Extracción de ADN de Ananas comosus (piña)

República de Filipinas
UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE FILIPINAS
Oficina del Vicepresidente de Asuntos Académicos
Facultad de Ciencias
Departamento de Biología

Extracción de ADN de Ananas comosus

Piña
Glenver [Link]
Angélica KayteCabacungan
Cristina Marie [Link]
Judy Anne [Link]
Janelan [Link]
RegocijoSantelices

RESUMEN
Todos los seres vivos, ya sean plantas o animales, contienen una molécula llamada ADN o ácido desoxirribonucleico.

que se puede encontrar dentro del núcleo de una célula. El ADN contiene la información genética para el

el desarrollo y el crecimiento de un organismo. La extracción de ADN es una de las técnicas más básicas para

aislar el ADN en el núcleo de la célula. Ananas comosus (piña) se utilizó para la extracción

de su propio ADN. Los procedimientos de este experimento se dividen en tres pasos, a saber, extracción,

dilución y espectrofotometría. Con los resultados, se formó una capa separada en la parte superior de la

líquido de piña después de agregar etanol frío al 95%. Después de un minuto de observación, nube blanca esponjosa

en la interfaz entre los dos líquidos se hizo visible. Este precipitado blanco era el ADN

extraído de la piña. Por otro lado, se observó la pureza del ADN utilizando

espectrofotómetro. Los resultados han mostrado que el Grupo A tiene la menor relación de absorbancia (ABS

Ratio) de 0.8097 mientras que el Grupo D obtuvo el ratio ABS más alto de 1.0577. En términos de ADN y

la concentración de proteínas, el Grupo A obtuvo el valor más alto de 7.2650 y 456.83, respectivamente,

mientras que, por otro lado, el Grupo E tiene el valor más bajo de 1.9596 y 49.785, respectivamente.

Además, un A2 más alto (280 nm) puede resultar en una mayor concentración de proteínas, menos pureza y más

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contaminado (Grupos A, B, C). En eso, se añadió menos cantidad de sal durante el laboratorio

actividad ya que la mayoría de los grupos obtuvieron una alta concentración de proteínas. En cuanto a la pureza de

las muestras de ADN, el Grupo D y E tienen una buena muestra extraída debido a las proporciones de ABS

los grabados estaban cerca de 1.7-2.0.

INTRODUCCIÓN
El ácido desoxirribonucleico es una molécula formada por dos cadenas que se enrollan una alrededor de la otra

formar una estructura de doble hélice. El ADN está presente en todos los organismos vivos, ya sean plantas o animales, y es

localizado dentro del núcleo de la célula. Juega un papel importante en la síntesis de proteínas y transporta

información genética para el desarrollo, crecimiento y proliferación de cada uno de los conocidos

organismos y virus (Albert et al., 2002).

La aislamiento de ADN es una de las técnicas más esenciales en el estudio del propio ADN. ADN

la extracción y purificación juegan un papel importante para el avance de la biotecnología y

análisis forense (Adnan, 2010). Esos son los pasos previos en el análisis de ADN utilizados por el científico para

detectar trastornos genéticamente inclinados, producir ADN de dedo por medio de biometría, y crear

organismo genéticamente modificado que puede proporcionar productos beneficiosos como antibióticos, insulina,

y hormonas (Jie, 2018).

Según el Libro de Texto Virtual de Alaska BioPREP (s.f.), los pasos básicos de la extracción de ADN son

1) lisis, 2) precipitación, y 3) purificación. La lisis utiliza detergentes y enzimas como

Proteasa K para liberar el ADN y disolver proteínas celulares. Además, la precipitación separa

El ADN de estos desechos celulares y el alcohol juegan un papel importante para que el ADN se precipite.

la solución acuosa porque no es soluble en alcohol. Y para la purificación, es el proceso de

enjuagar con alcohol para eliminar cualquier material indeseado y desechos celulares restantes.

En este experimento de laboratorio, los estudiantes utilizaron Ananas comosus (piña) como un

muestra para la extracción de ADN. Además, también pudieron analizar la pureza y

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concentración de ADN de A. comosus utilizando un espectrofotómetro. Este experimento tenía como objetivo el

estudiantes para saber cómo aislar ADN en un espécimen de planta y también para adquirir conocimientos

sobre la importancia del ADN en todos los organismos vivos.

METODOLOGÍA

Este capítulo discutirá los procedimientos realizados por los estudiantes con el objetivo de extraer ADN.

de piña utilizando los métodos dados y medir la absorbancia y su relación, el ADN

concentración y concentración de proteínas del ADN disuelto.

Materiales

Las herramientas y equipos fueron prestados del almacenamiento del laboratorio escolar y otros

los suministros fueron comprados por los estudiantes. La tabla a continuación muestra los materiales necesarios para ejecutar

el experimento.

Table 1. Supplies and its Function

SUPPLIES FUNCIÓN

Piña Fruta a ser extraída

5-7 ml de líquido para lavar platos Joy Destruye la membrana plasmática

250ml de agua destilada Medio

100ml of ice cold alcohol ( 95% ethanol) Permite que el ADN se precipite

1-2 cucharadas de sal yodada Hace que el ADN sea menos hidrofílico

50 ml de tubos de hielo Permite que la solución esté a una temperatura fría

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Tabla 2. Herramientas y su Función

HERRAMIENTAS FUNCIÓN

Vaso de precipitados Almacenamiento para el medio

Manejando el ADN sin mezclarlo de nuevo con el

Asa de inoculación
solución

Pipeta de vidrio Extracción del producto cuando es visible

Cristal de reloj Secando la muestra de ADN

Tubos de ensayo Adquiriendo un pequeño lote de soluciones

Soporte de muestra en espectrofotómetro especialmente

Cuvette
hecho de vidrio de cuarzo.

Cubo de hielo Contenedor para el baño de hielo.

Tabla 3. Equipos y su Función

EQUIPMENT FUNCIÓN

Mezclador Para destruir la pared celular

Equipo para medir los solutos por

Espectrofotómetro (Shimadzu uv-1800) medir la luz absorbida por la solución en

la solución

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Procedimientos

Aunque los métodos utilizados para las extracciones de ADN varían un poco, los objetivos permanecen los mismos.

mismo: liberar ADN destruyendo la pared celular y la membrana celular de la célula, y precipitar

ADN fuera de solución para que pueda ser visto. Componentes comunes de un laboratorio de extracción de ADN

incluye: Alcohol, detergente o líquido para lavar platos servirá, y sal. Los procedimientos del

el experimento se divide en tres pasos, a saber, extracción, dilución y espectrofotometría.

Extracción

Los estudiantes enfriaron el agua destilada y el alcohol en el congelador para un propósito posterior.

Simultáneamente, toda la piña se peló y solo se utilizarán 2/3. Se cortó

en trozos pequeños y inmediatamente lo pone en la licuadora junto con hielo y mezcla lentamente

hasta que se convierta en un puré de fruta o se parezca a un batido de piña. Una vez hecho, agrega la extracción

solución hecha de 5-7 ml de detergente para platos y una cucharada de sal yodada. Agregando

La sal (NaCl) en una solución que contiene ADN neutraliza las cargas negativas del ADN.

molécula, haciendo que las moléculas de ADN separadas sean más propensas a agruparse y convertirse en

visible. La sal puede hacer esto porque los iones de sodio y cloruro se separan en solución

y los iones de sodio positivos (Na+son atraídos por las cargas negativas del ADN

grupos fosfato, neutralizando así la carga negativa. Porque cada nucleótido de la

La molécula de ADN posee un grupo fosfato cargado negativamente, el ADN es negativo

molécula cargada. Por lo tanto, las moléculas de ADN no se atraen entre sí, sino que son

repelidos por la carga similar que poseen, por eso los estudiantes fueron añadidos sal a la

puré de piña. En este paso, el detergente descompone las membranas celulares en las que se encuentra.

contiene lauril sulfato de sodio, que limpia los platos eliminando grasas y proteínas. Actúa

de la misma manera en el protocolo de extracción de ADN, separando los lípidos y proteínas que

forman las membranas que rodean la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas son

se rompe, el ADN se libera de la célula. La sal elimina las proteínas que están unidas

al ADN (Fig. 1). Se agregó agua fría para mantener baja la temperatura de la solución.

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Dado que el uso de agua helada aumentará el rendimiento de ADN. Deje la solución homogeneizada

en la licuadora durante unos 20 minutos hasta que las burbujas lleguen a la superficie de

solución. A continuación, se despejaron las burbujas en la parte superior de la solución homogeneizada y la

la solución se colocó en un vaso de precipitados y luego se transfirió finalmente a cinco (5) tubos de ensayo. Idealmente, se encuentra

mejor si hay un colador para filtrar las cosas no deseadas en la solución, como las que no están mezcladas

cosas de piña que son irrelevantes para el experimento. También contiene sal que proporciona un

un ambiente adecuado para las células, comienza a descomponer las proteínas en la célula, y más tarde,

ayuda a que el ADN se separe de los otros componentes celulares para poder verlo. Los trozos

que caían al fondo del contenedor eran proteínas y otros fragmentos celulares agrupándose

junto con la ayuda de la sal. Esto hace que la solución de ADN esté un poco más limpia. En este

punto, el ADN y un grupo de otras partes celulares, proteínas y lípidos flotando alrededor en un

una solución que es principalmente agua; se llama solución acuosa. Ahora, está lista para precipitar.

el ADN, quita el alcohol del congelador. Los estudiantes inclinaron el tubo de ensayo

containing the pineapple mush and carefully poured the cold alcohol inside of the test tube

porque al hacer esto no se mezclará con la solució[Link]: en este punto no agites el

tubo de ensayo. El alcohol debe estar al doble del volumen de la solución de ADN (Fig. 2). Después de

Vertiendo alcohol sobre él, el tubo de ensayo se colocó en la cubeta de hielo que contenía hielo para regular la

frialdad de la solución, luego después de alrededor de 10 minutos, usando el lazo de inoculación el

el alcohol se agitó en parte del tubo de ensayo, asegúrate de que el puré de piña de abajo esté

sin alterar. Al agitar la parte alcohólica, comienzan a salir partículas blancas y eso es lo

ADN de la piña (Fig. 3). El ADN es soluble, o se disuelve en agua, pero es insoluble en

alcohol, por lo que el ADN que toca el alcohol en la interfaz. El alcohol frío ayuda el

El ADN precipita (se solidifica y aparece) más rápidamente. El agua salada ayuda a que el ADN precipite.

(solidificarse y aparecer) cuando se agrega alcohol.

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Figura 1. Puré de piña con Figura 2. Puré de piña con Figura 3. ADN de la piña

sal y detergente líquido etanol al 95% (precipitado blanco)

Dilución

Los estudiantes utilizaron el lazo de inoculación para agitar la parte de alcohol del tubo de ensayo para

separarlo y utilizar el gotero de vidrio para sorber las partículas blancas que son el ADN de

la piña (Fig. 4). Después de obtener algo de ADN, lo liberó cuidadosamente en el vaso de reloj

y poner el ventilador eléctrico, esperar hasta que no haya líquido en el vidrio de reloj (Fig. 5). Dos pruebas

se prepararon tubos; uno tiene el ADN extraído con 5 mL de agua destilada y el otro

tubo de ensayo con 5 mL de agua destilada solamente. Luego, el ADN fue diluido y asegurarse de que

no hay partículas visibles (Fig. 6). Y por último, se transfirió a la cubeta.

Figura 4. Sorbiendo el ADN en Figura 5. Transferir para ver Figura 6. Tubo de ensayo con ADN extraído mezclado
y 5 mL de agua destilada (izquierda) y tubo de ensayo con
tubos de ensayo vidrio para secarlo 5 mL de agua destilada solamente (derecha)

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Espectrofotometría

Los estudiantes vertieron la solución de ADN diluido en un soporte de muestra llamado cubeta y

vertí agua destilada en otra cubeta como una referencia en blanco que también se encuentra en el

solución de muestra excepto la sustancia que los estudiantes están tratando de analizar o medir. En

en este experimento de laboratorio, se midió la absorbancia del ADN que fue

disolver en agua destilada (Figuras 7 y 8). El blanco de referencia en este caso sería

agua sola. Porque otros compuestos en una solución (o el disolvente mismo) pueden absorber el

las mismas longitudes de onda que el compuesto que se está analizando, se compararon los estudiantes

la absorbancia de nuestra solución de prueba a un blanco de referencia.

Antes de encender el interruptor de alimentación, asegúrate de que no hay nada colocado en el

compartimento de muestra y soporte para celdas. Mantenga la tapa del compartimento de muestra cerrada durante

medición o corrección de 100 %T (0 Abs) (Figuras 9, 10 y 11). Cualquier luz exterior

detectado en el espectrómetro puede interferir con la medición y corrección precisas.

Cuando se encendió la alimentación del instrumento, el UV-1800 comienza a ejecutar varias comprobaciones

y las inicializaciones. Los estudiantes dejaron que su profesor realizara el proceso de inicio de

espectrofotómetro. Se mostró la pantalla del menú de modos en el espectrofotómetro.

La función del Bio-Método está seleccionada. Como se seleccionó, [7. Bio-Método] en el [Modo

pantalla del menú, aparece la pantalla para seleccionar un método de cuantificación. Seleccione el elemento

número para la cuantificación de ADN [Cuantificación de ADN]. La medición se realizó en

especificó dos a tres longitudes de onda fijas y obtuvo la concentración de ADN y

proteínas y relación de absorbancia, basada en las absorbancias medidas. Los estudiantes pueden

elija cualquier longitud de onda para las mediciones, incluida la más comúnmente utilizada

longitudes de onda (260 nm/ 230 nm o 260 nm/280 nm). Pero en este experimento el 260nm/ 280

se seleccionó nm. Los estudiantes también establecieron los parámetros deseados para calcular el

Concentraciones de ADN y proteínas en las muestras. Después de establecerse en la longitud de onda deseada, se

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listo para comenzar la medición. La pantalla de medición muestra el número de muestra.

absorbance values A1, A2, and absorbance ratio A1/A2 as well as DNA and protein

Las concentraciones. Los estudiantes registraron los resultados de las mediciones y hicieron una tabla.

comparar los datos con los otros grupos.

Figura 7. Vertiendo agua destilada Figura 8. Solución de Dilución Figura 9. Encendiendo el

dentro de la cubeta Espectrofotómetro

Figura 11. Muestra de referencia en blanco

Figura 10. Colocando la cubeta
dentro del compartimento en una cubeta
en el soporte de muestra
portador

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RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Este capítulo presenta las observaciones y resultados del experimento de laboratorio que se siguió

a través de una discusión de los hallazgos experimentales. Se extrajo ADN de Ananas comosus

(Piña) y se probó usando un espectrofotómetro. Luego, se obtuvieron los siguientes resultados.

Se formó una capa separada en la parte superior del líquido de piña después de añadir etanol frío al 95%.

Después de un minuto de observación, una nube blanca y esponjosa en la interfaz entre los dos líquidos se convirtió en

visible como se muestra en la Figura 1. Este precipitado blanco era el ADN extraído de la piña.

Figura 12. Apareció un precipitado blanco en los tubos de ensayo.

Uno de los métodos para medir la pureza y concentración del ADN es la absorbancia (óptica

densidad) que se mide utilizando un espectrofotómetro. Se obtuvieron datos de diferentes grupos.

y en términos de Relación de Absorbancia (Relación ABS), el Grupo A tiene 0.8097 (más bajo) y el Grupo D tiene

1.0577 (máximo). Además, el Grupo A tiene el valor más alto de concentración de ADN y proteínas

(7.2650 y 456.83, respectivamente) y el Grupo E tiene el valor más bajo (1.9596 y 49.785,

respectivamente).

Según [Link], las lecturas de absorbancia se realizan a 260nm (A260) donde

El ADN absorbe la luz con mayor intensidad. Oxford Gene technology (2011) agregó que es común que

muestras de ácidos nucleicos pueden contaminarse con otras moléculas como proteínas. Específicamente, el

los aminoácidos tirosina y triptófano tienen una absorción muy específica a 280 nm, lo que permite una detección directa

A280medición de la concentración de proteínas (El Hombre de Proteína, 2016). En ese caso, el

ratio de absorbancia (A260/280) dirá cuán pura es la muestra de ADN. Y con los resultados, Grupos

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D y E han considerado tener buenas muestras de ADN extraído ya que la relación registrada fue

cerca en A260/280una relación de 1.7-2.0 que, según [Link], se considera buena.

ADN de calidad. Por otro lado, un mayor A2 (280 nm) puede resultar en una mayor concentración de proteínas

menos pureza y más contaminado (Grupos A, B, C).

Según Sweeney (s.f.), el cloruro de sodio ayuda a eliminar proteínas que están unidas a

el ADN. También ayuda a mantener las proteínas disueltas en la capa acuosa para que no

precipitar en el alcohol junto con el ADN. En eso, se agregó una menor cantidad de sal durante el

actividad de laboratorio ya que la mayoría de los grupos obtuvieron alta concentración de proteínas.

Tabla 1. Análisis Espectrofotométrico de las Muestras de ADN Extraídas de Ananas

comosus(Pineapple)

A1 A2 ADN Proteína
Grupo Proporción ABS
(260.0 nm) (280,0 nm) Concentration Concentración

A 0.3940 0.4866 0.8097 7.2650 456.83

B 0.2471 0.2871 0.8607 5.2070 258.45

C 0.2834 0.3399 0.8338 5.5895 312.91

D 0.0733 0.0693 1.0577 2.1158 52.044

E 0.0687 0.0656 1.0473 1.9596 49.785

Nota: DESTACADO EN AZUL - Análisis espectrofotométrico de muestras de ADN de los autores

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REFERENCIAS

Alberts, B., et al. (2002). Biología Molecular de la Célula, 4ta ed. Ch. 4. Garland Science: Nueva
York. ISBN: 978-0815316206.

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