COLEGIO INGLS SAN JOS ANTOFAGASTA

LABORATORIO DE PROTENAS Y AMINOCIDOS CUARTO MEDIO QUMICA FORMACIN GENERAL

PROF. S. CASAS-CORDERO E.

I. PROPIEDADES ANFTERAS Los aminocidos pueden actuar como cidos y como bases, formando sales con las bases fuertes v con los cidos fuertes respectivamente. A los compuestos que muestran este comportamiento se les llama anfteros

H R-C-COO1- Na1+ NH2

NaOH

H R-C-COO1NH31+ HCl

H R-C-COOH NH31+

Las protenas tienen tambin un comportamiento anftero. y por ello pueden disolverse -al menos en parte- tanto en soluciones cidas como en un medio bsico. Esto es debido a que algunos aminocidos que forman parte de la protena poseen grupos amino libres (lisina o arginina) y grupos carboxilo libres (cido asprtico y cido glutmico). Estos grupos pueden reaccionar con cidos o bases dando sales solubles de la protena.

N-CH-C CH2 COOH

PROCEDIMIENTO:

N-CH-C (CH2)4 NH2

A. Poner 0,1 g de casena en un tubo de ensayo y aadir 5 mL de agua y 2 mL de solucin de hidrxido de sodio al 10 %. Tapar el tubo de ensayo 1 agitar fuertemente y observar el resultado. Guardar 2 mL de esta mezcla para utilizarlos en la parte VI. B. Aadir cido clorhdrico concentrado, gota a gota1 a la solucin de la parte A y observar el resultado. Continuar hasta que se hayan aadido 4 mL, tapar el tubo de ensayo agitar fuertemente y observar lo que ocurre. II. COAGULACIN DE LAS PROTENAS

La estructura de hlice de las protenas se mantiene gracias a los puentes de hidrgeno entre los aminocidos de una parte de la protena con los de otra. Sin embargo, dicha estructura puede ser alterada por todos aquellos agentes fsicos o qumicos capaces de romper tales enlaces. Si esto sucede, la hlice se desenrolla y la protena precipita. Se dice entonces que la protena se ha desnaturalizado. Las protenas pueden precipitar (coagular) al calentarlas o al tratarlas con cidos fuertes o con alcohol. PROCEDIMIENTO A. Introducir 2 mL, aproximadamente, de una solucin de albmina de huevo en un tubo de ensayo, y hervirla suavemente durante 5 minutos. Observar lo que sucede en la solucin. B. Poner aproximadamente 2 mL de la solucin de albmina en un tubo de ensayo, y aadir 7 mL de etanol del 95 %, Observar el comportamiento de la solucin.

III.

PRECIPITACIN POR IONES METLICOS

Los iones de los metales pesados tales como la plata, el plomo y el mercurio inducen la precipitacin de las protenas, debido a que se combinan con los grupos carboxilo libres de sta. La accin antisptica del nitrato de plata y del cloruro mercrico se basa precisamente en que precipitan las protenas de las bacterias.

protena-COO1- + Ag1+ protena-COO1-Ag1+ (Precipitado)

PROCEDIMIENTO A. Poner aproximadamente 2 mL de la solucin de albmina de huevo en un tubo de ensayo y aadir, gota a gota, una solucin de nitrato de plata al 2 %. Observar lo que ocurre. B. Repetir lo indicado arriba con una solucin de Acetato de Plomo al 5 %. IV. PRUEBA DE LA XANTOPROTEINA Algunos de los aminocidos presentes en las protenas poseen anillos aromticos que se nitran fcilmente. As, al tratar una protena con cido ntrico concentrado, la solucin tomar un color amarillo claro, que se volver ms intenso si se basifica el medio.
NO2 proteina OH + HONO2 proteina OH proteina NO2 O1-

Tirosina PROCEDIMIENTO

(Amarillo)

(Amarillo intenso)

Introducir 2 mL de la solucin de albmina de huevo en un tubo de ensayo y aadir 10 gotas de cido ntrico concentrado. Calentar ligeramente la muestra y observar si tiene lugar algn cambio de color. Enfriar la solucin y aadir gota a gota una solucin de hidrxido de sodio, hasta que el medio est bsico. Anotar si tiene lugar algn cambio de color.

V. PRUEBA DE AZUFRE
Las protenas que contienen aminocidos con azufre, tales como la cistna (enlace disulfuro), se hidrolizan en medio bsico dando un sulfuro inorgnico, que en presencia de acetato de plomo da lugar a un precipitado de sulfuro de plomo negro.

Protena que contiene azufre

NaOH S 2

Pb PbS

2+

(Precipitado negro)

PROCEDIMIENTO Aadir 2 mL de la solucin de albmina, 5 mL de hidrxido de sodio al 10 % y 2 gotas de una solucin de acetato de plomo al 5 % en un pequeo Matraz Erlenmeyer. Hervir la mezcla cuidadosamente, agitar durante cinco minutos y observar el resultado.

VI.

PRUEBA DEL BIURET

Cuando se calienta la urea por encima de su punto de fusin, se convierte en biuret (carbodiamida), perdiendo amoniaco:

O 2 NH2-C-NH2
urea

O calor

NH2-C -NH-C-NH2
Biuret

NH3

Amoniaco

Cu++ + 4 NH3
catin cprico Amoniaco

Cu(NH3)4++
catin tetraamincprico

Con los iones cpricos, el biuret forma en medio bsico un complejo de color rosa o violeta. Todos los compuestos que contienen dos o ms enlaces peptdicos (tripptidos o pptidos mayores) dan con los iones Cu2+ una coloracin anloga a la que da el biuret. Los aminocidos (excepto la serina y la treonina), los dipptidos y la urea se distinguen de los anteriores en que no toman color violeta en esas condiciones, por lo que se dice que dan negativa la prueba (los aminocidos y el amonaco, dan color azul en presencia de iones Cu2+). Por otra parte, esta prueba tambin es til si se desea seguir la hidrlisis de una protena, ya que, cuando haya finalizado la hidrlisis, la prueba debe dar negativa. PROCEDIMIENTO A. Poner 1 g de urea en un tubo de ensayo seco. Calentar ligeramente el tubo de ensayo hasta que funda la urea. Acercar un trozo de papel filtro humedecido con solucin de Sulfato cprico al 2 %, a la boca del tubo de ensayo. La aparicin de una coloracin azul intenso, evidencia la presencia de vapores de amoniaco. Continuar calentando ligeramente hasta que el producto solidifique. Una vez que se enfre el tubo de ensayo, disolver el residuo blanco en 4 mL de agua y aadir 4 mL de hidrxido de Sodio al 10 %. Agregar luego 10 gotas de una solucin de Sulfato de cobre al 2 %. Agitar la mezcla y observar el color. B. Poner 2 mL de la solucin de albmina de huevo en un tubo de ensayo y aadir 2 mL de hidrxido de sodio al 10 %. Aadir 5 gotas de la solucin de sulfato de cobre al 2 % y mezclarlo bien. C. Aadir 2 mL de agua y 2 mL de la solucin de sulfato de cobre al 2 % a 2 mL de la solucin de caseina. Mezclar y observar el color que toma. D. Poner 0,1 g de glicina en un tubo de ensayo y aadir 3 mL de hidrxido de sodio al 10 % para disolver el slido. Adicionar 10 gotas de solucin de sulfato de cobre al 2 %, agitar la mezcla y observar el color. E. Poner 5 gotas de una solucin de protena hidrolizada (parte I A), y 10 gotas de solucin de hidrxido de sodio al 10%, en un tubo de ensayo. Comprobar con un papel indicador que la solucin es alcalina. Aadir ms solucin de hidrxido de sodio al 10 % si es necesario. Aadir 4 o 5 gotas de solucin de sulfato de cobre al 2 %. Un color azul Indica que la hidrlisis de la protena ha finalizado. El color rosa o violeta indica que se ha hidrolizado slo parcialmente.

VII. PRUEBA DEL CIDO NITROSO Los aminocidos reaccionan con el cido nitroso dando un - hidroxicido y nitrgeno gaseoso:

R-CH-COOH NH2

HONO

R-CH-COOH + H2O + N2 OH

Ya que muchos grupos amino de la protena participan en el enlace peptdico no pueden experimentar la reaccin que aqu se indica. Las, protenas contienen, sin embargo, algunos grupos amino libres, que corresponden principalmente a la lisina. Estos grupos pueden reaccionar con cido nitroso desprendindose nitrgeno, pero, como es obvio, nunca se desprende tanto nitrgeno como si se tratara de aminocidos libres. PROCEDIMIENTO Ensayar cada una de las pruebas simultneamente. A. Introducir 0,1 g de glicina en un tubo de ensayo y aadir 5 mL de cido clorhdrico al 10 %. Agregar cuidadosamente 1 mL de una solucin de nitrito de sodio al 5 %. Mezclarlo bien y observar la velocidad de desprendimiento de nitrgeno. B. Introducir 4 o 5 g de gelatina en un tubo de ensayo y aadir 3 gotas de cido clorhdrico al 19 %. Aadir 3 gotas de la solucin de nitrito de sodio. Mezclarlo bien y observar el desprendimiento de nitrgeno. C. Introducir unas 10 gotas de la solucin de protena hidrolizada, en un tubo de ensayo y aadir alrededor de 20 gotas de la solucin de nitrito de sodio. Mezclarlo bien y observar la velocidad de desprendimiento del gas.