RESÚMENES DEL CURSO DE BIOLOGÍA MOLECULAR

UNIDAD 1. Funciones del material genético.

Las características o propiedades que debe reunir cualquier molécula para ser el
material hereditario se deducen de la observación de las propiedades que tienen
los organismos vivos. a) Almacenar información biológica de una forma estable; b)
replicarse y transmitirse de una célula a otra y de una generación a la siguiente; c)
llevar información para otro tipo de moléculas y estructuras y, d) mutación y
recombinación.
Las alteraciones o cambios en la molécula que contiene la información se
denominan mutaciones. La mutación es la fuente primaria de variabilidad genética,
si no existiera la mutación, no habría sido posible observar la enorme variabilidad
existente de especies diferentes, ni la variabilidad dentro de cada especie. Sin la
mutación no se podría haber producido el proceso evolutivo.
Experimentos de transformación bacteriana de Griffith (1928). La segunda fuente
de la variabilidad genética es la recombinación.
El material empleado por Griffith (médico inglés) fue la bacteria Diplococcus
pneumoniae o neumococo y los ratones. Cuando se inyecta a un ratón con el
esputo de una persona enferma (con neumonía) dicho ratón muere de septicemia
a las 24 horas. Esta capacidad virulenta de los neumococos se debe a la
presencia de una cápsula de polisacáridos (polímeros de glucosa + ácido
glucurónico) que envuelve a la bacteria y la protege de la fagocitosis.
Para poder realizar cualquier estudio genético es necesaria la exis tencia de
variabilidad para el carácter analizado. Griffith observó la existencia de diferentes
tipos de neumococos: neumococos virulentos de tipo S que dan lugar a colonias
con aspecto liso y brillante (producen la cápsula que los protege de la fagocitosis
del huésped) y neumococos no virulentos (avirulentos) de tipo R que dan lugar a
colonias de tipo rugoso y mate (carecen de la cápsula protectora).
En experimentos control, Griffith no observó que los neumococos RII (no
virulentos) mutarán o cambiarán a SIII (virulentos).
Griffith observó que si inyectaba a los ratones con neumococos de tipo no
virulentos a las 24 horas seguían vivos, mientras que si los inyectaba con
neumococos virulentos a las 24 horas los ratones morían. Entonces decidió
calentar los neumococos virulentos para destruirlos y posteriormente inyectarlos a
los ratones, encontrando que los ratones seguían vivos después de 24 horas. Por
consiguiente el calor, destruía el poder infectivo de los neumococos. Por último,
inyectó a los ratones una mezcla de neumococos no virulentos vivos y virulentos
previamente muertos por calor, encontrado que los ratones morían a las 24 horas
y extrayendo de su sangre neumococos virulentos vivos.
Griffith propuso la existencia de una sustancia presente en los extractos de
neumococos virulentos muertos por calor que es capaz de transformar a los
neumocos avirulentos vivos en virulento vivos, dicha sustancia fue denominada
por Griffith el Principio Transformante.
En 1944. Avery, McLeod y McCarty, utilizando un enfoque bioquímico (además del
genético y microbiológico) demostraron que la transformación de neumocos
avirulentos en virulentos se podía realizar en tubo de ensayo sin necesidad de
utilizar ratones en el experimento. Es decir, se puede mezclar en el mismo medio
de cultivo líquido neumocos avirulentos vivos con neumococos virulentos
previamente muertos por calor y obtener neumococos virulentos vivos
Ellos se propusieron encontrar cuál era el componente que transmitía el carácter
heredable y llegaron a la conclusión de que sólo el DNA de las bacterias virulentas
S muertas por el calor, era la sustancia que producía la transformación de las R,
no virulentas, en S virulentas. Ellos fraccionaron las bacterias muertas por calor en
sus componentes, DNA, proteínas y polisacáridos. Solo el DNA S era capaz de
transformar a las cepas R en S, sin embargo en presencia de una DNAsa se
perdía la actividad. Las fracciones de proteínas o polisaridos, en ningún caso
producían la transformación. Estos experiencias demostraban que el ADN era la
molécula que contenía la información necesaria para que las bacterias S fueran
virulentas y que, a pesar de estar muertas, su ADN no estaba destruido y podía
pasar al medio y de aquí a las bacterias de cepa R integrándose en el genoma de
éstas y transformándolas en virulentas
La función del DNA como material genético también fue demostrada por
experimentos con fagos radioactivos: El material que utilizaron Alfred Hershey y
Marta Chase (1952) en sus estudios fue el virus T4 que infecta a la bacteria E.
coli. Dicho virus mantiene una relación de tipo lítico con esta bacteria.
Los virus de la serie T, como el T4 cuando se aíslan y se someten a un choque
osmótico pueden reventarse liberándose el ADN que estaba en el interior de su
cápside.
Hershey y Chase pensaron en alguna forma para marcar los virus T4 solamente
en su ADN y solamente en sus proteínas, se dieron cuenta de que el azufre (S)
forma parte solamente de las proteínas pero no del ADN, y que el Fósforo (P)
forma parte solamente del ADN pero no de las proteínas. Por tanto decidieron
obtener dos colecciones de fagos diferentes, una colección de fagos T4 marcados
solamente en su ADN con Fósforo radiactivo (P 32) y otra colección de fagos T4
marcados solamente en sus proteínas con Azufre radiactivo (S35). Para conseguir
este tipo de fagos T4 llevaron a cabo dos experimentos, en uno de ellos infectaron
bacterias de E. coli que crecían en un medio que con tenía P32, los virus
descendientes de la infección tenían marcado su ADN con P 32; en el otro
experimento infectaron bacterias de E. coli que crecían en un medio con S35 , los
virus descendientes de la infección tenían marcadas sus proteínas con S 35 .
Para comprobar que habían marcado correctamente los virus T4, unos solamente
en el DNA y otra colección solamente en las proteínas, aislaron parte de los virus
descendientes de las infecciones los sometieron a choque osmótico y
centrifugaron en condiciones tales que las cápsides de los virus eran más pesadas
y se iban al fondo del tubo después de la centrifugación, mientras que el ADN que
había salido fuera de las cápsides, como consecuencia del choque osmótico, se
quedaba en solución al finalizar la centrifugación.
Cuando el experimento se hacia con virus marcados en su ADN con P 32 el
marcaje aparecía en solución y no en el fondo del tubo, mientras que si el
experimento se realizaba con fagos marcados en sus proteínas con S35 el
marcaje aparecía en el fondo del tubo donde estaban las cápsides y no en
solución.
Experimentos que demuestran que el RNA es el material hereditario en el virus del
mosaico del tabaco (TMV)
Fraenkel-Conrat y Williams (1955) demostraron que después de separar la
cápside y el RNA del virus TMV era posible volver a reconstruir el virus con
capacidad infectiva.
Fraenkel-Conrat y Singer (1957) comprobaron que era posible separar el RNA y la
cápside de dos tipos de virus TMV diferentes y reconstruir virus con la cápside de
un tipo y el RNA de otro tipo. Cuando estos virus híbridos con cápside de un tipo
(tipo 1) y RNA de otro tipo (tipo 2) se utilizaban para infectar hojas de tabaco, los
virus descendientes de la infección mostraban siempre un tipo de cápside (tipo 2)
coincidente con el tipo de RNA (tipo 2) utilizado en la infección.
Fraenkel-Conrat y colaboradores (1957) y Gierer y Schramn (1956) comprobaron
que al infectar plantas de tabaco solamente con el RNA aislado de partículas del
virus TMV, se provocaban los síntomas normales de la infección y además era
posible recuperar virus TMV completos a partir de las hojas de tabaco infectadas.
Conclusiones de los experimentos de Fraenkel-Conrat y colaboradores: Infectando
solamente con el RNA del virus TMV es posible obtener virus TMV completos con
cápside y RNA, y cuando se infecta con virus híbridos los virus descendientes
poseen siempre una cápside coincidente con el tipo de RNA empleado para
infectar; se deduce que la molécula portadora de la información, la que determina
que aparezca la cápside del virus TMV es el RNA.
Los genomas de los seres vivos están constituidos por DNA. Los nucleótidos,
unidades básicas de los ácidos nucléicos, están formados de: i) una base
nitrogenada; ii) una desoxirribosa o ribosa ( en DNA y RNA respectivamente); y iii)
un grupo fosfato. Las cuatro bases que se encuentran en el DNA son: adenina
(A), guanina (G), timina (T) y citosina (C); en el RNA el uracilo (U) substituye a la
timina.
A partir de datos experimentales de cristalografía de rayos X obtenidos por
Maurice Wilkins y Rosalind Franklin, en 1953 James Watson y Francis Crick
determinaron la estructura tridimensional del DNA. Las cadenas de polinucleotidos
en el DNA forman una doble hélice (DNA dúplex) de 2 nm de diámetro, con una
vuelta cada 3.4 nm y una separación de 0.34 nm entre cada base, habiendo por lo
tanto 10 nucleótidos por cada vuelta. Los grupos 5’ fosfato y 3’ OH de cada par de
nucleótidos adyacentes están unidos a través de enlaces fosfodiester. Las dos
cadenas están unidas en forma de espiral y son antiparalelas, es decir, los
extremos 5’ y 3’ terminal de una cadena están apareados con los extremos 3’ y 5’
terminal de la cadena opuesta respectivamente. En la doble hélice, las bases se
localizan en la porción interna y el esqueleto de azucares y fosfatos hacia el
exterior. Las bases de una cadena están unida con las bases de la otra a través
de enlaces no covalentes de tipo puentes de hidrógeno. El apareamiento de bases
es específico, A con T y G con C, con dos y tres puentes respectivamente.
En las células, el DNA forma parte de estructuras cromosomales, que además
contienen diferentes familias de proteínas; en eucariotes se encuentran histonas,
proteínas no histónicas y varios tipos de factores proteicos que participan en
diferentes procesos celulares, tales como replicación, transcripción, y algunos
otros.
La conformación del DNA depende de las condiciones del ambiente en que se
encuentra. En condiciones fisiológicas, la mayor parte del DNA adopta una
conformación de doble hélice tipo DNA-B, con giro hacia la derecha y 10
nucleótidos por vuelta, sin embargo existen otras formas alternativas tales como el
DNA-A y el DNA-Z.
Además de una conformación particular, todas las moléculas funcionales de DNA
adoptan una organización tridimensional super-enrrollada o “super coil” que
permite su empaquetamiento. Para la replicación y expresión del DNA, se requiere
de varias familias de proteínas (topoisomerasas), las cuales cortan
transitoriamente y unen al DNA generando moléculas “relajadas”. Estas
estructuras se han caracterizado principalmente en virus y plásmidos, y se han
denominado “circular cerrada” y “circular abierta”.

UNIDAD 2. Dogma Central de la Biología Molecular.

El dogma central de la biología molecular indica que la información genética fluye
de DNA a DNA durante la replicación de cromosomas y de DNA a proteínas
durante la expresión génica.
El flujo de la información de DNA a proteínas ocurre en dos pasos: (1)
transcripción, de DNA a RNA, y (2) traducción, de RNA a proteínas. La
transcripción involucra la síntesis de un transcrito de RNA complementario a una
de las cadenas del gen. La traducción es la conversión de la información genética
almacenada en la secuencia de nucleótidos del transcrito de RNA a una secuencia
de aminoácidos de un polipéptido, esto de acuerdo a las especificaciones del
código genético.
En virus cuyo material genético es RNA, en las células infectadas el genoma se
replica y se transcribe generándose RNA genómico y mRNA respectivamente y
este ultimo se traduce en proteínas. Algunos virus de RNA (denominados
retrovirus) tienen la capacidad de sintetizar moléculas de DNA a partir del genoma
de RNA, por medio de una enzima denominada transcriptasa reversa codificada
por el virus. No se ha encontrado que los genomas celulares codifiquen para
enzimas con esta actividad, sin embargo la telomerasa si utiliza molde de RNA
para sintetizar pequeños fragmentos de DNA.
De acuerdo al Dogma Central de la Biología Molecular, se ha encontrado que a
partir de DNA se puede sintetizar RNA y viceversa y de estos se pueden sintetizar
proteínas, sin embargo no se han encontrado evidencias que indiquen que a partir
de proteínas se puedan sintetizar genes, es decir, DNA o RNA.
Cada gen especifica para un polipéptido diferente, las proteínas pueden tener
funciones estructurales o enzimáticas, la función de todas ellas es determinar el
fenotipo de un organismo.
Relación gen-proteína:
Los genes determinan las estructuras de las proteínas. Las secuencias de
nucleótidos en el DNA se transcriben a secuencias de nucleótidos en los mRNAs y
estos a su vez determinan las secuencias de aminoácidos en las proteínas.
Las principales características del Código Genético son:
- Las unidades básicas, codones, están compuestos de tripletes de
nucleótidos.
- Cada codón codifica para un aminoácido.
 - En la gran mayoría de los casos, el código es “no traslapado”, es decir,
cada base forma parte exclusivamente de un solo codón..
- No tiene pausas, los codones se leen consecutivamente.
- Es “degenerado”, con excepción de dos aminoácidos, el resto está
codificado por más de un codón.
- Es redundante, el número de codones sobrepasa al de aminoácidos.
- Existen codones específicos de iniciación y terminación.
- Es universal, con solo algunas pequeñas excepciones, los codones tienen
el mismo significado en todos los organismos.
- Las mutaciones en el material genético son cambios heredables indispensables
para la evolución de las especies. La mayoría de las mutaciones tienen efectos
adversos sobre el organismo. Las mutaciones se pueden presentar en la células
somáticas y en los gametos, sin embargo solo estas últimas pueden ser
transmitidas a la progenie.
- Las mutaciones pueden presentarse de manera espontánea como consecuencia
de errores durante la replicación del DNA, pero también pueden ser inducidas por
agentes mutagénicos químicos, físicos y biológicos presentes en el medio
ambiente.
- Todos los carcinógenos son agentes mutagénicos, ellos alteran uno o mas
nucleótidos en el DNA.
-Las mutaciones generalmente son procesos no adaptativos en los cuales el
medio ambiente “desfavorable” simplemente selecciona los organismos
preexistentes en los cuales ocurrieron mutaciones aleatorias.
- Las mutaciones son inducidas por agentes químicos, radiación ionizante, luz
ultravioleta, e incluso por fragmentos de DNA que se introducen en sitios
específicos del genoma.
- Los carcinógenos químicos tienen estructuras muy variadas, sin embargo tienen
en común su reactividad electrofílica (siendo ellos electrofílicos de manera natural
volviéndose por acción del metabolismo del organismo. La activación metabólica
ocurre via el sistema del citocromo P-450, una vía generalmente utilizada por la
célula para la deshacerse de compuestos químicos nocivos.
- Las mutaciones puntuales son de tres tipos: i) transiciones, substitución de una
purina por otra purina o de una pirimidina por otra pirimidina; ii) Transversiones,
purina por pirimidina y viceversa y ; iii) cambio en le marco de lectura, en donde la
adición de un nucleótido (pueden ser más) altera el orden de codones en que se
va a traducir el mRNA.
- Muchos errores de copiado del DNA que se presentan durante la replicación, son
corregidos por la función de “proofreading” de las DNAs polimerasas, que pueden
reconocer el incorrecto apareamiento de bases en el extremo 3’ terminal de la
cadena naciente y los retiran por medio de una actividad de exonucleasa 3’ → 5’.

UNIDAD 3. Replicación del DNA.

La replicación del DNA es semiconservativa, conforme las dos cadenas del DNA
duplex se desenrollan y separaran cada una de ellas funciona como molde para la
síntesis de las nuevas cadenas complementarias. La propiedad de formar puentes
de hidrógeno que tienen las bases de las cadenas molde, hace que estas
determinen la secuencia específica de bases complementarias que tendrán las
cadenas recién sintetizadas.
- Una horquilla de replicación, con las enzimas y proteínas de unión a DNA
constituye un replisoma.
- Las enzimas y otros factores que llevan a cabo la replicación del DNA en E. coli y
en células eucarióticas son análogas, lo anterior sugiere que el mecanismo
bioquímico de la replicación del DNA es semejante en todas las células.
- Los eventos enzimáticos que ocurren en la horquilla de replicación son
consecuencia de dos propiedades del DNA duplex y dos de las DNA polimerasas.
La doble hélice del DNA contiene dos cadenas antiparalelas (la dirección 5’→ 3’
de una cadena es opuesta a la dirección 5’→ 3’ de la otra) y las dos cadenas
están enroscadas, por lo que no se pueden separar de manera completa en un
solo paso durante la desnaturalización. Las DNAs polimerasas requieren de un
primer de iniciación ( ya sea DNA o una molécula de RNA al inicio de la síntesis) y
todas las cadenas de DNA crecen por la incorporación de nucleótidos en su
extremo 3´ OH terminal.
- En todas las células una de las cadenas nuevas de DNA (cadena lider, temprana
o “leading”) se sintetiza continuamente en dirección hacia la horquilla de
replicación, por alargamiento del extremo 3’ OH de un primer de RNA
complementario a la cadena molde. La síntesis de la otra cadena (tardía o
“lagging” ) ocurre en dirección opuesta al movimiento de la horquilla de replicación
por alargamiento del extremo 3’ OH de una serie de primers pequeños de RNA
complementario a la segunda cadena molde. Los fragmentos resultantes de RNA
+ DNA se denominan fragmentos de Okasaky.
Posteriormente los primers son retirados, los “huecos” entre los fragmentos se
rellenan y después son unidos covalentemente.
- La iniciación de la replicación del DNA en E. coli se lleva a cabo por la unión de
la proteína DnaA al sitio oriC (origen de replicación), seguido por la unión de la
proteína DnaB con actividad de helicasa que desnaturaliza el DNA dúplex en la
horquilla de replicación. La asociación de la primasa a este complejo forma el
primosoma. Después de la síntesis del primer de RNA la primasa se disocia.
- Las proteínas SSB (de unión a DNA de cadena sencilla) favorecen la
polimerización de bases a partir de la cadena molde, ya que evitan que las
cadenas de DNA que están separadas se vuelvan a unir. Conforme la DNA
polimerasa III avanza, estas son desplazadas de la cadena sencilla de DNA y
vuelven a reciclar.
- La DNA polimerasa III de E. coli cataliza la incorporación de nucleótidos a las
cadenas temprana y tardía. La DNA polimerasa I retira los primers de RNA de los
fragmentos de Okasaky y rellena los huecos en la cadena tardía. Posteriormente
la DNA ligasa une segmentos completos de fragmentos de Okasaky que están
adyacentes.
- Las proteínas eucarióticas que replican in vitro el DNA del virus SV40 tienen
similitudes con las proteínas de replicación de E. coli. La proteína viral llamada
antígeno T funciona de manera semejante a la helicasa DnaB y la proteína del
huésped PCNA (antígeno nuclear de proliferación celular) es similar a la
subunidad β de anclaje que se asocia con la DNA polimerasa III. Sin embargo, en
la horquilla de replicación de eucariotes funcionan dos polimerasas distintas, la α
y δ o ε. Estas son polimerasas nucleares, α también tiene actividad de primasa,
δ y ε actúan sobre la cadena líder y participan en la síntesis de frgmentos de
Okasaki.. En mitocondrias participa la polimγerasa γ.
- El deslizamiento de las DNAs polimerasas sobre la cadena molde es esencial
para una polimerización eficiente, lo anterior se facilita por su a asociación con la
subunidad β de anclaje en E. coli y PCNA en eucariótes.
- La telomerasa, una transcriptasa reversa que contiene un molde de RNA, añade
nucleótidos al extremo 3´OH del molde para la cadena tardía y así previene el
acortamiento de las cadenas tardías durante la replicación de moléculas de DNA
lineales tales como los cromosomas eucarióticos.

UNIDAD 4. La transcripción.
La transcripción y su regulación.: La síntesis de RNA se presenta en tres etapas: i)
iniciación; ii) alargamiento y; iii) terminación. Las enzimas con actividad de RNA
polimerasas (un solo tipos en bacterias y tres en eucariotes) son proteínas
multiméricas (contienen varias subunidades con funciones independientes). La
síntesis del RNA se realiza a partir de una cadena sencilla de DNA que sirve como
molde (no codificadora), en regiones con forma de “burbujas” u horquillas, las
cuales se producen por el desenrrollamiento de un segmento del DNA dúplex. El
alargamiento se detiene cuando la RNA polimerasa encuentra una señal de
terminación de la transcripción en el DNA molde. En procariotes, la transcripción,
la traducción y la degradación de la molécula de mRNA ocurre de manera
simultanea.
- La RNA polimerasa bacteriana esta compuesta de subunidades β’, β, y dos α
que forman el “core” de la polimerasa, y algunas otras subunidades
(principalmente ζ), las cuales funcionan como factores de iniciación.
- La RNA polimerasa bacteriana es responsable de la transcripción de todas las
moléculas de RNA, es decir del RNA ribosomal, de los de transferencia y de los
mensajeros.
- La iniciación de la transcripción se presenta cuando la subunidad ζ de una
molécula de RNA polimerasa (holoenzima) se une de manera específica a la
secuencia promotora del DNA duplex formando un complejo “cerrado”.
Posteriormente la polimerasa separa las dos cadenas del DNA en una región de
12-13 nucleótidos justo en el sitio de iniciación de la transcripción formando un
complejo “abierto”. Las polimeras comienza a incorporar nucleótidos (
subunidades β’ y β) a la cadena naciente de RNA en base a la secuencia de la
cadena molde de DNA y cuando se han sintetizado cerca de 10 nucleótidos, la
subunidad ζ se libera y el “core” continúa con la transcripción. Las subunidades α
interaccionan con proteínas reguladoras y controlan la frecuencia con la cual una
polimerasa trancribirá a partir de un promotor específico.
- La “fuerza” de un promotor se refiere a que tan frecuente la RNA polimerasa
inicia la transcripción a partir de él. La subunidad ζ70 es el principal factor de
iniciación en E. coli, interacciona con la secuencia promotora en la región entre –
10 y –35 pares de bases (caja de Pribnow) del sitio de iniciación.
- La RNA polimerasa bactariana generalmente termina la transcripción por un
mecanismo independiente del factor de terminación Rho (φ) en sitios que codifican
para un repetido de varios residuos de Us, que a su vez están precedidos por una
estructura secundaria estable en forma de “burbuja” en el transcrito de RNA.
- Algunos otros transcritos bacterianos requieren de la actividad del factor φ, una
ATPasa que disocia al extremo 3´OH del RNA naciente, del sitio activo de la
polimerasa.
- En células de E. coli infectadas con el bacteriófago λ , la expresión temporal de
genes del virus se regula por un proceso de transcripción llamado
“antiterminación”. Un complejo proteico que contiene a la proteína λ N y algunas
otras proteínas de la célula huésped se unen de manera específica a secuencias
del RNA recién transcrito, e interactúan con la polimerasa permitiendo que avance
sobre sitios de terminación sin que se detenga la incorporación de nucleótidos,
hasta que finalmente encuentra un terminador “fuerte” y ahí se termina la
transcripción.
- Los mRNAs bacterianos se caracterizan por ser policistrónicos, es decir,
contienen varios segmentos (cistrones) que codifican para diferentes proteínas,
cada uno de ellos presenta regiones reguladores que permiten la iniciación
(secuencia de Shine-Dalgarno y codón de iniciación) y la terminación (codón de
terminación) de su traducción. Los mRNAs policitrónicos se generan por la
transcripción de operones, grupo de genes que están regulados por un solo
promotor y un terminador.
- En organismos eucarióticos los genes se encuentran en el núcleo, mientras que
las proteínas se sintetizan en el citoplasma. Las moléculas de mRNA funcionan
como intermediarios que transportan la información genética del DNA a los
ribosomas, en donde se sintetizan las proteínas. La síntesis de RNA catalizada por
RNA polimerasas, en varios aspectos es semejante a la síntesis de DNA, sin
embargo la síntesis de RNA se presenta en una región localizada en donde se
separan las dos cadenas del DNA dúplex, y solo una de las cadenas funciona
como molde para la síntesis de RNA.
- En eucariótes existen tres tipos de RNA polimerasas y cada una transcribe una
familia diferente de genes. La RNA polimerasa I transcribe los genes para los
rRNAs mayores; la RNA polimerasa II transcribe los genes que codifican para
mRNAs (y finalmente proteínas); y la RNA polimerasa III trasncribe los genes para
los tRNAs y un rRNA pequeño.
- Las polimerasas contienen dos subunidades grandes, dos subunidades
pequeñas “core” , con homología funcional a las subunidades bacterianas, y
varias subunidades pequeñas adicionales. Algunas de estas subunidades son
compartidas, otras son específicas para cada tipo de polimerasa.
- La transcripción de genes para mRNAs eucarióticos generalmente se
complementa con tres modificaciones postranscripcionales: i) la adición de
residuos de 7-metil guanosina (cap) al extremo 5’ terminal; ii) la adición de
residuos de ácido adenílico (poly A) en el extremo 3’ terminal y; iii) el retiro de
secuencias no codificadoras (intrones) de la molécula precursora del mRNA
(splicing). Después de estas etapas, el mRNA maduro sale del núcleo al
citoplasma y es funcional en la síntesis de proteínas. Algunos transcritos
eucarióticos son modificados por un mecanismo de “edición”, el cual produce
cambios en la secuencia nucleotídica del RNA antes de que sea traducido. La
mayoría pero no todos los genes eucarióticos tienen “interrumpidas” las regiones
codificadoras (exones) por secuencias no codificadoras (intrones). Algunos genes
contienen intrones muy grandes, otros tienen un gran número de intrones
pequeños.
- Los intrones del precursor de mRNA se retiran en un complejo molecular de
ribonucleoproteínas llamadas “espliciosomas”. El proceso debe ser preciso en el
corte entre los nucleótidos, para asegurarse que los codones presentes en los
exones que están separados por los intrones sean leídos correctamente durante la
traducción.
- La expresión de genes eucarióticos que codifican para proteínas generalmente
es regulada por múltiples regiones no codificadoras que controlan la transcripción.
Algunos de estos elementos se localizan cerca del sitio de iniciación de la
transcripción (promotor proximales), mientras que otros se localizan a distancias
mayores que se denominan “enhancers”.
- Los promotores determinan el sitio de iniciación de la transcripción y dirigen la
unión de la RNA polimerasa II. En eucariotes el elemento más común presente en
el promotor es la caja “TATA”, esta región nucleotídica esta presente en genes
que se transcriben rapidamente, sin embargo por lo general el promotor contiene
más elementos de control de la transcripción.
- Los elementos cercanos al promotor se localizan aprox. 200 pares de bases (pb)
del sitio de iniciación de la transcripción y comprenden hasta 20 pb.
- Los enhancers (100 a 200 pb de longitud) contienen grupos específicos de 8 a 20
pb, pueden estar localizados de 200 a decenas de kilobases y pueden estar antes
del promotor o después del terminador del gen, incluso dentro de intrones de otro
gen.
- Los promotores y los enhancers generalmente son específicos para el tipo de
célula, estos funcionan en la diferenciación celular.
- La RNA polimerasa II requiere varios factores generales de transcripción para
localizar el sitio preciso de iniciación en el DNA y comenzar la transcripción. Estas
proteinas se denominan TIFA, TFIIB, etc. siendo la mayoría de ellas multiméricas.
La mas compleja es el factor TFIID que se une a la caja TATA a través de la
subunidad TBP (TATA binding protein).
- La transcripción dependiente de RNA pol II in vitro se inicia con la unión
secuencial de factores en el siguiente orden: TBP; TFIIB; un complejo entre la
RNA pol II y TFIIF; TFIIE; y finalmente TFIIH.
- La actividad de helicasa de dos subunidades de TFIIH separa las cadenas del
DNA duplex en el sitio de iniciación de los promotores, para ello se requiere de la
hidrólisis de ATP. Conforme la pol II avanza, su “cola” no fosforilada CTD
(secuencia de heptapéptido repetida en el extremo carboxi terminal de la
subunidad mayor) es fosforilado por otra subunidad de TFIIH.
- La iniciación de la transcripción in vivo requiere del factor TIFA, el cual
interacciona con TBP en la caja TATA. Así como un complejo multiproteico el cual
se asocia con la región CTD no fosforilada de la pol II, formando una holoenzima
muy compleja que incluye la mayoría de los factores transcripcionales. Esta
holoenzima pre-ensamblada (60-70 proteínas) se une al promotor in vivo en un
solo paso.

UNIDAD 5. Regulación de la expresión genética.

- En bacterias (y en todas las células) no todas las proteínas se sintetizan al
mismo tiempo, existen familias de proteínas cuya síntesis es constitutiva (no esta
regulada, “siempre” se sintetizan), otros son inducibles (se puede estimular su
síntesis) y otras son reprimibles (se puede detener su síntesis). La expresión
diferencial de genes normalmente se regula a nivel de la transcripción.
- Las proteínas inducibles y reprimibles dependen de genes que son regulados por
las condiciones nutricionales de la célula (medio ambiente).
- El operón lac esta sujeto a dos tipos de controles transcripcionales, uno positivo,
en el cual la proteína reguladora es una molécula activadora se une al gen y
favorece la transcripción, y otro negativo en el cual la proteína reguladora actúa
como represora uniéndose al gen e inhibiendo la transcripción.
- La transcripción del operón lac depende de las condiciones ambientales, para
que se transcriba se requiere cumplir con dos condiciones: i) que este presente la
lactosa y, ii) que no este presente la glucosa. Otra forma de expresar lo anterior,
es de que la molécula activadora esté “activa” y que la molécula represora este
“inactiva”.
- De acuerdo al modelo de control transcripcional de Jacob y Monod, la
transcripción de operón lac (que codifica para tres proteínas inducibles, β-
galactosidasa, permeasa y acetilasa) es reprimida por la unión de la proteína
represor lac a la secuencia operadora (que se traslapa parcialmente con el
promotor). El represor interfiere con la unión de la RNA polimerasa al promotor, y
por lo tanto con la iniciación de la transcripción (control negativo de la
transcripción). En presencia de lactosa u otro inductor, la represión se “termina”
debido a que el represor se inactiva y pierde su afinidad por el operador y como
resultado de esto el operón lac se puede transcribir de nuevo (si no hay glucosa)
- El operón lac también esta sujeto a un control positivo (represión catabólica). En
E. coli existe una proteína activadora denominada CAP (proteína activada por
catabolito) que en su forma “activa” se une a secuencias promotoras (sitio de
unión a CAP) presente en algunos genes que codifican para enzimas que
metabolizan fuentes de carbono alternas a la glucosa. La presencia de la proteína
CAP en el promotor estimula la unión de la RNA polimerasa y se presenta la
transcripción En presencia de glucosa los niveles de AMP cíclico disminuyen y
por lo tanto la proteína CAP permanece inactiva y no favorece la transcripción de
genes. En ausencia de glucosa, los niveles de AMPc aumentan, este se una a la
proteína CAP y la activa, por lo que se favorece la transcripción de este tipo de
genes, su transcripción dependerá de que este presente el inductor apropiado
(tipo de azúcar, por ejemplo lactosa ) para que el represor lac este inactivo, el
operador este vació y por lo tanto se lleve a cabo la transcripción.
- Mutaciones en el promotor o el operador actúan en “cis”, es decir, solo afectan la
expresión de los genes que están localizados en la molécula de DNA en donde
ocurrió la mutación.
- Mutaciones en el operador que evitan la unión del represor, resultan en
transcripción constitutiva. Mutaciones en un promotor que afectan la unión de la
RNA polimerasa pueden disminuir o incrementar la velocidad de transcripción.
- Las moléculas represoras y activadoras actúan en “trans”, es decir, pueden
afectar la expresión de genes (a los cuales regulan) sin importar en que molécula
de DNA de la célula se encuentren.
- Muchos represores y activadores bacterianos son dímeros, cada monómero
contiene una α hélice en su superficie que se inserta en el surco mayor del DNA
localizado en la región operadora. La alta afinidad de los dímeros a dos surcos
“vecinos” sobre el mismo lado del DNA, se debe a la interacción de las proteínas
con bases específicas a través de puente de hidrógeno, enlaces iónicos y fuerzas
de van der Waals.
- Las secuencias operadoras consisten de dos repetidos invertidos, en las cuales a
cada una de ellas se une una subunidad del represor.
- Al igual que en bacterias, en organismos eucarióticos la regulación de la
expresión de genes se lleva a cabo principalmente a nivel de la transcripción.
- El propósito principal del control de la expresión de genes en organismos
multicelulares es tomar las decisiones correctas para los genes se expresen en el
orden y de la manera adecuada durante el desarrollo embrionario y la
diferenciación celular.
- En los genomas eucarióticos los elementos reguladores que actúan en “cis” se
localizan a distancias hasta de miles de bases del sitio de iniciación de la
transcripción.
- Los factores transcripcionales eucarióticos que pueden estimular o reprimir la
transcripción, se unen a regiones proximales del promotor o a “enhancers”
- Las moléculas activadoras y represoras son proteínas que tienen un dominio de
unión al DNA y varios dominios de activación que les permiten interaccionar con
otros dominios de activación de moléculas unidas al DNA en sitios cercanos o
distales.
- Los enhancers contienen sitios de unión a factores transcripcionales, la unión
cooperativa de estas proteínas forman complejos denominados “enhanceosomas”
.
- Los dominios de unión a DNA de los factores transcripcionales tienen una
variedad de estructuras. Entre los más comunes están los “Homeodomain”, “zipper
de leucina”, “hélice-burbuja-vuelta” y varios tipos de “dedos de zinc”.
- La propiedad de formar heterodímeros, que tienen varios factores
transcripcionales, aumenta el número de sitios de unión al DNA y las maneras en
los cuales estos factores pueden controlar la transcripción de genes o familias de
genes.
- Así como existen múltiples dominios de unión a DNAs en los factores
transcripcionales, también existe la contraparte en las secuencias nucleotídicas o
“motifs” presentes en las regiones reguladoras de los genes que actúan en “cis”.
Por lo tanto hay “equipos” de factores transcripcionales y regiones reguladoras
de unión en el DNA. Hay secuencias y factores específicos que regulan la
expresión de familias de genes que se inducen o reprimen de coordinada, por
ejemplo: “choque térmico”; resistencia a metales pesados”; genes de “estrés” ;
regulación por hormonas; tejido específico; nutrientes; deshidratación, daño a
DNA; y otros.
- Además de los factores transcripcionales, la regulación de la expresión de genes
también se puede dar por cambios en la estructura de la cromatina, que pueda
hacer accesible o nó la interacción de factores y promotores en regiones
específicas del genoma. La heterocromatina es una región condensada de la
cromatina en donde el DNA es relativamente inaccesible y por la tanto la
transcripción esta reprimida.

UNIDAD 6. El Proceso de la traducción.

La mayoría de los genes afectan el fenotipo de un organismo a través de las
proteínas, las cuales son macromoléculas compuestas de cadenas polipeptídicas
con diferentes secuencias de aminoácidos. La secuencia de aminoácidos es
especificada en la secuencia nucleotídica de un gen. La gran diversidad de
funciones de las proteínas depende en gran manera de la complejas estructuras
tridimensionales a que pueden dar origen.
- La secuencia de nucleótidos en el mRNA se traduce en el ribosoma en una
secuencia específica de aminoácidos. La traducción requiere la participación de un
número considerable de moléculas de RNA y proteínas.
- El Códifo Genétic esta en forma de tripletes de nucleótidos (codones), es
degenerado, “sin pausas”, no traslapado y redundante. Cada aminoácido es
codificado por uno o mas tripletes de nucleótidos en el mRNA. Sesenta y un
codones codifican para aminoácidos y tres para señales de terminación de la
traducción. Cada codón especifica para un aminoácido, pero hay aminoácidos
codificados por múltiples codones.
- El codón AUG para metionina es el codón de iniciación de la traducción,
corresponde al aa del extremo NH2-terminal de la proteína.
- Un marco de lectura es una secuencia no interrumpida de codones en el mRNA
a partir del codón de iniciación, se traduce en una secuencia lineal de aminoácidos
en la proteína.
- La “descodificación“ de la secuencia nucleotídica del mRNA a una secuencia de
aminoácidos, depende de tRNAs y aminoacil tRNA sintetasas.
- Todos los tRNAs tienen una estructura tridimensional semejante, dos regiones
muy importantes son sus extremos, en uno esta un brazo aceptor para la unión
de un aminoácido específico y en el otro extremo se encuentra una secuencia de
tres bases, el anticodón. El anticodón aparea con el codón del mRNA, por lo
general atendiendo a las reglas de Watson y Crick, sin embargo hay cierta
flexibilidad entre algunas bases localizadas en el extremo 5’ terminal del
antocodón (3´terminal del codón) que permite que el anticodón reconozca a varios
codones (wobble).
- Cada una de las 20 aminoacil- tRNA sintetasas reconoce un solo tipo de
aminoácido y lo une de manera covalente al tRNA apropiado, formando un
complejo de aminoacil-tRNA. De esta manera el aminoácido esta “activo” y puede
participar en la formación de enlaces peptídicos.
- Los ribosomas son complejos de ribonucleoproteínas muy grandes, en ellos se
lleva a cabo la traducción, tienen muchas similitudes en todos los organismos.
Están formados de dos subunidades ribosomales que contienen rRNAs y
proteínas ribosomales.
- Los rRNAs de especies diferentes son capaces de adquirir una estructura
tridimensional que contiene muchas regiones de tallos y burbujas que son sitios de
unión a proteínas, mRNAs y tRNAs. Conforme el ribosoma se traslada sobre el
mRNA una región del rRNA de la subunidad mayor une secuencialmente los
extremos amnioacilados de los tRNAs que ingresan al complejo y cataliza la
formación de los enlaces peptídicos.
- Existen dos tRNAs diferentes que pueden ser cargados con metionina (metionina
formilada en el caso del tRNA iniciador), solo uno participa en la iniciación de la
síntesis de proteínas, el otro participa durante el alargamiento.
- Durante la iniciación las subunidades ribosomales se ensamblan sobre el sitio de
iniciación de un mRNA, después el tRNA que transporta la metionina NH2-terminal
aparea con el codón formando un complejo de iniciación 70S (en bacterias) u 80S
(eucariotes).
- Los mecanismos por los cuales la subunidad riboosmal pequeña reconoce al
codón de iniciación depende de factores de iniciación y de hidrólisis de ATP y
GTP, sin embargo difiere en bacterias y eucariotes. En bac terias, el factor IFI-3 se
une a la subunidad ribosomal pequeña y al mRNA, posteriormente entra un
complejo que contiene al factor IFI + GTP y el tRNA iniciador con metionina
formilada y se posiciona sobre el codón de iniciación localizado en el sitio P
(peptidil) de la subunidad ribosomal pequeña, evento que se favorece entre las
secuencias de Shine Dalgarno del mRNA y del rRNA 16S. Posteriormente entra la
subunidad ribosomal grande y se separan los factores de traducción.. El factor IFI
no es indispensable pero si favorece la formación del complejo de iniciación. En
eucariotes existe un mayo número de factores de iniciación , se denominan eIF1A,
B etc., la mayoría de ellos participa en el reconocimiento del mRNA y del sitio de
iniciación.
- El alargamiento de la traducción se realiza en tres pasos, los que ocurren de
manera cíclica. Primero un complejo formado por el factor EF-Tu/GTP y un
aminoacil-tRNA específico penetran al sitio A (Aminoacil) del ribosoma en donde
se lleva a cabo la interacción del codón del mRNA y el anticodón del tRNA y de
ser precisa, se forma el enlace peptídico a través del grupo amino terminal del
aminoácido entrante con el grupo carboxilo terminal del aa localizado en el tRNA
del sitio P, posteriormente se hidroliza el GTP y se libera el complejo EF-Tu/GDP.
El sitio E (de salida) podrá estar vació o tener un tRNA no cargado, en el sitio P
habrá un trNA no cargado y en el sitio A estará el último tRNA con el péptido
naciente. Para que el factor EF-Tu recicle, se activa de nuevo por unión del factor
EF-Ts que libera al GDP y posteriormente se incorpora una molécula de GTP que
desplaza al EF-Ts y ahora el EF-Tu/GTP se encuentra listo para unirse a otro
tRNA aminoacilado y llevarlo al sitio A. En la segunda etapa, el factor EFG o
“translocasa” + GTP mueve al ribosoma sobre el mRNA de tal forma que el tRNA
libre del sitio E se sale, el del sitio P pasa al sitio E y en el sitio A se encuentra un
codón del mRNA listo para recibir otro complejo de EF-Tu/GTP + el aminoacil-
tRNA cargado con el aminoácido apropiado al codón. Se libera GTP y el factor
EFG sale del ribosoma. En la última etapa, cuando en el sitio A del ribosoma
aparece un codón “sin sentido” , es decir un codón de terminación, se incorpora un
factor de terminación RF que libera la proteína. Rf1 o RF2 reconocen al codón de
terminación yRF3-GTP cataliza la separación del péptido del tRNA y libera las dos
subunidades ribosomales, estas reacciones requieren hidrólisis de GTP.
- En eucariotes, los factores eEFA y eEFB son análogos funcionales a los factores
bacterianos EF-Tu y EF-Ts, y existe un solo factor de terminación.
UNIDAD 7. Tecnologías en Biología Molecular y DNA Recombinante.
- En la clonación de DNA, las moléculas de DNA recombinantes son formadas in
vitro insertando fragmentos de DNA de interés en una molécula de DNA que sirve
como vector . Posteriormente las moléculas de DNA recombinantes se introducen
en células huésped, donde se replican, produciendo grandes cantidades de
moléculas de idénticas.
- Los vectores de clonación mas usados en bacterias son los plásmidos,
pequeñas moléculas circulares de DNA que tienen tres regiones funcionales: i) Un
origen de replicación; ii) un gen marcador, que normalmente confiere resistencia a
un antibiótico y; iii) una región en donde se puede insertar DNA exógeno sin
interferir con la replicación o la expresión del gen marcador.
- Dos tipos de enzimas son las mas usadas para generar moléculas de DNA
recombinante: i) enzimas de restricción, que cortan DNA dúplex en secuencias de
nucleótidos específicas (4-8 pb), dejando a menudo extremos de cadena sencilla
que son autocomplementarios (pegajosos o compatibles). Estas enzimas se usan
para cortar moléculas grandes de DNA en múltiples fragmentos de restricción y
para cortar el vector en un solo sitio. Si los extremos de los fragmentos de
restricción y del vector son compatibles, se mezclan en condicones apropiadas y;
ii) se añade una DNA ligasa que une las moléculas a través de sus extremos por
la formación de enlaces fosfodiester entre los fragmentos y el vector.
- Cuando plásmidos recombinantes se incuban con bacterias que han sido
tratadas con una alta concentración de cationes divalentes, una fracción muy
pequeña de células es capaz de aceptar una sola molécula de DNA recombinante.
Esta célula transformada, la cual lleva el gen plasmídico que confiere resistencia a
un antibiótico, puede ser seleccionada del resto de las células que son sensibles al
antibiótico, por crecimiento en un medio sólido que contiene el antibiótico. Todas
las células de cada colonia contienen plásmidos “descendientes” de la molécula
original, las colonias independientes representan clonas de células que
originalmente replicaron un tipo específico de fragmento de DNA.
- Los plásmidos y vectores virales pueden aceptar la clonación de fragmentos de
hasta 20 y 50 Kb respectivamente, para fragmentos mas grandes se utilizan otros
tipos de vectores, tales como cósmidos, y cromosomas artificiales de bacterias y
levaduras.
- La clonación de una molécula de DNA en un vector, no necesariamente implica
que la proteína para la que codifica este gen se vaya a expresar y sea funcional,
para ello se requiere de dos condiciones principales, que contenga todas las
regiones estructurales y reguladoras apropiadas y que se encuentre en una célula
huésped apropiada que tenga toda la maquinaria para su correcta expresión.
- Para aislar una clona que contiene un gen que codifica para una proteína de
interés, generalmente se trata de identificar la clona entre una colección de clonas
diferentes que contienen genes diferentes (bancos de genes, bilotecas de genes,
etc.). Dos son los métodos más utilizados: i) la hibridación con una sonda
específica de DNA radioactiva y posterior detección por autorradiografía
(Southern) y ; ii) la expresión de la proteína de interés y detección de ella por su
actividad biológica o por su unión a un anticuerpo específico.
- La sonda de hibridación específica puede construirse a partir de la secuencia de
aminoácidos de una porción de la proteína, para ello se aplica el código genéticos
y se sintetiza el DNA en un equipo automático. Otra opción es usar un gen
homólogo de algún otro organismo.
- La electroforesis en gel separa moléculas de DNA y RNA en base a su tamaño,
su migración es inversamente proporcional a su tamaño. De esta manera se
puede cortar la molécula de DAN recombinante con la misma enzima de
restricción que se uso en la construcción y los fragmentos del vector y del inserto
pueden ser separados por electroforesis y caracterizados.
- La bioinformática consiste en una serie de métodos para el almacenamiento,
distribución y análisis de grandes cantidades de secuencias de DNA. A través de
internet se puede tener acceso a bancos de información.
- La determinación de las secuencias genómicas completas de algunos
organismos ha dado origen a la Genómica, que se encarga del análisis de y
comparación de genomas enteros. La genómica ha revelado que en algunos
aspectos, que las arquibacterias son mas semejantes a los organismos
eucarióticos que a las bacterias. La levaduras Saccharomyces cerevisiae fue el
primer organismo eucariótico al cual se le secuencio su genoma completo.
- La expresión de RNAs en clonas puede ser identificada por medio de la técnica
de “Northern”, de una manera similar al al Southern
- Existen vectores de clonación apropiados para la expresión de proteínas en
bacterias y en eucariotes, estos se utilizan para propósitos de Biotecnología en los
cuales se requiere la producción de grandes cantidades de proteínas funcionales,
para usos en la industria, en alimentación, en salud, investigación y otros. Un
ejemplo de ello es la síntesis de insulina humana, la cual se expresa a partir de
una bacteria transformada que contiene el gen de la insulina humana.
- La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) permite la amplificación
específica de grandes cantidades de moléculas de DNA de manera idéntica, a
partir de cantidades muy pequeñas. Esto ha permitido que se utilice ampliamente
en una gran variedad de campos, para sintetizar DNA y más importante aún, para
identificar genes específicos en muestras biológicas de diferentes orígenes.
Ejemplos de aplicaciones son el diagnóstico molecular, tales como etección de
HIV y otros virus, detección en individuos de genes mutantes responsables de
anormalidades genéticas, pruebas de paternidad e identificación de individuos,
análisis filogenético de especies, epidemiología molecular, y otros.
- Los “microarreglos” de DNA contienen miles de pequeñas muestras de DNAs
de 1 Kb unidos a la superficie de un portaobjetos, que representan una proporción
considerable del contenido genético del organismo. También existen “DNA chips”
que contienen miles de oligonucleótidos específicos para genes independientes.
- La presencia o la expresión de genes en un microarreglo puede ser analizada
sintetizando cDNA marcado con fluorescencia a partir de muestras de mRNA
aislado de diferentes células bajo ciertas condiciones. La cantidad de cDNA que
híbrida con cada muestra en el microarreglo se mide usando un microscopio laser
confocal y una computadora para el análisis.
 RESÚMENES DEL CURSO DE BIOLOGÍA MOLECULAR

Funciones del material genético.

PROPIEDADES QUE DEBE REUNIR UNA MOLÉCULA PARA SER EL

MATERIAL HEREDITARIO

Las características o propiedades que debe reunir cualquier molécula para ser el
material hereditario se deducen de la observación de las propiedades que tienen
los organismos vivos.

 ALMACENAR INFORMACIÓN BIOLÓGICA DE UNA FORMA ESTABLE.

 REPLICARSE Y TRANSMITIRSE DE UNA CÉLULA A OTRA Y DE UNA
GENERACIÓN A LA SIGUIENTE.
 LLEVAR INFORMACIÓN PARA OTRO TIPO DE MOLÉCULAS Y
ESTRUCTURAS.
 MUTACIÓN Y RECOMBINACIÓN.

Fuente Primaria de variabilidad genética: mutación.

Las alteraciones o cambios en la molécula que contiene la información se

denominan mutaciones. La mutación es la fuente primaria de variabilidad genética,
si no existiera la mutación, no habría sido posible observar la enorme variabilidad
existente de especies diferentes, ni la variabilidad dentro de cada especie. Sin la
mutación no se podría haber producido el proceso evolutivo.

Fuente secundaria de variabilidad genética: recombinación.

EXPERIMENTOS DE TRANSFORMACIÓN BACTERIANA DE GRIFFITH (1928).

EL PRINCIPIO TRANSFORMANTE.

El material empleado por Griffith (médico inglés) fue la bacteria Diplococcus

pneumoniae o neumococo y los ratones. Cuando se inyecta a un ratón con el
esputo de una persona enferma (con neumonía) dicho ratón muere de septicemia
a las 24 horas. Esta capacidad virulenta de los neumococos se debe a la
presencia de una cápsula de polisacáridos (polímeros de glucosa + ácido
glucurónico) que envuelve a la bacteria y la protege de la fagocitosis.

Para poder realizar cualquier estudio genético es necesaria la existencia de

variabilidad para el carácter analizado. Griffith observó la existencia de diferentes
tipos de neumococos: neumococos virulentos de tipo S que dan lugar a colonias
con aspecto liso y brillante (producen la cápsula azucarada que los protege de la
fagocitosis del huésped) y neumococos no virulentos (avirulentos) de tipo R que
dan lugar a colonias de tipo rugoso y mate (carecen de la cápsula azucarada
protectora).

Experimento control: Griffith nuca había observado que los neumococos RII (no
virulentos) mutarán o cambiarán a SIII (virulentos).

Griffith observó que si inyectaba a los ratones con neumococos de tipo RII
(avirulentos) a las 24 horas seguían vivos (Figura A), mientras que si los inyectaba
con neumococos SIII (virulentos) a las 24 horas los ratones morían (Figura B).
Entonces decidió calentar los neumococos SIII (virulentos) para destruirlos y
posteriormente inyectarlos a los ratones, encontrando que los ratones seguían
vivos después de 24 horas (Figura C). Por consiguiente el calor, destruía el poder
infectivo de los neumococos SIII. Por último, inyectó a los ratones una mezcla de
neumococos RII vivos (no virulentos) y de SIII (virulentos) previamente muertos
por calor, encontrado que los ratones morían a las 24 horas y extrayendo de su
sangre neumococos SIII vivos Figura D).

Conclusiones de Griffith: puesto que los neumococos RII (avirulentos) nunca

mutan a SIII (virulentos), en el último experimento (Figura D) se demuestra la
existencia de una sustancia presente en los extractos de neumococos SIII muertos
por calor que es capaz de transformar a los neumocos RII vivos en SIII vivos,
dicha sustancia fue denominada por Griffith el Principio Transformante.

Estudios posteriores pusieron de manifiesto que la transformación de neumocos

RII en SIII se podía realizar en tubo de ensayo sin necesidad de utilizar ratones en
el experimento. Es decir, se puede mezclar en el mismo medio de cultivo líquido
neumocos RII vivos con neumococos SIII previamente muertos por calor y obtener
neumococos SIII vivos y virulentos.

These experiments, carried out in the 1940s, showed that adding purified DNA to a
bacterium changed its properties and that this change was faithfully passed on to
subsequent generations. Two closely related strains of the bacterium
Streptococcus pneumoniae differ from each other in both their appearance under
the microscope and their pathogenicity. One strain appears smooth (S) and causes
death when injected into mice, and the other appears rough (R) and is nonlethal.
(A) This experiment shows that a substance present in the S strain can change (or
transform) the R strain into the S strain and that this change is inherited by
subsequent generations of bacteria. (B) This experiment, in which the R strain has
been incubated with various classes of biological molecules obtained from the S
strain, identifies the substance as DNA.

Demostración experimental que el DNA es el material genético.

Fredrick Griffith

) LOS EXPERIMENTOS DE GRIFFIT: La bacteria Diplococcus pneumoniae es un

pneumococo, una bacteria causante de enfermedades. Existen dos cepas, la S
(Smooth = lisa), virulenta, y la R (rough = rugosa), no virulenta. Las bacterias S,
vivas, producen la muerte en los ratones, pero no la produce si están muertas. Las
segundas no son capaces de desarrollar la enfermedad. En 1928 Griffith realizó con
esta bacterias las siguientes experiencias: Fig. 3 y Fig. 4.

II) LOS EXPERIMENTOS DE AVERY y colaboradores: En 1944. AVERY,

MCLEOD y MCCARTHY, se propusieron encontrar cuál era el componente que
transmitía el carácter heredable y llegan a la conclusión de que s ólo el ADN de las
bacterias virulentas S muertas por el calor, era la sustancia que producía la
transformación de las R, no virulentas, en S virulentas. Estas experiencias
demostraban que el ADN era la molécula que contenía la información necesaria
para que las bacterias S fueran virulentas y que, a pesar de estar muertas, su ADN
no estaba destruido y podía pasar al medio y de aquí a las bacterias de cepa R
integrándose en el genoma de éstas y transformándolas en virulentas (Fig 6).

) LOS EXPERIMENTOS DE GRIFFIT: La bacteria Diplococcus pneumoniae es un

pneumococo, una bacteria causante de enfermedades. Existen dos cepas, la S
(Smooth = lisa), virulenta, y la R (rough = rugosa), no virulenta. Las bacterias S,
vivas, producen la muerte en los ratones, pero no la produce si están muertas. Las
segundas no son capaces de desarrollar la enfermedad. En 1928 Griffith realizó con
esta bacterias las siguientes experiencias: Fig. 3 y Fig. 4.
 II) LOS EXPERIMENTOS DE AVERY y colaboradores: En 1944. AVERY,
MCLEOD y MCCARTHY, se propusieron encontrar cuál era el componente que
transmitía el carácter heredable y llegan a la conclusión de que sólo el ADN de las
bacterias virulentas S muertas por el calor, era la sustancia que producía la
transformación de las R, no virulentas, en S virulentas. Estas experiencias
demostraban que el ADN era la molécula que contenía la información necesaria
para que las bacterias S fueran virulentas y que, a pesar de estar muertas, su ADN
no estaba destruido y podía pasar al medio y de aquí a las bacterias de cepa R
integrándose en el genoma de éstas y transformándolas en virulentas (Fig 6).

EXPERIMENTOS CON FAGOS RADIACTIVOS HERSHEY Y CHASE (1952).

El material que utilizaron Alfred Hershey y Marta Chase (1952) en sus estudios fue
el virus T4 que infecta a la bacteria E. coli. Dicho virus mantiene una relación de
tipo lítico con esta bacteria.

Los virus de la serie T, como el T4 cuando se aíslan y se someten a un choque

osmótico pueden reventarse liberándose el ADN que estaba en el interior de su
cápside.

Hershey y Chase pensaron en alguna forma para marcar los virus T4 solamente
en su ADN y solamente en sus proteínas, se dieron cuenta de que el azufre (S)
forma parte solamente de las proteínas pero no del ADN, y que el Fósforo (P)
forma parte solamente del ADN pero no de las proteínas. Por tanto decidieron
obtener dos colecciones de fagos diferentes, una colección de fagos T4 marcados
solamente en su ADN con Fósforo radiactivo (P 32) y otra colección de fagos T4
marcados solamente en sus proteínas con Azufre radiactivo (S 35). Para conseguir
este tipo de fagos T4 llevaron a cabo dos experimentos, en uno de ellos infectaron
bacterias de E. coli que crecían en un medio que con tenía P32, los virus
descendientes de la infección tenían marcado su ADN con P 32; en el otro
experimento infectaron bacterias de E. coli que crecían en un medio con S 35 , los
virus descendientes de la infección tenían marcadas sus proteínas con S 35 .

Para comprobar que habían marcado correctamente los virus T4, unos solamente
en el ADN y otra colección solamente en las proteínas, aislaron parte de los virus
descendientes de las infecciones los sometieron a choque osmótico y
centrifugaron en condiciones tales que las cápsides de los virus eran más pesadas
y se iban al fondo del tubo después de la centrifugación, mientras que el ADN que
había salido fuera de las cápsides, como consecuencia del choque osmótico, se
quedaba en solución al finalizar la centrifugación. Cuando el experimento se hacia
con virus marcados en su ADN con P32 el marcaje aparecía en solución y no en el
fondo del tubo, mientras que si el experimento se realizaba con fagos marcados
en sus proteínas con S35 el marcaje aparecía en el fondo del tubo donde estaban
las cápsides y no en solución.
EXPERIMENTOS QUE DEMUESTRAN QUE EL ARN ES EL MATERIAL
HEREDITARIO EN EL VIRUS DEL MOSAICO DEL TABACO (TMV)

Fraenkel-Conrat y Williams (1955) demostraron que después de separar la

cápside y el ARN del virus TMV era posible volver a reconstruir el virus con
capacidad infectiva.

Fraenkel-Conrat y Singer (1957) comprobaron que era posible separar el ARN y la

cápside de dos tipos de virus TMV diferentes y reconstruir virus con la cápside de
un tipo y el ARN de otro tipo. Cuando estos virus híbridos con cápside de un tipo
(tipo 1) y ARN de otro tipo (tipo 2) se utilizaban para infectar hojas de tabaco, los
virus descendientes de la infección mostraban siempre un tipo de cápside (tipo 2)
coincidente con el tipo de ARN (tipo 2) utilizado en la infección.

Fraenkel-Conrat y colaboradores (1957) y Gierer y Schramn (1956) comprobaron

que al infectar plantas de tabaco solamente con el ARN aislado de partículas del
virus TMV, se provocaban los síntomas normales de la infección y además era
posible recuperar virus TMV completos a partir de las hojas de tabaco infectadas.

Conclusiones de los experimentos de Fraenkel-Conrat y colaboradores:

Infectando solamente con el ARN del virus TMV es posible obtener virus TMV
completos con cápside y ARN, y cuando se infecta con virus híbridos los virus
descendientes poseen siempre una cápside coincidente con el tipo de ARN
empleado para infectar; se deduce que la molécula portadora de la información, la
que determina que aparezca la cápside del virus TMV es el ARN.

Life depends on the ability of cells to store, retrieve, and translate the genetic
instructions required to make and maintain a living organism. This hereditary
information is passed on from a cell to its daughter cells at cell division, and from
one generation of an organism to the next through the organism's reproductive
cells. These instructions are stored within every living cell as its genes, the
information-containing elements that determine the characteristics of a species as
a whole and of the individuals within it.

As soon as genetics emerged as a science at the beginning of the twentieth

century, scientists became intrigued by the chemical structure of genes. The
information in genes is copied and transmitted from cell to daughter cell millions of
times during the life of a multicellular organism, and it survives the process
essentially unchanged. What form of molecule could be capable of such accurate
and almost unlimited replication and also be able to direct the development of an
organism and the daily life of a cell? What kind of instructions does the genetic
information contain? How are these instructions physically organized so that the
enormous amount of information required for the development and maintenance of
even the simplest organism can be contained within the tiny space of a cell?

The answers to some of these questions began to emerge in the 1940s, when
researchers discovered, from studies in simple fungi, that genetic information
consists primarily of instructions for making proteins. Proteins are the
macromolecules that perform most cellular functions: they serve as building blocks
for cellular structures and form the enzymes that catalyze all of the cell's chemical
reactions (Chapter 3), they regulate gene expression (Chapter 7), and they enable
cells to move (Chapter 16) and to communicate with each other (Chapter 15). The
properties and functions of a cell are determined almost entirely by the proteins it is
able to make. With hindsight, it is hard to imagine what other type of instructions
the genetic information could have contained.