Biología molecular en
Virología.
“
Es necesario contar con un
laboratorio sectorizado para
cada paso de la técnica.
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Área de extracción
▫ Manipulación de la
muestra que llega al lab.
▫ Zona limpia libre de
productos de PCR.
▫ Equipada con elementos
destinados solo a este
paso.
▫ Cabina de Bioseguridad. 3
Área de preparación
de mix
▫ Zona donde se
manipulan los reactivos.
▫ Libre de productos de
PCR y no ingresan
muestras.
▫ Cabina o cuarto para
preparación de mix.
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Área de siembra del
ac. Nucleico extraído
▫ Zona donde se agrega al
tubo con la mix la
muestra a evaluar.
▫ Libre de productos de
PCR.
▫ Pipetas y tips solo para
esta tarea.
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Área de PCR
▫ Zona donde se produce
la Reacción en Cadena
de la Polimerasa.
▫ Es en el único lugar
donde se van a encontrar
los termocicladores.
▫ Zona Contaminante.
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Área de corridas
electroforéticas.
▫ Zona donde se siembran los geles
de agarosa para la visualización
de resultados.
▫ Alta presencia de productos de
PCR.
▫ Equipada con fuentes de energía,
cubas de electroforesis y
transiluminador.
▫ Riesgo de contaminación química.
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PCR punto final
¿Qué es?
Es una reacción enzimática in vitro
que amplifica millones de veces
una porción específica de un gen
durante un número establecido de
ciclos repetidos.
El resultado de la reacción, se
visualiza al término de los ciclos
establecidos.
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Visualización de los resultados
▫ Electroforesis en geles de agarosa.
▫ ADN que posee carga negativa migran hacia el polo
positivo.
▫ El gel actúa como un filtro que permite separar los
fragmentos de ADN de acuerdo a su tamaño (pb).
▫ Debe usarse un colorante que tiña al ADN para verlo a
través de una transiluminación.
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M1 M2 M3 M4 MK C- C+
▫ El profesional que realice la
técnica debe conocer el tamaño
del fragmento que busca. .
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Ventajas y desventajas
▫ Ventajas ▫ Desventajas
▫ Sensibilidad y ▫ Mayor riesgo de
especificidad alta. contaminaciones.
▫ Pocos operarios. ▫ Es menos sensible que
▫ Más económica que la la PCR real time.
real time. ▫ Personal altamente
▫ Obtención de capacitado.
amplicones de mayor ▫ Riesgo químico.
tamaño. ▫ Operativamente es
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mas laboriosa.
Aplicaciones
▫ Detección de enfermedades
infecciosas.
▫ Identificación de familias virales .
▫ Identificación de géneros virales.
▫ Tipificación viral.
▫ Generación de amplicones de gran
tamaño para secuenciación.
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Caso
▫ En un establecimiento avícola está ocurriendo
un brote de lo que se cree que es GUMBORO
(flia Birnaviridae). Varias aves han muerto y
otras están en un estado grave. Teniendo en
cuenta el tropismo y el genoma que tiene este
tipo de virus,
▫ Como haría la toma de muestras y que
consideraciones tendría?
▫ Para un diagnóstico por PCR punto final, a que
gen cree usted que estarían dirigidos los
primers? 13
Caso 2
▫ Un grupo de epidemiólogos está realizando un
estudio para ver la prevalencia de VEEV en
poblaciones del vector, a raíz del caso de tres
caballos muertos con sintomatología nerviosa y
sin diagnóstico virológico. Dichos animales
habían sido vacunados contra VEEE y VEEO.
▫ En qué consistiría el muestreo epidemiológico
para evaluar la presencia viral por BM? Y en el
caso de los equinos?
▫ Sobre qué gen piensan que se dirigirían los
primers para detectar al VEEV? 14
Preguntas?
▫ [Link]
e/esp/Health_standards/tahm/3.06.
05_EQUINE_ENCEPH.pdf
▫ Carballal 4ºEd, 2015. Cpítulo 9,
Diagnóstico Virológico
▫ [Link]
nvdis/ir-2013/[Link]
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