblemente absorber y enlazar
protenas y otros compuestos qumicos.
Absorcin es no especfica
Protenas o compuestos qumicos a ser usados deben ser
purificados antes de ser aadidos al soporte slido
(plstico).
Sistemas de Fase Slida
Membranas celulares o partculas infecciosas son adheridas a
un soporte slido antes de iniciarse la prueba.
El componente inmobilizado puede ser un antgeno o un
anticuerpo dependiendo del propsito de la prueba.
El reactante adherido al plstico sirve para capturar el
componente especfico que es buscado en la muestra evaluada.
Este componente es capturado o atrapado en el soporte slido.
Un sistema indicador es usado para demostrar que la reaccin
deseada ha occurido.
Pruebas de Compatibilidad en
Fase Slida
Detecta anticuerpos HLA as como
anticuerpos contra antgenos plaquetarios
especficos y anticuerpos IgG contra
antgenos A y B
Utiliza plaquetas frescas o conservadas para
las pruebas de compatibilidad
Pruebas de Compatibilidad
Plaquetaria
Proporcionan ayuda en la seleccin de
donantes para el paciente refractario
Artculos sealan la ineficacia de las
transfusiones de plaquetas seleccionadas
exclusivamente en base a pruebas de HLA
Pruebas de Compatibilidad en Fase
Slida
LISS
Suero
Y
YY
YYYYY
YY Y
Y
Y
YY
Y Y
YY YY
YYY
YY
Y
Y
Y Y
Lavar
YY YY
Y
YYY
YY
Y
Incubar
YYYYY
YY
Pruebas de Compatibilidad en Fase
Slida
Hemates
indicadores
+
Centrifugar
|
Positivo
fuerte
Positivo
dbil
Negativo
Inmovilizacin de Ag plaquetarios especficos con
Ac monoclonales
Principle of the Monoclonal
Antibody Immobilized Platelet
Antigen (MAIPA) test
antigens on platelet membrane are
recognized by a human (H) and a
mouse (M) antibody; (3) antigen
antibody complex is solubilized and
disintegrated platelets removed; (4)
Goat antibodies coating the
microplate immobilize platelet
antigens; and (5) a second goat
antibody, coupled to an enzyme,
binds to the human antibody. Upon
addition of substrate, color is
generated
MASPAT
Tcnica de adherencia eritrocitaria en fase slida
Monocapa
de
plaquetas
de
donante
inmovilizada por centrifugacin a la superficie
de pocillos recubiertos de Ac monoclonales de
ratn plaqueta especficos .
Tcnica ( MASPAT )
GR humanos sensibilizados con Ig G
Anti Ig G monoclonal de ratn
Ac. Plaquetario del suero del paciente
Plaqueta del Donante
Ac monoclonal plaqueta especfico
Fase Slida
MASPAT
Muestra: suero, ST con EDTA
PRP: donantes de grupo ABO
PBS: solucin de lavado
Centrfuga para microplacas
Incubador seco a 37C
Cloroquina
Tratamiento con cloroquina
Esta tcnica se utiliza para
diferenciar Ac HLA de Ac HPA
Suero
Plaq. tratadas
Plaq. No tratadas
Carente de AC
Anti HLA
Anti HPA
REPORTES DE INTERES
.
Seleccin de Plaquetas por HLA no es exitosa en
20 a 30% de casos ( Transfusion 1985)
Laboratorios combinan pruebas de compatibilidad
plaquetaria con pruebas de HLA en la seleccin de
plaquetas a ser transfundidas.
Friedberg y colegas demostraron que:1987
HLA Compatible, produjo CCI en 30%
HPA Compatible, produjo CCI en 60%
Conclusiones
Contribuyen al diagnstico de aloinmunizacin plaquetaria
Permite la busqueda de concentrados plaquetarios
complatibles
Permite la individualizavin de embarazadas con potencial
de TAIN
Pueden complementar exitosamente las pruebas de pareo
HLA
Predicen mejor el xito de transfusiones de plaquetas
Ofrecen un mtodo simple y confiable para la idntificacin
de donantes compatibles
