CÓDIGO Nº VIGENTE DESDE: PROCEDIMIENTO
BYF 19/08/2025 OPERATIVO
ESTÁNDAR
SUSTITUYE AL DE FECHA: VIGENTE HASTA: TÍTULO:
19/08/2025 20/08/2025 Identificación
REVISIÓN: ÁREA: SECTOR/SECCION: HOJA: 1 de 6
Dr. Cervando Christian Biotecnología y Bioquímica y
Gutierrez Foronda Biodiversidad Farmacia
1. OBJETIVO
Identificar las características macroscópicas y microscópicas del hongo Rhizopus
stolonifer a partir del cultivo de una muestra de frutilla.
2. ALCANCE
Se realizará la obtención, cultivo y aislamiento del hongo Rhizopus stolonifer a partir de
muestra de la frutilla. donde se emplearán técnicas de tinción, observación
microscópica, y pruebas bioquímicas básicas para la identificación del hongo. Este
estudio se limitará a la identificación y caracterización inicial.
3. RESPONSABILIDAD
-De supervisión:
• El Bioquímico Dr. CERVANDO GUTIÉRREZ FORONDA docente de la
asignatura de Biotecnología y Biodiversidad.
-De ejecucion:
• Los estudiantes, de la carrera de Bioquímica y Farmacia del octavo semestre
2025.
• Nayeli Lobo Choque
• Yadira Mamani Flores
• Sidnny Hade Huanca Tola
• Sonia Huanaco Ticona
• Cristyane Shiaskya Laura Adriane
• Rachel Carem Quispe Ochoa
4. FRECUENCIA
Según lo requerido para fines académicos, de investigación o de control en el marco de
la asignatura correspondiente.
El procedimiento deberá realizarse cada vez que se requiera un experimento de
aislamiento y extracción de metabolitos con fines académicos o de investigación.
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Cristyane Shiaskya Laura Adrian Christian Gutierrez Christian Gutierrez
Sidnny Hade Huanca Foronda Foronda
Nayeli Lobo Choque
Yadira Mamani Flores
Carem RachelQuispe Ochoa
ABREVIATURA: POE- BBI-2025 POE-BBI-2025 POE-BBI-2025
FECHA: 26/08/2025 26 /08/2025 26/08/2025
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5. LISTA DE DISTRIBUCIÓN
Estudiantes de octavo semestre de la carrera de BIOQUÍMICA Y FARMACIA que cursan
la materia de BIOTECNOLOGÍA Y BIODIVERSIDAD en laboratorio, sub grupo 5
paralelo 3.
6. DEFINICIONES
Rhizopus stolonifer es un hongo filamentoso perteneciente al filo Zygomycota,
ampliamente distribuido en la naturaleza como saprófito en frutas, verduras y alimentos
con alto contenido de humedad y carbohidratos. Es conocido comúnmente como “moho
negro del pan” debido a su capacidad de colonizar este sustrato, aunque también se
desarrolla con facilidad en frutas carnosas como las frutillas, provocando pérdidas
poscosecha significativas. Su ciclo de vida incluye estructuras reproductivas asexuales
(esporangios y esporangiosporas) y sexuales (zigosporas), lo que le otorga gran
capacidad de diseminación y resistencia en condiciones ambientales adversas (Pitt &
Hocking, 2009).
Uno de los metabolitos secundarios de interés producidos por R. stolonifer es el ácido
oxálico, un compuesto dicarboxílico orgánico de fórmula (C₂H₂O₄), considerado de gran
importancia tanto en procesos fisiológicos como en aplicaciones industriales y
biotecnológicas. Este ácido participa en la acidificación del medio y contribuye a la
descomposición de tejidos vegetales, favoreciendo el avance de la infección en frutas
como la frutilla, ya que debilita la pared celular vegetal y actúa como un factor de
patogenicidad (Guimarães et al., 2019).
En el contexto de la industria y la investigación biotecnológica, el ácido oxálico derivado
de Rhizopus stolonifer presenta interés como producto de fermentación, dado que
puede ser empleado en la producción de agentes quelantes, en la industria textil, de
limpieza, farmacéutica y en procesos de remediación ambiental. A nivel fisiológico, la
acumulación de ácido oxálico en frutas infectadas como la frutilla está asociada a un
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deterioro acelerado de la calidad, reduciendo su vida útil y afectando directamente su
comercialización (Kaur et al., 2020).
7. PRECAUCIONES
7.1. Bioseguridad microbiológica:
• Manipular Rhizopus stolonifer en un área de trabajo limpio, preferiblemente bajo
campana de bioseguridad.
• Evitar la exposición directa a las esporas, ya que pueden causar alergias o
irritaciones respiratorias.
• No consumir alimentos ni bebidas en el laboratorio.
7.2. Protección personal:
• Uso obligatorio de bata, guantes y gafas de seguridad durante todo el
procedimiento.
• Lavado de manos antes y después de la práctica.
• No tocarse ojos, nariz ni boca durante la manipulación del hongo o reactivos.
7.4. Manejo del material biológico:
• Esterilizar el material de vidrio y frutillas antes y después del experimento.
• Todos los residuos contaminados con el hongo deben ser autoclavados o
tratados con desinfectante (hipoclorito de sodio al 10%).
• No abrir placas de Petri infectadas fuera de condiciones controladas.
7.5. Seguridad en el área de trabajo:
• Mantener el área limpia y ordenada para evitar contaminación cruzada.
• Señalizar claramente el material en uso al igual que identificar la caja petri en
uso con etiquetas.
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• Prohibido reutilizar material sin desinfección adecuada.
7.6. Emergencias
• En caso de inhalación de esporas: retirarse a un área ventilada y notificar al
responsable del laboratorio.
• Tener siempre disponible un kit de primeros auxilios y acceso a ducha/lavaojos
de emergencia.
8. ELEMENTOS NECESARIOS
• Caja Petri con la muestra identificada
• Asa bacteriológica
• Cinta adhesiva
• Porta objetos
• Microscopio
• Azul de metileno
• Mechero
9. PROCEDIMIENTO
• Identificar la parte más representativa del hongo
• Abrir la caja Petri cerca del mechero
• Colocar un pedazo de cinta adhesiva sobre el hongo
• Realizar una pequeña presión hasta obtener muestra del hongo
• Colocar una gota de azul de metileno en un porta objetos
• Llevar el trozo de cinta adhesiva con la muestra de hongo adherido hacia el porta
objetos
• Realizar un poco de presión sobre la cinta adhesiva que esta en el porta objetos
• Identificar primero con 10x y luego con 40x
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Procedimiento para la identificación microscópica de Rhizopus stolonifer según Chávez
Díaz, IF (2011). Biocontrol de Rhizopus stolonifer en frutos
1. Se gelifica una placa de medio PDA hasta un espesor de 1 cm.
2. Se corta el PDA gelificado en cubos de 1 cm de largo por 1 cm de ancho.
3. Los cubos se colocan por pares sobre una caja Petri que contiene una capa de
PDA de 3 mm.
4. Con una punta estéril se toca el micelio esporulado de las cepas fúngicas
presumiblemente del género Rhizopus.
5. Se pincha el cubo con el micelio en la parte superior y en los cuatro laterales con
la punta estéril.
6. Se coloca un cubreobjeto estéril sobre el cubo.
7. Se deja incubar a temperatura ambiente hasta que se observen cuerpos
fructíferos esporulados.
8. Para la observación, se toma el cubreobjetos con una pinza estéril y se coloca
sobre un portaobjetos con una gota de azul de tripano.
9. Se observa al microscopio con el objetivo de identificar las cepas por sus
estructuras características del género Rhizopus y determinar la especie usando
claves taxonómicas (como las descritas por Shipper en 1984).
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10. DOCUMENTO RELACIONADOS
• Velázquez-del Valle, Miguel Gerardo, Bautista-Baños, Silvia, Hernández-
Lauzardo, Ana Niurka, Guerra-Sánchez, María Guadalupe, & Amora-Lazcano,
Enriqueta. (2008). Estrategias de Control de Rhizopus stolonifer Ehrenb. (Ex
Fr.) Lind, Agente Causal de Pudriciones Postcosecha en Productos Agrícolas.
Revista mexicana de fitopatología, 26(1), 49-55. Recuperado en 26 de agosto
de 2025, de http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0185-
33092008000100008&lng=es&tlng=es.
• Guimarães, L. H. S., Terenzi, H. F., Polizeli, M. L. T. M., & Jorge, J. A. (2019).
Enzymes and organic acids production by Rhizopus species: Industrial potential
and biotechnological applications. Fungal Biology Reviews, 33(1), 44–56.
https://doi.org/10.1016/j.fbr.2018.12.003
• Kaur, S., Dhillon, G. S., & Brar, S. K. (2020). Microbial production of oxalic acid
and its applications: An overview. Critical Reviews in Biotechnology, 40(6),
821–839. https://doi.org/10.1080/07388551.2020.1727035
• Pitt, J. I., & Hocking, A. D. (2009). Fungi and food spoilage (3rd ed.). Springer.
https://doi.org/10.1007/978-0-387-92207-2
• Chávez Díaz, IF (2011).Biocontrol de Rhizopus stolonifer en frutos de
zarzamora (Rubus fruticosus) empleando microbiota nativa, asociada a la
planta [Tesis de maestría, Instituto Politécnico Nacional].Repositorio Digital
IPN. https://www.repositoriodigital.ipn.mx/bitstream/123456789/8008/1/Tesis%2
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