Los Inhibidores PARP1 Alejandro Reyes Morales1, Eduard Naranjo Vargas1, Andrs Felipe Cardona2-4, Henry Becerra2, Jorge
Miguel Otero2,3
1Departamento 2Grupo
de Medicina Interna, Hospital Universitario Meissen, Bogot, Colombia
Oncologa Clnica y Traslacional, Instituto de Oncologa Carlos Ardila Llle, Fundacin Santa Fe de Bogot, Bogot, Colombia
3Fundacin
para la investigacin Clnica y Molecular Aplicada del Cncer FICMAC; Investigador asociado ONCOLGroup
4Red
Iberoamericana de la Colaboracin Cochrane
Durante el ciclo celular normal ocurren daos en el ADN, ya sea espontaneos o secundarios a la exposicin a sustancias ambientales, radioterapia o quimioteraputicos; hay 4 tipos principales de dao en el ADN a procesos endgenos; la oxidacin de bases, alquilacin de bases, hidrlisis de bases como la desaminacion, la depurinacion o depirimidinacion y el malfuncionamiento de las bases; y los daos producidos en el ADN por agentes exgenos como los rayos ultravioleta, radiacin ionizante, disrupcin trmica, virus o por productos qumicos industriales.4. La reparacin del ADN integra una serie de procesos en donde se identifica y se corrigen los daos en el genoma humano y su eficiencia depende del tipo de clula, edad y el ambiente extracelular que la rodea, hay 5 vas de reparacin ADN para conservacin de la integridad genmica en una clula normal; Los sistemas de reparacin directa, la reparacin por escisin (BER, NER y MMR), los Sistemas de Tolerancia (Sistemas SOS), los sistemas de recuperacin (Recombinacin) y la reparacin de rupturas de doble cadena (recombinacin homologa y NHEJ Unin de extremos no homlogos). Sistemas de Reparacin Directa Son Sistemas en los que intervienen enzimas que revierten directamente el dao en el ADN sin que requieran la sntesis de ADN, como la reparacin producida por los rayos ultravioleta. La Reparacin por Escisin (BER, NER y MMR) Este sistema de reparacin es usado cuando una de los las dos cadenas de la doble hlice de ADN se encuentran daadas, eliminando el nucletido daado y sustituyndolo por el nucletido complementario. BER (Reparacin por Escisin de Base) mecanismo que repara el dao en un nico nucletido secundario a oxidacin, alquilacion, hidrlisis y desaminacion; la base a reparar es retirada por la glicosilasa y es reparada por la ADN ligasa. NER (Reparacin por Escisin de Nucletido) mecanismo que repara los daos que afectan un porcin entre 2 y 30 bases, as como ruptura de cadena nica. MMR (Reparacin del Malaprareamiento) mecanismo que corrige
errores en la replicacin y recombinacin del ADN que resultan l en malapareamiento sin que haya dao en el ADN especficamente. Sistemas de Tolerancia El mecanismo es llevado a cabo por una polimerasa especial que es capaz de realizar sntesis translesiva sin que se requiera molde, de este modo se evita la muerte celular a expensas de un elevado nmero de mutaciones. Reparacin de Rupturas de Doble Cadena La ruptura de las dos cadenas de la doble hlice del ADN es altamente nociva para la sobrevida celular, por lo que se ha desarrollado 2 mecanismos de reparacin para esta lesin. La unin de extremos no homlogos (NHEJ del ingls Non-homologous DNA End Joining), en donde acta la ADN ligasa IV que junto con el cofactor XRCC4 une directamente los dos extremos. Y la Reparacin Recombinativa (tambin conocida como reparacin asistida por plantilla o reparacin de recombinacin homloga) la cual requiere la presencia de una secuencia casi idntica para reparar la ruptura como plantilla El Sistema PARP1 - Poli (ADP-ribose) polimerasa Estructura de la Poli (ADP-ribose) polimerasa Estas protenas hacen parte de una familia de enzimas de sealizacin celular, constituida por las PARPs, PARP Vault (Bovedas) y las Tankirasas.4 Es una enzima nuclear presente en las clulas eucariotas es altamente conservada en los vertebrados (92% de homologa entre las clulas humanas y ratones)-, tambin conocida como Poli (ADP-ribose) sintetasa y poli (ADP-ribose) transferasa, de las cuales la mas caracterizada es la parp1 que tiene un peso molecular de 116 kDa y codificada por el gen ADPRT (ADP ribosil tranferasa).3, 4 Involucrada en mltiples procesos celulares entre ellos (la) inflamacin, reparacin de ADN y, muerte celular y en la fisiopatologia de multiples procesos patolgicos como infartos cerebrales, miocardicos, diabetes, choque, desordenes neurodegerativos, alrgicos, enferemedades inflamatorias y cncer entre otros procesos.4 Se han descrito hasta 17 protenas que conforman la familia de la PARP, cada una con diferentes funciones a nivel celular. En las PARP1 se han descrito clsicamente 3 dominios descritos por diferentes autores (Mazen 1989, Murcia 1994, Schreiber 1995 y Smith en 2001) cada uno con diferentes funciones (Ver Caja 1). 3 Caja 1. Dominios Estructurales de las PARP El dominio de unin al ADN El dominio de auto modificacin Un dominio C-terminal cataltico
El dominio de unin al ADN est compuesto por 2 dedos de zinc, los cuales sirven para la unin al ADN daado causando cambio conformacional en las hebras de ADN; esta actividad es independiente de los otros dominios (Ver Figura 1).3 El segundo dominio de automodificacion es responsable la separacion de la PARP1 del ADN despus de su catlisis como un mecanismo de autoregulacin de su actividad enzimatica.3 Y un tercer dominio C terminal catalitico Se ha descrito en otros artculos un cuarto dominio con actividad clivaje de caspasas, esta actividad tiene un papel importante en la muerte celular programada. Las PARP se encuentran en las clulas nucleadas y su papel importante es el de detectar rupturas tanto de una sola hebra (SSB- del ingles single strand DNA breaks) como de la doble hebra ADN adicionando unidades de ribosa a los grupos carboxilo en los residuos de aspartato y glutamato de las protenas blanco y asi sealizando a la maquinaria de reparacin celular entre ellas la ADN ligasa III y la ADN polimerasa beta (Figura 2). 2-4 Figura 1. Estructura de la PARP1
Modificado de 3.
Figura 2. Funcion de la PARP
Pendiente pedir autorizacion
Al localizar el dao en el ADN ocurre la formacin de homodimeros de PARP1, los cuales calatizan NAD+ a nicotinamida y ADP ribosa, la cuales son usados para la sntesis de polmeros similares a los acidos nucleicos, que a su vez se unen covalentemente a receptores proteicos nucleares.3 Regulacion de la Actividad PARP1 Se han descrito varios mecanismos de regulacin, el ms conocido e importante es la Auto poli ADP ribosilacion descrito por el doctor Kawaichi y colaboradores en 1981; adems, se ha descrito un mecanismo de retroalimentacin negativa mediado por la nicotinamida producto de la transformacin de NAD+. Adicional a la nicotinamida otros inhibidores descritos entre los que se encuentran la inosina, adenosina y las purinas hipoxantinas. Este ultimo mecanismo es de importancia en estados patolgicos en los cuales los niveles de estas purinas se encuentran elevados.3 Otro mecanismo descrito en la literatura principalmente por los grupos de los doctores Tanaka y Bauer y colaboradores es la fosforilacionde las PARP por la protein cinasa C (Ver Caja 2). 3 La poli ADP ribosilacion es un proceso dinamico con una duracin menor a 1 minuto, este proceso es adems regulado por 2 enzimas la poli ADP ribosa glicohidrolasa (PARG) y la ADP ribosil protein liasa.3 Estas enzimas, principalmente la PARG, tiene efectos importantes en la autorregulacion de la PARP1 (Figura 3), se han usado inhibidores de la PARG entre ellos la
gallotannina y la nobotanina b, quienes han tenido un efecto citoprotector al estress oxidativo en las clulas epiteliales pulmonares y en los keratocitos HaCaT. La inhibicin de PARG da como resultado una hiperautopoli ADP ribosilacion de las PARP produciendo una inactivacin de su funcin.3 Caja 2. Mecanismos de regulacin de las PARP Autoribosilacion Regulacion negativa: Nicotinamida, Adenosina, Inosina y las purinas hipoxantinas Forforilacion por la Protein Cinasa C Figura 3. Rol de la PARG en la reactivacin de la PARP.
Pendiente modificacion
Aunque la rutura de las hebras de ADN es el mecanismo primordial de activacin de las PARP, el doctor Homburg y sus colabradores han publicado una diferente ruta de activacin de las PARP mediante la via de la fosfolipasa C-Inositol trifosfato-Calcio, aunque se desconoce el papel biolgico de esta via de activacin.3 Funciones de la PARP1 Los roles biolgicos 1. Reparacin de ADN y mantenimiento de la integridad genmica
2. Regula varias protenas a nivel transcripcional, especialmente en mediadores inflamatorios y en la expresin del antgeno leucocitario humano II. En esta funcin los PARP actuan como coactivador del factor nuclear NF-kB (Aunque no hay claridad en la forma de coactivacion). Adicionalmente, existe un papel en la poli ADP ribosilacion de las histonas, ya que estas ultimas son tambin consideradas aceptores de la poli ADP ribosa, lo cual le confiere una carga negativa, causando la repulcion electrosttica de estas con el ADN. Este preoceso adicionalmente esta involucrado en la remodelacin de la Cromatina, la reparacin dela ADN y tambin participa en la regulacin transcripccional.3 3. Regula la replicacin y la diferenciacin celular. Se han involucrado las PARP en las mltiples interacciones con las molculas de replicacin conformando con estas el complejo de replicacin multiproteina. (Ademas, de la interaccion antes descrita con las histonas.) 4. Regulacion en la actividad de las telomerasas. Esta funcin se encuentra sustentada en una PARP recientemente descrita tankirasa 1 que produce elongacin de los telomeros. 5. Tambin involucrada en los procesos de (Muerte) muerte celular. La sobreestimulacion de las PARP por dao genmico severo conlleva a una deplecin de NAD+ y ATP con consecuentemente muerte celular (Figura 4).3, 4 Al ser estimulado PARP la clula muere por apoptosis, proceso que resulta menso lesivo para el medio que la rodea que la muerte por necrosis donde el contenido celular s liberado generando una cascada inflamatoria que resulta nociva para el tejido celular que la rodea (5). 6. Mecanismo de produccin de energa descrito por el doctor Maruta, Matsumura y Tanuma (S) en 1997 mediante la produccin de ATP en la excision de bases. 7. Estn involucrados en la lesin que produce los agentes oxidantes sobre el DNA, hecho que demostr Hller y cols, Grazia y cols al evidenciar que las clulas y los fibroblastos pulmonares de ratones PARP-/- son resistentes a la accin oxidante de peroxinitrito (5). 8. Degradacion de protenas intracelulares como una funcion similar a la Ubiquitinacion. Principalmente en las histonas. 9. En otros multiples procesos celulares indirectamente mediante la poli ADP ribosilacion de diferentes molculas celulares como histonas, XRCC1, p53 y la ADN polimerasa, y por lo tanto modificando su funcin. 10. Regulacin de la organizacin del Citoesqueleto. Se ha descrito alteraciones en el citoesqueleto de celulas con sobrexpresion de PARP1; sin que se haya logrado identificar un efecto (es) directo o (si este es) secundario a (la) otros mecanismos.3 Figura 4. Muerte celular secundario a la sobreactivacion de las PARP
Solicitar autorizacin al autor 3.
Virag y Szabo explicaron que hay tres vas que toma la celula segn la intensidad del dao sobre el DNA: 1. Una lesin leve activa PARP1 y hace reparacin celular al estimular enzimas reparadoras como XRCC1 y DNA-PK con lo cual la celula queda sana, esta situacin, puede ser aprovechada en el tratamiento antitumoral . 2. Un dao moderado sobre el DNA, induce apoptosis y durante esto las caspasas rompen al PARP1 en dos pequeas fragmentos (p89 y p24) , de esta manera , al desactivar PARP1 se asegura que no vaya a reparar clulas que estn muy lesionadas y que repararlas podra ser peligroso y adems se asegura que la muerte celular sea programada, no por necrosis. 3. Cuando hay un dao severo sobre el DNA , se sobreestimula PARP , con lo que se genera una deplecin de las fuentes de energa: NAD+ y ATP con lo cual se deterioran las funciones celulares; Esto explica por que usar inhibidores de PARP permite que las clulas tengan niveles adecuados de ATP para completar el necesario paso de la apoptosis . (5)
Conociendo la funcin de las protenas de la familia PARP se ha estudiado la inhibicin de su funcin en diversas patologas como DM , Artritis reumatoide, lesiones vasculares tipo IAM, Stroke, ciruga cardiovascular y tratamiento antineoplasico bien sea en monoterapia o como coadyuvante de la quimioterapia y la radioterapia .(5) Uso en cncer : En gliomas recurrentes, oligonendrogliomas, metstasis cerebrales de tumores solidos, linfoma cerebral, melanoma maligno metastasico, se ha usado un agente alquilante : temozelomida(TMZ) Sin embargo algunos de estos tumores son resistentes a su accin alquilante precisamente por la reparacin iniciada por PARP lo que ha motivado estudios en vivo para aumentar su eficacia asocindolo a un inhibidos de PARP (PARP-Inh).(5)
Tentori y colegas aportaron la primera evidencia en vivo, de esta asociacin al administrar una inyeccin intracerebral de NU1025 (PARP-Inh) con lo cual se logro aumentar la sobrevida de ratones con linfoma intracerebral . Aunque la via intralesional tiene la ventaja de potenciar localmente la accin de TMZ sin aumentar la toxicidad sistmica, esta modalidad podra ser inadecuada en malignidad del SNC cuando hay compromiso difuso o multifocal . Sin embargo cuando se administra sistemticamente NU1025 , no afecta la sobrevida de animales tratados con TMZ, debido a su muy limitada penetrancia en el SNC . (5). Posteriormente se desarrollo el GPI 15427, apto para el uso via oral con una vida media de 4 horas frente 90 minutos de TMZ y cuya ventaja es mayor biodisponibilidad en LCR y con este se aumento la eficacia de TMZ (reduccin de masa tumoral y numero de sitios infiltrados) frente a glioblastoma multiforme, linfoma cerebral y melanoma maligno intracraneal. (5,6). Posteriormente Curtin y cols demostraron que al dar una inyeccion intrapertioneal de un PARP-I, el: AG 14361 , creado por Pfizer reduce la actividad de PARP carcinoma de colon , permitiendo una sensibilizacin de las clulas tumorales, al efecto de TMZ y aumento de flujo sanguneo hacia el area cancergena. (5) En el tratamiento del cncer de colon se ha usado bloqueadores de la topoisomerasa 1 :Irinotecam y Topotecan, efecto que se ha potenciado con algunos PARP-Inh :CPT 11, AG14361, CEP 6800. Por otra parte la admnistracion intraperitoneal de AG14361 ha aumentado la respuesta a la radioterapia si se administra antes de esta.
Catabolismo de las Pilo ADP ribosa- Pilo ADP ribosa Glicohidrolasa Los PARP1 son una nueva clase de medicamentos antineoplsicos,
El Iniparib es uno de los medicamentos en desarrollo para la administracin intravenosa, el cuel puede ser administrado como monoterapia o en combinacin con otros agentes quimioteraputicos, y quien tiene mltiples estudios in vitro e in vivo que demuestra su efectividad en estudios preclinicos.1
Referencias 1. Liang H, Tan AR. Iniparib, a PARP1 inhibitor for the potential treatment of cancer, including triple-negative breast cancer. IDrugs. 2010 Sep;13(9):646-56. 2. Piskunova TS, Yurova MN, Ovsyannikov AI, Semenchenko AV, Zabezhinski MA, Popovich IG, Wang ZQ, et al. "Deficiency in Poly(ADP-ribose) Polymerase-1 (PARP-1) Accelerates Aging and Spontaneous Carcinogenesis in Mice". Curr Gerontol Geriatr Res. 2008: 754190. 3. Lszl V, Csaba S. The therapeutic potential of poly(adp-ribose) polymerase inhibitors. Pharmacological reviews vol. 54, no. 3, 375 - 429 4. Cepeda V, Fuertes M, Castilla J, Alonso C, Quevedo C, Soto M, et al. Poly(ADP-Ribose) Polymerase-1 (PARP-1) Inhibitors in Cancer Chemotherapy. Recent Patents on anti-cancer Drug Discovery. 2006: 1; 39-53. 5. Grazia G, Csaba S. Clinical Perspectives of PARP inhibitors. Pharmacological Research 52 (2005) 109-118 6. Tentori L, Leonetti C, Scarsella M, dAmatiG, Portarena I, Zupi G, y cols . Combined treatment with Temozelomide and poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor enhances survival of mice bearing hematological malignancy at the CNS site . Blood 2002; 99: 22414
tambien se ha descrito por el Doctor Tanuma y sus colaboradores otros aceptores o receptores (aunque no propiamente dicho) como las histonas, confirindoles cargas negativas lo que conlleva a la separacin de las histonas al ADN, proceso que se encuentra implicado en el remodelamiento de la cromatina, reparacin del ADN y regulacin transcripcional. Otros blancos de poli ADP-ribosilacion como las histonas han sido descritos como NF-B, AP-2, Oct-1, YY1, BMYB, Proteincinasas dependientes de ADN, p53, la Topoisomerase I, lamina B y B23. 3 el proceso de poli ADP-ribosilacion es de efecto corto (menos de 1 minuto) indicando que es un proceso dinamico.3 regulacin transcripcionales y posttransripcionales tambin se han descrito. A pesar de la identificacin de los mltiples activadores y reguladores los efectos biolgicos de esta via fisiolgica y en estados patolgicos aun no han sido totalmente elucidados.
