AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS EN CULTIVO PURO
Autores: PEDRO STEVEN PATIÑO GAVIRIA– 202129051, DIANA PAOLA PRIETO
MORA- 202221275, LUZ HELENA ESPITIA SANCHEZ-202127852
Docente: PH.D DONALD HEBERTH RIASCOS ORTIZ- Ingeniero Agrónomo
INTRODUCCIÓN
El estudio de las enfermedades en las plantas no se limita solo a observar los síntomas que
aparecen en hojas, tallos o frutos. Para conocer con certeza qué microorganismo está detrás
de una patología, es necesario aislarlo y analizarlo en el laboratorio (Agrios, 2005). Sin
embargo, este proceso suele presentar un reto: las lesiones iniciales causadas por el patógeno
pueden ser invadidas después por microorganismos oportunistas o saprófitos, que aprovechan
el tejido debilitado y también crecen en los medios de cultivo (Schmale & Bergstrom, 2004).
Por esta razón, no basta con observar las primeras colonias que aparecen en una placa. Es
fundamental realizar transferencias cuidadosas hasta obtener un cultivo puro o axénico, que
permita diferenciar al verdadero agente causal de aquellos microorganismos secundarios
(Barnett & Hunter, 1998). Solo así es posible hacer una identificación confiable del patógeno
y, con base en ella, diseñar estrategias de manejo que protejan los cultivos y garanticen su
productividad (FAO, 2020).
OBJETIVO: Obtener cultivos de microorganismos asociados a síntomas de enfermedades.
METODOLOGÍA
● A partir de aislamientos de microorganismos, crecidos en placas de Petri,
seleccionamos las colonias con mayor frecuencia de ocurrencia.
● En cabina de flujo laminar y con ayuda de un asa micológica o bacteriológica, según
sea el caso, se tomó un fragmento de micelio o una colonia bacteriana y se transfirió
a una nueva caja de Petri con medio de cultivo.
● Se incubaron los microorganismos transferidos a las cajas de Petri, a una temperatura
de 25°C para hongos que fue el caso
● Se realizaron seguimiento diario al crecimiento de los microorganismos, llevando
registro fotográfico de los cambios de aspecto (forma, color, textura, etc.).
RESULTADOS
Tras la transferencia a nuevas placas de Petri más pequeñas, pudimos observar con mayor
detalle el crecimiento del hongo en condiciones más controladas. Durante los primeros días,
el micelio comenzó a extenderse sobre el medio PDA, mostrando una textura algodonosa con
un patrón radial bien definido y conservando su tonalidad blanca característica en el centro de
la colonia. Conforme avanzó el tiempo de incubación, el hongo siguió desarrollándose de
manera estable, aunque en este período no se evidenciaron aún estructuras reproductivas
diferenciadas, lo que indica que el cultivo se encontraba en una etapa temprana de
maduración.
Con el fin de confirmar la relación entre este hongo y la enfermedad observada en el tomate
de arbol, se aplicaron los postulados de Koch. Hasta ahora se logró cumplir el segundo
postulado, correspondiente al aislamiento del microorganismo en cultivo puro. Este avance
permitió obtener una muestra homogénea del hongo predominante, lo que constituye un paso
clave para garantizar la confiabilidad del proceso y preparar las condiciones necesarias para
completar los siguientes postulados.
Figura 1. fotografías de aislamiento de los cultivos puros (E004 y E005) de las colonias
obtenidas en el primer cultivo
Los cultivos puros fueron sembrados en dos repeticiones (E004 y E005). Tras el período de
incubación, se hizo un seguimiento de su desarrollo.
Al sexto día, las colonias ya habían crecido bastante en ambas cajas de Petri. Mostraban un
patrón de expansión filamentoso, con hilos que se extendían radialmente desde el centro
hacia los bordes. En la parte central el micelio se veía más compacto, mientras que hacia los
bordes mantenía un aspecto algodonoso y esponjoso.
Al describirlas en detalle, se observaron las siguientes características:
● La colonia completa presentaba un crecimiento filamentoso.
● El borde también era filamentoso, con prolongaciones que avanzaban sobre el medio.
● La elevación era ligeramente elevada en la zona central.
● La superficie se apreciaba lisa y uniforme.
Estas características indican que el hongo estaba creciendo de manera adecuada en el cultivo
puro. La ligera elevación en el centro sugiere que el micelio está comportándose a medida
que madura, lo que hace probable que en los próximos días se formen estructuras
reproductivas. Por esta razón, es importante continuar con la observación y realizar nuevas
improntas cuando el cultivo esté en una fase más avanzada.
Conclusiones
● El aislamiento en cultivo puro nos permitió observar con claridad las características
del hongo, reconociendo un crecimiento filamentoso con bordes activos y un centro
anaranjado que destacó como rasgo distintivo.
● Las características observadas en las colonias, tanto a simple vista como en las
improntas, concuerdan con las descripciones del género Colletotrichum, lo que
refuerza su papel como el agente causal de la antracnosis en los frutos de tomate de
árbol analizados.
● Este laboratorio mostró lo valioso que es continuar con el seguimiento. Observar
cómo el hongo madura y avanzar en la aplicación completa de los postulados de Koch
será fundamental para confirmar con mayor certeza su papel como causante de la
enfermedad.
PREGUNTAS Basado en las características macroscópicas de las colonias crecidas en cultivo
puro, indique:
1. ¿A qué género potencialmente pertenece el microorganismo? Compare las características
del microorganismo con los reportes de literatura.
Con base en las características observadas en el aislamiento del hongo que presentaba mayor
frecuencia en la lesión del tomate de árbol (Solanum betaceum) se sospecha que pertenece al
género Colletotrichum, según Agrios (2005) los hongos del género Colletotrichum producen
colonias de aspecto algodonoso en los primeros días de incubación, que posteriormente
adquieren tonalidades grisáceas, anaranjadas conforme aparecen las estructuras reproductivas
(acérvulos con setas y conidios).
2. ¿Qué características asociadas al microorganismo, según la literatura, permiten
identificarlo hasta el nivel de género?
las características que tiene que tener Colletotrichum para poder identificarlo a nivel de
género, a nivel de sus estructuras microscópicas son la presencia de acérvulos con setas y
conidios hialinos en masa mucilaginosa es un criterio clave para identificar Colletotrichum
microscópicamente (EFSA Panel on Plant Health, 2018).
BIBLIOGRAFÍA
Agrios, G. N. (2005). Plant Pathology (5th ed.). Elsevier Academic Press.
EFSA Panel on Plant Health (PLH). (2018). Scientific Opinion on the pest categorisation of
Colletotrichum gossypii. EFSA Journal, 16(7), e05305.
https://doi.org/10.2903/j.efsa.2018.5305
