Fisicoqumica 2009

Terico 30

FOSFORILACIN OXIDATIVA y
TEORA QUIMIOSMTICA

Bibliografa
Valdez y Boveris (2008) Fosforilacin oxidativa y Teora Quimiosmtica. En
Material de Enseanza Complementario Parte II. Pp 62.
Lehninger y Cox (2002-3a edicin) Oxidative phosphorilation and
Photophosphorilation. En Principles of Biochemistry. Pp 659.
Atkins y de Paula (2008-8a edicin) Conversin de la energa en clulas
biolgicas. En Qumica Fsica. Pp 227.
[Link]

PROCESOS TRANSDUCTORES DE ENERGA

Procesos transductores de energa ms importantes en la bisfera
HETERTROFOS

AUTTROFOS

FOSFORILACIN OXIDATIVA
Sntesis qumica de ATP
impulsada
por el proceso exergnico de
transferencia de electrones
desde
el NADH al O2

FOTOFOSFORILACIN
Sntesis qumica de ATP
impulsada por
absorcin de luz solar

SNTESIS DE ATP

Amino
-cidos

RESPIRACIN CELULAR

cidos
grasos

Glcidos

Gluclisis

Fase 1
Produccin de Acetil-CoA

e-

e-

Piruvato

ee-

CO2

e-

ee-

Acetil-CoA

Fase 2: Ciclo de Krebs

Oxidacin de Acetil-CoA

Citrato

Oxalacetato

Ciclo de
Krebs

ee-

e-

CO2
e-

CO2

Fase 3: Cadena respiratoria y

Fosforilacin oxidativa
Sntesis de ATP

NADH, FADH2
(transportadores
de e- reducidos)

e-

Cadena respiratoria

La FOSFORILACIN OXIDATIVA
comienza con la entrada de electrones
en la CADENA RESPIRATORIA

(de transferencia de e-)

O2 + 2 H +

y Fosforilacin oxidativa
H 2O
ADP + Pi

ATP

Conversin de energa en clulas biolgicas

Acople de reacciones exergnicas (G 0) y endergnicas (G > 0)
La energa liberada de la oxidacin de los alimentos se almacena en la
molcula de ATP, la cual tiene capacidad de hidrolizarse, perder un grupo
fosfato terminal y formar ADP:
ATP (aq) + H2O ADP (aq) + Pi- (aq) + H3O+(aq)
Pi- : fosfato inorgnico
(por ej. H2PO4-)

A 37oC (310 K):

Go = - 30.5 kJ/mol
Ho = - 20 kJ/mol
So = + 34 J/K mol

FOSFORILACIN OXIDATIVA

La fosforilacin oxidativa, ocurre en la

mitocondria, y se refiere a la sntesis
qumica de ATP (reaccin endergnica)
impulsada por el proceso exergnico de
transferencia de electrones desde el
NADH al O2 (cadena respiratoria).

FOSFORILACIN OXIDATIVA

La fosforilacin oxidativa, ocurre en la

mitocondria, y se refiere a la sntesis
qumica de ATP (reaccin endergnica)
impulsada por el proceso exergnico de
transferencia de electrones desde el
NADH al O2 (cadena respiratoria).

Mitocondria
Sitio subcelular donde ocurre la fosforilacin oxidativa en
clulas eucariotas (1948)

Albert L. Lehninger
1917-1986

Mitocondria
Sitio subcelular donde ocurre la fosforilacin oxidativa en
clulas eucariotas (1948)
La membrana externa es permeable a
pequeas molculas (PM < 5000 Da) e
iones. Presencia de canales transmembrana

La membrana interna es impermeable a la

mayora de molculas e iones (H+, O2-, etc).
Las nicas molculas que cruzan la
membrana interna son aquellas para las que
hay protenas transportadoras especficas
de metabolitos esenciales (ADP, ATP, cidos
carboxlicos, Ca2+, aminocidos, etc.)
La membrana interna aloja a las protenas
pertenecientes de los componentes de la
cadena respiratoria y el complejo
enzimtico responsable de la sntesis de
ATP (ATP sintasa)

FOSFORILACIN OXIDATIVA

La fosforilacin oxidativa, ocurre en la

mitocondria, y se refiere a la sntesis
qumica de ATP (reaccin endergnica)
impulsada por el proceso exergnico de
transferencia de electrones desde el
NADH al O2 (cadena respiratoria).

CADENA DE TRANSPORTE DE ELECTRONES MITOCONDRIAL

O CADENA RESPIRATORIA MITOCONDRIAL
Consta de una serie de transportadores de electrones, la
mayora protenas integrales de la membrana interna, con
grupos prostticos capaces de aceptar y/o ceder 1 2
electrones
Cada componente de la cadena, acepta electrones del
transportador precedente y se los transfiere al siguiente, en
una secuencia especfica
Los transportadores electrnicos mitocondriales funcionan
dentro de complejos proteicos ordenados en serie

Tipos de transferencia de electrones en la

cadena respiratoria
Transferencia directa de electrones: par redox Fe3+/Fe2+
Fe2+ + Cu2+

Fe3+ + Cu+

Transferencia de tomos de hidrgeno: un protn (H+) y un eAH2

A + 2 e- + 2 H +

Transferencia de un hidruro (:H-) portador de 2 eNAD+ + 2 e- + 2 H+

NADH + H+

NADP+ + 2 e- + 2 H+

NADPH + H+

Mientras una molcula de sustrato es oxidada (deshidrogenacin),

cediendo 2 tomos de hidrgeno, la formas oxidadas (NAD+ o NADP+)
aceptan un hidruro (:H-; -un protn y 2 e-) transformndose en las formas
reducidas (NADH o NADPH). El segundo H+ del sustrato se libera al medio.

Tipos de transferencia de electrones en la

cadena respiratoria

Equivalente de reduccin
Trmino utilizado para designar a un equivalente
electrnico simple (un electrn transferido) que
participa en una reaccin de oxidacin-reduccin,
sin importar si este equivalente est en forma de
electrn per s, tomo de hidrgeno in hidruro

Transportadores de electrones en la cadena respiratoria

Transportadores universales de electrones

- Nucletidos de nicotinamida (NAD+ y NADP+)
- Nucletidos de flavina (FMN y FAD)

Otros grupos transportadores de electrones

- Ubiquinona Coenzima Q (benzoquinona)
- Citocromos
protenas
- Hierro-sulfo

Transportadores de electrones en la cadena respiratoria

Transportadores universales de electrones

- Nucletidos de nicotinamida (NAD+ y NADP+)
- Nucletidos de flavina (FMN y FAD)

Otros grupos transportadores de electrones

- Ubiquinona Coenzima Q (benzoquinona)
- Citocromos
protenas
- Hierro-sulfo

Aceptores universales de electrones

Nucletidos de nicotinamida
NAD+ y NADP+ estn compuestos por 2 nucletidos unidos mediante sus
grupos fosfatos
NAD+ y NADP+ son transportadores electrnicos hidrosolubles,
asociados reversiblemente a deshidrogenasas

Aceptores universales de electrones

Nucletidos de flavinas
La flavoprotenas contienen nucletidos de flavina (FAD o FMN) fuertemente
unido, a veces covalentemente. El nucletido oxidado puede aceptar
un e- (dando la forma semiquinona) o dos e- dando FADH2 o FMNH2

Transportadores de electrones en la cadena respiratoria

Transportadores universales de electrones

- Nucletidos de nicotinamida (NAD+ y NADP+)
- Nucletidos de flavina (FMN y FAD)

Otros grupos transportadores de electrones

- Ubiquinona Coenzima Q (benzoquinona)
- Citocromos
protenas
- Hierro-sulfo

Otros grupos transportadores de electrones

Ubiquinona o Coenzima Q
La reduccin completa (UQH2)
requiere 2 e- y 2 H+ y se produce
en 2 pasos sucesivos
La UQ puede aceptar 1 eformndose radical semiquinona
(UQH)
Capaz de actuar como unin
entre un dador de 2 e- y un
aceptor de 1 e Debido a que es pequea e
hidrofbica difunde a travs de la
membrana interna, actuando de
lanzadera de equivalentes de
reduccin entre otros
transportadores electrnicos de la
membrana, menos mviles

Otros grupos transportadores de electrones

Citocromos
Hemo A
(Citocromos tipo a)

Son protenas que contienen el grupo

prosttico hemo: 4 anillos penta-atmicos
nitrogenados en una estructura cclica llamada
porfirina. Los 4 N estn coordinados con un
Fe2+ (cit. reducido) o Fe3+ (cit. oxidado)
Hemo de cit c est unido covalentemente a su
protena, a diferencia de hemos de cit a y b
El cit c mitocondrial es una protena perifrica
(excepcin), asociada a MI por interacciones
electrostticas

Fe protoporfirina IX
(Citocromos tipo b)

Hemo C
(Citocromos tipo c)

Otros grupos transportadores de electrones

Hierro-sulfo protenas

En las hierro-sulfo protenas, el hierro est presente no en forma de hemo, sino

en asociacin con tomos de azufre inorgnico o con azufre de residuos Cys
de la protena, o con los dos simultneamente
Centros (Fe-S): estructuras sencillas a complejas
Participan en reacciones de transferencia de 1 e- en la que se oxida o reduce
uno de los tomos de Fe

Al menos, 8 protenas Fe-S intervienen en la cadena e transporte de e-

Potenciales de reduccin estndar de los transportadores de

la cadena respiratoria mitocondrial
Hemi-reaccin

Eo (mV)

NAD+ + 2H+ + 2e- NADH + H+

- 320

FMN + 2H+ + 2e- FMNH2

- 290

Fe3+-S-protena (Complejo I) + 1e- Fe2+-S-protena

- 270

Fumarato + 2H+ + 2e- Succinato

- 31

FAD + 2H+ + 2e- FADH2

- 10

Fe3+-S-protena (Complejo II) + 1e- Fe2+-S-protena

20

Ubiquinona + 2H+ + 2e- Ubiquinol (UQH2)

50

Citocromo bk (Fe3+) + 1e- Citocromo bk (Fe2+)

77

Citocromo bT (Fe3+) + 1e- Citocromo bT (Fe2+)

190

Citocromo c1 (Fe3+) + 1e- Citocromo c1 (Fe2+)

220

Citocromo c (Fe3+) + 1e- Citocromo c (Fe2+)

254

Citocromo a (Fe3+) + 1e- Citocromo a (Fe2+)

290

Citocromo a3 (Fe3+) + 1e- Citocromo a3 (Fe2+)

550

O2 + 2H+ + 2e- H2O

816

Los electrones fluyen espontneamente desde los transportadores de

Eo ms bajo hacia los transportadores con Eo ms elevado.
En la tabla, los de ms arriba reducen a los de mas abajo.

Los transportadores mitocondriales de electrones funcionan

dentro de complejos proteicos
Cada componente de la cadena, acepta electrones del transportador
precedente y se los transfiere al siguiente, en una secuencia especfica

Los transportadores electrnicos mitocondriales funcionan dentro de

complejos proteicos ordenados en serie

Succinato
Malato Glutamato

II
FAD

NAD

FMN - (Fe-S)6

(Fe-S)3
III

UQ

cit bK . cit bT (Fe-S) . cit c1

O2

IV
cit c

cit aa3
H2O

Complejos proteicos de la cadena respiratoria mitocondrial

Espacio intermembranas (Lado P)

pH = 7.0

Matriz (Lado N)

pH = 7.8

Reacciones de transferencia de electrones en los

Complejos mitocondriales

Complejo I (NADH-Ubiquinona oxidoreductasa)

NADH + H+ + Q NAD+ + QH2

Eo = + 0.42 V
Go = -81 kJ/mol

Complejo II (Succinato- Ubiquinona oxidoreductasa)

FADH2 + Q FAD + QH2

Eo = + 0.015 V
Go = -2.9 kJ/mol

Complejo III (Ubiquinona-citocromo c oxidoreductasa)

QH2 + 2 Fe3+(cit c) Q + 2 Fe2+(cit c) + 2 H+

Eo = + 0.15 V
Go = -30 kJ/mol

Complejo IV (Citocromo oxidasa)

2 Fe2+(cit c) + 2 H+ + O2 2 Fe3+(cit c) + H2O

Eo = + 0.815 V
Go = -109 kJ/mol

FOSFORILACIN OXIDATIVA

La fosforilacin oxidativa, ocurre en la

mitocondria, y se refiere a la sntesis
qumica de ATP (reaccin endergnica)
impulsada por el proceso exergnico de
transferencia de electrones desde el
NADH al O2 (cadena respiratoria).

LA TRANSFERENCIA DE ELECTRONES ES UN
PROCESO EXERGNICO
En la cadena de transporte de e-, pasan 2 e- desde el NADH al O2
NADH + H+ + 1/2 O2 H2O + NAD+

La reaccin neta es altamente exergnica

Teniendo en cuenta

NAD+/NADH
O2/H2O

Eo = -0.320 V
Eo = + 0.816 V

Eo = 1.14 V

El cambio de energa libre:

Go = - n F Eo
Go = - 2 x 96500 x 1.14 V = - 220 kJ/mol NADH (cada 2e-)

En mitocondrias respirando activamente, la relacin NADH/NAD es mayor

que 1, y el G es mucho mayor (ms negativo) que -220 kJ/mol

Para el succinato

Go = - 150 kJ/mol

LA SNTESIS DE ATP ES UN PROCESO ENDERGNICO

La sntesis de ATP, a partir de ADP y Pi, es un proceso endergnico:
ADP + Pi ATP + H2O

Go = 30.5 kJ/mol

En condiciones fisiolgicas, en eritrocitos

[ATP] = 2.25 mM
[ADP] = 0.25 mM y [Pi] = 1.65 mM
A 25 oC, pH = 7.0

G =

51.8 kJ/mol

En las condiciones celulares, la oxidacin mitocondrial de

NADH o de succinato libera una energa superior a la
necesaria para la sntesis de ATP.
La fosforilacin oxidativa mitocondrial no plantea un
problema termodinmico

TRANSLOCACIN DE H+ ASOCIADA AL FLUJO DE

ELECTRONES MITOCONDRIAL
Espacio intermembranas (Lado P)

Matriz (Lado N)

pH = 6.9-7.0

pH = 7.5-7.8

Por cada par de electrones transferidos al O2,

4 H+ son bombeados por el Complejo I, 4 H+ por el Complejo III y
2 H+ por el complejo IV; todos ellos desde la matriz mitocondrial (Lado N),
hacia el espacio intermembranas (Lado P)
NADH + 11 H+ (N) + 1/2 O2 H2O + NAD+ + 10 H+ (P)

FUERZA PROTO-MOTRIZ
Gradiente electroqumico de H+
La membrana mitocondrial
interna separa 2
compartimientos de
diferente pH, generando
diferencias tanto en la
concentracin de H+ (pH)
como en la distribucin de
cargas ().
El efecto neto de esta
diferencia es la fuerza
proto-motriz

Potencial electroqumico para el H+

Aplicando el concepto de potencial electroqumico de
Guggenheim (1924)

~
mH+(2) = mH+ + RT ln aH+(2) + z F (2)
~
mH+(1) = mH+ + RT ln aH+(1) + z F (1)

(2) EIM

(1) Matriz

~
mH+(2-1) = RT ln (aH+(2)/ aH+(1) ) + z F (2-1)
~
m(2-1) = RT ln (C2/C1) + z F (2-1)

Potencial electroqumico para el H+

~
m(2-1) = RT ln (C2/C1) + z F (2-1)

Sabiendo:
ln (C2/C1) = 2.3 (log [H+] 2 - log [H+] 1)
= 2.3 (pH1 - pH2) = 2.3 pH

~
*
m(2-1) = 2.3 RT pH(1-2) + F (2-1)

En mitocondrias
respirando

pH = 0.75-0.8
= 0.15-0.2 V

~
m(2-1) = 5.7 kJ/mol pH + (96.5 kJ/V mol) (2-1)
~
m(2-1) = 5.7 kJ/mol (0.8) + (96.5 kJ/V mol) (0.15 V)

~
m(2-1) = 20 kJ/mol

Potencial electroqumico para el H+

~
m(2-1) = 20 kJ/mol
Para 10 H+ que translocan a travs de la membrana
NADH + 11 H+ (N) + 1/2 O2 H2O + NAD+ + 10 H+ (P)

Aproximadamente, 200 kJ/mol de los 220 kJ liberados por la

oxidacin de 1 mol de NADH son conservados en el
gradiente electroqumico de H+ (fuerza proto-motriz)

Cuando los H+ vuelvan espontneamente a travs de su

gradiente electroqumico, hacia la matriz mitocondrial, la
energa estar disponible para realizar trabajo

Potencial electroqumico para el H+

~
m(2-1) = 2.3 RT pH + F (2-1) *

~
Considerando

p = m/F

p = 2.3 RT/F pH + (2-1)

A 298 K:
2.3 RT/F = 59 mV

p = + 59 pH
En mitocondrias en estado de reposo (estado 4) (pHM = 7.8; pHEIM = 7.0):
p = + 59 pH = 170 mV + 50 mV = 220 mV
La fuerza proto-motriz (p), expresa en mV (220-230 mV) el potencial
electroqumico del H+ que es utilizado en la sntesis endergnica de
ATP a partir de ADP y Pi

FOSFORILACIN OXIDATIVA

La fosforilacin oxidativa, ocurre en la

mitocondria, y se refiere a la sntesis
qumica de ATP (reaccin endergnica)
impulsada por el proceso exergnico de
transferencia de electrones desde el
NADH al O2 (cadena respiratoria).

TEORA QUIMIOSMTICA MITOCONDRIAL

(P. Mitchell, 1961)
The Nobel Prize in Chemistry 1978
"for his contribution to the understanding
of biological energy transfer through the
formulation of the chemiosmotic theory"

Peter Mitchell
1920-1992

El gradiente electroqumico de protones a travs de la

membrana interna mitocondrial (fuerza proto-motriz)
es crucial para los procesos de transduccin de energa
y sntesis de ATP

La teora quimiosmtica mitocondrial

Acopla el flujo de electrones a travs de la cadena respiratoria y
la sntesis de ATP

La fuerza proto-motriz,
lleva a la sntesis de ATP,
como consecuencia del
flujo pasivo de H+ hacia la
matriz mitocondrial, a
travs de un poro de H+
(F0) asociado a la ATP
sintasa (Complejo V)

ADP + Pi + nH+ (p) ATP + H2O + nH+ (N)

Postulados de la teora quimiosmtica mitocondrial

(P. Mitchell, 1961)
La membrana interna es impermeable a los H+
El transporte de e- a travs de la cadena respiratoria est asociado al
transporte de H+ desde la matriz hacia el espacio intermembranas
Se conserva la energa de oxidacin de los procesos metablicos en
forma de potencial electroqumico, ya que se genera un gradiente
electroqumico de H+
La cadena respiratoria est acoplada a la sntesis de ATP
Las [H+] en las 2 fases acuosas (EIM y M) separadas por la membrana
interna, constituyen la fuerza responsable (fuerza proto-motriz) de la
formacin de ATP: el flujo de H+ a favor de su gradiente electroqumico
proporciona la energa libre para la sntesis de ATP a partir de ADP y de
Pi, por accin de la F1-ATPasa de la membrana mitocondrial.
Se sintetizan 3 ATP por cada par de e- pasados al O2 si el dador es
NADH, y 2 ATP por cada par de e- pasados al O2 si el dador es
succinato.

Sntesis de ATP por ATP sintasa

The Nobel Prize in Chemistry 1997
"for their elucidation of the enzymatic
mechanism underlying the synthesis of
adenosine triphosphate (ATP)"

John Walker

Paul Boyer

ATP sintasa, ATPasa o Complejo V

Gran complejo enzimtico, que cataliza la sntesis de ATP a partir de
ADP y Pi, acompaado del flujo de H+ desde el lado P al N
Est formado por dos componentes:
F1, una protena perifrica de membrana (33)
Fo, una protena integral (poro de H+) (ab2c10-12)

F1

Matriz

Sub. c (de Fo) forman 2 crculos

concntricos
La subunidad pasa a travs del
centro esfrico 33
Sub. y (de F1) se unen
firmemente al anillo de sub. c.

EIM

F0

ATP sintasa, ATPasa o Complejo V

Las translocacin de H+ a travs del poro Fo provoca que el cilindro de
sub. c y la subunidad adjunta, roten alrededor del eje de
(perpendicular al plano de la membrana)
El pasaje de H+ a travs de Fo llevan -ADP
a cambios conformacionales de la
subunidad de la F1-ATPasa
El proceso endergnico de rotacin
de la sub. es impulsado por el
proceso exergnico de la
translocacin de H+ del lado P al N

F1-ATPasa = Rotor molecular

El acoplamiento no es qumico,
sino electroqumico y fsico

-ATP -vaco
Alta afinidad
por ATP

Baja afinidad
por ATP

RESUMEN
La FOSFORILACIN OXIDATIVA se refiere a la sntesis qumica de
ATP impulsada por el proceso exergnico de transferencia de
electrones desde el NADH al O2

Ocurre en la mitocondria
La fosforilacin oxidativa comienza con la entrada de e- en la cadena respiratoria

Los e- pasan a travs de una serie de transportadores includos en la membrana

interna mitocondrial. Los e- fluyen espontneamente desde los transportadores de
Eo ms bajo hacia los de Eo ms elevado
Los transportadores electrnicos mitocondriales funcionan dentro de complejos
proteicos ordenados en serie
La transferencia mitocondrial de e- es un proceso exergnico, que libera energa
suficiente para la sntesis de ATP
El transporte de e- est asociado al transporte de H+ desde la matriz hacia el EIM
(fuerza proto-motriz)

El flujo de H+ a favor de su gradiente electroqumico proporciona la energa libre

para la sntesis de ATP, por accin de la ATP sintasa (rotor molecular)