GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA

Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0

UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Práctica No. 1

NORMAS DE BIOSEGURIDAD LEY 1323. LEY 2020 NB 63001-63002-63003.

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

La transmisión de enfermedades infectocontagiosas por contaminación
accidental en el laboratorio suele ser poco probable si las muestras se
manipulan con precaución. El riesgo más alto está en la contaminación con
sangre o fluidos de pacientes con SIDA, hepatitis A o B, etc. Los errores
más frecuentes en la manipulación de las muestras, que colocan al personal
en mayor riesgo de contaminación accidental, están relacionados a la falta
de conocimientos de las normas de bioseguridad o no aplicar las mismas.

NORMAS DE BIOSEGURIDAD
• Mantener el lugar de trabajo en condiciones de higiene y seguridad
• Evitar maquillarse, fumar, comer o beber alimentos en el sitio de
trabajo.
• No guardar alimentos en los equipos de refrigeración de sustancias
contaminantes o químicos.
• Manejar a todo paciente como potencialmente infectado.
• Lavarse cuidadosamente las manos antes y después de cada
procedimiento.
• Utilizar en forma sistemática guantes plásticos o de látex en
procedimientos que conlleven manipulación de sustancias biológicas y/o
cuando maneje instrumental o equipo contaminado en la atención de los
pacientes.
• Abstenerse de tocar con las manos enguantadas alguna parte del
cuerpo y de manipular objetos diferentes a los requeridos durante el
procedimiento.
• Emplear mascarilla y protectores oculares durante procedimientos que
puedan generar salpicaduras, gotitas aerosoles de sangre u otros líquidos
corporales.
• Usar bata durante la estancia en el laboratorio.
• Mantener sus elementos de protección personal en óptimas
condiciones de aseo en un lugar seguro y de fácil acceso.
• Si usted presenta lesiones exudativas o dermatitis serosas, evitará la
atención directa de pacientes hasta que estas hayan desaparecido.
• Utilizar las técnicas correctas en la realización de todo procedimiento.
• Manejar con estricta precaución los elementos punzocortantes y
desechar en los recipientes indicados a prueba de perforaciones.
• Evitar cambiar elementos punzocortantes de un recipiente a otro.
• Evitar reutilizar el material contaminado, como agujas, jeringas, u hojas
de bisturí.
• Realizar desinfección y limpieza a las superficies y equipos de trabajo
en caso de contaminación.
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
• En caso de rotura del material de vidrio contaminado con sangre u otro
líquido corporal, los trozos de vidrio deberán recogerse con escoba y
recogedor, nunca con las manos, y se depositarán en el contenedor para
punzocortantes.
• Los recipientes para transporte de muestras deben ser de material
irrompible y cierre hermético (tapón de rosca).
• Manipular, transportar y enviar las muestras disponiéndolas en
recipientes seguros con tapa y debidamente rotuladas.
• Las gradillas a su vez se transportan en recipientes herméticos, de
plástico o acrílico que retengan fugas o derrames accidentales. Además,
deberán ser fácilmente lavables.
• Restringir el ingreso a las áreas de alto riesgo biológico al personal no
autorizado, a quien no utilice los elementos de protección personal y a los
niños.
• Disponer el material patógeno en bolsas resistentes de color rojo que
se identifiquen con el símbolo de riesgo biológico.
• Las personas sometidas a tratamiento con inmunosupresores no
deberán trabajar en áreas de riesgo biológico.

MEDIDAS GENERALES DE PROTECCION:

• Lavarse las manos con frecuencia y al quitarse los guantes.
• Usar guantes cuando se manejen líquidos biológicos
• Establecer y respetar áreas sucias y áreas limpias
• No tocar con guantes las áreas no contaminadas.
• No aspirar con la boca sustancias corrosivas a través de la pipeta.
• No maquillarse en el laboratorio.
• No consumir alimentos en las áreas de trabajo.
• No masticar chicle.
• No fumar en las áreas de trabajo.
• No tratar de tapar de nuevo las agujas y depositarlas en los
contenedores adecuados.

LAVADO DE MANOS
El lavado de manos es el método más eficaz para prevenir y evitar
infecciones. Debe realizarse cuando:
• Exista contaminación de sangre o líquidos corporales
• Al completar la práctica y antes de abandonar el área de trabajo.
• Después de quitarse los guantes.
• Antes y después de ir al baño.

Método de lavado de manos

▪ Abrir la llave de agua
▪ Usar cantidad generosa de jabón no abrasivo
▪ Tallar bien todas las superficies de las manos, por lo menos durante
10 segundos.
▪ Limpiar bien abajo y alrededor de las uñas. Enjuagarse con sus
manos hacia abajo.
 GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
▪ Evitar salpicar
▪ Secarse las manos con toallas de papel
▪ Cerrar la llave utilizando una toalla de papel
▪ Botar la toalla en el cesto
▪ Utilizar una crema para evitar resequedad o irritación

MEDIDAS DE SEGURIDAD PARA EL MANEJO DE MUESTRAS

BIOLOGICAS
Son muy importantes las medidas de bioseguridad para la persona que toman
las muestras biológicas, ya que existen un gran número de infecciones, como
hepatitis y VIH, por mencionar algunas, que pueden ser transmitidas por el
manejo de las mismas. Por este motivo a todo paciente que se le tome la
muestra biológica se le debe considerar potencialmente infectado. Las normas
deben aplicarse para todos los pacientes independientemente del diagnóstico.

Equipo de protección

• Bata. Se debe usar bata de manga larga y de algodón y mantenerla

cerrada para protección de salpicaduras.
• Guantes. Se debe usar guantes durante su práctica los cuales deberán
ajustarse bien. En caso de que se rompan se reemplazarán y
desecharán al final de la práctica.
• Cubre bocas. Se debe usar en áreas donde se produzcan
salpicaduras o aerosoles.
• Lentes de seguridad. Se deben usar en las áreas donde se produzcan
salpicaduras o aerosoles.
• Limpieza del área y material de trabajo
▪ El área y material de trabajo deberán mantenerse limpios y libres de
contaminantes.
▪ El material de desecho se colocará en los contenedores especiales.
▪ En caso de derrames de líquidos biológicos, cubrir el derrame con
toallas de papel, aplicar hipoclorito de sodio 1%, dejar reposar 3 – 5
minutos y desechar en el contenedor adecuado.
NORMA BOLIVIANA NB 63001
Bioseguridad – Orientaciones generales para establecimientos de salud:
• Elementos del sistema de gestión de bioseguridad.
❖ Requisitos generales. - El establecimiento de salud debe establecer y
mantener un Sistema de Gestión de Bioseguridad (SGB), cuyos requisitos
son: Política de bioseguridad, planificación, implementación y operación,
verificación y acción correctiva, revisión por la dirección.
• Política de bioseguridad. - La Dirección o responsable del
establecimiento de salud, debe definir la política de Bioseguridad, que
especifique claramente los objetivos generales y el compromiso para la
mejora continua del desempeño de procesos y procedimientos inherentes
al tema.
• Planificación. - Para la identificación de riesgos, su evaluación y control,
donde el establecimiento de salud debe:
o Identificar riesgos.
o Definir estrategias de control y evaluación.
o Implementar medidas preventivas y correctivas necesarias.
o Implementación y operación.
o Estructura y responsabilidades.
o Formación, toma de conciencia y competencia.
 GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
o Consulta y comunicación.
o Documentación.
o Control de documentos y datos.
o Control operativo.
o Preparación y respuesta ante emergencias.
➢ Verificación y acción correctiva.
o Medición del desempeño y seguimiento.
o Accidentes, incidentes, no conformidades y acciones correctivas y
preventivas.
o Registros y gestión de registros.
o Evaluación.
➢ Revisión por la dirección. - La Dirección del establecimiento de salud debe
revisar a intervalos definidos el Sistema de Gestión de Bioseguridad para
asegurar su adecuación y eficacia permanente. El proceso de revisión por la
Dirección debe asegurar que se recoja la información necesaria que le
permita a ésta llevar a cabo la evaluación. Esta revisión debe ser
documentada.
NORMA BOLIVIANA 63002
Bioseguridad – Vocabulario:
Esta norma define y recopila la terminología habitual en el campo de
Bioseguridad en los establecimientos de salud.
DEFINICIONES.
Aerosoles. - Sistemas de partículas sólidas o liquidas muy finas dispersas en
un gas, humo, niebla y/o aire.
Agente Antibacteriano. - Agente que inactiva o impide la multiplicación de
bacterias
Agente antimicótico. - Agente que inactiva o impide la multiplicación de
hongos.
Agente antimicrobiano. - Agente responsable de la eliminación o inhibición
del crecimiento de microorganismos.
Agente antiviral. - Agente que inactiva o previene la replicación viral.
Agentes biológicos. - Cualquier microorganismo con inclusión de los
genéticamente modificados.
Agentes biológicos infecciosos. - Cualquier microorganismo (virus,
bacterias, hongos o parásitos) capaz de causar infecciones o alergias,
toxicidad, enfermedad o muerte del ser humano, animales y plantas, con
inclusión de los genéticamente modificados.
Agente Infeccioso. - Microorganismo (bacteria, virus, hongo, protozoario)
capaz de producir una infección en un huésped susceptible.
Antisepsia. - Uso de un agente químico (antiséptico) sobre la piel u otros
tejidos para evitar la infección inhibiendo el crecimiento de los
microorganismos.
Antiséptico. - Agente químico responsable de controlar o inhibir la
proliferación de microorganismos.
Áreas contaminadas. - Zona donde existe potencial agente biológico o
radioactivo
Área no contaminada. - Zona donde no existe de exposición de agentes
biológicos, químicos o radioactivos.
Asepsia. - Libre de gérmenes o microorganismos.
Bacteria. - Microorganismo unicelular que se clasifica en el reino procariota.
Bacteriemia. - Indica la presencia transitoria de bacterias en la sangre sin
signos generales en el curso de una infección localizada.
Bacteriostático. - Detención del desarrollo de las bacterias y agente que tiene
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
esta acción.
Cabina de seguridad biológica (CSB) o Cabina de flujo laminar. - Cámaras
de circulación forzada de aire, que, según sus especificaciones y diseño,
proporcionan diferentes tipos de protección. Recinto que emplea un ventilador
para forzar paso del aire a través de un filtro de alta eficiencia.
Cadena de Infección. - Representa un conjunto de factores que se relacionan
con un proceso de infección como: agente etiológico, huésped susceptible,
puerta de entrada.
Campana extractora de gases. - También denominada “campana de gases”
recinto ventilado que captura los humos y vapores procedentes de la
manipulación de los productos químicos.
Contaminación. - Presencia de agente infeccioso en superficies orgánicas,
equipamiento, Instrumental, material, paredes, salas, pisos, etc.
Daño. - Consecuencia producida por un evento que afecta la calidad de vida
individual o colectiva de las personas.
Decontaminación. - Uso de medios físicos o químicos para remover, inactivar
o destruir agentes patógenos existentes sobre superficies o artículos.
Desinfección. - Eliminación de gérmenes patógenos y otras clases de
microorganismos por los medios de agentes físicos o químicos.
Desinfectante. - Agente químico que se utiliza sobre objetos inanimados (por
ejemplo, pisos, paredes) para eliminar microorganismos patógenos.
Equipo de protección personal. - Cualquier equipo destinado para ser llevado
o sujetado por el trabajador y que le brinda protección de uno o varios riesgos
que pueden amenazar su seguridad o su salud.
Ergonomía. - Ciencia que estudia las relaciones entre el hombre v el trabajo
que realiza. Trata de adaptar las condiciones
del trabajo a las características fisiológicas v sicológicas del trabajador.
Esterilización. - Destrucción de todas las formas de material viviente
incluyendo bacterias, virus, esporas y hongos.
Etiología. - Parte de la medicina que tiene por objeto el estudio de las causas
de las enfermedades.
Factores de riesgo. - Todos los elementos, sustancias, procedimientos y
acciones humanas presentes en el ambiente laboral que de una u otra forma
ponen en riesgo al trabajador teniendo la capacidad de producir lesión.
Filtro HEPA. - Filtro de aire de alta eficiencia para materiales articulados.
Fomites, Fomes. - Sustancia u objeto cualquiera, no alimenticio, que
conserva y transmite microorganismos infecciosos.
Germicida. - Agente que destruye microorganismos especialmente
patógenos.
Gotas. - Partículas que pueden contener microorganismos infecciosos
Higiene de las manos. - El término que se utiliza para el lavado de las manos.
Hongo. - Microorganismo procariota eucariota, unicelular o pluricelular, que
se clasifica en el reino vegetal.
Implante. - Dispositivo colocado quirúrgicamente en el organismo o la cavidad
oral.
Infección. - Acto de adquirir una enfermedad contagiosa.
Inmunización. - El proceso por el cual una persona es inmune, o se protege
contra una enfermedad.
Jabón antimicrobiano. - Detergente que contiene un agente antiséptico.
Limpieza. - Proceso físico para eliminar material extraño o residual de una
superficie
Patogenicidad. - Capacidad del microorganismo de causar enfermedad.
Peligro. - Situación en la que es posible que ocurra daño o deterioro individual
 GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
o colectivo.
Peligro biológico. - Agente biológico que es potencialmente peligroso para
los seres humanos, animales, plantas y medio ambiente.
Radio nucleótido. - Núcleo inestable de un átomo que emite la radiación
ionizante, producido natural o sintéticamente.
Residuos Peligrosos. - Desechos biológicos, inflamables, combustibles,
irritable, corrosivo, toxico y/o reactivo, dañino a los seres vivos y/o al medio
ambiente.
Resistencia. - Aptitud del huésped para neutralizar a un germen patógeno
Riesgo. - Probabilidad de un peligro de manifestarse y causar un daño
Riesgos Biológicos. - Riesgo relacionado con agentes potencialmente
patógenos que pueden causar daño
Riesgos Físicos. - Riesgos relacionados con agresiones físicas (radiación,
ruidos, vibraciones, temperaturas extremas u otros.)
Riesgo ocupacional. - Lesión o enfermedad ocurrida durante el desempeño
laboral
Riesgos Químicos. - Riesgos relacionados con productos químicos
Técnica Aséptica. - Es un conjunto de medidas cuyo objetivo es la
eliminación o control de microorganismos.
Toxigenicidad.- Capacidad de un microorganismo de producir toxinas
capaces de contribuir al desarrollo de una enfermedad.
Virus. - Cualquiera de los agentes infecciosos más pequeños (20 nm a 300
nm) que se caracterizan por replicar sola mente en células vivas y ser
parásitos absolutos incapaces de generar energía ni de cualquier actividad
metabólica.

REGLAMENTO PARA LA APLICACIÓN DE LA NB 63003

Establecimientos de salud – Requisitos para bioseguridad:
NORMAS DE BIOSEGURIDAD PARA ESTABLECIMIENTOS DE SALUD
CAPITULO I
INSTITUCIONES DE SALUD
ARTÍCULO 15.- (OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN).- Este reglamento
especifica la aplicación de norma NB 63003, para las instituciones de salud,
como requisito fundamental que se debe cumplir en la práctica segura en la
atención a los pacientes, con la finalidad reducir el riesgo relacionado con
agentes físicos, químicos y la transmisión de enfermedades
infectocontagiosas a través de fluidos, secreciones corporales y/o
respiratorias, del paciente y/o cliente internos hacia los profesionales y
viceversa, en el desarrollo de actividades propias y/o impropias.
ARTÍCULO 16.- (RESPONSABILIDAD DEL PERSONAL DENTRO DEL
ESTABLECIMIENTO DE SALUD). - Toda persona que trabaja dentro de una
institución de salud debe cumplir con los requisitos establecidos en la norma:
A.- Los cuales son de cumplimiento individual y general:
➢ Cumplimiento del principio de universalidad.
➢ Higiene personal.
➢ Lavado de manos.
B.- Se refiere al uso de equipos de protección personal (EPP), los cuales
son:
➢ Barreras físicas, que se clasifican en:
• Protección de cara y cuerpo
• Protección de brazos y manos
C.- Eliminación de residuos sólidos. - Se refiere al manejo de los
residuos generados en los Establecimientos de Salud, el cual se
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
encuentra normado en el Reglamento de Residuos Sólidos Generados
en Establecimientos de Salud.
Las disposiciones del reglamento, tienen como base en los siguientes
principios:
Prevención de la generación de residuos sólidos en establecimientos de salud,
orientada a minimizar cantidades y riesgos.
Reducción del riesgo producido por los residuos sólidos, dirigida a disminuir
la peligrosidad de los residuos infecciosos clase A y especiales clase B
(subclase B).
Corresponsabilidad de todos los involucrados en el manejo de los residuos al
interior y exterior de los establecimientos de salud.
Equidad, respecto al derecho de la comunidad hospitalaria a gozar de
seguridad en el ámbito del establecimiento de salud.
Sostenibilidad económico – financiera, en sentido que los costos de manejo y
prestación de los servicios, deben ser cubiertos por los generadores de
residuos.
Constituyen objetivos del reglamento, los siguientes:
Prevenir y controlar los riesgos para la salud pública, ocupacional y ambiental
generados por los residuos sólidos de establecimientos de salud.
Contribuir y propiciar una atención segura en los establecimientos de salud,
mediante el manejo adecuado de los residuos sólidos.
Establecer las responsabilidades del generador y los prestadores de servicios
internos y externos.
Facilitar la coordinación institucional, intersectorial e intra sectorial en los
distintos ámbitos de aplicación de este reglamento.
➣ Prevenir y controlar los riesgos para la salud pública, ocupacional y
ambiental generados por
ARTICULO 17.- (PRECAUCIONES DEL PERSONAL EN AREAS
ESPECÍFICAS). -
Las precauciones específicas deben ser adaptadas según el área de trabajo,
como ser en: servicios de emergencias, servicios de vacunación, nutrición y
dietética, oftalmología y control, radiología, laboratorio, análisis clínicos,
aéreas de producción de antígenos, bioterios y farmacias, neonatología,
quemados, quirófanos y salas de partos, unidad de cuidados intensivos,
morgue - servicios de necropsia
y mortuorios, manipulación de cadáveres, lavandería, manipulación de ropa
hospitalaria, personal de limpieza, mantenimiento de los ambientes
hospitalarios y cocina.

2. COMPETENCIAS. -
• Conoce y aplica las normas de Bioseguridad de un laboratorio de
hematología para aplicar en el campo profesional.

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Tubos con EDTA
Tubos tapa roja sin aditivos 5 Tubos
Tubos con citrato de sodio tapa 5 Tubos
Celeste 5 Tubos
Jeringas
Pinzas anatómicas 5 Piezas 25 ESTUDIANTES
Algodón 5 Piezas
Alcohol 100 Gramos
Hipoclorito 1% 100 Ml
Hipoclorito 0.5 % 100 Ml
Guantes 100 Ml
Papel toalla 2 pares

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. -
Aplicación de normas de bioseguridad para manipulación y desecho de
materiales.

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. -

2 horas de practica

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -

En esta práctica no se aplican cálculos ni mediciones.

7. CUESTIONARIO. –
• ¿Cuáles son las precauciones universales para manejo de material
biológico en el laboratorio de hematología?
• ¿Cuáles son las causas más frecuentes de accidentes
punzocortantes
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Práctica No. 2

TOMA DE MUESTRA Y CONTROL DE CALIDAD EN LA FASE

PREANALITICA PARA HEMATOLOGIA

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

La hematología como el estudio de la sangre y de órganos hematopoyéticos

(medula ósea, bazo sistema linfático), una adecuada extracción y manejo de
las muestras biológicas y en concreto de las muestras de sangre es
fundamental para conseguir dicho objetivo.

La sangre está constituida por una serie de elementos formes o células

sanguíneas en suspensión en un líquido llamado plasma. Se puede por tanto
diferenciar:

a) Células sanguíneas o parte sólida (leucocitos, hematíes, plaquetas)

b) Plasma o parte líquida y suero.

2. COMPETENCIAS. -
• Prepara el material necesario para la obtención de muestra sanguínea por
punción venosa y dactilar.
• Obtiene muestras por punción venosa, sobre la recogida y manipulación
de muestra sanguínea a través de la resolución de problemas
• Obtiene sangre por punción capilar para la recogida de muestra sanguínea
y el análisis clínicos del contexto.
• Utiliza correctamente los anticoagulantes de acuerdo a los exámenes que
se solicitan, a través de la resolución de problemas que se presentan en
el campo de trabajo del profesional.

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Jeringa de 3 ó 5 ml 20 Piezas
Tubos de Hemolisis 40 Piezas
Anticoagulantes de acuerdo a los 2 Ml
exámenes que se van a realizar ( 25 ESTUDIANTES
EDTA) 5 Piezas
Tubos vacutainer con EDTA 100 Gramos
Algodón, 200 ml
 GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Alcohol 20 Frascos
Frascos de penicilina o tubos de
hemólisis con tapa de goma 5 Piezas
Gradilla para tubos de hemolisis 20 Piezas
Portaobjetos 20 Piezas
Tubos capilares sin 20 Piezas
anticoagulante 2 Piezas 25 ESTUDIANTES
Tubos capilares con 10 Pares
anticoagulante, 2 Piezas
Plastilina con porta capilares 2 Piezas
Ligaduras 30 Piezas
Pares de guantes 20 Piezas
Pinzas 5 Piezas
Aplicadores de plástico (gotero) 5 Piezas
Lancetas 5 Piezas
Detergente
Jabón desinfectante
Frascos con hipoclorito para
desechos
Micropipetas 10 – 50 ul
Tips

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. -

4.1 PUNCION VENOSA

1. Registrar los datos del paciente tanto en los cuadernos de registro, como
en los tubos donde se colocará la muestra.
2. Ubicar al paciente en la camilla o en la silla de extracción.
3. Explicar al paciente en lenguaje claro el procedimiento al cual será
sometido
4. Colocarse guantes.
5. Localizar la vena adecuada para la punción (vena cubital interna y la
cefálica, dorso de la mano, dorso del pie)
6. Aplicar la ligadura aproximadamente 7 cm arriba de la fosa antecubital
(pliegue del codo)
7. Pedir al paciente cierre la mano
8. Localizar la vena palpando y visualizando cual es la más apta
 GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
9. Limpiar el sitio de la punción con torunda de algodón impregnada de
alcohol 70% u otro antiséptico cutáneo, con movimiento circular desde
adentro hacia fuera.
10. Fijar la vena con el dedo índice o el pulgar de la otra mano próxima a la
punción para evitar que esta se mueva.
11. Introducir la aguja con una inclinación de 45 a 60° respecto a la vena con
el bisel hacia arriba.
12. Aspirar la sangre, ni muy lento (puede coagularse) ni muy rápido (se
hemoliza).
13. Extraer la cantidad necesaria.
14. Indique al paciente que abra la mano
15. Aplicar algodón seco estéril y retirar la aguja de la vena.
16. Ejercer presión sobre el algodón en el lugar de la punción por 2 a 5
minutos. Preferentemente con el brazo extendido,
17. Vaciar la muestra retirando la aguja haciendo deslizar suavemente por las
paredes del tubo.
4.2. PUNCION CAPILAR.
PROCEDIMIENTO.
1. Realizar la antisepsia del lugar elegido (lóbulo de la oreja, pulpejo del dedo
anular, planta del pie en lactantes (borde externo o interno de la planta del
pie, nunca en el centro o arco plantar)
2. Dejar secar el área.
3. Puncionar con rapidez y firmeza de tal manera que ingrese toda la punta
de la lanceta.
4. Descartar la primera gota.
5. Tomar la sangre que fluye libremente, llenando ¾ partes el capilar, una vez
realizado, esto deben ser sellados con plastilina.
6. Realizar hemostasia por compresión.

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. -

4 horas de práctica
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -
Indicadores de calidad
• Nombre del indicador

• Fórmula para calcular y meta de cumplimiento

número de errores
• Nombre del indicador= x 100
Total de procedimientos realizados

• Justificación de la implementación

7. CUESTIONARIO. -
1. Explique el procedimiento para la toma de muestra en el sistema del
tubo al vacío.

2. ¿Qué anticoagulantes se utilizan en el laboratorio de hematología y en

que proporciones?

3. ¿Cuáles son razones para rechazo de muestras?

GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Práctica No. 3

CONTROL DE CALIDAD EN LA FASE ANALÍTICA DEL LABORATORIO

DE HEMATOLOGÍA

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

Control de Calidad son las técnicas operativas y actividades necesarias
para cumplir con los requisitos de calidad y concierne el monitoreo diario
de los procedimientos realizados en el laboratorio
El control de la calidad (CC) es un componente de la gestión de procesos
y un elemento clave del sistema de gestión de la calidad. Supervisa los
procesos relacionados con la fase analítica del análisis y ayuda a detectar
los errores del sistema de análisis. Estos errores podrían producirse a
consecuencia de un fallo en el sistema, condiciones ambientales adversas
o el rendimiento del operador. El CC proporciona al laboratorio la confianza
de que los resultados de los análisis son exactos y fiables antes de
comunicar los resultados al paciente.
Como parte del sistema de gestión de la calidad, el laboratorio debe
establecer un programa de CC para todos los análisis cuantitativos.
Evaluar cada análisis de esta manera permite al laboratorio determinar si
los resultados del paciente son exactos y fiables. Los pasos para
implementar un programa de CC son: establecer políticas y
procedimientos; y asignar las responsabilidades de supervisión y revisión;
y formar a todo el personal sobre la forma de seguir correctamente las
políticas y procedimientos; y seleccionar buen material de CC; y establecer
intervalos de control para el material seleccionado; y elaborar gráficos para
representar los valores de control, denominados gráficos de Levey-
Jennings; y establecer un sistema para supervisar los valores de control; y
aplicar medidas correctivas inmediatas, si es necesario; y mantener
registros de los resultados del CC y de las acciones correctivas aplicadas.
Los controles son sustancias que contienen una cantidad determinada de
la sustancia que se está analizando (el analito).
Los controles se analizan a la vez y de la misma forma que las muestras
de los pacientes. El propósito del control es validar la fiabilidad del sistema
de análisis y evaluar el rendimiento del operador y las condiciones
ambientales que pueden influir en los resultados. Es fundamental
seleccionar los materiales de control adecuados. Algunas características
importantes que deben tenerse en cuenta cuando se realice la selección
son: y Los controles deben ser adecuados para el análisis diagnóstico
deseado: la sustancia que se mida en el análisis debe estar presente en el
control de forma mensurable. y La cantidad del analito presente en los
controles deberá estar cerca de los puntos de decisión médica del análisis;
esto significa que los controles deberán servir para comprobar tanto los
valores bajos como los altos y los controles deberán tener la misma matriz
que las muestras de los pacientes; esto significa que normalmente los
controles se realizan en suero, pero también podrían realizarse en plasma,
orina u otros materiales. Debido a que es más eficaz contar con controles
que duren algunos meses, lo mejor es obtener materiales de control en
grandes cantidades.
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

Los materiales de control están disponibles en varias formas. Pueden estar

congelados, liofilizados o conservarse con productos químicos. Los
materiales liofilizados deben reconstituirse, lo que requiere prestar mucha
atención al pipetear con el fin de garantizar la concentración correcta del
analito.

2. COMPETENCIAS. -
• Construye cartas control de Levey-Jennings.
• Traza los datos del control en la carta de Levey-Jennings.
• Interpretar los resultados del control.

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

No aplica

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. -
Tras adquirir o preparar los materiales de control adecuados, el siguiente
paso consiste en determinar el intervalo de valores aceptables del material
de control. Esto se utilizará para que el laboratorio sepa si el análisis está
“dentro del control” o si los valores del control no arrojan una lectura
adecuada (“fuera del control”). Con este fin, el material de control se
analiza repetidas veces a lo largo del tiempo. Se deben recopilar al menos
20 puntos de recogida de datos durante un periodo de 20-30 días. Una vez
recopilados los datos, el laboratorio deberá calcular la media y la
desviación estándar de los resultados. Una característica de las
mediciones repetidas es que hay cierto grado de variación.

Los métodos utilizados en los laboratorios clínicos podrían revelar

diferentes variaciones en torno a la media; por tanto, algunos son más
precisos que otros. Para determinar la variación aceptable, el laboratorio
debe calcular la desviación estándar (DE) de los 20 valores de control. Esto
es importante porque una característica de la distribución normal es que,
si las mediciones se distribuyen normalmente: y el 68,3 % de los valores
caerá entre –1 DE y +1 DE de la media y el 95,5 % caerá entre –2 DE y +2
DE y el 99,7 % caerá entre –3 DE y +3 DE de la media. Saber que esto se
cumple en todas las distribuciones con perfiles normales permite al
laboratorio establecer los intervalos para el material de CC.

Cuando se emplea un solo control, consideramos que un análisis está

“dentro del control” si el valor se sitúa dentro de 2 DE respecto a la media.
El coeficiente de variación (CV) es la DE expresada en tanto que
porcentaje de la media. CV (%) = DE x 100 Media El CV se utiliza para
supervisar la precisión. Cuando un laboratorio cambia de un método de
análisis a otro, el CV es uno de los elementos que se pueden utilizar para
comparar la precisión de los métodos. Lo ideal es que el valor del CV sea
menor que el 5 %.

Una vez establecido el intervalo adecuado de los valores de control, el

laboratorio encontrará muy útil representar el intervalo gráficamente para
la supervisión diaria. El método más frecuente de representación es el uso
de gráficos de Levey-Jennings. Para elaborar gráficos de Levey-Jennings
para uso diario en el laboratorio, el primer paso es calcular la media y la
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
DE de un conjunto de 20 valores de control. A continuación se puede trazar
un gráfico de Levey-Jennings que muestre el valor de media y las +1, 2 y
3 DE. La media se indica trazando una línea horizontal en el centro del
gráfico, las DE se marcan a intervalos adecuados y las líneas se trazan
horizontalmente en el gráfico, tal y como se muestra a continuación.

Este gráfico de Levey-Jennings se elaboró utilizando 20 mediciones

repetidas del valor de control. Para utilizar el gráfico de Levey-Jennings
con el fin de registrar y supervisar diariamente los valores de control,
indique en el eje x los días, análisis u otros intervalos que se utilicen para
realizar el CC. Indique en el gráfico el nombre del análisis y el número de
lote del control que se está utilizando.

Interpretación de los datos del control de la calidad Es posible utilizar una

muestra de CC analizada junto con las muestras de los pacientes para
determinar si los análisis diarios están “dentro del control”. Con cada
conjunto de muestras de pacientes debe analizarse una muestra de
control. Analice el control y represéntelo en el gráfico Levey-Jennings. Si
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
el valor está dentro de +2 DE, el análisis puede aceptarse como “dentro
del control”.
Los valores del gráfico son aquellos analizados en los días 1, 2 y 3 tras la
realización del gráfico. En este caso, el segundo valor está “fuera del
control” porque cae fuera de las 2 DE. Cuando se utilice únicamente una
muestra de CC, si el valor está fuera de 2 DE, el análisis se considera
“fuera del control” y debe rechazarse. Si es posible utilizar únicamente un
control, elija uno con un valor situado dentro del intervalo normal del analito
que se analiza. Cuando evalúe los resultados, acepte todos los análisis en
los que el control se sitúe dentro de +2 DE. Utilizando este sistema, el valor
correcto se rechazará el 4,5 % de las veces. Para poder mejorar la eficacia
y la exactitud, puede utilizarse un sistema que utilice dos o tres controles
para cada análisis. Entonces puede utilizarse otro conjunto de normas para
evitar rechazar análisis que podrían ser aceptables. Estas normas las
aplicó en un laboratorio de CC el bioquímico clínico James Westgard. Este
sistema de normas múltiples de Westgard requiere el análisis de dos
controles de valores diana diferentes de cada grupo de análisis, la
elaboración de un gráfico de Levey-Jennings para cada uno de ellos y la
aplicación de las normas. El uso de tres controles con cada análisis
proporciona una garantía incluso más grande de exactitud del análisis.
Cuando utilice tres controles, elija un valor de intervalo bajo, normal y alto.
También hay normas de Westgard para un sistema con tres controles.

Errores en control de calidad

Los errores que se produzcan en el proceso de análisis pueden ser
aleatorios o sistemáticos. Con los errores aleatorios, la variación en los
resultados del CC no mostrará ninguna pauta. Este tipo de error
normalmente no es reflejo de un fallo en una parte del sistema de análisis
y, por consiguiente, no es probable que se repita. Los errores aleatorios
solo son causa de rechazo del análisis si exceden +2 DE. Los errores
sistemáticos no son aceptables, puesto que indican algún fallo en el
sistema que puede y debe corregirse. Son ejemplos de muestras de
errores sistemáticos: y desplazamiento: cuando el control está en el mismo
lado de la media durante cinco análisis consecutivos; y tendencia: cuando
el control se desplaza hacia una dirección y parece aproximarse a un valor
fuera del control. Incluso un valor de control situado dentro de las 2 DE
puede ser causa de preocupación.
Los gráficos de Levey-Jennings pueden ayudar a distinguir entre una
variación normal y un error sistemático. Los desplazamientos en la media
se producen cuando a un cambio abrupto le siguen seis o más resultados
de CC consecutivos situados a un lado de la media, pero normalmente
dentro del intervalo del 95 %, como si se agrupasen alrededor de una
nueva media. A la sexta ocasión se le llama desplazamiento y se rechazan
los resultados. Las tendencias se producen cuando los valores se
desplazan gradualmente, pero de forma continua, en una dirección en más
de seis análisis. Las tendencias pueden mostrar valores a ambos lados de
la media o solo en un lado. A la sexta ocasión, se determina que se trata
de una tendencia y se rechazan los resultados. El origen del problema
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
debe investigarse y corregirse antes de que comunicar las muestras de los
pacientes. Dado que en las mediciones hay variaciones, hay incertidumbre
en cuanto al valor real. La incertidumbre representa un intervalo de valores
en el que se espera que se encuentre el valor real. En la mayoría de las
situaciones, la incertidumbre de la medición se calcula con “cobertura del
95 %”. En la mayoría de los casos, se acepta un intervalo de +2 DE como
incertidumbre de la medición que se explica por la variación aleatoria. Pero
el grado de variación también depende del método que se utilice. Los
métodos más precisos tienen menos incertidumbre porque la cantidad de
variación incluida en los límites del 95 % es más pequeña. Los laboratorios
deben procurar usar métodos que tengan un alto grado de precisión y
seguir siempre los procedimientos operativos estándar.

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. -

2 horas de practica

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -

7. CUESTIONARIO. -
• Defina exactitud
• Defina precisión
• ¿Cuáles son los tipos de errores en control de calidad interno?
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Práctica No. 4

RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS (MÉTODO MANUAL)

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

La función principal de los eritrocitos es transportar oxigeno de los
pulmones a los tejidos del organismo y transferir dióxido de carbono de los
tejidos a los pulmones. Este proceso se logra mediante la hemoglobina de
los glóbulos rojos que se combinan fácilmente con oxígeno y con dióxido
de carbono y proporciona a la sangre arterial su color rojo brillante. Debido
a que la sangre venosa contiene poco oxigeno su color es más oscuro. La
cuenta eritrocitaria, medición muy importante para determinar la anemia o
policitemia, determina el número total de glóbulos rojos o eritrocitos en
mm3 de sangre.

2. COMPETENCIAS. -
Prepara los reactivos de dilución para recuento de hematíes, relacionados
de recuento de glóbulos rojos en el transporte de oxígeno de los pulmones
a los tejidos del organismo.
Conoce la utilidad y características de los materiales de vidrio que se
utilizan en el recuento de hematíes.
Realiza el recuento de hematíes, que se presentan en el campo de trabajo
del profesional y esto permite asumir procedimientos de resolución de
casos
Reporta el resultado e interpretar, de acuerdo a los casos clínicos
relacionados con el campo de trabajo del profesional.

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Contador hematológico 1 Equipo 25 ESTUDIANTES
automatizado/ citómetro hemático
Microscopios Olympus CX31 13 Equipos
Vortex 1 Equipo

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Liquido de dilución para glóbulo 100 ml 25 ESTUDIANTES
rojos solución fisiológica 0,9 %
Líquido de Hayem (Opcional)
Cámara de Newbauer 20 Piezas
Gradillas para hemolisis 5 Piezas
Tubos de hemólisis 20 Piezas
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Tubos con EDTA (tapa lila) 5 Pieza 25 ESTUDIANTES
Micropipetas de 20 ul y 400 ul 5 Piezas
Micropipetas de 100 a 1000 ul 5 Piezas
Contadores celulares 5 Piezas
Algodón 100 Gramos
Alcohol 100 ml
Detergente
Guantes 2 Pares
Colas de zorro 3 Piezas
Frascos de hipoclorito para
desechos 5 Piezas
Jeringas 2 Piezas
Pinzas anatómicas 5 Unidades
Curitas 2 Piezas
Torniquetes
Tips

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. -
4.1. En tubo:
1. Depositar 3.9 ml de solución fisiológica en un tubo de ensayo. Absorber
20 microlitros de la muestra. Limpiar la superficie externa de la puntilla
(tip) y depositar en la solución de tal manera que quede completamente
limpia. Dilución 1/200.
2. Cargar la cámara con la mezcla, cuando se emplea pipeta dilutora
desechar las tres primeras gotas, cuando se emplea dilución en tubo,
mezclar muy bien para el cargado.
3. Dejar sedimentar 2 a 3 minutos.
4. Leer en microscopio con objetivo de 10 X se efectúa el recuento en los
cuadrados grandes de las cuatro esquinas (1mm2 cada uno) se
incluyen las células que están dentro de estos y las que están en
contacto con la primera línea.

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. -

2 horas de práctica

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -

Se realiza la lectura en 5 cuadrantes secundarios ubicados en el cuadrante

primario central, Figura 1. Se realiza la sumatoria de los eritrocitos y se
multiplica por el factor.
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

Figura 1

INFORME
Se informa la cantidad de hematíes calculados en mm3.

7. CUESTIONARIO. -

1. Indique cual es la acción del líquido diluyente

2. ¿Qué importancia clínica tiene el recuento de hematíes?
3. Indique en que patologías puede existir una microcitos y macrocitos y
cómo influye en la cuantificación de hematíes.
4. Realice un cuadro sinóptico de los valores de referencia de hematíes
según la edad.
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

Práctica No. 5

DETERMINACIÓN DE MICROHEMATOCRITO (MÉTODO MANUAL)

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

El hematocrito forma parte de la biometría hemática, esta prueba
determina la masa eritrocitaria. Los resultados se expresan como
porcentaje de eritrocitos en un volumen de sangre periférica completa.
Constituye una medida muy importante de la anemia o policitemia.

2. COMPETENCIAS. -
• Conoce el significado del valor del hematocrito, que forma parte de la
biometría hemática que determina la masa eritocitaria.
• Aprende y utiliza reglas lectoras de hematocrito y calcula dicho valor sin
ellas, a través de la resolución de problemas que se presentan en el campo
de trabajo del profesional

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
1 Microcentrifuga 1 Equipo 25 ESTUDIANTES

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Tubos capilares de vidrio con 40 Tubos 25 ESTUDIANTES
Heparina
Tubos capilares de vidrio sin 40 Tubos
Heparina
plastilina con portacapilares 2 Piezas
Ábaco o regla 1 Pieza
Algodón 100 Gramos
Alcohol 100 ml
Pares de guantes 2 Pares
Gradillas para tubos de hemolisis 5 Piezas
Jeringas 5 Piezas
Tubos con EDTA 5 Tubos
Curitas 5 Piezas
Torniquetes 2 Piezas
Pinzas 2 Piezas
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. –
1. Homogeneizar la muestra.
2. Llenar hasta un máximo de ¾ partes de la capacidad del tubo capilar
con sangre total
3. Limpiar con papel o gasa el capilar y sellar un extremo del mismo
con plastilina.
4. Colocar en la microcentrifuga los capilares con los extremos
sellados hacia afuera equilibrando.
5. Centrifugar por 5 minutos a 12.000 rpm.
6. Realizar la lectura en el ábaco o con una regla

VALORES DE REFERENCIA
Recién Nacido 54 +/- 10
Niños hasta 10 años 38 +/-5
Mujeres adultas 42 +/-5
Mujeres embarazadas 39 +/- 5
Hombres 45-5

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. -

2 horas de práctica

7. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -

Cada estudiante debe determinar el hematocrito de la muestra de sangre
en estudio.

8. CUESTIONARIO. -
1. Un anticoagulante liquido en exceso ¿qué puede provocar en la
muestra y cómo influye en la determinación de hematocrito?
2. Cuando hay retraso en la lectura del hematocrito con formación de pico
de flauta que acciones deben realizarse.
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Práctica No. 6

DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA POR EL MÉTODO

CIANOMETAHEMOGLOBINA (HICN)

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

La hemoglobina es una proteína conjugada, componente principal de los
eritrocitos. La medición de la hemoglobina forma parte de la biometría
hematica. Sirve para detectar enfermedades que se acompañan de
anemia, ayuda a determinar la intensidad de la anemia, a vigilar la
respuesta al tratamiento y a valorar la policitemia.

FUNDAMENTO
Se basa en la mezcla de la solución de Drabkin que contiene ferricianuro
con la muestra que convierte el hierro ferroso de la hemoglobina en férrico,
formando metahemoglobina, la que al reaccionar con el cianuro potasico
forma cianometahemoglobina. La absorción de la solución es medida en
espectrofotómetro a 540 nm o con filtro verde- amarillo en foto colorímetro
Es de gran importancia para diagnóstico de anemias y eritrocitos.
La transformación de la hemoglobina en cianmetahemoglobina-Hb tiene
lugar según siguiente proceso:
hemoglobina+ ferricianuro potásico =metahemoglonina (meta –Hb )
Meta-Hb + cianuro potásico = cianmetahemoglobina (cianmeta-Hb)

2. COMPETENCIAS. -
• Determina la hemoglobina por el método de la cianometahemoglobina, a
través de la resolución de problemas que se presentan en el campo de
trabajo del profesional
• Reporta e interpreta los resultados de la hemoglobina que sirva en el
análisis de enfermedades que se acompaña en anemia y ayuda a la
determinación de la intensidad de la anemia, en relación con situaciones
clínicas.

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
STAT FAX 25 ESTUDIANTES
Vortex 2 Equipos
Contador hematológico 1 Equipo
automatizado/ citómetro hemático 1 Equipo
Previo 13 March
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Micro pipeta de 20 microlitros 5 Piezas 25 ESTUDIANTES
Tips Amarillo en porta tips
Tubos de hemolisis 20 Tubos
Gradillas para tubos de hemolisis 5 Piezas
Pipetas volumétricas de 10 ml 5 Piezas
Pro pipetas 5 Piezas
Algodón 100 Gramos
Alcohol 100 ml
Papel secante 1 Rollo
Relojes o timers 3
Parafilm 1 Sobre
Marcadores de vidrio 5 Piezas
Solución de Drabkin modificada y 1 Kit
estándar de hemoglobina.
Colas de zorro 3 Pieza
Agua destilada 500 ml
Frascos con hipoclorito para desecho 2 Piezas
Tubos con EDTA 5 Tubos
Torniquetes 2 Piezas
Curitas 5 Unidades
Pinzas 2 Piezas

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. -
1. Colocar 5 ml de la solución de Drabkin en un tubo de 10ml
2. Mezclar bien la muestra (por inversión suave sin formar espuma)
3. Tomar 0.02 ml (20 microlitros) de la muestra, limpiar la parte externa
de la pipeta.
4. Expulsar suavemente la muestra en la solución
5. Mezclar bien por inversión varias veces (o en vortex) esperar según
tiempo de Drankin.
6. Leer a 540 nm o con filtro amarillo – verde.

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. –

2 horas de práctica
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -

Concentración del estándar
Factor Hemoglobina (g/dl) =--------------------------------
Absorbancia del estándar

Hemoglobina (g/dl) = Factor Hb x absorbancia de la muestra.

7. CUESTIONARIO. -

1. ¿Cuál de las hemoglobinas es la que se determina por el método de la

cianometahemoglobina?
2. Indique de que depende la capacidad de la sangre para combinarse
con el oxígeno.
3. Explique cómo influye el pH en la hemoglobina.
4. Indique 5 causas por las cuales se incrementa la hemoglobina.
Indique 3 causas que pueden interfieren en la determinación de
hemoglobina.
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Práctica No. 7
FROTIS, COLORACIÓN SANGUÍNEA

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

El frotis sanguíneo, una vez seco, se somete a un proceso de fijación y
posteriormente a una tinción mediante un colorante adecuado. La tinción
hematológica se basa en el de Romanowsky, constituido por una mezcla
de eosina y azul de metileno.
La aplicación del método de Romanowsky a la rutina hematológica precisa
dos aspectos básicos: a) la fijación de la sangre extendida sobre el
portaobjetos antes de colocar el anticoagulante y b) el empleo junto a la
eosina y azul de metileno, de derivados por oxidación de este último
(metiltionina).
Mediante este tipo de colorantes pueden distinguirse los siguientes
aspectos morfológicos de las células:
Hematíes: color rosado o anaranjado
Gránulos polinucleares: neutrófilos: rosa a lila
Eosinófilos: anaranjado a pardo basofilos: azul oscuro
Citoplasma de linfocito: azul celeste claro.
Citoplasma de monolitos: azul grisáceo
Núcleo celular y resto de cromatina: color púrpura o violeta oscuro
Plaquetas: púrpura oscuro o violeta con un halo azul claro a su alrededor

2. COMPETENCIAS. -
• Realiza el frotis sanguíneo según las normas, que se establecen en la
frotación sanguínea a través de la resolución de problemas.
• El estudiante utiliza y realiza las diferentes tinciones hematológicas
según el estudio que se requiera implementar y responda a las
necesidades del campo de trabajo del profesional
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Microscopios ópticos Olimpus 13 Equipos 25 ESTUDIANTES

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Colorantes de Giemsa, Wright, 1 Kit
Leishman, Wright – Giemsa
Colorante panóptico 1 Kit
Soportes para tinciones 2 Pieza
Portaobjetos 100 Pieza
Pipetas Pasteur de plástico 10 Pieza
Gradillas para tubos de hemolisis 5 Pieza
Pinzas anatómicas 2 Pieza
Agua destilada 2 Litros
Algodón alcohol 100 Gramos 25 ESTUDIANTES
Aceite de inmersión 10 ml
Contador celular. 5 Pieza
Parafilm 1 Sobre
Marcadores de vidrio 5 Pieza
Tubos EDTA 5 Tubos
Jeringas 5 Piezas
Alcohol 100 ml
Curitas 5 unidades
Aplicadores plásticos (Goteros) 50 Piezas

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. –
1. Depositar la gota de sangre, en un lado y en el centro de un
portaobjetos bien limpio. Seguidamente, con el empleo de un
portaobjetos de borde esmerilado se hace un frotis o extensión de
sangre.
2. El portaobjetos con el que se hace la extensión debe deslizarse bien
colocado y lo más perfectamente aplicado en su borde contra el otro
porta sobre el que se hace la extensión. Sólo debe pasarse una vez,
de forma continua e ininterrumpida.
3. Es conveniente realizar dos o tres extensiones, con el fin de seleccionar
para la tinción la mejor lograda.
4. Las extensiones o frotis deben secarse al aire lo más rápidamente
posible. La desecación se facilita con movimiento en forma de abanico,
nunca soplando o por calor. La rápida desecación evita la deformación
de los glóbulos sanguíneos.
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

TINCION DE GIEMSA
Frotis sanguíneo
Cubrir con metanol 5´ dejar secar
Cubrir con Giemsa diluido (1+ 19) 10.
Lavar el frotis con abundante agua destilada y dejarlo secar al aire libre
Observar al microscopio con objetivo X100.
METODO COLORANTE WRIGHT
Frotis sanguíneo
Cubrir con n gotas de colorante 4.
Añadir n gotas de agua destilada 7´
Lavar con agua
Secar y observar con objetivo de inmersión

METODO COLORACIÓN DE LEISHMAN

Frotis seco
Cubrir con n de gotas de colorante 3 ´
Añadir n de gotas de agua destilada 5-7 ´
Lavar con agua, hasta color rosado
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Secar y observar con objetivo de inmersión

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. -

4 horas de práctica

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -

Consiste en realizar el frotis y la coloración según normas establecidas y
comparar con valores de referencia

7. CUESTIONARIO. –
1. Un buen frotis ¿qué características debe tener y qué células
predominan es cada una de las zonas?
2. ¿Cuáles son las causas de error de frotis sanguíneo?
3. Indique que otros colorantes se emplean en hematología
4. ¿Cuáles son las causas de una coloración intensa y una coloración
rápida no a tiempo?
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Práctica No. 8

OBSERVACIÓN DEL FROTIS SANGUÍNEO (ERITROCITO)

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

Un examen de extendido en sangre periférica puede ser solicitado por el
médico clínico al laboratorio. Con el desarrollo de analizadores sofisticados
de células sanguíneas la proporción de pacientes que lo requieren ha
descendido a 10 a 15% o menos. Sin embargo el frotis de sangre periférica
sigue siendo un elemento de crucial ayuda diagnóstica. Para obtener
máxima información del mismo, este debe ser realizado por un profesional
experimentado hematólogo. En Europa solo los hematólogos entrenados
“leen” el frotis, mientras que en Estados Unidos los Internistas tienen
experiencia y frecuentemente lo realizan.
Recientemente ha habido un más estricto control regulatorio sobre este
tema y los clínicos que no están certificados ya no pueden realizar la
práctica. Pero sin embargo es importante que los clínicos soliciten a los
hematólogos precisamente qué están buscando en un frotis y para que
solicitan el estudio. El examen de un extendido de sangre periférica
comparado con uno realizado por contador lleva mucho más tiempo y debe
ser solicitado si es estrictamente necesario. El internista cuando pide un
frotis de sangre periférica es usualmente como consecuencia de alguna
anormalidad detectada en algún análisis por un analizador automático.
Generalmente alguna anormalidad en el conteo celular o las llamadas
“alarmas” detectadas por el analizador son los disparadores de la solicitud
del frotis. Otras veces el clínico solicita directamente el estudio debido a
que detecta en el paciente esplenomegalia o adenopatías.
Muchos laboratorios realizan un frotis directamente cuando la solicitud de
un análisis automatizado se realiza con el diagnóstico de esplenomegalia
o adenopatías.

2. COMPETENCIAS. -
• El estudiante diferencia las diferentes morfologías de los eritrocitos, a
través de la resolución de problemas que se presentan en el campo de
trabajo del profesional
• El estudiante interpreta las alteraciones morfológicas según patología.
Del frotis sanguíneo a través de la resolución de problemas que se
presentan en el campo de trabajo del profesional

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. –

EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Microscopios ópticos Olimpus 10 Equipos 25 ESTUDIANTES
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Frotis sanguíneos coloreados
10ml de aceite de inmersión 10 ml
100ml Alcohol 10 ml 25 ESTUDIANTES
100g Algodón 100 gramos
2 pares de guantes 2 pares
Xilol 10 ml
Papel toalla 1 rollo

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. -
1. Con el aumento de 4 X explorar la preparación para localizar la zona
en la que el frotis es más perfecto. Los lugares más aptos son aquellos
en los que la extensión de los glóbulos se ha conseguido en una sola
capa, están bien teñidos y no se han producido precipitados de los
colorantes. Cuando se observe una zona apta, pasar a aumentos más
fuertes hasta llegar al aumento 100X (inmersión).
2. En el campo del microscopio, se verán con un dominio predominante
los glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos . No tienen núcleo y son más
delgados por el centro que por los bordes. Los glóbulos blancos o
leucocitos de identifican fácilmente por la presencia de núcleo. Hay
varias clases de glóbulos blancos:
3. los linfocitos algo mayores que los glóbulos rojos, con un núcleo muy
voluminoso que ocupa casi todo el glóbulo, aparece fuertemente
teñido en color violeta oscuro.
4. los monocitos son los leucocitos mayores, poco frecuentes
normalmente, hay que desplazarse por la preparación para encontrar
alguno. Tienen un núcleo muy grande y redondeado que aparece
teñido en color violeta.(Es bueno que recuerdes su función que es la
de fagocitosis). o los polinucleares presentan el núcleo como
fragmentado o con aspecto arrosariado.
5. los eosinófilos, con granulaciones abundantes de color rojizo y el
núcleo teñido de color azul marino. Estos glóbulos aumentan su
número en caso de parasitosis o procesos alérgicos.
6. los basófilos presentan un núcleo teñido de rojo y las granulaciones
del citoplasma de color muy oscuro.
7. Las plaquetas aparecen como pequeños fragmentos teñidas de color
violeta.

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. -

4 horas de práctica

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -

Interpretar y relacionar la morfología de los hematíes con las diferentes
patologías.
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

7. CUESTIONARIO. -
• ¿Qué cuidados se debe tener para realizar un extendido?
• ¿Cómo reporta el informe de laboratorio?
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Práctica No. 9

RECUENTO DE RETICULOCITOS MÉTODO MANUAL

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

Los reticulocitos son hematíes que contienen restos de ARN; éste precipita
con determinados colorantes dando lugar a hematíes con imágenes
filamentosas y reticulares en su interior, visibles fácilmente al microscopio
óptico.
El número de reticulocitos en sangre periférica es un reflejo del grado de
actividad eritropoyética.
El recuento de reticulocitos es una manera muy útil de estimar la
producción medular de eritrocitos. Los colorantes supravitales tiñen los
remanentes de RNA presentes en los eritrocitos jóvenes.

2. COMPETENCIAS. -
Realiza la tinción con colorantes supravitales, de la producción modular de
los eritrocitos y la relación con el campo de trabajo del profesional.
El estudiante identifica y realiza el recuento y cálculo de los reticulocitos
El estudiante interpreta los resultados obtenidos, en la estimación de la
producción medular de los eritrocitos a través de la resolución de
problemas

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Microcentrifuga 1 Equipo 25 ESTUDIANTES
Microscopio Olimpus CX31 13 Equipos
Baño María a 37°C 1 Equipo
Vortex 1 Equipo

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Tubos de hemólisis limpios 20 Tubos
Tubos capilares sin heparina 40 Tubos
Ábaco 1 Pieza 25 ESTUDIANTES
Plastilina con porta tubos 2 Pieza
Capilares
Gradillas para tubos de hemolisis 5 Pieza
Soportes de coloraciones 2 Pieza
Pipetas Pasteur de plástico 20 Pieza
Aceite de inmersión 10 ml
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Algodón 100 gramos
Alcohol 100 ml
Parafilm 1 sobre 25 ESTUDIANTES
Nuevo azul de metileno o azul 10 ml
cresil brillante
Contador células 5 Pieza
Colas de zorro 2 Pieza
Guantes 2 Pares
Marcadores de vidrio 2 Pieza

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. -
1. Colocar 3 gotas de sangre con EDTA en tubo de 25 x75 mm.
2. Añadir una gota del colorante (filtrado)
3. Incubar 15 minutos en baño Maria a 37° C o 1 hora a temperatura
ambiente
4. Luego realizar frotis delgados y uniformes
5. Una vez bien secos leer con objetivo 100X

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. -

2 horas de práctica

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -

Se cuenta por lo menos 1000 glóbulos rojos y de estos cuantos son
reticulocitos, se saca la proporción respecto a 100 células.

Ejemplo

1000 ----------------------- cantidad de reticulocitos hallados

100 X

se informa el índice reticulocitario (IR) ya que por si solo el porcentaje

tiene poca significación.

% reticulocitos obs. X Hto paciente /45

I.R =
Factor de corrección

Factor de corrección (maduración):

Para Hto 45 factor 1

35 1.5
25 2
15 2.5
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

7. CUESTIONARIO. -

• Un índice reticulocitario alto a que causas se puede deber.

• ¿Cómo se denomina cuando existe una buena respuesta
hematopoyética o aumento tal como se observa en las anemias
hemorrágicas y hemolíticas?
• ¿Cómo se observa el número de reticulocitos en el caso de las anemias
aplásicas?
• Interprete el valor obtenido en su práctica en que clasificación de
anemias entra.
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Práctica No. 10

VELOCIDAD DE ERITROSEDIMENTACIÓN

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

La velocidad de sedimentación globular es aquella con la que los
eritrocitos se sedimentan en la sangre anticoagulada en una hora. Esta
prueba se basa en el hecho de que los procesos inflamatorios y necróticos
alteran las proteínas sanguíneas, con lo que los eritrocitos se aglomeran,
se torna más pesados y es más probable que caiga rápidamente si se
coloca en tubo de ensayo vertical.
El proceso de sedimentación globular ocurre en tres etapas diferentes:
• Hemaglutinación: En esta fase los hematíes comienzan a aglutinarse
entre sí. Y lo hacen formando agregados en forma de pilas de moneda,
también llamados rouleaux. El tamaño de estos agregados vendrá
determinado por el potencial zeta existente entre los hematíes. Se
denomina potencial zeta a la energía de repulsión existente entre los
hematíes debido a la presencia de cargas negativas en su superficie.
Esta energía de repulsión mantiene separados a los hematíes.
• Sedimentación de los agregados: En esta fase los agregados
hemáticos se desplazan hacia el fondo del tubo. Durante este periodo,
el descenso ocurre de forma constante.
• Acumulación: En esta fase los hematíes se concentran en el fondo
del tubo en forma de sedimento.
Es útil para él diagnóstico y la vigilancia de arteritis temporal y polimialgia
reumática. La velocidad de sedimentación globular no es diagnostica de
ninguna enfermedad en especial, sino que indica que existe alguna
patología que debe ser investigada.

2. COMPETENCIAS. -
• Conoce el concepto de VES, es aquella con la que los eritrocitos se
sedimentan en la sangre anticoagulada en una hora de acuerdo a los
procesos inflamatorios de los pacientes.
• Identifica los diferentes factores que afectan a la VES, dentro de los
procesos inflamatorios y necróticos que alteran las proteínas sanguíneas.
• Emplea correctamente las técnicas de determinación de VES., para él
diagnóstico y la vigilancia de arteritis temporal y polimialgia reumática. La
velocidad de sedimentación globular no es diagnostica de ninguna
enfermedad en especial, sino que indica que existe alguna patología que
debe ser investigada.
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones

Pipetas para VES 20 Piezas

Soportes o Gradillas para VES 3 Piezas
Reloj 3
Propipetas 5 Piezas
Papel toalla c.s.p 1 Rollo
Tapones de goma para 20 Piezas
soportes de VES
Parafilm 2 Piezas 25 ESTUDIANTES
Gradillas para tubos de 3 Piezas
Hemolisis
marcadores de vidrio 3 Piezas
Tubos con EDTA 10 Tubos
Jeringas 10 Piezas
Alcohol 100 ml
Algodón 100 gramos
Pinzas anatómicas 3 Piezas
Torniquetes 3 Piezas

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. -
1.- Cargar la pipeta hasta la marca 0 con la muestra
2.- Colocar la pipeta en el soporte (vertical)
3.- Leer al cabo de una hora el nivel en milímetros lineales desde el 0 al
que llego la columna

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. -

2 horas de práctica

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -

mm/ hora
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

7. CUESTIONARIO. -
1. Cuantas fases se observan durante la determinación de la VES.

2. ¿Cuál es la relación de la lectura de la VES con la edad?

3. Explique porque no es específica la determinación del VES.

GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Práctica No. 11

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HIERRO, TRANSFERRINA Y

CAPACIDAD DE SATURACIÓN

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

El hierro se encuentra en el organismo localizado en su mayor parte en el
interior celular y particularmente en los eritrocitos formando parte de la
hemoglobina, los niveles de hierro circulantes son relativamente bajos y
dependen de numerosas variables, la anemia por pérdida de hierro
representa uno de los trastornos orgánicos más frecuentes encontrados
en la clínica médica.

2. COMPETENCIAS. -
• Determina la concentración de hierro a nivel sérico, a través de la
resolución de problemas que se presentan en el campo de trabajo del
profesional
• Determina la concentración de transferrina en suero particularmente en
los eritrocitos formando parte de la hemoglobina, los niveles de hierro
circulantes son relativamente bajos y dependen de numerosas
variables,
• Determina la saturación de la transferrina, que presentan uno de los
trastornos orgánicos más frecuentes encontrados en la clínica médica.

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Fotocolorimetro (stat Fax) 2 Equipo 25 ESTUDIANTES
Centrifuga 1 Equipo

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Kits de determinación de hierro 1 Kit
Sérico
Kits de determinación de 1 Kit
Transferrina
Tubos de hemolisis 40 Tubos 25 ESTUDIANTES
Gradillas para tubos de hemolisis 5 Pieza
Micropipetas de 100 a 1000ul 5 Pieza
Micropipetas de 10 a 50 ul 5 Pieza
Tips color azul
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Tips color amarillo
Porta tips para amarillo y azul 2 Pieza
Parafilm 1 Sobre
Algodón 100 Gramos
Alcohol 100 ml
Relojes o timer 3 Pieza
Macadores de vidrio 3 Pieza 25 ESTUDIANTES
Colas de zorro 3 Pieza
Pares de guantes 2 Pares
Tubos tapa roja (sin aditivos) 10 Tubos
Aplicadores 30 Unidades
Jeringas 10 Pieza
Curitas 10 Unidades
Pinzas 2 Pieza
Frascos con hipoclorito 2 Frascos

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. -
1 En tres tubos marcados con Blanco, Standard y Desconocido, colocar
el Buffer reductor.
2 En el Blanco colocar 500 microlitros de agua bidestilada. En el tubo de
Standard 500 microlitros de Standard.
3 En el tubo del Desconocido colocar 500 microlitros de muestra.
4 Leer la Absorbancia de los tres tubos a 560 nanómetros.
5 Agregar una gota de reactivo PBTS a cada tubo y volver a leer a 560
nanómetros, llevando a cero con agua destilada
6 Para la saturación de la Transferrina, colocar 500 microlitros de suero
y 500 microlitros de la solución saturante.
7 Mezclar y dejar 5 minutos a 37º C.
8 Agregar el absorbente.
9 Tapar y agitar 5 minutos a temperatura ambiente.
10 Centrifugar de 10 a 15 minutos a 3000 r.p.m.
11 Seguir el procedimiento indicado para la determinación de hierro

VALORES DE REFERENCIA
Hierro varones: 114,6 mcg/dl
Mujeres: 103,3 mcg/dl
Transferrina ambos sexos: de 250 a 400 mcg/dl
Saturación de la Transferrina: de 20 a 55%
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. -

4 horas de práctica

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -

Resultado de la Muestra = Valor del Hierro x factor
Donde el factor es igual a 100 mcg/dl / Standard corregido
% Saturación = Hierro sérico (mcg/dl) / Transferrina (mcg/dl) x 100

7. CUESTIONARIO. -
1 ¿De qué variables dependen los niveles de hierro circulante?
2 Mencione causas de anemia ferropénica.
3 ¿En qué forma circula hierro por el organismo?
4 ¿En qué casos se encuentra la saturación de hierro aumentada y
en qué casos disminuida?
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Práctica No. 12

TIPIFICACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO Y FACTOR RH

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

Estructuralmente los grupos sanguíneos son glucolípidos y/o proteínas
que forman parte de la membrana de los hematíes y se diferencian por
su distinta capacidad antigénica. Las glicoproteínas se hallan unidas a
diferentes azúcares, en los cuales reside la especificidad del grupo
(grupos A, B,O y Lewis). En otros casos la especificidad está determinada
por la estructura primaria de la proteína (grupo My N)
Los antígenos de los sistemas de grupo eritocitario se definen mediante
reacciones de tipo antígeno-anticuerpo. Los anticuerpos pueden ser
naturales, como en el caso de las aglutininas anti A y anti B o inmunes,
cuyo ejemplo mas característico es el anticuerpo anti Rh.

2. COMPETENCIAS. -
Realiza la determinación del grupo sanguíneo y factor Rh con sangre
capilar y por punción venosa en placa a través de la resolución de
problemas en el campo de trabajo del profesional

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Centrifuga 1 Equipo 25 ESTUDIANTES

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Porta objetos 50 Piezas
Aplicador 100 Unidades
Relojes 3 Piezas
Tubos de hemolisis 40 Tubos
Micropipetas 20 ul 3 Piezas
Solución fisiológica estéril 500 ml
Pinza anatómica 1 Piezas
Parafilm 1 Sobre 25 ESTUDIANTES
Gradillas para tubos de hemolisis 5 Piezas
Marcadores de vidrio 3 Piezas
Colas de zorro 3 Piezas
Antisuero A 1 Kit
Antisuero B 1 Kit
Antisuero D 1 Kit
Jeringas 5 Piezas
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Curitas 5 Unidades 25 ESTUDIANTES
Alcohol 100 ml
Algodon 100 gramos
Tubos 5 Tubos
EDTA 2 Frascos
Frasco con hipoclorito para
desechos

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. -
1. Colocar tres gotas de sangre (una en cada extremo del portaobjeto y
una al centro)
2. Adicionar a cada una el antisuero correspondiente (una gota)
3. Mezclar con varilla o palillo de sangre con su respectivo antisuero
4. Rorar suavemente por dos minutos

PRUEBA CONFIRMATORIA EN TUBO

Para los casos de factor Rh negativo
• Prepara una suspensión de glóbulos rojos al 3 o 5 % en solución
fisiológica
• Colocar una gota del Antisuero D y una de la suspensión de
glóbulos rojos en un tubo de hemolisis
• Mezclar y centrifugar a 3500 rpm por 20 segundos
• Agitar el tubo para desprender las células buscando
aglutinación
• Si no hay aglutinación se procede de la siguiente manera o
Incubar el mismo tubo 15 a 30 minutos a 37ºC o Centrifugar y
volver a leer como en los puntos 3 y 4
o De percibir la ausencia de aglutinación realizar la prueba
de la antiglobulina indirecta (Coombs Indirecto)

DETERMINACION DEL ANTIGENO Du

Un test de Coombs indirecto, pero el problema está en la membrana
del hematíe. Es un antígeno débil que hay que visualizar.
• Se lava y prepara la suspensión de hematíes donde queremos
detectar el antígeno Du
• En tubo de hemolisis se hecha 2 gotas de suspensión de
hematíes problema + 2 gotas de suero anti D (reactivo)
• Mezclar suavemente, Esperar 1 – 2 minutos
• Centrifugar 1 minuto a 1000 rpm
 GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
• Leer golpeando suavemente o si los glóbulos rojos se
distribuyen homogéneamente.
Si el resultado es negativo, mantenga el tubo a temperatura ambiente
por 5 minutos vuelva a centrifugar y lea nuevamente

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. -

2 horas de práctica
6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -
Efectuar la lectura directamente buscando aglutinación
INTERPRETACION
La visualización de aglutinación indica una reacción positiva
Aglutinación = Rh positivo (+)
No Aglutinación = Rh negativo (-)
Aglutinación con el antisuero A = grupo sanguíneo A Aglutinación con el
antisuero A y B = grupo sanguíneo “A B”
Ausencia de aglutinación en A y B = grupo sanguíneo “O”
INFORME
Se informa el grupo sanguíneo con letras mayúsculas, acompañados del
factor Rh escrito y entre paréntesis el signo sea (+) o (-)

7. CUESTIONARIO. -
1. Indique cual la importancia de conocer el grupo sanguíneo
2. Realice un cuadro esquemático de la diferencia entre el sistema A,B,O
y factor Rh.
3. ¿En caso de una incompatibilidad son el sistema O,A,B y factor Rh en
una transfusión que reacción se producirá?
4. ¿Qué cuidados y como se debe proseguir cuando el factor Rh es
dudoso?
¿Cuáles son los azúcares que determinan la actividad antigénica de la molécula A Y B
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Práctica No. 13

DETERMINACIÓN DEL HEMATOCRITO, HEMOGLOBINA E ÍNDICES

ERITROCITARIOS (MÉTODO AUTOMATIZADO)

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO. -

Los índices eritrocitarios definen el tamaño y el contenido de
hemoglobina de los glóbulos rojos y constan del volumen corpuscular
medio (VCM), hemoglobina corpuscular media (HCM) y concentración
media de hemoglobina corpuscular (CCMH).

2. COMPETENCIAS. -
• Conoce el significado del valor del hematocrito, que forma parte de la
biometría hemática que determina la masa eritocitaria.
• Aprende y utiliza reglas lectoras de hematocrito y calcula dicho valor sin
ellas, a través de la resolución de problemas que se presentan en el campo
de trabajo del profesional
• Determina la hemoglobina, a través de la resolución de problemas que se
presentan en el campo de trabajo del profesional
• Determina los índices eritrocitarios por cálculo matemático a partir del
recuento eritrocitario, el hematocrito y la concentración de hemoglobina e
interpreta los resultados.

3. EQUIPOS, MATERIALES E INSUMOS. -

EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
STAT FAX 2 Equipos 25 ESTUDIANTES
Vortex 1 Equipo
Contador hematológico 1 Equipo
automatizado/ citómetro hemático
Microcentrifuga 1 Equipo
Microscopios Olympus CX31 13 Equipos

INSUMOS
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
5 Piezas 25 ESTUDIANTES
Micro pipeta de 20 microlitros
Tips Amarillo en porta tips 20 Tubos
Tubos de hemolisis 5 Piezas
Gradillas para tubos de hemolisis 5 Piezas
Pipetas volumétricas de 10 ml 5 Piezas
Pro pipetas 100 Gramos
Algodón 100 Ml
Alcohol 1 Rollo
Papel secante 3
Relojes o timers 1 Sobre
Parafilm 5 Piezas
Marcadores de vidrio 1 Kit
Solución de Drabkin modificada y
estándar de hemoglobina. 3 Pieza
Colas de zorro 500 Ml
Agua destilada 2 Piezas
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
Frascos con hipoclorito para
desecho 5 Tubos
Tubos con EDTA 2 Piezas
Torniquetes 5 Unidades
Curitas 2 Piezas
Pinzas 20 Tubos
Tubos capilares de vidrio con 25 ESTUDIANTES
heparina 20 Tubos
Tubos capilares de vidrio sin
heparina 2 Piezas
Plastilina con portacapilares 1 Pieza
Ábaco o regla 100 ml
Liquido de dilución para glóbulo
rojos solución fisiológica 0,9 % 13 Piezas
Cámara de Neubauer 5 Piezas
Gradillas para hemólisis 5 Piezas
Micropipetas de 20 ul y 400 ul 5 Piezas
Micropipetas de 100 a 1000 ul 6 Piezas
Contadores celulares 2 Pares
Guantes

4. TECNICA O PROCEDIMIENTO. –

RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS

1. Depositar 3.8 ml de solución fisiológica en un tubo de ensayo.
2. Absorber 20 microlitros de la muestra. Limpiar la superficie externa de
la puntilla (tip) y depositar en la solución de tal manera que quede
completamente limpia. Dilución 1/200.
3. Cargar la cámara con la mezcla, cuando se emplea pipeta dilutora
desechar las tres primeras gotas, cuando se emplea dilución en tubo,
mezclar muy bien para el cargado.
4. Dejar sedimentar 2 a 3 minutos.
5. Leer en microscopio con objetivo de 10 X se efectúa el recuento en los
cuadrados grandes de las cuatro esquinas (5 cuadrantes secundarios
del cuadrante primario central) (1mm2 cada uno) se incluyen las células
que están dentro de estos y las que están en contacto con la primera
línea.

DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA
1. Colocar 5 ml de la solución de Drabkin en un tubo de 10ml
2. Mezclar bien la muestra (por inversión suave sin formar espuma)
3. Tomar 0.02 ml (20 microlitros) de la muestra, limpiar la parte externa
de la pipeta.
4. Expulsar suavemente la muestra en la solución
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I
5. Mezclar bien por inversión varias veces (o en vortex) esperar según
tiempo de Drankin.
6. Leer a 540 nm o con filtro amarillo – verde.

DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO
1. Homogeneizar la muestra.
2. Llenar hasta un máximo de ¾ partes de la capacidad del tubo capilar
con sangre total
3. Limpiar con papel o gasa el capilar y sellar un extremo del mismo con
plastilina.
4. Colocar en la microcentrifuga los capilares con los extremos sellados
hacia afuera equilibrando.
5. Centrifugar por 5 minutos a 12.000 rpm.
6. Realizar la lectura en el ábaco o con una regla

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA. -

4 horas de práctica

6. MEDICIÓN, CALCULOS Y GRAFICOS. -

VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO

Hematocrito (%)
VCM (femplitros) = ----------------------------------------------------------- x 10
Núm. Hematíes /mm3 en millones
(las 2 primeras cifras decimales)

HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA

Hemoglobina (g/dl)
HbCM (pico gramos) = X 10
Núm. Hematíes /mm3 en millones
(las 2 primeras cifras decimales)

CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA

Hemoglobina (g/dl)
CHbCM (porcentaje) = ……………….X 100
Hematocrito (%)
GUIAS DE PRÁCTICA CS DE LA SALUD – BIOQUIMICA Y FARMACIA
Código de registro: RE-10-LAB-054 Versión 5.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE
LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA I

7. CUESTIONARIO. –
1. De qué factores depende una hemoglobina alta o baja.
2. ¿Qué puede provocar en la muestra un anticoagulante líquido en
exceso que y cómo influye en la determinación de hematocrito?
3. Cuando hay retraso en la lectura del hematocrito con formación de pico
de flauta que acciones deben realizarse.
4. ¿Qué indica el volumen corpuscular medio?
5. Indique cuales son las interferencias para la determinación de CCMH.
¿Qué células se encuentran entre la columna de glóbulos rojos y
plasma?