UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA PLATA
Facultad de Ciencias Exactas
Área de Biotecnología
ESTEQUIOMETRÍA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO
CONTENIDOS
Conceptos de grado de reducción, C-mol, fórmula promedio de un microorganismo,
rendimientos. Ecuación de crecimiento. Balances de materia: carbono y otros. Balance de
grado de reducción. Rendimientos máximos teóricos. Sustrato limitante.
APLICACIONES
Análisis de consistencia de datos experimentales.
Predicciones usando balances y/o rendimientos. Diseño de medios de cultivo.
PROBLEMAS:
1. Se determinó la composición elemental de un hongo, obteniendo los siguientes valores (base
seca): C = 42,6 % p/p, H = 7,1 % p/p, O = 33,2 % p/p, N = 8,3 % p/p sales 8,8 % p/p
a) Calculá la “fórmula” de la biomasa y el peso de un C-mol.
b) ¿Cuál es la concentración de (NH4)2SO4 (PM: 132 gr/mol) necesaria, expresada en g/l, para
obtener 0,2 C-mol/l de dicho hongo.
2. a) ¿Qué entendés por grado de reducción (γ)?
b) En base a la definición de γ calculá el grado de reducción del etanol, de la biomasa estándar
(CH1,8O0,5N0,2) y de la leucina (C6H13O2N) con respecto al nivel de referencia:
b1: CO2, H2O, NH3
Opcional: b2: CO2, H2O, N2
c) Calculá el grado de reducción de la alanina (C3H7O2N) con respecto al nivel de referencia:
c1: CO2, H2O, ácido glutámico (C5H9O4N)
Opcionales: c2: ácido acético, H2O, NH3
c3: ácido acético, H2O, alanina (C3H7O2N)
3. Cuando se cultivó Saccharomyces cerevisiae (CH1.7O0.56N0.17) en un medio con glucosa,
(NH4)2SO4 y sales por cada C-mol de biomasa formada se consumieron 2,24 C-mol de glucosa,
0,69 moles de O2 y se produjeron 0,89 mol de CO2. Escribí la ecuación que representa el
crecimiento de este microorganismo y evaluá si se ha formado algún producto. En caso afirmativo,
estimá cuál podría ser la naturaleza del mismo.
4. Se desea crecer Candida utilis en un medio con glucosa NH4Cl y sales. La ecuación que
representa al proceso es:
CH2O + a ClNH4 + b O2 0,56 CH1.8O0.5N0.2 + yco2/s CO2 + d ClH + w H2O
Calculá:
a) el valor de los restantes coeficientes,
b) el pH que se alcanzaría al final del proceso en el que se forman 10 g/l de biomasa considerando
que el medio no contiene buffer.
c) las concentraciones de glucosa y ClNH4 necesarias para obtener la biomasa deseada si la fuente
de nitrógeno es el sustrato limitante.
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5. a. Predecí cuál es el valor de rendimiento en biomasa (yx/s) esperado para el cultivo aeróbico
de un microorganismo de composición estándar creciendo con ácido málico (C4H6O5) como FCE
y (NH4)2SO4 como FN. Utilizá el concepto de rendimiento máximo teórico y la aproximación de
Roels definiendo en qué condiciones es válida esta última.
b. ¿Qué sucedería con el rendimiento celular si en lugar de (NH4)2SO4 se emplea NO3H como
FN?
6. Es bien conocida la capacidad de Saccharomyces cereviciae para transformar azucares en
etanol en procesos anaerobios. En este proceso, típicamente se obtienen 0,12 C-mol biomasa por
cada C-mol de glucosa consumida. Calculá el rendimiento para el etanol. ¿Qué porcentaje
representa este valor con respecto al rendimiento máximo teórico para etanol?
7. Detallá la composición cuantitativa del medio para el cultivo de la arquea Haloferax
mediterranei teniendo en cuenta lo descripto en la sección Materiales y Métodos de la publicación
de Lorantfy et al. (2013) que se encuentra como material del módulo. Elegí una de las fuentes de
carbono mencionadas en la Tabla 1 y realizá las siguientes tareas:
a. Escribí la ecuación química que creas conveniente para representar el crecimiento del
microorganismo en las condiciones elegidas.
b. Determiná cuál es el sustrato limitante del crecimiento. Enunciá las consideraciones que haces
y justificá.
Problemas adicionales
8. Para estudiar la aptitud de diferentes fuentes de carbono y energía para el crecimiento de un
microorganismo de composición estándar se ensayaron en frascos agitados ácido oxálico y glucosa.
La concentración de las mismas en el medio de cultivo fue de 5 g/l y se utilizó (NH4)2SO4 como
fuente nitrogenada. Los frascos se rotularon A y B correspondiéndole una letra a cada sustancia
ensayada. Al final del experimento se determinó la concentración de biomasa seca, siendo ésta de
2,65 g/l en el frasco A y de 0,595 g/l en el frasco B. El inóculo había sido de 0,2 g/l y el sustrato se
consumió totalmente en ambos frascos sin poder detectar productos en el sobrenadante del cultivo.
a) Analizá cual podría ser la fuente de carbono presente en cada frasco.
b) Estimá el consumo total de O2 en cada frasco.
9. Un microorganismo aerobio (composición: CH1,625O0,5N0,125) produce una sustancia extracelular
cuya fórmula molecular es C6H4O2N2. Realizado un cultivo en batch de este organismo en un
medio de cultivo conteniendo 30 g/l de glucosa (sustrato limitante y única FCE) se midieron los
rendimientos en biomasa y oxígeno (yX/O) obteniéndose valores de 0,170 y 0,307 g/g
respectivamente.
Si el método colorimétrico empleado para la valoración del producto en cuestión tiene límites de
detección que van desde 100 a 600 ppm de producto, ¿qué dilución del medio de cultivo se deberá
realizar para poder medir la concentración de este producto?
10. Un microorganismo crece anaeróbicamente en un medio que contiene glucosa como FCE,
(NH4)2SO4 como FN y HNO3 como último aceptor de electrones, siendo este último llevado a N2.
¿Cuánto HNO3 será necesario agregar al medio de cultivo para obtener 3.5 g/l de biomasa?
Suponé que no se forma ningún producto distinto de biomasa y CO2. El rendimiento en el medio
utilizado es de 0,45 C-mol/C-mol. Considerá que el HNO3 no se asimila a la biomasa. Realizá los
cálculos utilizando como estado de referencia al N2 y al HNO3.
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