Universidad Nacional Mayor De San Marcos EAP Tecnologa Medica Laboratorio Clnico Y Anatoma Patolgica
CRIOELECTROMISCROSCOPIA Y MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO AMBIENTAL
Microscopia y Fotografa mdica
Napa Aguirre Josselyn Estefanny
CRIOELECTRO MICROSCOPA
La criomicroscopa electrnica es una forma de microscopa electrnica en la que la muestra se estudia a temperaturas criognicas, evitando as la generacin de artefactos. Se trata de una tcnica muy utilizada en biologa estructural, pues permite observar directamente (sin tinciones ni fijaciones) estados conformacionales nativos a resolucin atmica.
La criomicroscopa electrnica se basa en congelar la muestra para protegerla del vaco y disminuir el dao por radiacin. Adems provocando congelaciones sbitas se consigue que el agua permanezca en forma vtrea con lo que no aparecen cristales de hielo que daen al espcimen. El contraste es menor pero no hay lmites adicionales a la resolucin
Desde el inicio de la microscopa electrnica, la Crio ME ha sido la alternativa para el procesamiento de muestras por los mtodos qumicos. Fernndez - Moran (1952), fue uno de los pioneros ms importante en el desarrollo de la fijacin por mtodos fsicos (congelamiento), la seala como la forma ms idnea de observar al microscopio electrnico muestras biolgicas en estado hidratado lo ms cercano a su estado natural.
Metodologa
Preparacin de la muestra con hielo vtreo. Los crigenos pueden ser propano, etano o nitrgeno lquido. Para evitar la formacin de cristales se utiliza un anticontaminador. En este aspecto se sigue un protocolo para evitar o disminuir la formacin de cristales de hielo que obstaculicen la observacin de la muestra bajo el microscopio. Toma de imgenes Digitalizacin de las imgenes Procesamiento de las imgenes: se retroproyectan las imgenes 1D para conseguir una imagen 2D
Aplicaciones
El empleo del poder de resolucin de la Crio-ME combinada con la Rec-3D, permite el conocimiento detallado de las estructuras virales, sus propiedades estructurales incluyendo la estabilidad cuaternaria, los efectos de los compuestos antivirales, y sus relaciones con los ciclos de vida. De all la importancia del conocimiento y valoracin de estas tcnicas en la virologa moderna.
El empleo del poder de resolucin de la Crio-ME combinada con la Rec3D, permite el conocimiento detallado de las estructuras virales,
Microscopio Electrnico de Barrido preparado para analizar muestras congeladas (Crio-SEM);
Detalle de la crio-cmara adosada a la cmara de visualizacin propia del SEM.
Microscopia electrnica de barrido ambiental
La microscopa electrnica de barrido ambiental
La microscopa electrnica de barrido es una de las tcnicas ms verstiles para el estudio de superficies de distintos materiales gracias a la combinacin de elevada resolucin y gran profundidad de campo.
Corte transversal de tubrculo de papa.
Microscopio electrnico de barrido ambiental
Se denomina ambiental "debido a que la muestra se encuentra dentro de la cmara a temperatura ambiental. En el modo ambiental se pueden observar muestras hmedas, sustancias orgnicas o inorgnicas Esta herramienta permite observaciones en 3 modos distintos: Alto vacio Bajo vacio : Soportando una presion de maximo 2 torr Presin ambiental : Resistiendo una presion maxima de 50 Torr En los dos ltimos modos , no es necesario recubrir o metalizar las muestras
Se han desarrollado diversos tipos de microscopios de barrido adaptados a los diferentes materiales a estudiar. En el campo de los polmeros el tipo de microscopio electrnico de barrido que quizs mejor se adapta a este tipo de muestras es el microscopio electrnico de barrido ambiental (MEBA).
Desventajas
La nica desventaja de los sistemas de microscopia electrnica de barrido ambiental comparados con los instrumentos de microscopia electrnica de barrido es una pequea perdida de resolucin por las colisiones elsticas entre los electrones y las molculas del gas a presiones ms altas
Microscopio Electrnico de Barrido Ambiental
Microscopio Electrnico de Barrido Ambiental (ESEM) de ltima generacin que admite el anlisis de muestras en estado natural o bajo condiciones ambientales naturales, sin necesidad de usar tcnicas convencionales de preparacin de muestras. Adems, es posible utilizar rgimen de alto vaco de forma similar a los microscopios SEM convencionales. La muestra no necesita desecarse ni recubrirse con metales, no solo se ahorra tiempo sino tambin las muestras no sufren alteraciones
