UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA
ESCUELA DE POSGRADO
MAESTRIA DE FITOPATOLOGÍA

REPORTE DE PRÁCTICAS
FISIOLOGIA DEL PARASITISMO

LIMA - PERÚ

2022
Contenido
Práctica N°3
EFECTO ESTIMULATORIO DE EXTRACTOS DE PLANTAS EN LA
GERMINACIÓN DE ESPORAS DE HONGOS
1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. MATERIALES Y MÉTODOS.......................................................................................................
3.1. Materiales...............................................................................................................................
3.2. Métodos..................................................................................................................................
3.2.1. Primera Repetición..........................................................................................................
3.2.2. Segunda Repetición.........................................................................................................
4. RESULTADOS...........................................................................................................................
4.1. Primera Repetición..................................................................................................................
4.2. Segunda Repetición.................................................................................................................
5. DISCUSIONES........................................................................................................................
6. CONCLUSIONES.....................................................................................................................
7. RECOMENDACIONES............................................................................................................
8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS............................................................................................
9. ANEXOS.................................................................................................................................
 Práctica N°3
EFECTO ESTIMULATORIO DE EXTRACTOS DE
PLANTAS EN LA GERMINACIÓN DE ESPORAS DE
HONGOS
1. INTRODUCCIÓN

2. OBJETIVOS

Demostrar el efecto estimulatorio o inhibitorio de extractos de naranjas en la germinación

de esporas de algunos hongos patógenos

3. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1. Materiales
- Cultivos de Penicillium digitatum, creciendo sobre un fruto de naranjo
- Extracto de naranja
- Agua destilada en recipiente de vidrio
- Placas de Petri
- Porta-objetos
- Triángulos de vidrio
- Centrífuga

3.2. Métodos
3.2.1. Primera Repetición.
Establecimiento de Tratamientos.

Tratamientos. Se establecieron tres (03) tratamientos (suspensión de conidias +

extracto de naranja) con tres repeticiones y un testigo (solo agua destilada)

TRATAMIENTOS
Concentració Volumen de suspensión de Volumen de extracto
N° Volumen Total
n conidias en H2O destilada de naranja
1 1‰ 999 uL de suspensión de conidias 1uL extracto 1 mL
2 1% 990 uL de suspensión de conidias 10 uL extracto 1 mL
3 1 0/500 998 uL de suspensión de conidias 2 uL extracto 1 mL

Preparación del extracto de naranja. Se filtró jugo de naranja a través de papel de

filtro grueso para eliminar sólidos.

Preparación de suspensión de conidias de P. digitatum. En una placa de petri que

contiene el cultivo de Penicillium digitatum, se agregó agua destilada y una pequeña
gota de Tween 20 para preparar la respectiva suspensión de conidias. Se frotó con una
varilla de vidrio para liberar las conidias.

La suspensión de conidias fue agregada a dos microtubos de 2 mL y se centrifugó a

3,000 rpm por 5 min. Se eliminó el sobrenadante y se resuspendió el sedimento en 1
mL de agua destilada. Luego, se agregó 5 uL de dicha suspensión en un portaobjetos
para observarlos en el microscopio en un objetivo de 10X.
Preparación de ensayos. Se colocó en cada porta-objetos una gota del testigo y al lado
una gota de cada tratamiento.

Testigo Tratamiento
(10 uL H2O destilada) (7.5 uL suspensión de conidias
con extracto de naranja)

Preparación del soporte húmedo. Se colocó un disco de papel de filtro en el fondo de

cada placa de Petri y se humedeció. Luego se colocó un triángulo de vidrio y encima un
porta-objeto.

Figura 1. Preparación de 9 placas Petri que contienen 3 repeticiones

por cada tratamiento. C: control negativo

Figura 2. Se agregó una alícuota de cada tratamiento (suspensión de conidias de P.

digitatum en extracto de naranja) a cada placa Petri de cada repetición.
 Incubación de ensayos. Después de incubar los ensayos por 24 horas a
aproximadamente 25°C, se contabilizó el número de conidias germinadas en cada
tratamiento.

Figura 3. Se colocaron las placas Petri de cada ensayo a una cámara húmeda para facilitar la
germinación de P. digitatum

3.2.2. Segunda Repetición.

Establecimiento de Tratamientos.
Se establecieron cuatro (04) tratamientos (suspensión de conidias + extracto de
naranja) y un testigo (sólo suspensión de conidias)

TRATAMIENTOS
Volumen de suspensión de conidias Volumen de extracto de Volumen
N° Concentración
en H2O destilada naranja Total
1 1‰ 999 uL de suspensión de conidias 1uL extracto 1 mL
2 1 0/500 998 uL de suspensión de conidias 2 uL extracto 1 mL
3 1% 990 uL de suspensión de conidias 10 uL extracto 1 mL
4 10 % 900 uL de suspensión de conidias 100 uL extracto 1 mL
5 0% Suspensión de conidias en agua - -
destilada

Preparación del extracto de naranja.

Se filtró jugo de naranja a través de papel de filtro grueso para eliminar sólidos.

Preparación de suspensión de conidias de Penicillium sp.

En un beacker de 50 mL, se preparó una solución de 25 mL de agua destilada y 10 uL
de Tween. Luego, a partir de una naranja que contiene hongo Penicillium sp., se
obtuvo un raspado de conidias, que con ayuda de un bisturí fue colocado en la
solución anterior, para preparar la suspensión de conidias de Penicillium sp.

Se agregó 2 mL de suspensión de conidias a cinco (05) microtubos de 2 mL y se

centrifugó a 3,000 rpm por 5 min. Se eliminó el sobrenadante y se resuspendió el
sedimento en 1 mL de agua destilada.

Por otro lado, se agregó 5 uL de dicha suspensión en un portaobjetos, sin

cubreobjetos, para observarlos en el microscopio en un objetivo de 10X
Preparación de ensayos. Se colocó en cada porta-objetos una gota del testigo y al lado
una gota de cada tratamiento.

Testigo Tratamiento
(10 uL suspensión de (10 uL suspensión de conidias
conidias en H2O destilada) en extractos de naranja)

Preparación del soporte húmedo. Se colocó un disco de papel de filtro en el fondo de

cada placa de Petri y se humedeció. Luego se colocó un triángulo de vidrio y encima un
porta-objeto.

Incubación de ensayos. Después de incubar los ensayos por 24 horas a

aproximadamente 25°C, se contabilizó el número de conidias germinadas en cada
tratamiento.
4. RESULTADOS
4.1. Primera Repetición
TRATAMIENTO 1 (1 ‰)
T1_R1 T1_R2

T1_R3 Tratamiento N°conidias N°conidias Porcentaje

germinada totales
s
T1_R1 8 53 15.1
T1_R2 5 293 1.7
T1_R3 1 109 0.92

TRATAMIENTO 2 (1 %)
T2_R1 T2_R2

T2_R3
Tratamiento N°conidias N°conidias Porcentaje
germinada totales
s
T2_R1
T2_R2
T2_R3
 TRATAMIENTO 3 (1 0/500)
T3_R1 T3_R2

T3_R3

Tratamiento N°conidias N°conidias Porcentaje

germinada totales
s
T3_R1 8 53 15.1
T3_R2 5 293 1.7
T3_R3 1 109 0.92

4.2. Segunda Repetición

TRATAMIENTO 1 (1 ‰) TRATAMIENTO 2 (1 0/500)

Objetivo 4X Objetivo 4X
Porcentaje de germinación: 0% Porcentaje de germinación: 10%

TRATAMIENTO 3 (1 %) TRATAMIENTO 4 (10%)

 Objetivo 4X Objetivo 40X
Porcentaje de germinación: 70% Porcentaje de germinación: 80%

TESTIGO

Objetivo 10X
Porcentaje de germinación: 0%

5. DISCUSIONES
6. CONCLUSIONES
7. RECOMENDACIONES
8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
9. ANEXOS