UD 1: Los laboratorios de biología molecular y citogenética.

Índice:
1. Conceptos de biología molecular y citogenética………………………………………………………………………………3
1.1. Técnica básica: PCR.
1.2. Termociclador.
1.3. Efecto Peltier.
1.4. Termociclador a tiempo real.

2. La electrodoresis………………………………………………………………………………………………………………….4
2.1. Fundamentos de las técnicas de separación electroforéticas.
2.2. Tipos de técnicas electroforéticas.
2.3. Documentador de geles.

3. Equipamiento genérico……………………………………………………………………………………………………………..5
3.1. Cabina de bioseguridad.
3.2. Sistema de puri cación del agua.
3.3. Espectrofotómetro.
3.3.4. Ley de Lambert-Beer.

3.4. Microscopio.
3.4.1. Enfoque del microscopio.
3.4.2. Precauciones y mantenimiento.

3.5. Autoclave.
3.6. Incubador o estufa.
3.7. Baño termostatizado.
3.8. Termobloque y placa calefactora.
3.9. Centrífuga y microcentrífuga.
3.10. Neveras y congeladores.
3.11. Balanzas.
3.11.1. Lugar de emplazamiento.
3.11.2. Técnica de pesada.

3.12. Agitadores magnéticos.

3.13. Vórtex o agitadores de tubos.
3.14. pH-metro.

4. La estructura del laboratorio de biología molecular……………………………………………………………………….…..12

5. Flujo de trabajo en el laboratorio de biología molecular………………………………………………………………………14

6. Condiciones de trabajo en el laboratorio de biología molecular……………………………………………………………..14

6.1. Minimizar la contaminación de las muestras.
6.2. Normas para la manipulación de materiales y reactivos.

7. Técnica aséptica en laboratorio de biología molecular……………………………………………………………………….15

8. Uso e ciente de los recursos en laboratorio de biología molecular…………………………………………………………16

9. El laboratorio de citogenética y cultivos celulares…………………………………………………………………………….16

9.1. Equipamiento especí co del laboratorio de cultivos celulares.
9.2. Equipamiento especí co del laboratorio de citogenética.
9.3. Equipamiento común del laboratorio de citogenética y cultivo celular.
9.4. Estructura del laboratorio de citogenética y cultivo celular.
9.5. Condiciones de trabajo: Técnica aséptica.

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 10. Seguridad e higiene en el laboratorio………………………………………………………………………………………….19
10.1. Normativa legal: Notas técnicas de prevención.
10.2. Productos de riesgo en el laboratorio.
10.3. Normas generales de higiene en el laboratorio.
10.3.1. Lavado de manos.

10.4. Equipos de protección en el laboratorio.

10.4.1. Equipos de protección en caso de emergencia.
10.4.2. Derrame en el laboratorio.

10.5. Normas generales de seguridad en el laboratorio.

11. Gestión de residuos……………………………………………………………………………………………………………..24

11.1. Marco legal de residuos sanitarios en Galicia.
11.2. Clasi cación de residuos sanitarios en Galicia.
11.2.1. Residuos sanitarios no peligrosos.
11.2.2. Residuos sanitarios peligrosos.
11.3. Anexo I.

12. Procedimientos de gestión de residuos……………………………………………………………………………………….26

12.1. Gestión de los residuos de la Clase I.
12.2. Gestión de los residuos de la Clase II.
12.3. Gestión de los residuos de la Clase III y Clase IV.
12.4. Gestión de los residuos de la Clase V.

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 1. Conceptos de biología molecular y citogenética.

• Biología molecular: Parte de la biología que estudia la composición, estructura y moléculas biológicamente
importantes como las proteínas y los ácidos nucleicos.

CURIOSIDAD: Las proteínas se estudian en los laboratorios de proteómica.

• Citogenética: Parte de la genética que estudia la estructura, función y comportamiento de los cromosomas. En la
actualidad, la citogenética molecular utiliza técnicas de biología molecular.

Los laboratorios de biología molecular y los laboratorios de citogenética se engloban en los laboratorios de genética.

1.1. Técnica básica: PCR.

La PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) se trata de una técnica que nos permite, a partir de una cantidad
mínima de ADN, obtener millones de copias.

Al ser considerada la herramienta molecular por excelencia, la estructuración del laboratorio, los ujos y las formas de
trabajo se van a organizar alrededor de esta técnica. Tal que, se divide el equipamiento en especí co y genérico.

1.2. Termociclador.

El termociclador es el aparato básico en cualquier laboratorio de biología molecular, en él se lleva a cabo la PCR.

Este permite realizar secuencial mente un número elevado de ciclos repetitivos programables con temperaturas
diferentes y distintos tiempo de incubación.

• Tapa del bloque incubador: Tapa termostatizada a 102-105ºC que, una vez
cerrada, entra en contacto directo con la tapa de los tubos de reacción.

• Bloque incubador: Soporte metálico, con múltiples pocillos para colocar los
tubos de reacción de PCR.

Este es capaz de mantener de manera homogénea, en todo su volumen, durante

los tiempos que se requiera, las distintas temperaturas que se programan para
cada fase y en cada uno de los ciclos de la PCR.

El rango de temperaturas que pueden alcanzar estos bloques normalmente va de

4ºC a 96ºC. No aumentaremos de esa temperatura para no producir una
desnaturalización permanente.

Los distintos modelos de temocicladores que existen se diferencian principalmente en la tecnología que utilizan para
calentar y enfriar este bloque:

- Sistemas de aire caliente y aire frio o resistencias eléctricas: Sistema más utilizado en los aparatos más antiguos.
- Materiales semiconductores en conjunción con el efecto Peltier: Termocicladores más actuales.

1.3. Efecto Peltier.

El efecto Peltier es un efecto termoeléctrico que produce una

transferencia de calor entre 2 metales o semiconductores diferentes
unidos por 2 soldaduras cuando son atravesados por corriente eléctrica
continua.

El resultado nal es que uno de los semiconductores se calienta y otro

se enfría. Si se invierte la polaridad de la corriente continua, también se
invierte el calentamiento/enfriamiento de cada semiconductor.

Este efecto se utiliza en los termo cicla dores actuales para aumentar o
bajar rápidamente la temperatura del bloque de incubación, de los tubos
de reacción simplemente invirtiendo la polaridad de la corriente continua
que alimenta el circuito.

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 1.4. Termociclador a tiempo real.

El termociclador a tiempo real, también llamada PCR a tiempo real o cuantitativa, además de los
componentes descritos para el convencional, incorpora un sistema de láser y detección de
uorescencia capaz de excitar y medir la uorescencia emitida por cada tubo de reacción
individualmente.

Esta tecnología permite detectar la síntesis de productos de ampli cación en tiempo real.

2. La electrodoresis.

•Los ácidos nucleicos, ADN y ARN, tienen por naturaleza carga negativa.

•Si ponemos fragmentos de ADN extraído de una muestra biológica sobre un

soporte poroso (gel) y aplicamos un campo eléctrico, se producirá la
migración diferencial de los fragmentos a través de los poros de la matriz.

•La tinción del gel con bromuro de etidio (sustancia uorescente que se
intercala en la molécula de ADN y a la exposición con luz ultravioleta) permite
observar el resultado de esta migración.

• El tamaño de los fragmentos de ADN se puede estimar comparándolos con el patrón de bandas que se obtiene de
marcadores comerciales de peso molecular conocido.

• La electroforesis de ADN es útil para comparar patrones de bandas de diferentes muestras biológicas:
- Se puede usar para comparar muestras de individuo sano frente a individuo enfermo.
- Para identi car ácidos nucleicos de agentes infecciosos.
- Para la obtención de un fragmento determinado de ADN que, una vez localizado en el gel, puede ser extraído
para análisis posteriores.

2.1. Fundamentos de las técnicas de separación electroforéticas.

La electroforesis consiste en la migración de moléculas cargadas a través de un medio, por la acción de un campo
eléctrico.

Las técnicas electroforéticas se utilizan, por tanto, para separar compuestos como aminoácidos, pépticos, proteínas,
nucleótidos y ácidos nucleicos.

El comportamiento de una molécula en un campo eléctrico viene determinado por la movilidad electroforética, que
depende directamente de la carga (grupo fosfato: ácidos nucleicos), de la forma y del tamaño de las moléculas.

Para llevar a cabo una electroforesis se necesitan los siguientes elementos:

• Fuente de tensión o alimentación: Proporciona el campo eléctrico mediante 2 electrodos, el positivo (ánodo) y el
negativo (cátodo), y entre ambos se establece una diferencia de potencial.

- Las moléculas con carga negativa migran hacia el ánodo y las que tienen carga positiva hacia el cátodo.

• Cubeta: Recipiente en cuyos extremos se sitúan los electrodos y donde se vierte el tampón de electroforesis
(sustancia química).

• Soporte electroforético: Puede ser papel, membrana o gel.

Nosotros vamos a utilizar geles de agarosa y colorante de bromuro de etidio.

ROJO = POSITIVO.
NEGRO = NEGATIVO.

· Al polo + emigran - (Ánodo - Anión).

EJEMPLO: Cl.

· Al polo - emigran + (Cátodo - Catión).

EJEMPLO: Na, K.
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 2.2. Tipos de técnicas electroforéticas.

Según el tipo de soporte utilizado, hay distintas técnicas de electroforésis:

A. Electroforesis en acetato de celulosa:

Las membranas de acetato de celulosa, respecto al papel, presentan las ventajas de que son químicamente más
homogéneas y pueden transparentar, con lo que es posible cuanti car las sustancias que se separan, una vez teñidas o
reveladas por densitometría de transparencia.

Su aplicación principal es para separar proteínas del suero o proteinograma.

B. Electroforesis en gel:

Los geles permiten un principio adicional para la separación de sustancias, el tamaño, ya que modi cando su
concentración se consigue modi car el tamaño del poro. De esta forma, la separación puede llevarse a cabo
simultáneamente por diferencias de carga y tamaño.

• Geles de agarosa: La agarosa consigue buenas resoluciones en tiempos cortos. Se utiliza fundamentalmente
para separar fragmentos de ADN ampli cados por PCR o para testar la integridad de ADN y ARN.

• Geles de poliacrilamida: Se forman por la polimerización de los monómeros de acrilamida y bisacrilamida. Se

utilizan para separa moléculas de menor tamaño con mayor poder de resolución.

2.3. Documentador de geles.

El documentador de geles es un equipo que permite visualizar las bandas de ácidos

nucleicos en el gel después de la electroforesis y obtener una fotografía.

El equipo consta básicamente de:

• Transiluminador:

Consiste en una fuente de luz ultravioleta situada por debajo de una super cie transparente al UV donde se
coloca el gel.

Cuando la luz ultravioleta ilumina el gel, el agente intercalante emite uorescencia, visualizándose las
moléculas de ácidos nucleicos.

• Cámara fotográ ca: Sistema de captación de imágenes.

La visualización del gel se realiza con una cámara fotográ ca, adecuada para trabajar con luz UV y controlada
por un software especí co.

Con esta cámara es posible visualizar el gel en la pantalla de un monitor, mejorar las condiciones de la
imagen, obtener fotografías y realizar mediciones.

3. Equipamiento genérico.

3.1. Cabina de bioseguridad.

Las cabinas de seguridad biológica son equipos que proporcionan una barrera
de contención para trabajar de forma segura con muestras biológicas.

Se les conoce igualmente bajo otras denominaciones tales como: Cabinas de

bioseguridad, campanas microbiológicas o campanas de ujo laminar.

Las cabinas de ujo laminar pueden tener:

- Flujo horizontal: Busca mantener estéril el preparado.

- Flujo vertical: Además de la esterilidad del preparado se busca la protección del trabajador.

En los laboratorios de biología molecular se deben utilizar cabinas de ujo laminar vertical de clase II, que protegen de
contaminación a la muestra, a la persona manipuladora y al medio ambiente.

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 3.2. Sistema de puri cación del agua.

Debemos utilizar agua destilada o desionizada ya que, la mineralización condiciona el sabor y el olor.

CLASIFICACIÓN DE LOS TIPOS DE AGUA SEGÚN ASTM 1193:2001

Usada para procedimientos que requieran de máxima exactitud y

precisión.
EJEMPLOS: Espectometría atómica, fotometría de llama,
CLASE I
enzimología, gas en la sangre, tampones, soluciones bu er
de referencia y reconstrucción de materiales lio lizados
usados como estándares.

Recomendada para la mayoría de las pruebas analíticas y generales

Las más utilizadas de laboratorio.
EJEMPLOS: Análisis hematológicos, serológicos y
microbiológicos. También para métodos químicos en los que
especí camente no se indique o se haya comprobado que
CLASE II
requieren agua de calidad Clase I.

La ASTM especi ca que el agua Clase II sea preparada por

destilación y como factor importante recomienda que esté siempre
libre de impurezas orgánicas.

Satisfactoria para algunas pruebas generales de laboratorio.

EJEMPLOS: Análisis cualitativos, tales como uroanálisis,
procedimientos histológicos y parasitológicos. También para
el enjuague de muestras analíticas, preparación de
CLASE III soluciones de referencia y para el lavado o enjuague de
cristalería.

El enjuague nal de la cristalería debe hacerse con la clase de agua

especi cada para el procedimiento realizado.

Sirve para la preparación de soluciones y para el lavado o enjuague

CLASE IV
de cristalería.

En la puri cación del agua existen distintos procesos para eliminar las impurezas. Entre los más importantes se
encuentran:

• Filtración.
• Ultra ltración.
• Destilación.
• Osmosis Inversa.
• Adsorción con carbón activado.
• Desionización.

El agua ultrapura (Clase I), no se puede obtener con un solo proceso de puri cación, es necesario la combinación de
más de uno de ellos, para lograr la calidad deseada de acuerdo a sus características sicoquímicas.

El laboratorio de biología molecular requiere un suministro estable de agua puri cada Clase II y agua ultrapura Clase I.

La elección de uno u otro dependerá del consumo diario de ambos tipos de agua. Cuando el consumo de ambos tipos
de agua es muy bajo, se pueden adquirir como si se trataran de un reactivo más.

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 3.3. Espectrofotómetro.

El espectrofotómetro es un instrumento utilizado para medir la

energía absorbida o transmitida por una disolución atravesada
por un haz de luz.

Podemos determinar la concentración de la sustancia que

absorbe luz dentro de la disolución.

Los componentes básicos de un espectrofotómetro son:

• Fuente de luz: Produce un haz de luz.

• Ranura de entrada.
• Monocromador.
• Rendija de salida.
• Muestra.
• Detector: Detecta la cantidad de energía que recibe.

La cubeta o celda de muestra es aquel recipiente donde se coloca la muestra líquida para la medición. Pueden ser de
distintos tipos y tamaños (cuadradas, rectangulares, redondas), además, suelen estar fabricadas en vidrio o en plástico.

Si se utilizan cubetas redondas se deben marcar e introducir en el aparato siempre en la misma posición.

La medida de la concentración de ácido nucleico de una muestra y su pureza requiere lecturas de absorbancia en un
rango de longitudes de onda comprendidas entre 230 y 320 nm, por lo que se requiere un espectrofotómetro que cubra
ese rango.

Dado que en ocasiones la cantidad de muestra es muy pequeña, se han diseñado espectrofotómetros especí cos para
cuanti car ácidos nucleicos que utilizan cantidades mínimas de muestra (1 ul) basados en cubetas capilares.

3.3.4. Ley de Lambert-Beer.

• Establece que la concentración de una sustancia es directamente

proporcional a la cantidad de luz absorbida o inversamente proporcional al
logaritmo de la luz transmitida.

• Cuando un haz de luz pasa a través de un medio, se registra una pérdida

de intensidad, debido a la absorción por parte de la sustancia.

• Por lo tanto, la intensidad de un haz incidente decae exponencialmente a

medida que pasa a través del absorbente.

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 3.4. Microscopio.

El microscopio permite observar muestras. En biología molecular, un microscopio de uorescencia es imprescindible

para interpretar las técnicas de hibridación in situ uorescente.

Existen 2 tipos de microscopios:

A. Microscopio óptico: Emplea luz visible y una serie de dispositivos para mejorar la visibilidad.

• Microscopio de campo oscuro: Disco opaco en el condensador.

• Microscopio de contraste de fases: Diafragma en el condensador.
• Microscopio de interferencia: Prisma que permite una mayor resolución.
• Microscopio de uorescencia: Fuente de luz ultravioleta.

B. Microscopio eléctrico: Utiliza un haz de electrones.

Los microscopios están constituidos por 3 sistemas:

• Sistema óptico, compuesto por:

- Objetivos: Complejo sistema de lentes localizados directamente sobre el objeto que forman la imagen primaria en
el microscopio, esta es después ampli cada por el ocular. Existen 2 tipos:

Objetivo de inmersión en aceite: Objetivo del microscopio que requiere usarse con aceite entre la lente del
objetivo y la muestra a observar. Es el 100x y aumenta 100 veces.

Objetivos secos: Son aquellos en los cuales existe un espacio ocupado por aire entre la lente frontal y el
cubreobjetos. Aquí se encuentran los objetivos de menor aumento como son el de 4x, 10x y 40x que aumentan
4, 10 y 40 veces respectivamente.

- Oculares: Sistema de lentes más cercano al ojo del observador, utilizado para ampli car más la imagen primaria
transmitida por el objetivo. Suele suponer un aumento de 10x, es decir, 10 veces.

• Sistema mecánico, formado por:

- Base o pie: Es la parte inferior del microscopio, está fabricada con
metal pesado para evitar las vibraciones.

- Platina: Es la placa de metal ennegrecido (para la re exión) redonda,

cuadrada, o de otras formas, donde se colocan las preparaciones.
Puede estar ja o adosada a un carro con tornillos que le permiten
movimientos de traslación para centrarla.

- Brazo: Sostiene al tubo y su movimiento de translación vertical.

- Tornillo macrométrico: Permite realizar movimientos rápidos de la platina o tubo del microscopio, para encontrar
la distancia focal (enfoque grueso).

- Tornillo micrométrico: Tiene un movimiento suave que permite hacer la imagen más nítida (enfoque no).

- Revólver: Mecanismo giratorio que permite el cambio de los diferentes objetivos del microscopio.

• Sistema de iluminación, constituido por:

- Condensador: Lente o sistema de lentes de un microscopio cuya nalidad es iluminar la preparación en la parte
enfocada por el objetivo de modo que el campo visual presente una iluminación uniforme. Está colocada
directamente debajo de la platina del microscopio.

- Diafragma - Iris: Mecanismo simple, generalmente acoplado con el condensador del microscopio, usado para
variar el diámetro de una apertura.

- Fuente luminosa: Proporciona la luz para la observación de la muestra.

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 3.4.1. Enfoque del microscopio.

• Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.

• Comenzar la observación con el objetivo de 10x o 40x.

• Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse
mirando directamente y no a través del ocular, ya que corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación.

• Mirando a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y,
cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque no.

• Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre este y el de 40x.

• Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.

• Terminar de girar suavemente al objetivo y subir la platina lentamente hasta que la lente toque la gota de aceite.

• Enfocar cuidadosamente con el micrométrico.

3.4.2. Precauciones y mantenimiento.

- Una vez que se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x
sobre esa zona, pues se mancharía. Por tanto, si se desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la
operación.

- Una vez nalizada la observación de la preparación, se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento
girando el révolver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina.
Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.

- Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.

- Se pesará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad.

- Nunca hay que tocas las lentes con las manos. Si se ensucian, hay que limpiarlas muy suavemente con un papel de
óptica.

- Al nalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación. Además, hay
que asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con una
funda.

- No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.

- Cuando no se esté utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien
y dañen las lentes.
Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del
polvo.

- Si el aceite de inmersión se seca y queda pegado en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-
acetona o xilol.
No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso, se pueden
dañar las lentes y su sujeción.

- Es importante no forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio.

- El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo la mirada hacia la preparación para prevenir el roce de
la lente con la muestra.

- Mantener limpia y seca la platina. NUNCA SE DEBE:

• Emplear papel ordinario o

algodón para limpiar las lentes.
• Tocar los objetivos con los
dedos.
• Dejar el microscopio con aceite
de inmersión en el objetivo. 9
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 3.5. Autoclave.

El autoclave se utiliza para la esterilización. La esterilización es una técnica de saneamiento preventivo que garantiza la
eliminación total de todos los microorganismos (bacterias, hongos y virus) y sus formas de resistencia del material
sometido a dicho proceso.

La desinfección elimina los microorganismos pero no su forma de resistencia.

AGENTE SISTEMA DE ESTERILIZACIÓN MÉTODO

Calor húmedo Autoclave

Incineración y ameado.
Calor seco
Estufa Pasteur y horno Poupinell.
Físico
Ionizantes.
Radiaciones
No ionizantes (infrarrojos, UV).

Frío Congelación.

Formaldehído.
Gases Óxido de etileno.
Químico Peróxido de hidrógeno.

Líquidos Glutaraldehído.

Los aparatos de esterilización mediante calor húmedo se denominan

autoclaves o estufas de vapor.

Son recipientes cerrados, normalmente de acero inoxidable con

paredes gruesas y una super cie donde se coloca el material a
esterilizar.

El mecanismo de destrucción de los microorganismos mediante la

aplicación de calor húmedo o vapor se produce a través de la
desnaturalización y posterior lisis de sus proteínas.

La esterilización consiste en la aplicación de vapor de agua a una presión constante, con condiciones precisas:
121ºC = 1 atm durante 20 minutos.

Para esterilizar medios de cultivo, por lo general se emplea la tindalización. Esta consiste en alcanzar los 100ºC durante
30 minutos y repetir el ciclo 3 días consecutivos.

3.6. Incubador o estufa.

El incubador o estufa sirve para proporcionar un ambiente aislado a temperaturas más o menos altas, es decir, desde
los 30ºC hasta temperaturas muy elevadas.

En el laboratorio de biología molecular dependen de las muestras que se estudien o las técnicas que se apliquen.

Las estufas se clasi can en 3 tipos según su nalidad:

A. Estufa de cultivo:

Se utiliza en microbiología para el cultivo y crecimiento de microorganismos.

B. Estufa de CO2 (con humedad controlada):

Sirve para trabajar con cultivos celulares.

C. Estufa de secado:

Sirve para la esterilización o secado de materiales y puede alcanzar temperaturas muy elevadas. También se denomina
horno de secado o Poupinel.

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 3.7. Baño termostatizado.

El baño termostatizado se encarga de mantener muestras

a una temperatura determinada.

El baño termostatizado permite calentar agua mediante

una resistencia eléctrica que lleva en el fondo del depósito,
a la temperatura que se desee gracias a un termostato.

Es básico para realizar todo tipo de incubaciones,

digestiones y tratamientos enzimáticos.

3.8. Termobloque y placa calefactora.

El termobloque y la placa calefactora, con su temperatura regulable permite realizar

todo tipo de incubaciones, digestiones y tratamientos enzimáticos.

La placa calefactora es importante porque puede alcanzar de manera homogénea y

estable temperaturas de 95-100ºC para desnaturalizar el ADN de células y tejidos.

3.9. Centrífuga y microcentrífuga.

La centrífuga y la microcentrífuga sirve para separar componentes de una mezcla homogénea formada
por 1 o varios sólidos que se encuentran en un líquido. En ellas los tubos se encuentran enfrentados.

Existen diferentes tipos de centrífugas:

A. Centrífuga de tubos.
B. Centrífuga de Eppendorf (0,2ml).
C. Centrífuga de capilares.

3.10. Neveras y congeladores.

Las neveras y congeladores es fundamental para conservar los reactivos y las muestras:

• La mayor parte de los reactivos (sobre todo las enzimas) se conserva a -20ºC.
• La conservación de todas las muestras de ARN y el almacenamiento a largo plazo de muestras de ADN debe
realizarse a -80ºC.

3.11. Balanzas.

La balanza es el instrumento que se emplea para medir la masa de un cuerpo o sustancia.

Esta debe presentar:

- Exactitud:

De nimos la exactitud de una balanza como la capacidad que tiene para que los valores
medidos se correspondan con el valor verdadero.

- Precisión:

Es la capacidad que tiene para dar resultados, de mediciones consecutivas, iguales o muy próximas, efectuadas fajo
las mismas condiciones, es decir: con el mismo procedimiento de pesada, el mismo observador, el mismo lugar de
pesada, bajo las mismas condiciones ambientales y cuando la repetición de las medidas se han realizado en un
período de tiempo corto.

- Sensibilidad:

Capacidad que tienen para apreciar cantidades mínimas de masa. Las balanzas tendrán tanta mayor sensibilidad a
medida que las cantidades de masa que detecten sean menores.

Existen varios tipos de balanzas: Balanza analítica (d = 0’1 mg), semimicrobalanza (d = 0’01 mg), microbalanza
(d = 0’001 mg) y ultramicrobalanza (d = 0’1 μg).

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 3.11.1. Lugar de emplazamiento.

• Deben colocarse alejadas de ventanas y radiadores para evitar, respectivamente, que los rayos solares o la radiación
térmica las calienten.

• La habitación donde se monta la balanza no debe de ser de paso y los rincones son los mejores lugares para
instalarlas, ya que son los lugares más rmes y con las menores vibraciones.

• No deben montarse cerca de equipos de aire acondicionado ni de ventiladores, así como tampoco muy cerca de las
ventanas para evitar turbulencias de aire.

• Los aparatos de iluminación deben estar instalados no muy cerca de la mesa de pesada, con el n de evitar
radiaciones térmicas perturbadoras para el sistema de pesada. No deben instalarse lámparas de gran potencia. Son
recomendables los tubos uorescentes.

• Los cambios de temperatura de la habitación provocan cambios en el interior de la balanza repercutiendo en su

correcto funcionamiento. Se recomienda trabajar a temperaturas de entre 10ºC y los 40ºC.

• Cuanto mayor sea la sensibilidad de las balanzas, más repercusión sobre ella tendrán las variaciones de humedad,
por lo que se hace necesario controlarla. Se recomienda una humedad entre el 40% y el 65%.

3.11.2. Técnica de pesada.

Antes de iniciar:

- Comprobar que la balanza está limpia y, en caso contrario, proceder a su limpieza.

- Comprobar que la balanza esté nivelada, es decir, colocada horizontalmente sobre la mesa de las balanzas que lleva
incorporada una super cie dura y lisa.
Las balanzas ofrecen la posibilidad de ser niveladas mediante las patas reguladoras y mediante la burbuja
situada cerca de ellas, que debe de estar centrada.

- Comprobar que la balanza está enchufada.

- Colocar el interruptor en posición ON y esperar a que se estabilicen los ceros.

- Efectuar la calibración automática interna, si se dispone de esta función.

A continuación:

• Tener en cuenta la carga máxima de peso para cada balanza.

• Colocar sobre el platillo, el vidrio de reloj o recipiente de vidrio o plástico donde vaya a efectuarse la pesada.

• Presionar sobre el botón tara y esperar a que vuelvan a aparecer los ceros estabilizados.
Abrir los envases correspondientes del producto a pesar.

• Colocar, con ayuda de una espátula (sólidos) o de una pipeta (líquidos), una cantidad aproximada del producto a
pesar, leer el resultado de la medición asegurándose de que este resultado sea superior a la carga mínima.

• Adicionar producto hasta conseguir el peso deseado, esperando siempre la estabilización de los dígitos entre cada
operación.

• Cerrar el envase del producto (en la zona de pesadas no debe de haber más de un envase abierto) y situarlo al otro
lado de la balanza, de esta manera se diferencian los productos ya pesados de los que quedan por pesar.
Se debe identi car siempre el producto pesado.

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 3.12. Agitadores magnéticos.

Los agitadores magnéticos facilitan la dispersión de soluciones, suspensiones o mezclas

poco viscosas.

Para un funcionamiento adecuado se debe:

- Colocar el recipiente con el contenido que se quiere agitar sobre el plato de agitación.
- Introducir el imán en el interior para agitar el líquido.
- Conectar la red eléctrica y encender con el interruptor, en posición ON.
- Ajustar la velocidad comenzando siempre por la más baja e ir aumentándola hasta
alcanzar la adecuada.
- Finalizada la agitación se gira el mando de velocidad hasta la posición cero.
- Apagar el interruptor y sacar el imán de su interior.

3.13. Vórtex o agitadores de tubos.

El vórtex o agitadores de tubos sirven para agitar mezclas

contenidas en tubos de ensayo de modo rápido, gracias a su
movimiento vibratorio.

3.14. pH-metro.

El pH-metro se utiliza para medir el pH. En el laboratorio clínico se emplean fundamentalmente para la medida del pH
de reactivos, disoluciones, tampones y medios de cultivo.

Para un funcionamiento adecuado se debe:

- Encender el equipo y ajustar la temperatura de medida a la temperatura ambiente.

- Sacar el electrodo combinado de la solución conservante (KCl) y lavarlo con agua destilada.
- Lavar con agua destilada y secar con un papel que no deje residuos.
- Seleccionar el botón de calibración y añadir la primera solución patrón (pH = 7).
- Lavar con agua destilada y secar con un papel que no deje residuos.
- Seleccionar el botón de calibración y añadir la segunda solución patrón (pH = 4’01).
- Lavar con agua destilada y secar con un papel que no deje residuos.
- Seleccionar el botón pH y medir la solución problema, homogeneizándola.

4. La estructura del laboratorio de biología molecular.

PLANO TIPO:
El laboratorio de biología molecular se divide en las siguientes salas:

A. Sala de preparación de reactivos:

• Área “limpia” del laboratorio (sin ADN).

• Preparar los reactivos que se van a utilizar en el laboratorio:
Se incluye reacción PCR.
• Sala con presión positiva:
Evita la entrada de cualquier fuente de contaminación.

B. Sala de preparación de muestras, extracción y puri cación de ADN:

• Área “sucia” del laboratorio (con ADN).

• Sala con presión negativa: PRESIÓN POSITIVA:
Evita que pueda escaparse material contaminante. Presión de la sala superior a la
presión de los pasillos.
• Debe contar con cabina de bioseguridad y espectrofotómetro.
PRESIÓN NEGATIVA:
C. Sala de PCR (reacción de ampli cación): Presión de los pasillos superior
a la presión de la sala.
• Imprescindible termocicladores para llevar a cabo la PCR.
• Espacio de trabajo para llevar a cabo la PCR y para añadir las muestras de ADN a la mezcla de reacción.

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 D. Sala Post-PCR (análisis mediante electroforesis):

• Sala “sucia”, es decir, fuente importante de contaminación por productos ampli cados.
• Presión negativa,
• Dispone de equipos de electroforesis y de documentación de geles.

5. Flujo de trabajo en el laboratorio de biología molecular.

El ujo de trabajo es siempre unidireccional, de limpio a sucio: PRE-PCR PCR POST-PCR.

- El personal debe ser consciente de la extremada facilidad con la que se puede producir
la contaminación de las muestras.

- Cada área de trabajo tiene que ser autónoma en cuanto a infraestructura y material de
trabajo.

- Se debe evitar el retorno de cualquier material de trabajo de las áreas “sucias” a las
áreas “limpias”.

6. Condiciones de trabajo en el laboratorio de biología molecular.

6.1. Minimizar la contaminación de las muestras.

La contaminación es la introducción accidental en la muestra de material exógeno que altera la pureza de la muestra.
Las muestras pueden ser contaminadas por:

• Ácidos nucleicos extraños a la muestra: Exógenos (ADN y ARN).

• Enzimas no deseadas que degradan los ácidos nucleicos denominadas nucleasas.

Las diferentes fuentes de comunicación de una muestra biológica pueden ser:

A. Contaminación cruzada. Puede darse la situación con:

- Material no ampli cado del medio ambiente o microorganismos ambientales.

- Contaminantes del personal (células, descamación de la piel, pelo…)

B. Contaminación por productos ampli cados:

- Generados por PCR en el laboratorio (Carryover).

C. Contaminación de reactivos comerciales y material fungible:

- “Estéril” no implica la eliminación de ADN de microorganismos ni la activación de las enzimas.

6.2. Normas para la manipulación de materiales y reactivos.

• Intentar anular o prevenir las fuentes de contaminación.

• Separación física de las áreas de trabajo y ujo unidireccional.

• Utilizar reactivos y material fungible libre de nucleasas (enzimas).

• Control exhaustivo de reactivos (lote, fecha de caducidad…) y técnicas. Realizar la trazabilidad de los reactivos.

• USO de buenos hábitos de trabajo en condiciones de esterilidad basados en el técnica aséptica.

La técnica aséptica es el conjunto de actividades encaminadas a prevenir la contaminación por

microorganismos, ácidos nucleicos y nucleasas. Se utiliza para:

- Prevenir la contaminación de la muestra.

- Evitar la contaminación del trabajador por productos biológicos y químicos peligrosos.

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 7. Técnica aséptica en laboratorio de biología molecular.

La técnica aséptica adaptada al laboratorio de Biología Molecular debe presentar las siguientes actividades.

• Lavado de manos (entre 5-10 minutos aproximadamente): Muestra de higiene básica cuando se manipulan muestras
biológicas y reactivos químicos, independientemente del uso de guantes.

• Uso de EPI: Guantes y bata.

• Descontaminación de super cies: Limpieza y descontaminación de super cies de trabajo. Se pueden utilizar:
- Métodos físicos: UV.
- Métodos químicos: Hipoclorito sódico al 10% o descontaminantes comerciales (lejía, alcohol 70%…).

• Prevención de la contaminación ambiental: Es imprescindible el uso de:

- Cabinas de biodegradad de Clase II.
- Puntas de micropipeta especiales:

Puntas con desplazamiento positivo: Tienen un vástago que encaja en el émbolo, el cual sube y baja en el
interior de la punta succionando y expulsando el uido, sin que este toque en ningún momento el cuerpo de
la pipeta ni se produzcan aerosoles.

Puntas con ltro: Tienen un ltro en su interior que impiden que los posibles aerosoles alcancen el cuerpo
de la pipeta.

• Prevención del Carryover: No revertir nunca el ujo de trabajo.

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 8. Uso e ciente de los recursos en laboratorio de biología molecular.

Para una e ciente gestión de los recursos es imprescindible implantar estándares de calidad adecuados y desarrollar
indicadores de calidad que permitan comprobar que funcionan correctamente. Estos son:

• Equipamiento e infraestructuras: Plan de mantenimiento y revisiones técnicas periódicas.

• Reactivos: Asegurar la trazabilidad de los reactivos, desde su recepción hasta su consumo o eliminación.

• Recursos humanos:
- Personal de nueva incorporación: Adiestramiento adecuado.
- Plan de formación continuada (rápida evolución de tecnologías y procedimientos).

• Técnicas: Trabajar con procedimientos normalizados de trabajo (PNT) buena comunicación con el clínico solicitante
de la prueba.

• Gestión medioambiental:
- Intentar reducir, en la medida de lo posible, los consumos de agua, electricidad y papel.
- Garantizar el correcto reciclado de los residuos de tipo urbano.
- La infraestructura básica del laboratorio deberá también estar acorde con este principio (grifos de bajo caudal,
iluminación de bajo consumo, aislamiento…).

9. El laboratorio de citogenética y cultivos celulares.

A. Laboratorio de cultivos celulares:

• Propagación o crecimiento de células eucarióticas de organismos pluricelulares en medios de cultivo

arti ciales.

• Los peores contaminantes dentro de este laboratorio son los microorganismos.

B. Laboratorio de citogenética:

• Estudio de los cromosomas de especies eucarióticas, tanto desde una perspectiva morfológica (cariotipo)
como molecular (citogenética molecular).

• Los peores contaminantes dentro de este laboratorio son los ácidos nucleicos.

9.1. Equipamiento especí co del laboratorio de cultivos celulares.

• Cabina de ujo laminar: Se realizan todos los procesos y manipulaciones de cultivos celulares (preparación de
medios, siembra de cultivos, cambio de medios…).

• Incubador de CO2: Proporciona las condiciones ambientales óptimas para el crecimiento de las células en el medio
de cultivo.

- Control de la temperatura:
Responsable de jar y mantener estable la temperatura óptima para cada tipo de cultivo.

- Recircularización del aire interior:

Para homogeneizar la temperatura.

- Control de CO2:
El CO2 puro se suministra comprimido en botellas presurizadas y este dispositivo lo mezcla con aire en la
proporción adecuada (4-7%) y lo inyecta en el interior del incubador.

- Control de humedad:
En el interior del incubador se requiere una humedad ambiente elevada para evitar la evaporación del medio
de cultivo.
Los incubadores más sencillos lo consiguen, simplemente, colocando una bandeja con agua en el suelo del
incubador.
Sin embargo, esta solución no es la ideal por la facilidad con la que se contamina esa agua. Por ello, los
incubadores actuales incorporan un dispositivo de control de humedad que inyecta agua estéril.
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 • Microscopio invertido:
- La estructura del microscopio es invertida en comparación al microscopio convencional.

- La fuente de luz está ubicada por encima de la platina y el revólver de objetivos por debajo
de la platina.

- El principio de funcionamiento y formación de la imagen es el mismo que el del

microscopio tradicional.

- Utilizado principalmente para cultivos celulares (células vivas) sin una preparación previa y
para monitorizar actividades (crecimiento y comportamiento).

• Equipo de criogenia:
- El equipo de criogenia permite conservar a largo plazo y en forma visible muestras de
células.

- El equipo de criogenia mínimo está constituido por un tanque o depósito de nitrógeno

líquido.

- Es un equipamiento imprescindible en los laboratorios de cultivos celulares, optativos en

los de citogenética.

9.2. Equipamiento especí co del laboratorio de citogenética.

• Equipo de análisis de imagen: Es básico para documentar y analizar metafases, con el n de obtener un cariotipo.
- Microscopio óptico convencional de luz transmitida.

- Cámara digital para obtener imágenes para su posterior análisis.

- Software especí co para el análisis de metafases.

Existen varios programas informáticos comerciales que analizan las
metafases, cromosoma a cromosoma, permitiendo su reconocimiento con
base en el patrón de bandas y su emparejamiento para obtener el cariotipo.

• Microscopio óptico convencional y de uorescencia:

- Microscopio distinto al de análisis de imagen.

- Se utiliza para recuentos de células, estudios de viabilidad y morfología celular, visualización de preparaciones de
hibridación en situ…

9.3. Equipamiento común del laboratorio de citogenética y cultivo celular.

• Equipo de esterilización: Es imprescindible la esterilidad de todo el material y de los reactivos que estén en contacto
con los cultivos.

- Autoclave.

- Sistema de ltración con ltros 0’22 µm para esterilizar soluciones.

• Sistema de puri cación del agua: El agua utilizada para preparar reactivos y medios de cultivo tiene que ser
ultrapura, estéril y libre de apirógenos.

• Neveras y congeladores: Un sistema de frío (-20/-80ºC) para conservar los distintos reactivos.

• Otros equipamientos: Centrífugas, placas calefactoras, pH-metro, balanza, agitador magnético…

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 9.4. Estructura del laboratorio de citogenética y cultivo celular.

Los laboratorios de citogenética y cultivo celular presentan las siguientes salas:

A. Sala de cultivos:

• Sala limpia.
• Se realizan los procedimientos realizados con el cultivo celular.
• Sistema con aire ltrado y ligera presión positiva.
• En ella se situarán la cabina de ujo laminar, los incubadores y el microscopio invertido.

B. Sala de laboratorio convencional:

• Sala sucia.
• Se realizan los procedimientos no relacionados con el cultivo celular: Preparación de extensiones, tinciones,
cariotipos…
• Pueden tener área oscura para el microscopio.

C. Sala de frio:

• Lo ideal es que esta sala sea una cámara frigorí ca para minimizar el consumo de nitrógeno líquido y alargar
la vida de los congeladores.
• Debe de estar separada de la sala de cultivos porque los congeladores generan bastantes turbulencias.

9.5. Condiciones de trabajo: Técnica aséptica.

La técnica aséptica que impida la contaminación por microorganismos en los laboratorios de citogenética y cultivos
celulares consta de las siguientes medidas:

• Lavado frecuente de manos.

• Uso de guantes y batas desechables estériles.

• La puerta de la sala siempre debe de estar cerrada.

• Uso exclusivo de material y reactivos estériles.

El material desechable estéril no es intercambiable con el de otras salas.

• No introducir mecheros hunden en las cabinas porque generan turbulencias que alteran el ujo laminar.

• Colocar en el interior de la cabina exclusivamente el material que se vaya a utilizar en la sesión de trabajo.

• No tocar el material estéril de su embalaje hasta el momento de uso, evitando tocar con el cualquier super cie.

• El material usado reutilizable de vidrio se puede colocar en un recipiente con hipoclorito al 10% hasta nalizar la
sesión de trabajo.
Después se lleva al laboratorio general para su limpieza y esterilización.

• El material fungible utilizado en la cabina se deposita en contenedores adecuados para material contaminado, que
se retiraran al nalizar la sesión de trabajo.

• Restringir el acceso a la sala de cultivos exclusivamente al personal que esté realizando algún procedimiento.
No se deben recibir visitas en esta sala.

• Limpieza de las cabinas de ujo laminar con etanol al 70% o desinfectante comercial apropiado para cabinas al
nalizar cada sesión de trabajo.

• En las cabinas dotadas de lámpara germicida UV, esta se puede conectar después de la limpieza un máximo de 30
minutos.

• Realizar un mantenimiento programado de las cabinas (mínimo anual) que incluya comprobación del ltro HEPA.

• Limpieza y desinfección de super cies con etanol al 70% o desinfectantes apropiados.

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 10. Seguridad e higiene en el laboratorio.

La seguridad en el trabajo recoge los procedimientos y técnicas destinadas a eliminar o disminuir el riesgo de que un
trabajador sufra un accidente o enfermedad profesional.

El trabajo en un laboratorio clínico presenta una serie de riesgos que están relacionados principalmente con los
productos químicos y biológicos utilizados, así como con el material y aparataje propios del tipo de laboratorio.

Por ello, la prevención de riesgos en un laboratorio y el conocimiento de las normas mínimas de seguridad e higiene
son imprescindibles para minimizar la producción de accidentes que pueden tener consecuencias muy graves e incluso
fatales para el trabajador.

Existen unas precauciones generales mínimas sobre la prevención de riesgos en un laboratorio a tener en cuenta.
Estas son:

- Tener información sobre la peligrosidad de sustancias químicas y especímenes biológicos que se manipulen en el
laboratorio.

- Adquirir buenas prácticas y hábitos de trabajo por parte del personal del laboratorio.

- Tener por parte del personal la cuali cación laboral adecuada para el puesto de trabajo a desempeñar.

- Disponer del material de protección adecuado para las funciones que se van a desarrollar.

- Mantener los equipos de trabajo en un buen estado de funcionamiento con sus revisiones periódicas realizadas.

- Utilización por parte de los trabajadores de los medios de protección disponibles.

10.1. Normativa legal: Notas técnicas de prevención. (NO ENTRA: Nivel informativo).

Las normas de seguridad e higiene en el laboratorio están recogidas en la Ley de Prevención de Riesgos Laborales de
31/1995, con sus posteriores modi caciones (la última en septiembre del 2022), como RD 374/2001 sobre la protección
de la salud y seguridad de los trabajadores (modi cado en 2015).

Las notas técnicas de prevención (NTP) son documentos elaborados por los organismos o ciales competentes, con la
nalidad de informar, actualizar, promocionar y difundir los temas relacionados con la seguridad y salud en el trabajo.

Cada laboratorio debe recoger las normas de seguridad propias de su actividad en un manual de seguridad que estará
a disposición de los trabajadores y que es de obligado cumplimiento. Este manual de seguridad debe contener:

• Las notas técnicas de prevención.

• Las chas de seguridad de los productos químicos de riesgo.

• Las normas generales de higiene en un laboratorio.

• El uso de equipos de protección individual.

• Los elementos de protección a emplear en caso de emergencia.

• Las normas generales de seguridad en un laboratorio.

• Los sistemas de eliminación de residuos.

• Los primeros auxilios que se deben prestar a un accidentado.

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 10.2. Productos de riesgo en el laboratorio.

Casi todos los productos que se manejan en un laboratorio presentan algún tipo de riesgo, independientemente del
tipo de laboratorio donde se desarrolle la actividad laboral.

Hay algunos productos que presentan riesgos especialmente peligrosos y que debemos conocer para evitar accidentes
y lesiones que puedan afectar al trabajador.

• Sustancia comburente (O): Son aquellas que aumentan la combustión de sustancias in amables.
EJEMPLO: El fósforo de la cerilla.

• Sustancia tóxica: Producen trastornos de gravedad variable cuando entran en el organismo.

EJEMPLO: Acrilamida o bromuro de etidio.

• Sustancias explosivas (E): Explotan si son golpeados, si saltan chispas en sus proximidades o por calor
excesivo.
EJEMPLO: Cartuchos de los fuegos arti ciales.

• Sustancias corrosiva (C): Son capaces de destruir materiales diversos al entrar en contacto con ellos.
Entre estos materiales se encuentran los tejidos de los seres vivos, ropas…
EJEMPLO: Ácido sulfúrico.

• Sustancias irritantes (X): Al entrar en contacto con los ojos, la piel y el aparato respiratorio producen
lagrimeo, enrojecimiento e irritación en general. Los vapores de estas sustancias también son
importantes.
EJEMPLO: Amoníaco.

• Sustancias in amables (F): Sustancias que arden con mucha facilidad.

EJEMPLO: Gas butano y gas propano.

• Sustancias nocivas para el medio ambiente (N): Si se liberan sin control, producen daños en los ríos, el
mar y en la atmósfera.
EJEMPLO: Vertidos de aceites y grasas domésticas por el fregadero.

• Productos con riesgo biológico: Proceden de animales o personas afectadas por enfermedades
transmisibles.
EJEMPLO: Esputo de un enfermo tuberculoso, la sangre de un enfermo con sida o hepatitis B.

Como ejemplos de sustancias peligrosas habituales en los laboratorios de biología Cancerígeno: todas aquellas
molecular y citogenética se pueden mencionar los siguientes: sustancias que puedan alterar las
cánulas y producir tumores.
- In amables: Alcoholes.
- Tóxicos y muy tóxicos: Acrilamida, bromuro de etidio y formamida o derivados del Mutágenos: todas aquellas
formol. sustancias que pueden ocasionar
- Carcinógenos: Acrilamida y formaldehído. alteraciones en el material genético.
- Mutágenos: Acrilamida y bromuro de etidio.
- Teratógenos y perjudiciales para la fertilidad: Acrilamida, formamida y tetrametil urea. Teratógeno: todas aquellas
sustancias que provocan alguna
La identi cación de los productos químicos peligrosos se realiza con 2 documentos: alteración en el embrió o en el feto.

A. Etiquetas de seguridad:

Es la primera información que recibe el trabajador del laboratorio

y la cual permite identi car el producto en el momento de su uso.

La etiqueta debe aparecer obligatoriamente en los envases de

todos los productos químicos de riesgo y está regulada en la Ley de Prevención de
Riesgos Laborales.
Toda etiqueta debe contener la siguiente información:

• Nombre del producto químico.

• Nombre, dirección y teléfono del fabricante o distribuidor.
• Pictogramas según el tipo de sustancia peligrosa que contenga el envase.
• Frases H: Indican los riesgos especí cos de las sustancias peligrosas.
• Frases P: Indican los consejos de precaución y prudencia relativos al uso de sustancias peligrosas.
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 B. Fichas de seguridad:

Contiene información detallada acerca de los riesgos que tiene ese producto en concreto.
Recogen hasta 16 epígrafes de datos, entre los que se encuentran:

- Identi cación del producto.

- Peligros que puede ocasionar su manipulación.
- Consejos sobre su manipulación y almacenamiento.
- Medidas de protección necesarias para su manipulación.
- Primeros auxilios que se deben prestar en caso de accidente.
- Informes de toxicología.
- Propiedades físico-químicas del producto.

10.3. Normas generales de higiene en el laboratorio.

Las pautas higiénicas básicas de comportamiento para cualquier laboratorio son:

• Deben lavarse las manos al entrar y salir del laboratorio y siempre que se produzca algún contacto con productos
químicos o biológicos.

• Deben utilizarse jabón y toallas de un solo uso para el lavado de manos: No es recomendable usar pastilla de jabón,
sino jabón con dispensador.

• Debe emplearse ropa y calzados adecuados: La bata siempre se tiene que llevar abrochada y se debe renovar y
limpiar de forma regular y siempre que sea necesario.

• Deben usarse gafas de seguridad y guantes si la peligrosidad de los productos a manejar lo requiere.

• El cabello debe llevarse siempre bien recogido.

• Está totalmente prohibido ingerir alimentos o bebidas en el laboratorio, así como fumar o masticar chicle, salvo en
las zonas destinadas a ello.

• No se debe pipetear con la boca, sino usar los aspiradores o peras de seguridad.

• No se tienen que tocar con la mano ni oles los productos químicos utilizados.

• Se deben retirar de la mesa los objetos personales.

• No se den guardar alimentos o bebidas en los refrigeradores destinados a productos químicos o reactivos.

10.4. Lavado de manos.

El lavado de manos es una costumbre obligada, sobre todo en prevención de riesgos biológicos.

El lavado de manos es esencial para la autoprotección y para evitar ser vehículo de transmisión.

¿Cuándo deben lavarse las manos?

- Siempre que se manchen con sangre, uidos o cualquier tipo de sustancia.

- Después de quitarse los guantes.
- Antes de abandonar el laboratorio.
- Antes de comer, beber, fumar…
- Si usamos lentes de contacto, antes de cambiarlas.
- De forma periódica durante el trabajo.

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 10.4. Equipos de protección en el laboratorio.

Los equipos de protección individual (EPI) son los accesorios que el trabajador debe llevar para su protección frente a
los riesgos de su puesto de trabajo.

El uso de estos equipos está regulado por el Real Decreto (RD) 733/95.

10.4.1. Equipos de protección en caso de emergencia.

• Bata: Elemento de protección individual destinado a proteger la ropa de las posibles salpicaduras de los
productos químicos y biológicos que se manejan en el laboratorio y en la o cina de farmacia.

- Se debe de llevar siempre abrochada y es conveniente que sea de manga larga.

• Gafas: Se usan para proteger los ojos del trabajador de las posibles salpicaduras con productos irritantes o
cáusticos y también para protegerlo de posibles radiaciones nocivas.

- Si el trabajador utiliza lentillas, se debe de tener en cuenta que en caso de accidente es difícil
retirarlas de los ojos para lavarlos y pueden, además, retener partículas de polvo que pueden
producir lesiones en el globo ocular.

• Guantes: Se utilizan para la protección de la piel de las manos y evitar así que entren en contacto con productos
irritantes, tóxicos o nocivos para el manipulador.

- Es conveniente no llevar anillos con el uso de guantes, salvo que sean lisos y sin salientes.
Los guantes son de uso obligado en los laboratorios biosanitarios.

• Mascarillas: Se usan para evitar la entrada de gases tóxicos o partículas al aparato respiratorio.
- Las mascarillas constan de 2 partes:
A. Filtro: Componente que retiene los elementos nocivos.
B. Adaptador facial: Permite un ajuste adecuado a cada usuario.

10.4.1. Equipos de protección en caso de emergencia.

Estos sistemas son empleados para actuar rápidamente en situaciones de urgencia tras un accidente en el laboratorio.

• Fuentes lavaojos: Sistema para descontaminar rápidamente los ojos y la cara.

- Están formados por 2 boquillas que proporcionan un chorro de agua a baja presión que
se aplica en la base de la nariz para arrastrar el producto que se ha introducido en el ojo.
- Su uso es fundamental si se producen salpicaduras de productos cáusticos a los ojos.

• Duchas de seguridad: Sistema más habitual utilizado en la actualidad ante accidentes con quemaduras
químicas y es recomendable que su funcionamiento vaya asociado a una alarma acústica, con el n de
alertar al resto del personal sobre la existencia de una emergencia.

- El grifo de apertura nunca debe ser un grifo estándar, sino un dispositivo de muy fácil apertura, como una
cadena o un tirador.
- Es fundamental revisar las instalaciones periódicamente para asegurarnos de su adecuado funcionamiento
en caso de necesidad.

• Manta ignífuga: Se utiliza en casos de fuegos pequeños y cuando se prende la ropa.

• Extintores: Son dispositivos que contienen en su interior sustancias que al ser proyectadas sobre el fuego
hacen que este se apague.

- El tipo de sustancia que portan depende del tipo de fuego existente.

- En los laboratorios los extintores que más se usan contienen CO2.

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 10.4.2. Derrame en el laboratorio.

Ante un derrame en el laboratorio se deben de seguir las siguientes actuaciones:

A. Neutralización: Depende de las características químicas del producto derramado.

B. Absorción: El material absorbente que se use dependerá de la naturaleza del derrame.
EJEMPLOS: Serrín, carbón activo, absorbentes comerciales, celulosa…

C. Eliminación: El residuo se utiliza en un envase adecuado y se elimina en el contenedor especí co.

Durante la realización de estas actividades:

• Debe restringirse el acceso al laboratorio.

• Las personas responsables de la recogida deben estar equipadas con los EPI adecuados al producto derramado.
• Se debe tener especial cuidado con derrames de líquidos in amables y volátiles.

10.5. Normas generales de seguridad en el laboratorio.

• Deben conocerse la toxicidad y los riesgos de los compuestos y productos con los que se trabaje.

• No se deben transportar tubos de ensayo o frascos con reactivos en los bolsillos de la bata. Para ello, se emplearán
los soportes adecuados destinados a ello.

• Todos los productos biológicos deben ser tratados como si fueran infecciosos.

• No calentar directamente los recipientes de vidrio a la llama.

• Los frascos de reactivos se deben tapar inmediatamente después de su uso y los tapones deben colocarse en la
mesa boca arriba.

• Al terminar una tarea, se deben recoger los materiales y reactivos empleados y colocarlos en sus lugares de
almacenaje adecuados.

• Es de uso obligatorio las vitrinas o campanas extractoras cuando se manipules productos ácidos, corrosivos,
irritantes y tóxicos.

• En los procesos de mezclado de agua y sustancias ácidas, añadir siempre el ácido sobre el agua.

• Los transvases de líquidos de un recipiente a otro se deben hacer lentamente y usando un embudo.

• Si algún reactivo se derrama en la mesa, se debe retirar rápidamente de ella, neutralizándolo si es necesario con el
producto adecuado.

• Se deben emplear centrífugas con tapa para evitar proyecciones y accidentes. No se debe intentar detener la
centrífuga con la mano.

• La colocación de productos en el almacén debe seguir las normas de incompatibilidad.

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 11. Gestión de residuos.

El plan de gestión de residuos tóxicos y peligrosos del laboratorio de biología molecular y citogenética tenemos que
tener en cuenta los siguientes puntos:

• Medidas para la recogida selectiva.

• Clasi cación de residuos.
• Almacenamiento temporal.

Estas medidas se establecen para la gestión de:

- Residuos biosanitarios especiales.

- Residuos químicos.
- Residuos citotóxicos.
- Residuos radioactivos.

11.1. Marco legal de residuos sanitarios en Galicia.

En Galicia la legislación al respecto queda concretada en el Decreto 38/2015 del 26 de febrero, por el que se establece
la normativa para la gestión de los residuos de los establecimientos sanitarios de la Comunidad Autónoma de Galicia.

Su objetivo es:

• Regular, dentro de la Comunidad Autónoma de Galicia, la gestión (separación, manipulación, transporte,

almacenamiento y eliminación) de los residuos procedentes de la actividad sanitaria con el n de prevenir los
riesgos que dicha gestión genera, tanto para las personas directamente expuestas a ellos, como para la salud
pública y el medio ambiente.

• Reducir en lo posible la cantidad de residuos producidos en los centros sanitarios que requieran un tratamiento
especial.

• Adaptación a la normativa vigente en cada momento.

DEFINICIONES:

• Residuos sanitarios: Cualquier sustancia u objeto generados por las actividades sanitarias de los cuales se
desprenda o tenga la intención u obligación de desprenderse su poseedor, en virtud de las disposiciones legales en
vigor en esta materia.

• Actividades sanitarias: Las desarrolladas en hospitales, clínicas, consultas médicas, centros sociosanitarios,
laboratorios de análisis clínicos, de salud pública y de investigación médica, centros de atención primaria y de
plani cación familiar, centros de salud y cualquier otro que tenga relación con la salud humana.

Serán consideradas, asímismo, actividades sanitarias, las correspondientes a centros, servicios y establecimientos
veterinarios asistenciales y centros de investigación animal.

• Centro sanitario: Establecimiento, de titularidad pública o privada, donde se realizan actividades sanitarias.

• Gestión de residuos: Conjunto de actividades encaminadas a dar a los residuos el destino nal más adecuado de
acuerdo con sus características. Comprende las operaciones de manipulación, segregación, recogida, envasado,
almacenamiento, transporte, tratamiento y eliminación de los mismos.

- Gestión intracentro: Comprende las operaciones de gestión que se lleven a cabo en el interior de los centros
sanitarios.

- Gestión extracentro: Comprende las operaciones de gestión que se lleven a cabo en el exterior de los centros
sanitarios y especialmente las desarrolladas a partir de la recogida de los mismos, incluyendo el transporte,
tratamiento y eliminación.

• Segregación: Separación y clasi cación de los residuos en función de criterios establecidos de acuerdo con su
peligrosidad real.

• Tratamiento: Toda actividad que, a través de procesos químicos, físicos o biológicos, persigue la anulación de la
toxicidad y demás características nocivas y peligrosas para la salud humana, recursos naturales y medio ambiente,
contenidas potencialmente en los residuos generados por las actividades sanitarias.
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 • Eliminación: Toda actividad que suponga el con namiento de nitivo de los residuos.

• Productor: El titular del centro de cuya actividad se derive la generación de residuos sanitarios. En el caso de
centros públicos sanitarios gestionados por el Servicio Gallego de Salud se considera producto a este u identidad
adscrita con personalidad jurídica propia.

• Transportista: Toda persona física o jurídica que efectúe operaciones de recogida y transporte exterior de residuos
sanitarios desde los centros que los generan hasta una instalación de tratamiento o eliminación.

• Residuo sanitario biocontaminado: Residuo peligroso especí co de la actividad sanitaria que, debido a su
contaminación con agentes patógenos o por contener altas concentraciones de microorganismos, es de potencial
riesgo para las personas que entren en contacto con ellos.

11.2. Clasi cación de residuos sanitarios en Galicia.

11.2.1. Residuos sanitarios no peligrosos.

A. Clase I:

- Residuos domésticos.
- Son residuos generados en los centros sanitarios similares a los producidos en los hogares.

B. Clase II:

- Residuos no domésticos.
- Son residuos generados en los centros sanitarios diferentes de los producidos en los hogares.
- Se incluyen en esta clase:

• Clase IIa: Residuos especí cos de la actividad sanitaria, que son los generados en los centros
sanitarios, diferentes de los producidos en los hogares, como resultado de la actividad sanitaria
propiamente dicha.

• Clase IIb: Residuos no especí cos de la actividad sanitaria, que son los generados en los centros
sanitarios, diferentes de los producidos en los hogares, y que no son resultado de la actividad sanitaria
propiamente dicha.

11.2.2. Residuos sanitarios peligrosos.

A. Clase III:

- Residuos sanitarios biocontaminados.

- Son residuos que requieren una gestión diferenciada tanto en el interior de los centros como en el exterior,
en todas las etapas de la gestión.
- Se incluyen en esta clase:

• Residuos procedentes de la actividad sanitaria de pacientes afectados por patologías relacionadas en

el Anexo I del presente decreto.

• Residuos de cultivos o reservas de agentes infecciosos y material de desecho en contacto con ellos,
incluyendo los ltros de alta e cacia de las campanas de ujo laminar.

• Residuos de vacunas con agentes vivos o atenuados.

• Residuos de animales de experimentación, cadáveres y restos anatómicos de animales infectados o

inoculados con agentes infecciosos responsables de las patologías incluidas en el Anexo I del
presente decreto.

B. Clase IV:

- Residuos de citotóxicos y citostáticos, la mayoría son fármacos.

- Son residuos de citostáticos, citotóxicos y todo material utilizado en su preparación o en contacto con ellos.

C. Clase V:

- Otros residuos peligrosos.

- Son los residuos peligrosos generados en los centros sanitarios no incluidos en las Clases III y IV. 25
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 11.3. Anexo I. (NO ENTRA).

• Cualquier residuo de materiales, objetos o sustancias que estén en contacto con pacientes afectados de las
siguientes enfermedades infecciosas:

- Fiebres hemorrágicas víricas: Fiebre hemorrágica del Congo-Crimea, ebre de Lasa, marbug, ébola, ebre
hemorrágica argentina (Junin), ebre hemorrágica boliviana (Machupo).

- Complejo encefálico transmitido por artrópodos vectores (Arbovirus): Absettarow, Hanzalova, Hypr, Kumlinge,
Kiasanur Forest Disease, ebre hemorrágica de Omsk, Russian spring-summer encephalitis.

- Herpes virus simiae (Monkey Bvirus). - Difteria.

- Rabia. - Tularemia.

- Carbunco (Bacillus anthracis). - Viruela (Erradicada).

- Muermo. - Creutzfeld-Jakob.

- Mieloidosis. - Otras producidas por priones.

• Residuos contaminados con heces de pacientes afectados por las siguientes infecciones:
- Cólera. - Disentería amebiana.

• Residuos contaminados con secreciones respiratorias de pacientes con las siguientes infecciones:
- Tuberculosis. - Fiebre Q.

• Filtros de diálisis de máquinas reservadas a pacientes portadores de las siguientes infecciones de transmisión
sanguínea:

- Hepatitis B. - Hepatitis C. - Virus de la inmunode ciencia humana.

• Residuos de actividades de análisis o experimentación microbiológica, contaminados con agentes infecciosos o

productos biológicos derivados, tales como:

- Cultivos de agentes infecciosos y material de desecho en contacto con ellos: Placas Petri, hemocultivos,
extractos líquidos, caldos, instrumental contaminado…

- Reservas de agentes infecciosos.

- Vacunas vivas o atenuadas: Salvo materiales manchados de 1 solo uso.

• Residuos de cadáveres, partes del cuerpo y otros residuos anatómicos de animales de experimentación que sean
inoculados con los agentes infecciosos responsables de las infecciones que se citan en los puntos 1, 2, 3 y 4, así
como residuos procedentes de los lechos de estabulación de tales animales.

12. Procedimientos de gestión de residuos.

La gestión de residuos sanitarios es el conjunto de actividades por las que se da a los residuos sanitarios el nal más
adecuado, tanto dentro del centro sanitario (gestión intracentro) como fuera del mismo (gestión extracentro).

Esta gestión comprende las operaciones de:

• Tratamiento.
• Segregación y recogida de los residuos.
• Recuperación y valorización cuando sea posible.
• Almacenamiento.
• Eliminación.
• Transporte.

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 Los objetivos de la gestión son:

1. Minimizar los residuos: Intentar que la cantidad de residuos generados sea la menor posible.

2. Reciclar o reutilizar cuando sea posible.

3. Prevenir riesgos: Clasi car adecuadamente según su peligrosidad.

4. Tratar solo los residuos infecciosos o tóxicos (desinfectar, esterilizar, incinerar…).

5. Disminuir costes: A menor tratamiento, menor necesidad de instalaciones.

6. Aminorar la contaminación atmosférica.

- Los residuos sanitarios, debidamente separados y envasados, podrán almacenarse en lugares especí camente
habilitados a este n. Queda prohibido depositar los residuos en otro lugar que no sean los almacenes
habilitados para esta nalidad, así como el depósito de las bolsas a la intemperie.

- Las condiciones del almacenamiento se ajustarán a lo establecido por la consellería competente en materia de
medio ambiente.

- El transporte de los residuos en el interior de los centros sanitarios deberá responder a criterios de rapidez,
higiene, inocuidad y seguridad, evitando o minimizando acciones o manipulaciones que puedan implicar cualquier
tipo de riesgo para el personal encargado de su recogida y transporte interior, personas trabajadoras y usuarias.

12.1. Gestión de los residuos de la Clase I.

Los residuos domésticos se separarán de manera selectiva y conforme a la normativa vigente en materia de residuos, y
a lo establecido en los planes de residuos que sean de aplicación y en las ordenanzas municipales que correspondan.

12.2. Gestión de los residuos de la Clase II.

• Los residuos no domésticos se recogerán en envases o recipientes que faciliten su tratamiento y en condiciones que
eviten los riesgos para la salud humana y el medio ambiente.

• Las bolsas de plástico destinadas a la recogida y almacenaje de residuos deberán ser opacas, impermeables y lo
su cientemente resistentes como para, de una manera segura, contener la clase de residuo para la que fueron
diseñadas.

• La gestión de los residuos cortantes y punzantes de la Clase IIa se realizará de igual modo que la de los residuos
sanitarios de la Clase III.

12.3. Gestión de los residuos de la Clase III y Clase IV.

• Estos residuos se recogerán en recipientes adecuados al tipo de residuos y al punto de producción

y al que cumplan las siguientes características:

- Rígidos y de libre sustentación.

- Opacos, impermeables y resistentes a la humedad.
- Resistentes a perforación interna o externa.
- Provistos de cierre hermético.
- Composición que garantice que en su destrucción se eviten o minimicen las emisiones tóxicas.

• Solo podrán ser reutilizados los recipientes utilizados para contener residuos de la Clase III, y
después de someterse a un proceso de preparación para la reutilización que deberá ser
autorizado de la manera provista en el artículo 15.

• Los recipientes y los contenedores utilizados en el almacenamiento y transporte intracentro se

etiquetarán de acuerdo con lo establecido en la normativa general de residuos. Se rotularán con
los pictogramas de bioriesgo, citotóxico o ambos y con sus textos asociados cuando contengan
residuos de estas clases, tales como los que aparecen en el Anexo IV.

• Los residuos cortantes y punzantes se depositarán en envases especí cos y dispondrán de

dispositivos de seguridad que impidan su apertura.

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 12.4. Gestión de los residuos de la Clase V.

El envasado, etiquetado y separación de estos residuos se hará según la legislación vigente para este tipo de residuos
y, en concreto, según la Ley de residuos y suelos contaminados y la Ley de residuos de Galicia.

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