“UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA MARIA”
FACULTAD DE CIENCIAS E INGENIERÍAS BIOLOGICAS Y
QUIMICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA Y
ZOOTECNIA
MICROBIOLOGÍA GENERAL VETERINARIA
DE : Fabiana Mia Pacheco Marroquin
Cristhofer Jossue Ticona Apaza
Lucas Mateo Velázquez Rivera
Libertad Gabriela Vera Postigo
Alumnos
A : Dra. Katerinne Vercy Cuadros Rodríguez
Docente
REFERENCIA: Práctica N° 11: Prueba de Sensibilidad Microbiana a los
Antibióticos
FECHA : 8 de Junio del 2025
SEMESTRE IMPAR 2025
AREQUIPA – PERÚ
I. Objetivos
● Conocer que las bacterias pueden ser sensibles a la acción de
diferentes antibióticos según su naturaleza.
● Reconocer la importancia de los resultados de la prueba de
antibiograma en la clínica médica.
● Comprender y desarrollar la técnica de sensibilidad antibiótica o
antibiograma.
II. Marco Teórico
En el ámbito de la medicina veterinaria, el tratamiento de enfermedades infecciosas
requiere una adecuada selección de los antibióticos, lo cual depende en gran
medida del conocimiento de la especie bacteriana involucrada. Para lograr una
terapia efectiva, es esencial determinar la sensibilidad del microorganismo frente a
distintos agentes antimicrobianos, ya que no todas las bacterias responden de igual
manera a un mismo antibiótico.
La identificación del microorganismo patógeno representa un paso clave en el
proceso terapéutico, ya que permite elegir un antibiótico basándose en las
características reportadas en la literatura científica. Sin embargo, factores como la
resistencia antibiótica —que puede desarrollarse naturalmente o por uso
inadecuado de antimicrobianos— pueden interferir en la efectividad del tratamiento,
volviéndolo ineficaz.
Para evaluar esta sensibilidad, se recurre a la prueba de sensibilidad bacteriana a
los antibióticos, también conocida como antibiograma. Esta prueba permite conocer
de manera in vitro la eficacia de distintos antibióticos frente a cepas bacterianas
específicas. Su aplicación es crucial para seleccionar el antibiótico que garantice
una acción terapéutica confiable y evite el uso indiscriminado de medicamentos.
Existen diversas técnicas de antibiograma, siendo una de las más utilizadas la
difusión en agar, también conocida como método de Kirby-Bauer. Esta técnica
consiste en aplicar discos impregnados con concentraciones conocidas de
antibióticos sobre una placa de agar inoculada con la bacteria a estudiar. Al
incubarse, los antibióticos difunden en el medio y, si son efectivos, inhiben el
crecimiento bacteriano formando un halo de inhibición alrededor del disco. El
diámetro de este halo refleja la capacidad del antibiótico para eliminar o inhibir el
microorganismo, y permite clasificarlo como sensible (S), intermedio (I) o resistente
(R).
La interpretación de los resultados depende de tablas de referencia específicas,
como las publicadas por el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Estas
tablas consideran el tipo de antibiótico, la dosis utilizada y la especie bacteriana,
asegurando así una evaluación precisa y estandarizada.
III. Equipo, materiales e insumos
3.1. EQUIPO
● Estufa de incubación.
3.2. MATERIALES
● Tubos de ensayo 5 ml
● Hisopos estériles
● Mechero de gas propano
● Regla o vernier milimétrico
● Pinzas metálicas
● Estándar de turbidez Mc Farland 0.5
3.3. INSUMOS
● Placas de agar con medio de Mueller Hinton
● Medios de cultivo desarrollados con cepas identificadas
● Discos comerciales de antibióticos
● Tubos de ensayo con 2ml de Suero fisiológico o Caldo Tripticasa Soya o
caldo de Mueller-Hinton.
IV. ACTIVIDADES
5.1. Preparación del inóculo:
a) Desde un cultivo puro de bacterias, transferir 4 a 5 colonias a un tubo con 2
ml de suero fisiológico (Caldo Tripticasa soya o caldo Mueller-Hinton).
b) Obtener una turbidez equivalente: estándar N.º 0.5 de Mc Farland
(correspondiente aproximadamente a 10⁸ UFC/ml).
5.2. Sembrado del inóculo:
a) Antes de 15 minutos, sembrar el inóculo
preparado en un medio Mueller Hinton en
placa: hacer la extensión con ayuda de un
hisopo estéril (uniformemente en toda la
superficie de la placa por estría menuda,
para obtener un crecimiento en césped
homogéneo).
b) Dejar secar 5 minutos.
5.3. Colocación de los discos antibióticos:
a) Tome unas pinzas metálicas y esterilice por flameado con alcohol.
b) Tome los discos de antibióticos seleccionados según las recomendaciones
descritas para la bacteria a desafiar.
c) Colóquelos sobre la superficie de la placa equidistantemente a una distancia
mínima de 25 mm.
5.4. Incubación y observación de los halos de inhibición:
a) Llevar a incubar la placa dentro de los 15 minutos de aplicados los discos de
sensibilidad.
d
b) Tiempo de incubación: 24 horas, temperatura: 35 a 37°C. Variaciones en
estos valores dependerá de casos especiales, indicado en la literatura.
c) Observar y medir el diámetro de los diferentes halos de inhibición formados
para cada disco utilizando una escala milimétrica (incluir el diámetro del
disco).
d) Para mediciones efectivas, tener en cuenta visualizar la vertical del campo de
visión, evitar las áreas de contaminación o halos anómalos, efectuar el
procedimiento sobre un fondo negro, etc.
e) Reporte de resultados, dependerá del tipo de antibiótico y de la cepa
trabajada, para lo cual existen tablas de referencia que son específicas en
cada caso. Anualmente el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)
publica la actualización de las tablas de interpretación denominado
“Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Thirty third
Informational Supplement” conocidos como los documentos M100 (CLSI,
2023).
f) Consulte para ello bibliografía especializada, recuerde que estos son
resultados in vitro:
○ Sensible (S): el antibiótico es totalmente eficaz en eliminar a las
células bacterianas.
○ Intermedio (I): el antibiótico tiene una efectividad media en eliminar a
las células bacterianas, es probable una larga terapia.
○ Resistente (R): el antibiótico No es efectivo en eliminar a las células
bacterianas.
V. RESULTADOS
Todavía no se han observado resultados ya que se tuvo que dejar incubar.
VI. CUESTIONARIO
6.1. ¿Cuál es la razón por la cual se utilizan tablas específicas para la medición
de los halos de inhibición en ciertas especies?
Se utilizan tablas específicas porque cada especie bacteriana puede
responder de manera diferente a los mismos antibióticos. Además, las
características del crecimiento, metabolismo y mecanismos de resistencia
varían entre especies, lo que influye en el tamaño del halo de inhibición. Las
tablas de referencia (por ejemplo, las del CLSI) permiten interpretar
correctamente los resultados según la bacteria y el antibiótico, clasificando la
sensibilidad como Sensible (S), Intermedio (I) o Resistente (R).
6.2. ¿Qué utilidad le reconoce a la prueba de antibiograma y desventajas?
Utilidades:
● Determina la sensibilidad de una bacteria a diferentes antibióticos.
● Ayuda a seleccionar el tratamiento antimicrobiano más eficaz.
● Evita el uso innecesario de antibióticos y ayuda a reducir la resistencia
bacteriana.
● Es fundamental en el manejo de infecciones en medicina veterinaria y
humana.
Desventajas:
● Es una prueba in vitro, por lo que puede no reflejar con exactitud la respuesta
en el organismo (in vivo).
● Requiere condiciones controladas y experiencia para su correcta ejecución e
interpretación.
● Puede no ser aplicable a bacterias de crecimiento lento o exigencias
nutricionales específicas.
● En algunos casos, el tiempo de obtención de resultados puede retrasar el
inicio del tratamiento.
6.3. ¿Qué importancia en el tratamiento clínico significa un resultado
“Intermedio”?
Un resultado “Intermedio” (I) indica que el antibiótico tiene una eficacia limitada
frente a la bacteria. Esto significa que:
● El tratamiento podría ser efectivo solo si se usa una dosis más alta del
antibiótico.
● Puede requerir una terapia prolongada.
● El éxito terapéutico depende de factores como la concentración del antibiótico
en el sitio de infección o el estado inmunológico del paciente.
● No es la opción ideal, pero podría considerarse si no hay alternativas mejores
o si hay razones clínicas justificadas.
VII. Bibliografía
1. Cavalieri, S., Harbeck, R. J., McCarter, Y. S., Oteza, J. H., Rankin, I. D.,
Sautter, R. L., Spiegel, C. A. (2005). Manual de pruebas de susceptibilidad
antimicrobiana. University of Washington.
2. Sacasquiche Contreras, R., & Velásquez Pomar, J. (2002). Manual de
Procedimientos para la Prueba de Sensibilidad Antimicrobiana por el Método
de Disco Difusión. Serie de Normas Técnicas Nro 30. Ministerio de Salud.
Instituto Nacional de Salud.
