UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONA
Carrera Profesional de Ingeniera Agroindustrial
TEMA: Cultivo in vitro de tejidos vegetales Generalidades
Curso: Biotecnologa
Docente: Blgo. MSC. Liz Michielle Garca Zare Yarinacocha-Per
Carica papaya papaya
Ananas sp. pia
Orcchidaceae orquidea
Podemos implementar esta tecnologa en nuestra regin ?
Qu es los que hace posible dicha tecnologa?
EXPLANTO
Invernadero
Cultivo de Tejidos vegetales
Fue desarrollado a partir de 1950 por botnicos y fisilogos vegetales. Tcnica que utiliza pequeos segmentos de tejido en condiciones aspticas en medio nutritivo dentro de material estril de vidrio, conseguir nuevas plantas idnticas a la planta madre
Fases de propagacin vegetal: La iniciacin, se extrae segmentos de la planta madre, se desinfectan y cultivan en medio especfico. La Multiplicacin, comienza la reproduccin de los explantos. Enraizamiento, a travs de modificando el medio de cultivo para la generacin de races.
Aclimatacin, el paso de las plantas de cultivo hacia el medio natural
Combinacin slida o lquida de minerales y agua
Macroelementos: N, P, K, Ca, Mg, S
Sales inorgnicas
Microelementos: Fe, Zn, B, Mn, Cu, Ni, Co, Al, Mo, I Sacarosa, Manitol, Sorbitol
Carbohidratos
Thiamina, piridoxina, cido nicotnico, inositol
Vitaminas y aminocidos
Glutamina, Glycina
Reguladores de crecimiento
2,4 Diclorofenoxiactico, AIA, IBA, BAP, Citoquinicas
Preparacin de Medio de Cultivo
El xito del cultivo de tejidos depende de la seleccin del medio de cultivo. Estas se realizan por medio de la preparacin de soluciones stock.
La solucin stock puede estar separada por macronutrientes, micronutrientes, vitaminas en mg/mL de solucin.
Ejm. Preparar 50 ml de Thiamina sol. Stock 1mg/mL Esto es igual a pesar 50 mg de Thiamina y disolverlo en 50 mL de agua
Los principales medios de cultivos: Medio MS: cultivo de plantas herbceas Medio WPM: cultivo de plantas leosas
Preparacin de Medio de Cultivo
Aforar hasta volumen indicado con agua destilada y ajustar pH entre 5.5 y 6
Macronutrientes Micronutrientes Hierro Vitaminas Hormonas Sacarosa
Introducir explantos en medio estril
Adicionar fitagel , cubrir material de vidrio y autoclavar
Medio de cultivo MS
Se denomina as por haber sido formulado por cientficos Murashige y Skoog en 1962. Este medio de cultivo es empleado en plantas herbceas como: Tomate, orqudeas, caa de azcar, papaya, lcuma, papa, camote, etc
Reactivos que forman parte del medio MS
Vitaminas que conforman el medio MS
Medio de cultivo WPM
Se denomina as por sus siglas en ingls Wood plants medium (medio para plantas leosas), fue formulado por Lloyd & McCown, 1980, y modificado por Zhang et al 2006. Este medio de cultivo es empleado en plantas leosas como: camu camu, palmeras, arndano, etc
Reactivos que forman parte del medio WPM
Vitaminas que conforman el medio WPM
Aplicacin de cultivo in vitro
-Obtencin de plantas libres de patgenos -Propagacin masiva -Conservacin de germoplasma -Mejora por mutagnesis y seleccin in vitro
-Ingeniera Gentica
Embriones cigticos de papaya var. Maradol:
Se emplearn frutos inmaduros de papaya var. Maradol de aproximadamente tres meses de crecimiento.
Los frutos colectados se lavarn con agua y jabn
Sumergirn en cloro al 20% (v/v) (3.5% de NaClO), durante 1 h
Luego se incorporar en una campana Holten y, ah se enjuagarn nuevamente con etanol al 70% (v/v).
Embriones cigticos de papaya var. Maradol:
Despus, los frutos sern cortados transversalmente y se extraern las semillas
En placas Petri sern desinfectadas por inmersin: Etanol al 70% (v/v) por 30 s. Solucin de cloro al 20% (v/v) con dos gotas de Tween 20 por 20 min. Se enjuagarn por tres ocasiones cada 5 min. con H2O die
Medio MS con el 50% de la concentracin de sales y suplementado con 10 mg/L de cido 2,4-diclorofenoxiactico (2,4-D) Embrin cigtico de papaya var. Maradol
Iniciacin de embriognesis somtica de papaya var. Maradol
Semillas inmaduras en medio MS + 2,4 D
Estructuras somticas globulares Estructuras somticas en torpedo
Estructuras somticas de 21 das
Maduracin y germinacin de papaya var. Maradol
Enraizamiento de papaya var. Maradol
Aclimatacin de papaya var. Maradol
