Rev. Soco Entomol. Argent.

54 (1-4): 83-88, 1995

TOXICIDAD DE LACTONAS SESQUITERPENICAS SOBRE LARVAS DE

TENEBRIO MOLITOR (COLEOPTERA: TENEBRIONIDAE)

SOSA, Marta E*., C. E. TONN** , E. GUERREIRO** y O. S. GIORDANO**

ABSTRACT. Toxicity of sesquiterpene lactones against Tenebrio molitor

(Coleoptera: Tenebrionidae) larvae. Six sesquiterpene lactones (mexicanine I,
helenalin, hymenin, ludartin, desacetylmatricarin, and desacetoxymatricarin)
isolated from the genera Gaillardia, Parthenium, and Artemisia (all Asteraceae)
were tested for their toxicity against larvae of Tenebrio molitor (L.). All
sesquiterpenoids were active as well as the synthetic compound a-methylen-y-
butyrolactone. The comparison shows that conjugated a-methylen-y-Iactone
system and a, B-unsaturated cyclopentenone ring are both important for the
bioactivity.

INTRODUCCION

Se han hecho distintas interpretaciones en relación con la producción de

metabolitos secundarios por las plantas superiores. En el pasado fueron considera-
dos como productos de desecho del metabolismo primario y sin importancia vital para
las mismas. Hacia finales de la década del cincuenta se sugirió que este tipo de com-
puestos estaría relacionado con el comportamiento alimentario de los insectos
(Fraenkel, 1959).
En la actualidad es aceptado el papel que estos productos desempeñan en la
interacción planta-insecto, actuando como tóxicos agudos, repelentes, inhibidores del
desarrollo o agentes antialimentarios (Harborne, 1988, 1993; Ley, 1990; Nahrstedt,
1988). Así es posible presumir que la coevolución de insectos y plantas ha dado ori-
gen a una serie de estrategias defensivas por parte de éstas que han afectado la evo-
lución de los primeros. Uno de los grupos de metabolitos secundarios que han des-
pertado mayor interés, tanto por el número de estructuras aisladas como por las ac-
tividades biológicas detectadas, es el de las lactonas sesquiterpénicas (Picman, 1986).
Estos productos naturales son típicos de las especies de Asteraceae y a la fecha se
conocen más de 2000 estructuras. Entre los diversos núcleos de lactonas se destacan
los denominados germacranólidos, eudesmanólidos, guaianólidos y pseudoguaianó-
lidos.
La necesidad de proteger las fuentes alimentarias del ataque de insectos perju-
diciales mediante el uso de medios ecológicamente aceptables, ha orientado las in-
vestigaciones a la búsqueda de productos naturales modificadores del comportamiento

* Cátedra de Entomología, y ** Qca. Orgánica-INTEQUI-CONICET, Facultad de Química,

Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional de San Luis, Chacabuco y Pedernera, 5700 San Luis,
Argentina.
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de insectos plaga. La evaluación de una actividad biológica, presente en una familia

de compuestos estructuralmente relacionados, permite profundizar en el conocimiento
de la relación estructura-actividad. Esta información puede ser utilizada en la pro-
gramación de síntesis orgánicas de productos de selectividad comprobada, de bajo
impacto ambiental y accesibles a objetivos económicos.
Como parte de un estudio sistemático del comportamiento de larvas de Tenebrio
moliior (L.) (Coleoptera: Tenebrionidae) frente a los distintos metabolitos secundarios
de las plantas (Luco et al., 1994; Sosa et al., 1994), se presentan aquí los resultados
obtenidos por tratamiento crónico con seis sesquiterpenoides de tipo guaianólido y
pseudoguaianólido.

MATERIAL Y METODOS

Material biológico. Se utilizaron larvas del tercero y cuarto estadios de T. molitor

provistas por el Laboratorio de Zoología Agrícola de la Facultad de Ciencias Agra-
rias de la Universidad Nacional de Cuyo. Los insectos fueron mantenidos a 21 ± 1° C
con fotoperíodo de 16:8 (L:O) y alimentados con alimento balanceado molido (Cargill,
División Alimentos para Animales). Los ensayos biológicos se practicaron en cajas
plásticas de 20,0 x 15,0 X 5,0 cm cubiertas con gasa.

Compuestos ensayados (Fig. 1). (1) Mexicanina 1 y (2) helenalina fueron obte-
nidos a partir de Caillardia megapoiamica (Spreng.) Baker var. radiata (Del Vitto &
Petenatti 2841 UNSL). (3) Hymenina se aisló de Parihenium hysterophorus L. (Del Vitto
1672 UNSL). (4) Ludartina se obtuvo de Artemisia douglasiana Besser (Del Vitto 55
UNSL). De Artemisia mendozana D.C. var. paramillcensis (Ambrosetti, Roig & Del Vitto
1442 MERL) se aislaron los sesquiterpenos (5) desacetoximatricarina y (6)
desacetilmatricarina; (7) a-metilen-y-butirolactona fue adquirido en Aldrich Chemical
Co. En todos los casos el material vegetal (hojas y tallos tiernos) fue secado al aire a
la temperatura ambiente y extraído con cloroformo. El extracto obtenido luego de
concentrar a presión reducida fue purificado mediante sucesivas cromatografías en
columna de gel de sílice (Si0 2, 70-230 mesh, 60 Á), eluidas con mezclas de
hexanoacetato de etilo de polaridad creciente (Giordano et al., 1990). Las identifica-
ciones se hicieron sobre la base de datos espectroscópicos y constantes físicas y su
comparación con la bibliografía (Yoshioka et al., 1973).

Bioensayo. La incorporación de los productos naturales en el alimento balan-

ceado molido se realizó suspendiendo 50 g del mismo en 150 ml de acetona destila-
da, que contenía 5,0 mg de la lactona correspondiente. La eliminación del solvente
en evaporador rotatorio a 50° C al vacío, permitió obtener una mezcla homogénea y
libre de acetona con una concentración de 100 ppm del producto en estudio. Los con-
troles se prepararon de igual forma sin el agregado de las sustancias a ensayar. Las
larvas, sometidas a un ayuno previo de 24 horas, fueron ubicadas en número de veinte
en cajas plásticas tapadas con gasa, en las que previamente se había colocado el ali-
mento correspondiente a cada ensayo. Las observaciones se realizaron cada cinco días,
determinándose el porcentaje de mortalidad (Henderson et al., 1955) hasta el día vein-
ticinco.

RESULTADOS Y DISCUSION

Los resultados obtenidos se presentan en la tabla 1 y corresponden al promedio

de diez experimentos por duplicado para cada uno de los productos ensayados (Fig.
 SOSA, M E. ct al., lactonas sosquiterpénicas 85

15
(1)

(3)

~
O

(5)

11111

(8)
(7)

~O

OH

Fig. 1. (1) mexicanina 1, (2) helenalina, (3) hvmenina. (4) ludartina, (5) desacetoximatricarina, (6)
desacetilmatricarina, (7) rx-metilen-y-butirolactona, (8) tenulina.

1). En todos los casos las comparaciones fueron realizadas mediante el estadístico X2 ,
considerando no significativas las diferencias para p > 0,05. En la figura 2 se mues-
tran las curvas ajustadas de mortalidad en función del tiempo.
Con la excepción de (5) y (6), en todos los sesquiterpenoides ensayados está pre-
sente un grupo funcional y-Iactona que posee en C-a un grupo metileno exocíclico. La
bioactividad de lactan as sesquiterpénicas es atribuida a este tipo de funcionaliza-ción,
la que puede comportarse como aceptar de grupos tioles de enzimas que poseen gru-
pos sulfhidrilos libres. Esto ha sido demostrado Dar la disminución de la actividad
enzirnática de fosfofructoquinasa y glucogenosintetasa en presencia de lactorias
86 Rev. Soco Eniornol. Argent. 54 (1-4), 1995

Tabla 1. Porcentajes de mortalidad de diferentes terpenos sobre larvas de T. molitor

en condiciones de laboratorio. X2 : a-b, a-c, h-e: p ::; 0,001.

Porcentajes de mortalidad ± DS
Compuesto 5 días 10 días 15 días 20 días 25 días

mexicanina 1 15,5 ± 5,5 25,0 ± 5,7 33,5 ± 5,8 46,0 ± 4,6 57,0 ± 5,9 a

helenalina 9,0 ± 3,9 17,5 ± 3,5 26,0 ± 3,9 32,5 ± 5,8 44,0 ± 6,1 b

hymenina 10,5 ± 3,7 21,5 ± 4,7 27,0 ± 4,8 35,0 ± 5,3 45,0 ± 8,5 b

ludartina 7,5 ± 7,2 14,0 ± 6,1 20,0 ± 6,2 26,0 ± 9,1 32,5 ± 9,2 e

desacetoximatricarina 9,5 ± 1,6 17,5 ± 4,2 22,5 ± 6,8 30,0 ± 7,4 36,0 ± 8,4 e

desacetilmatricarina 9,5 ± 2,8 17,5 ± 4,2 24,5 ± 8,9 30,0 ± 6,6 35,5 ± 8,6 e

rx-metilen-y- butirolactona 12,5 ± 4,2 25,5 ± 4,5 33,3 ± 9,3 45,8 ± 9,7 55,8 ± 7,4 a

Control O 0,5 ± 1,5 1,5 ± 2,4 2,0 ± 4,2 3,0 ± 4,2

60

40

20

o
o 5 la 15 20 25 día

Fig. 2. Curvas ajustadas de mortalidad en función del tiempo. (O) mexicanina J, (O) helenalina e
hymenina (ajustada), (+) guaianólidos (ajustada), (.) a-metilen-y-butirolactona, (M control.

sesquiterpénicas (Picman, 1986). Sin embargo, otros grupos funcionales conjugados,

como el anillo ciclopentenona, pueden actuar como sustratos. Tal es el caso de tenulina
(8) que, si bien no presenta un sistema y-lactona-a, ~-insaturado, es activa frente a lar-
vas de Peridroma saucia y Ostrinia orbicularis (Arnanson et al., 1987). No obstante, esta
 SOSA, M. E. et al., lactonas sesquiterpénicas 87

misma lactona es inactiva frente a larvas de Triboliurn confusum (Picman, 1986). Estos
resultados demues tran la dificultad de proponer un modelo general de relación estruc-
tura-actividad.
A partir de los datos obtenidos se observa que el producto natural más activo
es (1), presentando diferencias significativas con (2) y (3). Es importante destacar que
si bien (1) y (2) presentan la misma funcionalización, resultan tener distinta configu-
ración en C-6 y C-8. En (1) el cierre de la lactona es C-8a y el hidroxilo en C-6 ocupa
una posición ~ mientras que en (2) dichos centros quirales poseen la configuración
opuesta. En relación con la hymenina (3), el cierre de la lactona ocurre en posición C-
6~ y sin embargo presenta una actividad biológica comparable a helenalina (2), con
cierre en C-8~. Aparentemente el cierre de la y-lactona no tendría mayor incidencia
en la actividad larvicida, esto ha sido observado también en compuestos análogos
frente a larvas de Heliothis zea (Boddie) (Isman, 1983). Los productos (1-3) pertenecen
al grupo de los pseudoguaianólidos. Cuando el bioensayo se realiza utilizando el
producto comercial (7) en concentración de 100 ppm, no se observan diferencias sig-
nificativas respecto de mexicanina 1, la más tóxica de las 1actonas aquí ensayadas. Esto
parecería confirmar la importancia que ha sido asignada al anillo lactónico in saturado
en la bioactividad. El segundo grupo de compuestos naturales, ludartina (4),
desacetoximatricarina (5) y desaceti1matricarina (6), pertenecen a la serie de los
guaianólidos, y los bioensayos no muestran diferencias significativas entre ellos. De
estos tres compuestos sólo (4) posee un sistema a.-meti1en-·y-butirolactona y no pre-
senta el anillo ciclopentenona, mientras que los otros dos tienen esta última
funcionalización y carecen de sistema lactónico insaturado.
Si bien es profusa la literatura en la que se asigna a los sistemas carbonílicos a,
~-insaturados un rol determinante en la bioactividad de 1actonas sesquiterpénicas
(Arnanson et al., 1987; Harrnatha & Narwrot, 1984; Picman, 1986), las propiedades
tóxicas de los productos (5) y (6) no podrían ser explicadas únicamente sobre la base
de este requerimiento estructural. En compuestos relacionados se ha demostrado que
la posición ~ en un anillo ciclopentenona a, ~-insaturada debe encontrarse no susti-
tuida para que el compuesto resulte bioactivo (Lee et al., 1974; Giordano et al., 1990).
Sin embargo, la toxicidad observada para (5) y (6), comparable a la del producto (4),
indicaría que en las propiedades tóxicas aquí medidas parecería no influir la
reactividad de carbono ~ frente a un nucleófilo.
Sobre la base de los datos presentados no es posible determinar si el incremen-
to en la mortalidad en los lotes experimentales, a la única dosis ensayada de 100 ppm,
se debe a un efecto antialimentario (<<antifeedant effe ct» ), a una disminución en la
transformación de la ingesta en biomasa, a un efecto tóxico post ingesta o a alguna
combinación de ellos. Se continúa trabajando en la evaluación de la bioactividad de
extractos crudos de especies vegetales que son fuente de lactonas sesquiterpénicas,
como una alternativa para el control de plagas.

AGRADECIMIENTOS

Nuestro agradecimiento a los Profesores Guido Máco1a y José Carda Sáez (Fa-
cultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de Cuyo) por sus valiosas suge-
rencias. A la Prof. Isabel Giménez por su contribución en los aspectos estadísticos.
Este trabajo ha sido realizado gracias a subsidios del CONICET y de la UNSL.
88 Reo. Soco Eniomol. Argent. 54 (1-4), 1995

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Recibido: 6-VII-1994
Aceptado: 17-VIH-1994