Laboratorio de Química Orgánica I Universidad de Guadalajara

Centro Universitario de Ciencias Exactas e Ingenierías

Universidad de Guadalajara

Asignatura: Laboratorio de Química Orgánica

Tema: Reporte 4, Cromatografía en capa fina

Docente: Dra. Morelia Eunice López Reyes

Autores: Ana Julia Gutiérrez Castillejos / 220284781

Vicente González Hernándes / 219745902
Laboratorio de Química Orgánica I Universidad de Guadalajara

Objetivos

 Realizar cromatografía en capa fina

 Identificar la polaridad de diferentes muestras problemas.
 Comparar diferentes proporciones de eluyentes.
 Determinar el sistema más efectivo de elusión utilizado.
 Calcular Rf de las distintas placas cromatográficas.

Marco teórico

La cromatografía en capa fina (TLC por sus siglas en inglés) es una técnica analítica rápida y
sencilla, muy utilizada en el laboratorio de química orgánica. Esta técnica sirve para determinar el
grado de pureza de un compuesto, comparar dos muestras observando el comportamiento de ambas
en la placa, realizar el seguimiento de una reacción, entre otras cosas (Corzo, 2019).
La CCF consiste de una fase estacionaria (líquido que está asociado a la superficie de la
placa) y una fase móvil (disolvente) y funciona según el mismo principio que toda la cromatografía:
el compuesto tendrá diferentes afinidades por las fases móvil y estacionaria, y esto afecta la
velocidad a la que migra. El objetivo de la TLC es obtener manchas bien definidas y bien separadas
(Libretexts, s.f.).
La placa de la TLC consiste típicamente en una gruesa capa de 0,1 mm de material
adsorbente unido a una capa o soporte de plástico. El adsorbente se compone de muchas
placas microscópicas. Después se aplica un pequeño volumen de solución de muestra a la superficie
adsorbente y se deja secar, la placa se coloca en un vaso de precipitados que contiene el disolvente
apropiado. Sólo el borde de la placa más cercano a las muestras está en contacto con el disolvente.
El disolvente se introduce en el material adsorbente seco y se desplaza hacia arriba a través
de la placa arrastrando las muestras. Una vez que se completa una separación, los compuestos
individuales aparecen como puntos separados verticalmente, estos pueden ser revelados con UV o
con un agente revelador. Cada mancha tiene un factor de retención (Rf) que es igual a la distancia
migrada sobre la distancia total cubierta por el solvente. La fórmula Rf es
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑞𝑢𝑒 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖ó 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝑅𝑓 =
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
El valor de Rf se puede utilizar para identificar compuestos debido a su singularidad para cada
compuesto. Al comparar dos compuestos diferentes en las mismas condiciones, el compuesto con
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el valor de Rf más grande es menos polar porque no se adhiere a la fase estacionaria tanto como el
compuesto polar, que tendría un valor de Rf más bajo (Corzo, 2019; Libretext, s.f.).
Los dos adsorbentes (fase estacionaria) más ampliamente utilizados son la gel de sílice
(SiO) y la alúmina (Al2O), ambas de carácter polar. La alúmina anhidra es el que retiene con más
fuerza a los compuestos; por ello se utiliza para separar compuestos relativamente apolares
(hidrocarburos, haluros de alquilo, éteres, aldehidos y cetonas). La gel de sílice, por el contrario,
se utiliza para separar sustancias más polares (alcoholes, aminas, ácidos carboxílicos). El proceso
de adsorción se debe a interacciones intermoleculares de tipo dipolo-dipolo o enlaces de hidrógeno
entre el soluto y el adsorbente. El orden de elución de un compuesto se incrementa al aumentar la
polaridad de la fase móvil o eluyente (Bioted, s.f.).

Procedimiento

 Se preparó un capilar, papel higiénico, y una cámara de elusión.

 Se pidieron las muestras problema y se disolvieron en 1 mL de diclorometano.
 Se marcó en la placa una línea ténue dejando 5mm en la parte superior e inferior, y también se
pusieron 3 marcas para colocar sobre estas las muestras, recordando siempre que la placa se
debe de tomar por los bordes, o con pinzas para que la huella dactilar no quede pintada.
 Se aplicó una pequeña cantidad de la sustancia problema con ayuda del capilar en la placa
cromatográfica, se colocaba de poco a poquito y presionando el capilar cuidando que no se
hiciera una mancha muy grande. Se limpió el capilar 3 veces con diclorometano después de
cada aplicación, para evitar contaminación de las muestras.
 Se colocó el disolvente a utilizar como eluyente dentro de la cámara de elusión. Primero se
utilizó 100% Hexano, luego una mezcla de Hexano-Acetato de Etilo 80:20, y por último
Hexano-Acetato de etilo 50:50. Este equipo preparó 20 mL de la mezcla 80-20.
 Se introdujo la placa cromatográfica dentro de la cámara de elusión cuidando que la parte en
donde se aplicaron las muestras no quedara sumergida en el disolvente, y se dejó eluir el
disolvente hasta 5 mm antes de llegar al borde de la placa (la línea que se marcó en el paso 2).
 Se retiró la placa cromatográfica y se dejó secar.
 Una vez ya seca, se llevó la lámina a revelar a la lámpara de UV y se marcaron ligeramente con
un lápiz las manchas que se observaron. Las manchas que no se revelaron con el UV se utilizó
Iodo como agente revelador. Se calculó el Rf de una mancha de cada muestra en cada placa.
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Diagrama de flujo
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Esquema del procedimiento

Reactivos y materiales

Reactivo Estructura Propiedades

Fisicoquímicas Toxicológicas
Acetato de Apariencia: líquido incoloro El contacto constante con la
etilo con olor a frutas piel provoca resequedad,
Fórmula: CH3COOCH2CH3 agrietamiento,
Peso molecular: 88.11
sensibilización y dermatitis.
g/mol
Irrita las memebranas
Punto de fusión: -83° C
mucosas y causa dolor de
Punto de ebullición: 78° C
cabeza, náuseas e inclusive
pérdida de la conciencia
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Hexano Apariencia: líquido incoloro En forma de vapor , irrita a la

con un olor parecido al del nariz y garganta; como
petróleo. líquido, irrita a la piel y ojos.
Fórmula: C6H14 En caso de inhalación causa
CAS: 110-54-3 tos y cansancio a
Masa molecular: 86.17 concentraciones bajas. A
g/mol concentaciones altas, tiene
Punto de fusión: -95.6 °C efecto narcótico provocando
Punto de ebullición: 69 °C adormecimiento, confusión
mental e inconciencia.
Una exposición crónica
provoca pérdida de
sensibilidad en manos y pies
.
Apariencia: líquido No se clasifica como
incoloro, claro, altamente toxicidad aguda, se sospecha
volátil con olor penetrante que provoca cáncer, puede
como a éter provocar somnolienciaa o
Peso molecular: 84.96 g/mol vértigo, vómitos, náuseas en
Diclorometa Fórmula: CH2Cl2 caso de ingestión
no Punto de fusión: -95° C
Punto de ebullición: 40° C
Densidad: 1.33 g/cm3 a
20°C

Material

Vaso de precipitados 50 mL Placa cromatográfica

Pinzas
Pipeta graduada 10 mL
Vaso de precipitados de 100 mL
Caja de petri
Capilar
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Hipótesis
Conforme se aumenta la polaridad del eluyente las muestras saldrán más arriba, y más pegadas,
por lo que será más difícil poder comparar y analizar las muestras ya que no habrá separación de
componentes.

Resultados y observaciones

El hexano no subió nada, por lo que se utilizó esta misma placa para la mezcla de 80-20, en el 80-
20 la muestra 1 y 2 subieron rápidamente. Se eligió la sustancia principal de cada de cada placa y
se obtuvo el Rf de cada una de ellas, los resultados obtenidos se desmuestran en la siguiente tabla.

Eluyente Muestra Distancia Distancia Rf

comp eluyente
Hexano- Muestra 1 1 4 0.25
Acetato de Muestra 2 3.5 4 0.875
etilo 80:20
Muestra 3 2.4 4 0.6

Hexano- Muestra 1 2.8 4 0.7

Acetato de Muestra 2 3.7 4 0.925
etilo 50:50
Muestra 3 3.5 4 0.875

Ilustración 1 Placas cromatográficas

Análisis de resultados
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Para la preparación de un capilar, se calienta en un mechero Bunsen y se estira, posteriormente se

rompe a la mitad. Se tiene que cuidar que el capilar este derecho de la parte que se usará para
aplicar las muestras, en caso de no ser así, con la uña se puede tallar para que quede derecho. Es
necesario marcar una línea muy ténue en la placa a 5 mm del borde inferior, y se recomienda que
se marque suavemente (para no dañar la placa) donde se aplicarán las muestras teniendo en cuenta
que la separación entre cada muestra debe ser de al menos 0.5 cm. La aplicación de la muestra debe
de ser sutil y sin dejar el capilar pegado a la placa ya que se puede generar una mancha muy grande,
esta no debe superar un diámetro de 2 mm, se debe de aplicar varias veces la muestra. Para la
preparación de la cámara de elusión es necesario un recipiente de tamaño adecuado para la placa
cromatográfica, se rellena con la cantidad de eluyente necesaria para que la placa cromatográfica
este en contacto sin que la muestras esten en contacto directo con el eluyente. Se debe de tapar el
recipiente mientras se deja que el eluyente migre.
Como se puede observar en la ilustración 1 el eluyente que permite una mejor separación
de los componentes es la mezcla 80:20, comparado con la mezcla 50:50 que los compuestos estan
muy juntos y no se puede observar, esto nos indica que la mezcla 50:50 es un sistema muy polar y
necesitamos un disolvente menos polar.
Basándonos en la placa 1, con la cual se usó la mezcla 80:20 la sustancia más polar es la muestra
1, como se observa es la que más pegada está al lugar donde se aplicaron las muestras, lo que quiere
decir que interactuo más con la alúmina lo que hace que eluya más lentamente. La muestra
problema menos polar es la muestra 2, dado que es la que eluyó hasta el final. La sustancia más
pura en este caso sería la muestra 3 ya que no presenta tantas manchas comparada con la muestra
2 y 3, la sustancia más impura es la dos porque presenta más manchas que las demás muestras, esta
presenta alrededor de 5 impurezas.
A continuación se muestra en Rf de una impureza y de la sustancia principal de cada muestra en el
sistema [Link]
Eluyente Muestra Distancia Distancia Rf
comp eluyente
Hexano- 1 0.9 4 0.225
Acetato de (impureza)
etilo 80:20 2 2.8 4 0.7

No reveló
-------
impureza
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Hexano- Muestra 1 1 4 0.25

Acetato de (sustancia
etilo 80:20 principal )
Muestra 2 3.5 4 0.875

Muestra 3 2.4 4
0.6

Conclusión
Se realizaron tres cromatografías en capa fina con placas cromatográficas de sílica gel,
mediante el uso de tres sistemas de elusión, se identificaron las diferencias de estos diferentes
sistemas de elusión, comparando las distintas placas, se determinó que el sistema de elusión más
efectiva para la cromatografía en capa fina de nuestras muestras problemas fue la mezcla de
eluyentes Hexano-Acetato de etilo (80:20); ya que nos permitió observar con mayor facilidad las
manchas que se presentaron en la placa cromatográfica ya que estas estaban más separadas.

Referencias

Corzo, A., (2019) Técnicas de análisis en química orgánica, Facultad de Ciencias Forestales,
U.N.S.E.
Principios de la cromatografía en capa fina (s.f.) Principios de la cromatografía en capa fina,
Bioted.
Thin Layer Chromatography. (2019, December 5). [Link]