DETERMINACION DE LA CL50 PARA UN VERTIMIENTO PROVENIENTE
DE UNA EMPRESA INDUMOTORA UTILIZANDO ORGANISMOS DEL
GENERO DAPHNIA
ANGELA MARIA AVENDAÑO ANDRADE
LILIANA MORA ARAQUE
FACULTAD DE INGENIERÍA
PROGRAMA DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y SANITARIA
BOGOTÁ D.C
2015
DETERMINACION DE LA CL50 PARA UN VERTIMIENTO PROVENIENTE
DE UNA EMPRESA INDUMOTORA UTILIZANDO ORGANISMOS DEL
GENERO DAPHNIA
ANGELA MARIA AVENDAÑO ANDRADE
LILIANA MORA ARAQUE
Tesis de Grado para Optar
Al Título de Ingenieros Ambientales y Sanitarios
Director
PEDRO MIGUEL ESCOBAR MALAVER
Químico industrial
Lic. Química y biología
Msc. Alta gestión, consultoría y verificación medio ambiental
Msc. Residuos urbanos e industriales
FACULTAD DE INGENIERÍA
PROGRAMA DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y SANITARIA
BOGOTÁ D.C
2015
NOTA DE ACEPTACION:
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FIRMA DIRECTOR DE TESIS
………………………………………………………………………………………
FIRMA JURADO 1
………………………………………………………………………………………
FIRMA JURADO 2
BOGOTA D.C., 2015
AGRADECIMIENTOS
A Dios por haberme permitido lograr uno de mis sueños, a mis padres por haberme
apoyado en todo el proceso de formación profesional y a mi compañera de tesis
por haber compartido conmigo la elaboración de nuestro proyecto de grado.
Liliana Mora
Quisiera agradecer a Dios por permitirme sacar adelante esta meta propuesta, que es el
inicio de muchas otras. A mis papas por su apoyo incondicional, por acompañarme en
todo el proceso académico y de formación personal. A mi compañera de tesis por
participar en la elaboración de este nuestro proyecto de grado y haberlo sacado adelante
con tanto esfuerzo.
Ángela María Avendaño
Contenido
GLOSARIO..................................................................................................................................... 5
INTRODUCCION ........................................................................................................................ 10
RESUMEN .................................................................................................................................... 12
ABSTRACT .................................................................................................................................. 13
1. OBJETIVOS .......................................................................................................................... 14
1.1 OBJETIVO GENERAL ...................................................................................................... 14
1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS .............................................................................................. 14
2. MARCO TEORICO .............................................................................................................. 15
2.1. BIOENSAYOS ................................................................................................................... 15
2.1.1. Tipos de bioensayos. .................................................................................................... 15
2.2. TOXICIDAD .................................................................................................................. 16
2.2.1. Clasificación de la toxicidad ................................................................................... 17
2.3. DETERGENTES ............................................................................................................ 17
2.3.1. Coadyuvantes .......................................................................................................... 18
2.3.2. Tensoactivos ............................................................................................................ 18
2.4. EFECTOS DE LOS DETERGENTES EN LA SALUD ................................................ 20
2.4.1. Elemento tóxico ...................................................................................................... 20
2.4.2. Síntomas .................................................................................................................. 20
2.5. EFECTOS DE DETERGENTES EN EL MEDIO AMBIENTE ................................... 21
2.6. EFECTOS DE LOS DETERGENTES EN EL TRATAMIENTO DE AGUAS
RESIDUALES ........................................................................................................................... 25
2.6.1 PARAMETROS FISICOQUIMICOS PARA LA DETERMINACION DE LA
CALIDAD DE AGUA .............................................................................................................. 26
2.6.1.1 Temperatura ............................................................................................................... 26
2.6.1.2 Potencial de hidrogeno............................................................................................... 26
2.6.1.3 Caudal ........................................................................................................................ 27
2.6.1.4 Sólidos suspendidos totales ....................................................................................... 27
1
2.6.1.5 Sólidos sedimentables .................................................................................................28
2.7. Daphnia pulex .................................................................................................................28
2.7.1. Hábitat ......................................................................................................................30
2.7.2. Condiciones ideales de mantenimiento de cultivo de laboratorio. ...........................31
2.7.3. Alimentación ............................................................................................................32
2.7.4. Morfología................................................................................................................34
2.7.5. Ciclo de Vida............................................................................................................35
2.7.6. Selección ..................................................................................................................36
2.7.7. Importancia ecológica de Daphnia pulex.................................................................37
2.8. PROCEDENCIA DEL VERTIMIENTO ........................................................................37
3. METODOLOGIA ...................................................................................................................40
3.1. FASE 1. CARACTERIZACIÓN FISICOQUIMICA......................................................41
3.1.1. Determinación de parámetros a medir .....................................................................41
3.1.2. Selección de puntos de muestreo .............................................................................43
3.1.3. Descripción del muestreo .........................................................................................44
3.1.4. Análisis in-situ .........................................................................................................46
3.1.5. Composición de la muestra ......................................................................................47
3.1.6. Análisis en el laboratorio..........................................................................................48
3.2. FASE 2. MANTENIMIENTO DEL CULTIVO (Daphnia pulex) ..................................49
3.2.1. Preparación del agua reconstituida ...........................................................................49
3.2.2. Ensayo de viabilidad ................................................................................................51
3.2.3. Preparación del medio bristol y cultivo de algas verdes ..........................................51
3.2.4. Prueba – Alimento....................................................................................................53
3.2.5. Prueba - Aclimatación ..............................................................................................54
3.2.6. Mantenimiento del cultivo de los organismos (Daphnia pulex) ..............................55
3.2.7. Separación de organismos: .......................................................................................56
3.2.8. Limpieza ...................................................................................................................58
3.3. FASE 3. ENSAYOS DE TOXICIDAD (Preliminares y Definitivas) .............................59
3.3.1. Pruebas de sensibilidad .................................................................................................60
3.3.2. Montaje de las pruebas de toxicidad (bioensayos)........................................................60
3.4. FASE 4. OBTENCIÓN DE RESULTADOS ..................................................................63
2
3.4.1 Validación de resultados por medio de la determinación del índice toxicológico........ 63
3.4.1.2 Corrección por caudal al IT de entrada ...................................................................... 65
3.4.1.5. Corrección por caudal del IT a la salida ................................................................... 65
3.4.3 Validación de resultados por medio Del coeficiente de variación. ............................. 65
4. ANALISIS DE RESUTADOS Y RESULTADOS................................................................ 67
4.1. CARACTERIZACION FISICOQUIMICA DEL VERTIMIENTO .............................. 67
4.1.1. Características del vertimiento en cada punto de muestreo .................................... 67
4.1.2. Características de la muestra primer punto ............................................................. 67
4.1.3. Características de la muestra segundo punto (caja de inspección) .......................... 68
4.1.4. Aforo de caudal ....................................................................................................... 69
4.1.5. Análisis IN- SITU .................................................................................................... 69
4.1.6. Análisis en el laboratorio......................................................................................... 71
4.2. PRUEBAS DE SENSIBILIDAD ................................................................................... 73
4.2.1. Análisis ANOVA para las pruebas de sensibilidad con Dicromato de Potasio ........... 76
4.3. PRUEBAS DE TOXICIDAD CON EL VERTIMIENTO ............................................. 79
4.3.1. Pruebas de toxicidad con muestra de agua antes de ser sometida a tratamiento.......... 79
4.3.1.1. Análisis ANOVA para las pruebas de toxicidad con el agua residual antes de ser
sometida a tratamiento ........................................................................................................... 81
4.3.1.2. Análisis ANOVA para las pruebas de toxicidad con el vertimiento......................... 84
4.4. CARGA TÓXICA E ÍNDICE TÓXICOLÓGICO ......................................................... 87
4.4.1. Carga toxicológica del afluente de la trampa de grasas .......................................... 87
4.4.2. Índice toxicológico del afluente de la trampa de grasas.......................................... 87
4.4.3 Corrección por caudal al IT de entrada ......................................................................... 87
4.4.3. Carga toxicológica del vertimiento a la salida de la trampa de grasas .................... 88
4.4.4. Índice toxicológico del afluente de la trampa de grasas.......................................... 88
4.4.5. Corrección por caudal del IT a la salida.................................................................. 89
4.5. COEFICIENTE DE VARIACION ................................................................................. 90
4.5.1. Media a la entrada del tratamiento .......................................................................... 90
4.5.2. Media a la salida del tratamiento............................................................................. 90
4.5.3. Desviación estándar................................................................................................. 90
4.5.4. Coeficiente de variación a la entrada del tratamiento ............................................. 93
3
4.5.5. Coeficiente de variación a la salida del tratamiento .................................................93
5. CONCLUSIONES ..................................................................................................................94
6. RECOMENDACIONES .........................................................................................................96
7. BIBLIOGRAFIA ....................................................................................................................97
ANEXOS ..................................................................................................................................... 100
4
GLOSARIO
ACLIMATACIÓN: Es la adaptación fisiológica a un nivel particular de una o más
variables ambientales. El término es generalmente referido al control en condiciones de
laboratorio. (ebookbrowsee, 2013)
AGUA DE DILUCIÓN: El agua natural o reconstituida que por las características
óptimas que presenta para la sobrevivencia y reproducción de los organismos usados en
pruebas de toxicidad, es utilizada para preparar las diferentes diluciones o
concentraciones efectuadas durante una prueba, sea ésta exploratoria o definitiva.
(ebookbrowsee, 2013)
AGUA DESTILADA: Agua que ha sido evaporada y condensada en un aparato de
destilación de vidrio borosilicato u otro material, para remover impurezas.
(ebookbrowsee, 2013)
AGUA RECONSTITUIDA: Es agua destilada con adición de reactivos. El resultado
es agua dulce sintética libre de contaminantes y con características deseables de dureza.
Se prepara con sales inorgánicas en cantidad requerida por el organismo prueba.
(ebookbrowsee, 2013)
BIOENSAYO: El concepto de bioensayo o prueba de toxicidad se deriva de la
toxicología clásica, esta definición actualmente ha sido modificada, adaptada y
extendida al diagnóstico y manejo ambiental. Estas técnicas bioanalíticas son
consideradas complementarias de los análisis fisicoquímicos convencionales y son
5
alternativas eficaces para la predicción de niveles seguros de concentración de tóxicos
en los que no se generan efectos observables. (Díaz Báez, Bistos López, & Espinosa
Ramirez, 2004)
BIOENSAYOS ACUÁTICOS: Son los procedimientos por los cuales las respuestas de
organismos acuáticos se usan para detectar o medir la presencia o efectos de una o más
sustancias, elementos, compuestos, desechos o factores ambientales solos o en
combinación. (ebookbrowsee, 2013)
BUENAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO (BLP, en inglés GLP): normas
fundamentales incorporadas en las legislaciones nacionales, relativas a la organización
y las condiciones en la que los estudios de laboratorio deben ser planificados,
realizados, controlados, registrados y resumidos en un informe.
CARGA TÓXICA: “La importancia de una descarga sobre el cuerpo receptor esta
conferida no solo por sus concentraciones tóxicas, sino por la cantidad total de tóxico en
un volumen dado de descarga”. (Castillo , 2004)
CL : concentración letal media, concentración del material en agua, suelo o sedimento
50
que se estima letal para el 50% de los organismos de ensayo. La CL50y sus límites de
confianza (95%) son usualmente derivados de análisis estadístico. (Castillo , 2004)
CONCENTRACIÓN: En una disolución, relación que existe entre la cantidad de
sustancia disuelta y la del disolvente. (Online Langiaje Dictionaries, Online)
6
CONCENTRACIÓN LETAL (CL): Es la concentración de una sustancia (pura o
combinada), o efluente que produce la muerte del organismo. (Online Langiaje
Dictionaries, Online)
CURVA CONCENTRACIÓN – RESPUESTA: Grafico que relaciona la
concentración de la exposición y la proporción de individuos de la población que
manifiesta un efecto determinado. (Jimenez Repetto & Reppetto kuhn, 2009)
CONTAMINANTE: Sustancia ajena, presente en un sistema natural en una
concentración más elevada de lo normal por causa de actividad antrópica directa o
indirecta. En un sentido más amplio se le define como la presencia de cualquier agente
físico, químico o biológico, o de combinaciones de los mismos en lugares, formas y
concentraciones tales y con tal duración que sean o puedan ser nocivos para la salud, la
seguridad o bienestar de la población, o perjudiciales para la vida animal y vegetal, o
que impidan el uso y goce de las propiedades y lugares de recreación. (Castillo , 2004)
Daphnia pulex (cladóceros): Daphnia pulex es la especie más común del grupo de
organismos conocidos como pulgas de agua. Su nombre común se dio a causa de su
aspecto general y espasmódicos movimientos de natación que se asemeja a la de la
pulga de la tierra. Ellos están, en realidad, un tipo de pequeño crustáceo y son
generalmente 0,2-3,0 mm de largo. Sus cuerpos no están claramente segmentados, pero
una característica importante de su anatomía es el caparazón, una estructura en forma de
concha plegada que cubre al animal y lo abre ventralmente y posteriormente. El estudio
de la anatomía de este organismo se hace más fácil por el hecho de que la mayor parte
7
de su cubierta exterior es clara, mostrando la mayoría de los órganos internos en el
trabajo, incluyendo el corazón. (University of Michigan, MUSEUM OF ZOOLOGU M,
2000).
DILUCIÓN: Consiste en disminuir la concentración de un soluto en una solución con
la adición de más solvente. (Franco, Yepes, & Vargas, 2008)
DOSIS LETAL: La prueba DL50 se desarrolló en 1927 para medir la toxicidad aguda
de ciertos compuestos en animales vivos. Consiste en la administración forzada
mediante ingesta, inhalación o vías parenterales, de distintas cantidades de una
sustancia, lo que conlleva dolorosas y agonizantes consecuencias para los animales
(dolor, convulsiones, diarrea, hemorragias nasales y bucales, vómitos, muerte).
(ANIMA NATURALIAS, 2013).
DUREZA: Concentración de compuestos minerales que hay en una determinada
cantidad de agua, en particular sales de magnesio y calcio. (Serveriche Sierra, Castillo
Bertel , & Acevedo Barrios, 200)
TÓXICO DE REFERENCIA: Es una sustancia química utilizada en bioensayos de
toxicidad, cuyo efecto en los organismos a determinadas concentraciones es conocidoy
por lo tanto, permite establecer el estado de respuesta de los organismos de prueba
empleados, así como comparar los resultados intra e inter laboratorios . El uso de estos
tóxicos, proporciona también una evaluación general de la precisión (estabilidad y
respetabilidad) del método a través del tiempo. (ebookbrowsee, 2013)
8
TÓXICOLOGÍA: Consiste en un estudio integrado o multidimensional de la respuesta
de los organismos frente a los tóxicos, aplicando tanto los métodos tradicionales como
los modernos, es decir, la observación clínica, el análisis químico toxicológico, la tóxico
cinética, los análisis bioquímicos y biomarcadores (de exposición, de efecto y de
susceptibilidad), los estudios histológicos, el análisis molecular de expresión de genes,
tóxicogenómica (transcriptó- mica), tóxicoproteómica y metabonómica, etc. que puedan
dilucidar nuevas vías y redes mecanísticas. (Jimenez Repetto & Reppetto kuhn, 2009)
9
INTRODUCCION
La descarga de compuestos peligrosos al medio ambiente, intencional o no, podrá
causar consecuencias serias, las cuales serán mayores cuando se generan y manejan
grandes cantidades de químicos que no existían anteriormente en la naturaleza y para
los cuales no existen procesos físicos o biológicos que permitan su degradación a
formas inocuas. (Díaz Báez, Bistos López, & Espinosa Ramirez, 2004).
Uno de los problemas presentados en el control ambiental es la contaminación de
los cuerpos de agua por diferentes vertimientos tóxicos, por ello es necesaria la
determinación de la toxicidad de estos, para así tomar medidas rigurosas de control.
El método más utilizado para la evaluación de la toxicidad de sustancias (vertimientos)
que afectan en alguna medida al medio ambiente son los bioensayos, los cuales son
herramientas ampliamente utilizadas en el campo de la ecotóxicología, la cual se ocupa
del estudio del efecto y destino de los agentes tóxicos de origen antropogénico a los
ecosistemas acuícolas y terrestres (Larrain 1995,P. 89).
El organismo seleccionado para la realización del análisis con el método de
bioensayos fue la Daphnia pulexy el vertimiento corresponde al de una industria
indumotora con contenido de detergentes.
Es necesario el estudio de los detergentes como agente tóxico potencial de los
vertimientos y la evaluación de este frente al medio ambiente y los organismos vivos,
determinando los daños que generan puesto que a pesar de que los detergentes son
sustancias con un nivel tóxico menor a otras, como metales pesados, suelen causar gran
afectación a microorganismos y organismos animales y vegetales, en suelos y cuerpos
de agua, alterando su ciclo de vida natural gracias a sus componentes.
10
El siguiente proyecto muestra los resultados obtenidos de la investigación
realizada a través de Bioensayos, determinando la concentración de CL 50 del
vertimiento de una de las sedes de Praco Didacol e identificando el efecto del mismo
sobre el recurso hídrico ayudados de resultados de análisis fisicoquímicos.
11
RESUMEN
Con esta investigación se determinó la concentración letal media de un vertimiento con
contenido de detergentes proveniente de una empresa indumotora, por medio de bioensayos de
toxicidad acuática realizados utilizando organismos Daphnia pulex. Se realizó el respectivo
montaje para la supervivencia del cultivo, estos, se aclimataron durante 15 días y después se
retuvieron en las instalaciones de los laboratorios de la Universidad de la Salle con fines de
realizar las pruebas donde se obtuvo el valor de sensibilidad de los organismos para verificar la
respuesta de estos al vertimiento con contenido de detergentes. La preparación de las sustancias
de referencia con vertimiento se realizó a través de ensayos preliminares y definitivos con los
tóxicos de referencia, se obtuvo la CL50 de vertimiento con contenidos de detergentes mediante
el método PROBIT y aceptabilidad de los resultados obtenidos por medio del análisis de
varianza ANOVA. Los organismos escogidos fueron Daphnia pulex por su gran importancia en
la cadena alimenticia media y por ser sensibles a todos los tipos de toxicidad presentes en el
medio acuático. Los ensayos fueron realizados en el laboratorio de bioensayos de la
Universidad de la Salle, basados en los protocolos establecidos por CETESB. Como resultado
final se determinó el valor de CL50 para un vertimiento con contenido de detergentes sin ser
sometido a tratamiento de 1,51 %. Y para un vertimiento con contenido de detergentes después
de ser sometido a un tratamiento de agua residual se determinó un valor de CL50 de 36,53 %.
12
ABSTRACT
This research determined the median lethal concentration of a shedding containing
detergent, through aquatic toxicity bioassays conducted using organisms Daphnia pulex.
Mounting the respective crop survival was performed; they were acclimated for 15 days
and then retained in the laboratory facilities of the University La Salle. The
accomplishment of the tests was the value of sensitivity of organisms to verify the
response of these dumping containing detergents. The preparation of the reference
substances with shedding were made through preliminary and final tests with reference
tóxicants, the LC50 of shedding with detergent content was obtained by the probit
method and acceptability of the results obtained by analysis of variance ANOVA. The
organisms were Daphnia pulex chosen for their great importance in the food media
chain and to be sensitive to all types of toxicity in the aquatic environment. The tests
were conducted in laboratory bioassays Salle University, based on protocols established
by CETESB. As a final result was determined LC50 value for shedding containing
detergents without being subjected to treatment was 1.51%. And for a detergent
containing shedding after being subjected to a wastewater treatment LC50 value of
36.53% was determined.
13
1. OBJETIVOS
1.1 OBJETIVO GENERAL
Determinar la toxicidad de un vertimiento proveniente de una industria
indumotora con contenido de detergentes utilizando organismos del genero Daphnia.
1.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Establecer la sensibilidad de la Daphnia pulex mediante la exposición al Dicromato de
Potasio
•Determinar la concentración letal media de detergentes sobre Daphnia pulex en el
vertimiento de la industria indumotora.
•Determinar índice de efecto tóxico potencial (IETP) con el fin de clasificar el
vertimiento según su toxicidad.
•Evaluar la eficiencia del tratamiento realizado al vertimiento proveniente de la
industria indumotora.
14
