CINETICA
ENZIMATIC
CINETICA
enzimtica estudia la velocidad de las reacciones
La cintica ENZIMATICA
catalizadas por enzimas
La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima puede
medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es
necesario purificar o aislar el enzima.
El estudio de la cintica y de la dinmica qumica de una
enzima permite explicar los detalles de su mecanismo
cataltico, su papel en el metabolismo, cmo es controlada su
actividad en la clula y cmo puede ser inhibida su actividad
por frmacos o venenos o potenciada por otro tipo de
molculas
Cintica de Michaelis
- Menten
Si la velocidad inicial de la
reaccin se mide a una
determinada concentracin de
sustrato (representado como
[S]), la velocidad de la
reaccin (representado como
V) aumenta linealmente con el
aumento de la [S], como se
puede ver en la figura
Cintica MichaelisMenten
Cintica MichaelisMenten
Inducen una nueva constante:
(Constante de Michaelis)
K +
Km= -1
K2 K
Km
Ecuacin de Michaelis-Menten:
Donde
V m ax s
v
Km s
Vmax= velocidad
mxima
Km= constante de
Michaelis
[S]= concentracin
del sustrato
Efecto de la [S]
Representa la Ecuacin
de Michaelis-Menten
Km
(Constante
de
Michaelis):
mide
la
concentracin
del
sustrato a la que la
enzima tiene la mitad de
la
velocidad
mxima
(Vmx/2)
Vmx: Se alcanza cuando
todos
los
centros
catalticos de la enzima
se encuentran ocupados
Km y Vmax se determina
midiendo las velocidades
iniciales de reaccin a varias
[S]
Unidades de
actividad
enzimtica
Unidades
Internacionales
(UI):
Cantidad de enzima necesaria para
producir 1 mol de producto/minuto
Nueva Unidad: Katal
Cantidad de enzima que transforma 1
mol de sustrato/segundo (6 x 107 UI)
Grado
de
Pureza:
Actividad
Especfica. Nmero de UI en 1 mg de
protena
DEDUCCION DE LA ECUACION DE MICHAELIS
MENTEN.
Para llegar a la descripcin de la actividad enzimtica en
funcin de la concentracin de sustrato descrita por
Michaelis-Menten se tuvieron que realizar algunas
consideraciones, debido a que existen varios pasos
intermedios de la reaccin, todos reversibles y a que la
velocidad de formacin de cada una de las especies
involucradas depende no solo de su concentracin sino
tambin de las constantes de velocidad (k1, k-1, k2, k-2,
kp, k-p) y que se encuentran en la siguiente reaccin .
Las simplificaciones y suposiciones para obtener la curva
matemtica que mejor se ajusta a los datos experimentales fueron
las siguientes:
Suponer que hay un complejo central (ES), esto es que ES se rompe
directamente en E + P.
Simplificndose la reaccin a dos pasos:
Paso 1. Formacin de ES que depende de:
A) La velocidad de formacin
v1=k1[S] [E]
B) La velocidad de disociacin
v-1=k-1[ES]
Paso 2. Formacin de productos que depende de:
A) La velocidad de formacin
B) La velocidad de disociacin
vp=kp[ES]
v-p=k-p[E] [P]
CALCULO Y SENTIDO DE LA
CONSTANTE Vmax y Km
Para determinar grficamente los valores de KM
y Vmax es ms sencillo utilizar la representacin
doble recproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es
una lnea recta. Esta representacin doble
recproca recibe el nombre de representacin de
Lineweaver-Burk Es una recta en la cual:
La pendiente es Km/Vmax.
La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/Km.
La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es
1/Vmax.
De esta forma, a partir de los datos
experimentales se puede calcular grficamente,
los valores de KM y Vmax de un enzima para
diversos sustratos.
REPRESENTACION DE
LINEWEAVER-BURO.
Su utilidad consiste en que el
recproco de la cintica de
Michaelis-Menten es
fcilmente representable y
que de l emanan mucha
informacin de inters.
CUYO RECIPROCO ES:
Donde V es la velocidad de reaccin, Km es la
constante de Michaelis-Menten, Vmax es la
velocidad mxima, y [S] es la concentracin
de sustrato.
La representacin grfica de Lineweaver-Burk
permite identificar el Km y Vmax; el punto de
corte con el eje de ordenadas es el
equivalente a la inversa de Vmax, y el de
abscisas es el valor de -1/Km.
FACTORES QUE AFECTAN A LA VELOCIDAD DE
LA REACCIN
Concentraci
n del
sustrato
Temperatur
a
pH
Concentracin del sustrato
La tasa de una reaccin catalizada
enzimticamente aumenta con la
concentracin del sustrato hasta alcanzar
una velocidad mxima
La nivelacin de la velocidad de la reaccin
a concentraciones elevadas de sustrato
refleja la saturacin
Forma hiperblica de la curva de la
cintica enzimtica y forma sigmoidea.
Temperatura
Aumento de la velocidad con la
temperatura por aumento de la energa en
las molculas
Disminucin de la velocidad con
temperaturas ms elevadas
Temperatura ptima entre 35C y 40C
pH
El proceso cataltico suele precisar que la
enzima y el sustrato tengan grupos
qumicos especficos en un estado ionizado
o desionizado para interaccionar.
Los valores extremos de pH tambin
pueden inducir desnaturalizacin de la
enzima
El pH ptimo vara para las diferentes
enzimas
INHIBIDORES ENZIMTICOS
Existen sustancias
que pueden impedir
que la enzima
desarrolle su
actividad cataltica,
ralentizando o
paralizando la
reaccin enzimtica
INHIBICIN
REVERSIBLE
INHIBICIN
IRREVERSIBLE
INHIBICIN
REVERSIBLE
Implican la unin
no covalente del
inhibidor con la
enzima-puede
revertirse
Competitiva
Acompetitiva
No competitiva.
Es una sustancia similar en estructura al sustrato,
con quien compite por el sitio activo de la enzima
La velocidad mxima no se altera, para
alcanzarla sera necesario poner ms cantidad de
sustrato en el medio de reaccin como un
aparente aumento de la km
INHIBICION
COMPETITI
Puede combinarse tanto con la enzima libre
como con el complejo enzima-sustrato, sin
afectar al sitio activo de la enzima.
Al no unirse el inhibidor al sitio activo, no se
afecta la afinidad de la enzima por el
sustrato y en este caso la km no se altera y
la vmax disminuye
INHIBICION
NO
Reacciona con la enzima en un punto
distinto al centro activo, pero slo en el caso
de que sta est unida al sustrato formando
el complejo ES; de esta forma impide que la
enzima desarrolle su actividad cataltica
Tanto la vmax como la km se alteran en la
misma proporcin
INHIBICION
ACOMPETITI
INHIBICIN
IRREVERSIBLE
se une
covalentemente a
la enzima y la
inactiva de
manera
irreversible
sustancias que reaccionan
bloquendolo e
impidiendo que la enzima
desarrolle su actividad.
Produce a travs del sitio
activo, impidiendo de
manera irreversible que el
sustrato ocupe su lugar
son sustancias
txicas naturales
o sintticas.
cuando el inhibidor
afecta al sitio activo
se observara una
situacin similar a la
inhibicin competitiva
una disminucin
de la Vmax y un
aumento aparente
de la Km
REGULACIN DE LA
ACTIVIDAD ENZIMTICA
Un aumento de la concentracin del sustrato induce
un aumento de la velocidad de la reaccion, que
tiende a devolver la concentracion del sustrato a su
nivel normal.
Mecanismos
Regulacin
Alostrica
Regulacin por
modificacin
covalente
SITIO
S DE
UNIO
N
ALO
ST
RICO
S
Las enzima alostricas son enzimas que
presentan dos centros distintos a los que
pueden unirse las moleculas reguladoras:
- El centro activo, en donde se une el
sustrato cuya reaccion cataliza la enzima
- El centro alosterico, en donde se pueden
unir sustancias, que pueden activar o
inhibir la actividad enzimtica
Los efectores o
modificadores que inhiben
EFECTORES NEGATIVOS
Impide la union del
sustrato
Los efectores que
aumentan la actividad
enzimtica
EFECTORES
POSITIVOS
Favorece la union
Enz.
Homotropicas
Estimuladas o
inhibidas por el
sustrato, estas
tienen dos o ms
sitios de unin
para el sustrato
Enz.
Heterotropicas
Estimuladas
o inhibidas
por un
efector
diferente
del sustrato
MODI
FICA
CION
COV
ALE
NTE
Este es el mtodo ms frecuente, mediante la
adicin o la extraccin de grupos FOSFATO de
residuos de serina, treonina o tirosina
especficos de la enzima.
La fosforilacin de la protena se reconoce
como una de las vas principales por medio de
las cuales se regulan los procesos celulares.
Elementos
de la
reaccin
El enzima no fosforilado
es inactivo
El enzima
fosforilado es
activo
