UNIVERSIDAD DE PANAMÁ

CENTRO REGIONAL UNIVERSITARIO DE BOCAS DEL TORO

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES, EXACTAS Y TECNOLOGÍA

LICENCIATURA EN DOCENCIA EN BIOLOGIA

Biología Vegetal

Asignación:

Informe Laboratorio #5

Estudiantes:
José Ortiz 1-744-856

Profesor:
Henry Castillo

II Semestre del 2024

 Tabla de contenido

Objetivo..........................................................................................................................................3
Introducción...................................................................................................................................4
Metodologia....................................................................................................................................5
Resultados y Discusión..................................................................................................................6
Conclusión......................................................................................................................................8
Referencias Bibliográficas.............................................................................................................9

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Por: Jose Ortiz
 Laboratorio #5

Presencia de pigmentos fotosintéticos en una muestra vegetal.

17 DE SEPTIEMBRE DEL 2024

Universidad de panama

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Por: Jose Ortiz
 Objetivo

Objetivo General

Determinar la presencia de pigmentos fotosintéticos en una muestra vegetal.

Objetivos Específicos

-Observar la existencia y funcionamiento de los pigmentos fotosintéticos mediante la

fluorescencia.

-Observar la degradación de la clorofila

-Observar y graficar el espectro de absorción de los pigmentos fotosintéticos mediante el

espectrofotómetro.

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Por: Jose Ortiz
 Introducción

Photosynthesis is a critical process by which plants transform light energy into chemical energy,
making it possible for them to create organic substances out of carbon dioxide and water. This
process requires the presence of photosynthetic pigments, like chlorophyll, that have the ability
to take up light in a range predominantly within the visible spectrum. These pigments allow for
both the absorbance of light and can additionally emit fluorescence under specific conditions.

The purpose of the laboratory is to study light absorption and fluorescence from pigments,
primarily chlorophyll. Spectrophotometric measurements and fluorescence tests allow us to
study these parameters, focusing on how pigments interact with light and how their behavior
changes under conditions such as dilution or denaturation.

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Por: Jose Ortiz
 Metodologia
Materiales:

- Tubos de ensayo
- Papel filtro
- Mortero
- Embudo
- Alcohol etílico al 96%
- Agua destilada
- Espectrofotómetro
- Proyector de diapositivas
- Muestras vegetales de hojas verdes frescas fáciles de moler a proporcionar por el alumno.

1. Determinación de los pigmentos fotosintéticos

- Preparación del extracto de pigmentos:
- Moler hojas frescas usando un mortero hasta obtener una pasta homogénea.
- Añadir 20 cm³ de etanol y mezclar.
- Filtrar el extracto utilizando un embudo y papel filtro.
- Repetir el proceso de decantación varias veces hasta obtener un líquido claro.
- Determinación del espectro de absorbancia:
- Separar el extracto en dos porciones iguales.
- Una porción se usa para medir la absorbancia con un espectrofotómetro, midiendo entre
400 y 700 nm.
- La absorbancia se mide en intervalos de 10 nm, comparando con un blanco de 80%
etanol.

Figura 1. Mortero usado para moler hojas dibujado por jose ortiz

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 2. Fluorescencia y degradación de la clorofila
- Prueba de fluorescencia:
- Exponer el extracto a la luz de una linterna para observar la emisión de fluorescencia
(color rojo).
- Degradación de la clorofila:
- Añadir poco a poco 10 cm³ de agua destilada al extracto.

.
Figura 2. Muestra expuesta en un foco para la prueba de fluorescencia dibujado por jose ortiz.

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 Resultados y Discusión

Determinación del espectro de absorbancia: Espectro de absorbancia de los pigmentos

fotosintéticos: Al usar el espectrofotómetro para medir la absorbancia de los pigmentos en un
rango de 400-700 nm, se observa que los pigmentos fotosintéticos, como la clorofila, tienen
picos de absorbancia específicos en ciertos rangos de longitud de onda. La clorofila a tiene picos
de absorbancia alrededor de 430 nm (azul) y 662 nm (rojo). Como se describe en el libro de
Govindjee y Shevela, la clorofila a tiene estos picos de absorbancia que permiten determinar la
longitud de onda a la que se excita más eficientemente. La mayoría de las plantas y algas
también tienen clorofila b, con picos de absorbancia en aproximadamente 453 nm (azul) y 642
nm (rojo). Los resultados sobre los picos de absorción en los rangos azul y rojo del espectro son
consistentes con fuentes previas, lo que indica cómo los pigmentos absorben la luz en el azul y el
rojo del espectro visible, pero reflejan la luz verde, lo que les da el color verde característico a las
hojas.

Fluorescencia de la clorofila: La exposición del extracto de clorofila a la luz de una lámpara hace
que emita fluorescencia roja. Como se describe por Lichtenthaler en 2001, la clorofila, cuando se
excita con luz, emite fluorescencia en el rango rojo del espectro visible. Sin embargo, al añadir
agua destilada, la fluorescencia disminuye y eventualmente desaparece. Esto se debe a que la
dilución altera la concentración de clorofila, afectando sus propiedades ópticas y llevando a la
desnaturalización del pigmento. La fluorescencia de las clorofilas libres y débilmente ligadas ha
sido estudiada por Lichtenthaler y Buschmann, quienes describieron cómo la clorofila, al
regresar a su estado basal después de la excitación, libera energía en forma de luz roja.

Pérdida de coloración roja: La adición de agua destilada también provoca la pérdida de la

coloración roja del extracto (como se muestra en las figuras 9-12 del manual). Esto se debe a que
la clorofila pierde su capacidad de emitir fluorescencia al diluirse, lo que interfiere con su
estructura química. Este fenómeno está relacionado con cambios estructurales en la molécula de
clorofila, lo cual ha sido mencionado por Krause y Weis, quienes observaron que la clorofila es
muy estable en su entorno nativo, pero se degrada rápidamente cuando está fuera de él.

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Discusión

En este experimento, aunque los resultados fueron afectados por un problema técnico en el
sistema potómetro, podemos inferir ciertos comportamientos típicos del proceso de transpiración
y la distribución de estomas en las plantas. Si el potómetro hubiese funcionado correctamente, se
habrían observado diferencias significativas en la transpiración dependiendo de la superficie de
la hoja, lo cual es fundamental para comprender la relación entre la fisiología de la planta y su
entorno. Estudios previos sugieren que, en plantas terrestres, los estomas tienden a concentrarse
en la superficie inferior de las hojas para minimizar la pérdida de agua en ambientes secos o
expuestos al sol, mientras que en plantas acuáticas los estomas se concentran en la superficie
superior para facilitar el intercambio gaseoso con el aire.

 Azcón-Bieto y Talón (1993) validan esta idea en su estudio sobre la fisiología vegetal, en
el cual afirman que la distribución de estomas es una característica clave que refleja la
adaptación de las plantas a su entorno. Según los autores, en plantas de ambientes
terrestres secos, la mayoría de los estomas se encuentran en la parte inferior de las hojas,
donde la transpiración puede ser controlada de manera más eficiente para evitar la
pérdida de agua excesiva. Por otro lado, en las plantas acuáticas, los estomas suelen estar
presentes en la superficie superior de las hojas para facilitar el intercambio de gases con
el aire, debido a que sus hojas flotan sobre la superficie del agua. Si el experimento
hubiera sido exitoso, nuestros resultados habrían estado en línea con sus observaciones
sobre la especialización de las plantas en función de su hábitat.

 Taiz y Zeiger (2010) también respaldan la importancia de la transpiración y la

distribución de los estomas para la regulación del agua en las plantas. Según ellos, la
transpiración es un proceso crucial para mantener el flujo de agua y nutrientes dentro de
la planta, y los estomas juegan un papel fundamental en este proceso. Su estudio indica
que la cantidad y localización de los estomas pueden variar dependiendo de las
condiciones ambientales, lo cual permite a las plantas controlar mejor la pérdida de agua
y regular el intercambio de gases. La falta de un funcionamiento correcto del potómetro
nos privó de resultados precisos, pero estudios como el de Taiz y Zeiger ayudan a
consolidar la expectativa de nuestros resultados.

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 Conclusión

La medición en el laboratorio de pigmentos fotosintéticos confirma que los pigmentos, como la

clorofila, son cruciales para la absorción de luz en la fotosíntesis. La medición del espectro de
absorbancia demostró que la clorofila absorbe luz en las regiones azul y roja del espectro visible,
lo que les da a las plantas su color verde al reflejar luz en esa región. La prueba de fluorescencia
mostró que la clorofila emite luz roja cuando se excita con luz directa, confirmando la excitación
de los electrones.

Al añadir agua destilada, se observó una disminución progresiva de la fluorescencia, lo que

sugiere que la dilución afecta la estructura de la clorofila, reduciendo su capacidad para emitir
fotones. La pérdida de coloración roja en el extracto también refleja esta alteración.

Estos experimentos confirman tanto la capacidad de los pigmentos fotosintéticos para captar luz
en rangos específicos como su susceptibilidad a cambios estructurales que afectan su
comportamiento óptico.

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 Referencias Bibliográficas

- Govindjee, & Shevela, D. (2011). On the requirement of minimum number of quanta

for oxygen evolution in photosynthesis. Photosynthesis Research, 105(3), 217-225.

- Lichtenthaler, H. K., & Buschmann, C. (2001). Chlorophylls and Carotenoids:

Measurement and Characterization by UV‐VIS Spectroscopy. Current Protocols in Food
Analytical Chemistry, F4.3.1–F4.3.8

- Krause, G. H., & Weis, E. (1991). Chlorophyll fluorescence and photosynthesis: The
basics. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology, 42, 313-349.

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