Coevolución
[Link]
Cambio reciproco entre las especies que interaccionan
La orquídea Angraecum arachnites y su mariposa polinizadora Panogena lingens. La mariposa presenta una larguísima
espiritrompa que le permite acceder al nectar de la flor situado en el fondo del largo tubo debajo de la corola
Definición
Es un cambio evolutivo en una característica de los individuos de una
población en respuesta a otra característica de los individuos de una
segunda población, seguido de una respuesta evolutiva en la segunda
población al cambio producido en la primera.
Esta definición es muy exigente pero también es muy útil
• Primero: Porque eso es exactamente lo que hay que comprobar para
demostrar la existencia de coevolución
• Segundo: Porque hay que ser muy cuidadoso a la hora de describir una
interrelación entre especies como el resultado de un proceso coevolutivo
Coadaptación ≠ Coevolución
(1)Cambio en una sola dirección
(2)Cambio reciproco en ambas especies
Criterios:
a) Especificidad: La evolución de cada carácter se debe a presiones
selectivas del carácter de la otra especie.
b) Reciprocidad: Ambos caracteres deben evolucionar conjuntamente
c) Simultaneidad: Ambos caracteres evolucionaron al mismo tiempo.
Cambio evolutivo en una primera población en
respuesta a otras características de una segunda
población, seguida de una respuesta evolutiva de la
segunda en respuesta a la primera.
Hipótesis a probar como coevolución.
Coadaptación ≠ Coevolución
Ejemplo: Coadaptacion: Colibrí y banano
(introducido) en costa rica
Aplicaciones
Especiación ➔ Origen de los eucariotas y las células vegetales.
Desarrollo del sistema digestivo ➔ Interacción con microorganismos
Conservación de la biodiversidad
Dinámica de las epidemias
Patologías vegetales
Mejora del control biológico
Tipos de coevolución
Coevolución especifica: Dos especies
evolucionan recíprocamente: 1
Ejemplo: Carrera armamentista ➔ Divergencias
(Competidores) o Convergencias (Mutualistas)
Coevolución difusa: Varias especies
interaccionan con un solo individuos (Es la más
frecuente)
3
Hipótesis del Mosaico geográfico coevolutivo 2
(Tompson 1994) => Coevolución dinámica
entre distintas poblaciones.
Adaptaciones y migraciones
Hipótesis de la reina roja
Van Valen 1973:
Alicia en el país de las maravillas:
“La reina le dice a Alicia que allí es necesario corre tan rápido como se
pueda para conseguir mantenerse en el mismo sitio ”
En un medio ambiente constante, sin cambios físicos, conforme las
distintas especies van evolucionando producen un deterioro de ese
mismo ambiente para las otras. Este deterioro podría provocar incluso la
extinción de las especies que no respondieran evolutivamente
contrarrestando los cambios provocados por dichos cambios.
Interacciones entre especies
Las interacciones entre las especies afectan su abundancia y distribución
• Competición: Entre dos o mas organismos ➔ Afecta de forma negativa a la
taza de reproducción.
• Explotación: Especie A estimula el desarrollo de B y la presencia de B
inhibe a A.
• Mutualismo: Interacción positiva entre dos especies.
Competición
• Competencia intraespecífica
• Competencia interespecífica
Principio de exclusión competitiva ➔ Competencia por el mismo
recurso => No pueden coexistir eternamente.
Fuente especifica➔ Extinción de uno de ellos.
Fuente variada ➔ Sobrevivencia de ambos.
Competencia por alimentos
Competencia intrasexual
Explotación
Interacciones antagónicas
• Depredador – Presa.
• Planta – Herbívoro
• Parásitos – Hospedador
Depredador-presa
Carrera de armamentos coevolutivos
Asimetría
Presa ➔ Presión selectiva es más fuerte (Muere) ➔ No dejan
desentendencia.
Depredador ➔ Costo energético y tiempo.
Adaptaciones => Mas rápido en la presa.
[Link]
Parásitos – Hospedero
Parásitos Internos ➔ Giardia lamblia
Parásitos Externos ➔ Pulgas, piojos
Parasitoides ➔ Hemípteros (Trichogramma)
Parásitos de cría ➔ Ponen huevos en otros nidos (Molothur ater )
Evolución de la virulencia ➔ Carrera armamentista
Los parásitos
Transmisión horizontal del parasito ➔ La virulencia puede:
• niveles intermedios
• Aumente la virulencia
• Disminuye virulencia ➔ Amensalismo
• Valores negativo ➔ Mutualismo
Hospedador
• Aparición de defensa, pueden:
• Extinguir al parasito.
• Desarrollo de contradefenza del parasito.
• Cambio de hospedero
Interacciones virus – Humano
Variabilidad
Mutaciones y adaptaciones
Acceso del virus a
la célula humana
Evolución del coronavirus
Respuesta humana
Interacción planta herbívoro ➔ Mamífero e insectos.
Planta: Espinas, pelos urticantes, acumulación de sílice, terpenos,
fenoles, alcaloides, saponina, etc.
Insecto: Contra adaptaciones
El polífago Spilostethus saxatilis desarrolló una interacción especializada con el azafrán de otoño ( Colchicum
autumnale ) y secuestra colchicina y alcaloides relacionados
[Link]
Mutualismo
Ambas especies de benefician, mejoran su aptitud biológica.
Evolución del engaño: Abejas se alimentan ➔ La polinización es una consecuencia.
Flores que parecen insectos (hembra), producción de feromonas.
Tipos de modelos coevolutivos
Coevolución y especiación
Piquituertos y pinos contorta.
Los dos conos superiores provienen de regiones con ardillas rojas.
Los dos conos inferiores provienen de South Hills, donde no hay ardillas de pino pero hay piquituertos.
Las diferencias regionales en la morfología de los conos imponen una selección divergente en las aves
[Link]
Interacción planta microorganismos
¿Existe coadaptacion o coespeciación?
[Link]
En el entorno terrestre, el fitomicrobioma contribuye al crecimiento y
desarrollo de las plantas mediante
• El establecimiento de relaciones simbióticas entre los microbios
promotores del crecimiento de las plantas, incluidas las rizobacterias y
los hongos micorrícicos
• El otorgamiento de resistencia al estrés biótico mediante la producción
de compuestos antibióticos
• La secreción de compuestos señal de microbio a planta, como
fitohormonas o sus análogos, que regulan aspectos de la fisiología de
las plantas, incluida la resistencia al estrés.
Rizosfera
Es la región del suelo que
se extiende entre 1 y 3 mm
desde la superficie de las
raíces al interior del suelo.
El efecto de la raíz sobre el
medio que la rodea se debe
fundamentalmente a la
liberación de sustancias
orgánicas e inorgánicas
al suelo.
Rizosfera
materia orgánica:
1. muerte de raíces
2. exudación radicular
• aminoácidos
• azúcares
• ácidos orgánicos
entre el 10% y el 30% del Carbono fijado en la fotosíntesis
Rizosfera
Mucigel: material gelatinoso sobre la superficie de
las raíces
formado por:
1. Mucílagos vegetales.
2. Células bacterianas y sus productos metabólicos.
3. Coloides minerales y materia orgánica del suelo.
4. Polisacáridos: galactosa, fucosa y ácidos urónicos.
Rizosfera
Mucigel, funciones
1. alimento de bacterias
2. absorbe minerales de arcilla, especies
tóxicas de Al y metales pesados como
Cu, Cd y Pb.
3. es más grueso en los extremos de la
raíz (protege al tejido meristemático
esas toxicidades
4. favorece el contacto entre la raíz y el
suelo.
Interacción planta – microorganimso, y sus
beneficios
Producción de AIA
• La formación de los órganos en las
plantas y el desarrollo de los mismos, esta
mediado por factores internos
(hormonales).
• Niveles endógenos de las hormonas
generan cambios en los procesos
fisiológicos que repercuten en la floración,
fructificación y rebrote de hojas.
• Las hormonas vegetales son las auxinas,
etileno, giberelinas, citoquininas, y acido
abscísico (28 Da – 346 Da).
• Las auxinas
Ácido indol acético (AIA), aun se conoce
poco sobre los mecanismos de expresión,
metabolismos, transporte y distribución
final.
EFECTOS
1. Induce al crecimiento celular.
2. Regula el desarrollo vegetal.
3. Controla los tropismos
(fototropismo, tigmotropismo y
nastias).
4. Se concentra en los ápices
caulinares y radicales,.
5. Induce establecimiento de raíces
por elongación y formación de
raíces secundarias, permite a la
semilla tener un pronto acceso
del agua y nutrientes.
6. El AIA es similar del aminoácido
triptófano, probablemente este es
el precursor del AIA.
Giberelinas
• La bacterias sintetizan GA1, GA2, GA3 y GA20.
• Estas hormonas son transportadas desde las raíces a las partes aéreas de la
planta, donde los efectos que ejercen son notables, mejora el suministro de
los nutrientes
• Estimula la germinación.
• Aunque son también de gran interés, la producción de giberelinas por los
PGPR es rara, habiendo solo dos especies documentadas que las han
producido como son Bacillus pumilus y Bacillus licheniformis
Metabolismo
del triptófano
Solubilización del Fósforo
Solubilización del Fósforo
• El fósforo es un macronutriente inorgánico requerido por las plantas y microorganismos.
• El suelo es un factor limitante del desarrollo vegetal.
• A pesar de que sea el mas abundante en su forma inorgánica es difícil poder capturarlo.
• Las concentraciones de P en la solución del suelo es de 0.01 -0.3 mg P/L , siendo esta una
pequeña parte del total del P. en el suelo.
• El P soluble reacciona con iones calcio, hierro, aluminio, provocando su precipitación.
• Los fosfatos inorgánicos aplicados como fertilizantes también son inmovilizados en el suelo.
• La disponibilidad del P depende de varios factores.
a) Fluidos y minerales presentes.
b) El pH.
c) Actividad microbiana.
d) Presencia de enzimas.
e) Ácidos orgánicos.
El propósito de muchas bacterias es solubilizar el P para optimizar su disponibilidad para las
plantas de esta forma se incrementara el rendimiento de la cosecha.
• Las plantas solo pueden absorber el P bajo dos formas iónicas y solubles:
1. (H2PO4)-1
2. (HPO4)-2
Las bacterias que solubilizan el fosfato utilizan diferentes mecanismos para
convertir las formas insolubles a solubles.
a) Secreción de ácidos producidos en el metabolismo de los azucares
tomados de los exudados radiculares >> a. butírico, oxálico, succínico,
málico, glucurónico, acético, láctico, cítrico, etc, estos actúan como
buenos quelantes de los cationes Ca+2, Fe, AL, Mg.
Ca3(PO4)2 + ácido >> (H2PO4)-2 + Ca-(radical)2
b) Producción de enzimas >> Fosfatasa, esta hidroliza el fósforo orgánico
entre ellas se encuentra las fitasas que hidrolizan el Hexafosfato de inositol o
fitato (80% del total de fósforo inorgánico)
Fijación de nitrógeno
El nitrógeno se encuentra en la
naturaleza bajo la forma de gas, cerca al
78% del aire es nitrógeno.
Fijación abiótica (relámpagos)
contribuye con un 13% del nitrógeno del
suelo.
La fijación biótica contribuye con el 87 %
de nitrógeno fijado naturalmente.
1. Una de las interacciones mas interesantes y destacadas entre
las bacterias y las plantas son las que se dan entre las
leguminosas y las bacterias gran – fijadoras de nitrógeno
(Rhizobium, Bradyrhizobium, Sinorhizobium, Mesorhizobium y
Azorhizobium (nódulo en raíz y tallo))
2. La leguminosa son un grupo de plantas de importancia
económica (Soja, Judía, Lenteja, guisantes, alfalfa, trébol).
3. La infección de las raíces de las leguminosas con algún
Rhizobium, conduce a la formación de nódulos radicales.
4. En la estructura del nódulo se hace mas eficaz la capacidad de
fijar el nitrógeno atmosférico.
• En condiciones normales las leguminosas y los Rhizobium, no
puede fijar nitrógeno.
• Rhizobium solo pude fijar nitrógeno en condiciones
microaerófilas.
• En lo nódulos la concentración de oxígeno es controlado por la
Leghemoglobina (proteína roja que se une al O2) esta se produce
por interacción de la leguminosa y Rhizobium.
• La leghemoglobina contiene átomos de Fe (Fe+2 Fe+3) funciona
con un tampón de oxígeno, esta mantiene una baja [O2] en el
nódulo.
• El O2 ligado a la leghemoglobina y el O2 libre es de 10 000:1.
• Rhizobium inefectivas >> nódulos de color verde y pardo.
• Los Rhizobium efectivas >> nódulos son de color rojo.
Formación del nódulo
1) Reconocimiento y adherencia a los pelos radicales.
2) Excreción de los factores nod.
3) Invasión del pelo radicular y formación del tubo de infección.
4) Desplazamiento hacia la raíz principal.
5) Aparición de los bacteroides.
6) Formación del nódulo maduro.
Formación de los nódulos
• Los genes que dirigen las etapas de nodulación son los genes Nod.
• Muchos genes Nod están conservados y se transmiten por medio del
plásmido Sym.
• Además en los Nod se encuentran los gene de especificidad a la leguminosa
(Planta - rhizobium).
• Los genes Nod esta limitados por los genes Nif.
• En Rhizobium legumisarum biovar viciae, se han identificado 10 genes Nod:
a) Nod ABC: Formación de oligosacáridos (Factores Nod)>> inducen al
rizado del pelo radicular y división de las células vegetales para formar el
nódulo.
b) Nod D: codifica proteínas reguladoras de otros Nod.
c) Nod F: codifica una proteína de transporte para grupos ‘acilo’ que utiliza
Nod A, para acilar los factores Nod.
d) Nod E y Nod L: Participan en la determinación del hospedador.
e) Nod I y Nod J: factores de membrana para el transporte de factores Nod al
exterior de las célula bacteria.
• Para la fijación biológica del nitrógeno es necesario una enzima >>
Nitrogenasa proteina de gran tamaño.
• Formada por dos unidades: Dinitrogenasa, proteína de Fe-Mo, y
Dinitrogenasa – Reductasa, Proteína de Fe-S.
• Se requiere 36 átomos de hierro para que esta enzima sea funcional.
• Presentan sensibilidad al oxígeno.
La planta incorpora succinato, malato y fumarato, al
simbiosoma, estos ácidos son usados para la
producción de ATP, y piruvato (como ultima como
fuente de electrones).
El primer producto estable es el amoniaco, este por una
enzima glutamina sintetasa (dentro de la célula vegetal)
asimila el amoniaco para formar la glutamina.
Otros productos como asparragia, 4-metilglutamina,
ureidos (alantoína y ácido alantoico) son sintetizado por
la célula vegetal y transportados a los tejidos vegetales.
• Se ha informado de la aparición de grupos de genes de fijación de
nitrógeno ( nif ) en varios organismos.
• Todos los organismos fijadores de N2 conocidos son procariotas
diazótrofos y, por lo tanto, la capacidad de fijar N2 esta ampliamente
distribuida
• Parafilético, en los dominios bacteriano y arqueas
• Boyd y Peters, 2013, han identificado genes nif en 21 de los 44
genomas de cianobacterias secuenciados hasta la fecha, incluyendo
cepas terrestres y marinas.
• La capacidad intrínseca para la fijación de N2 en las cianobacterias
está relacionada únicamente con el sistema enzimático nitrogenasa,
siendo la nitrogenasa de molibdeno (Mo-nitrogenasa) la nitrogenasa
más estudiada
• Este complejo enzimático comprende aproximadamente el 10% de la
proteína celular total en muchos diazótrofos, solicitando 16 ATP
por N2 fijado
• Cataliza la síntesis de aproximadamente la mitad de todo el
N2 fijado en la Tierra hoy en día
• Además, la nitrogenasa también cataliza la producción de
hidrógeno (H2 ) como subproducto de la fijación de N2
• Están organizados en operones distintos: nifB-fdxN, nifSU, nifHDK,
nif ENXW y nif VZT
• Curiosamente, en Anabaena spp. hay un elemento de escisión de 11 kb en el
operón nif HDK, que se elimina del cromosoma durante la diferenciación de
células vegetativas a heterocitos, lo que permite la transcripción del operón
completo
[Link]
Cabe destacar que existen tres tipos de dinitrogenasas que se encuentran
normalmente en las nitrogenasas de las cianobacterias, que varían en
función del contenido metálico.
• El tipo 1 contiene molibdeno (Mo)
• El tipo 2 contiene vanadio (V)
• El tipo 3 hierro (Fe).
La reducción del nitrógeno (N₂) a amoníaco (NH₃) requiere energía
metabólica en forma de ATP, y en este contexto se utilizan dos
moléculas de ATP por cada electrón transferido de la dinitrogenasa
reductasa a la dinitrogenasa.
En consecuencia, la reacción requiere un total de 16 moléculas de ATP
hasta que la dinitrogenasa acumula suficientes electrones para reducir el
N₂ a NH₃ .
Los genes que codifican las tres formas de nitrogenasas
Las organizaciones de los clústeres nif , anf y vnf que
codifican las tres formas de nitrogenasas en A. vinelandii
.
Las regiones promotoras dependientes de σ54 predichas
se representan con flechas.
Se muestran los genes que codifican las proteínas
reguladoras con funciones conocidas o predichas (marrón
oscuro),
nifD en azul; nifK en aguamarina; nifH en rojo vino; nif
G en amarillo ➔ Componentes involucrados en la
reducción catalítica de N2
• el ensamblaje o estabilidad de la nitrogenasa
(naranja),
• la maduración de la nitrogenasa (oliva),
• la maduración del cofactor Fe–M (púrpura),
• la transferencia de electrones (rojo claro),
• la biosíntesis del cofactor Fe–M (aguamarina claro)
• una función desconocida (gris).
M = Mo, Fe o V.
La enzima nitrogenasa consta de dos partes:
• La dinitrogenasa➔ Una proteína Fe-Mo codificada por los
genes nif D (subunidad α) y nifK (subunidad β), que está organizada
en un tetrámero α2β2 de 240 kDa asociado con dos cofactores FeMo
(FeMo-co) y dos grupos P.
• Dinitrogenasa reductasa ➔ Un homodímero (2×30 kDa) con un
grupo [4Fe-4S] (proteína Fe) codificado por nif H
• NifE y NifN: son un complejo heterotetramérico similar a NifD y
NifK respectivamente, y parece actuar como andamios para el
ensamblaje de FeMo-co
• NifV es una homocitrato sintetasa que proporciona homocitrato para la
biosíntesis de FeMo-co
• NifS y NifU están involucrados en la movilización de hierro y azufre,
y en el ensamblaje de clústeres [4Fe-4S]
• NifX es capaz de unirse a precursores del FeMo-co, siendo un
reservorio transitorio para estas moléculas
• clústeres [4Fe-4S] se transfieren a NifB y se convierten en el cofactor
NifB, un precursor para la biosíntesis de FeMo-co
• NifW no está directamente involucrado en el ensamblaje de la proteína
FeMo, pero se asocia con él en condiciones aeróbicas, siendo parte de
un sistema de protección de O 2
• NifZ es importante para la maduración del clúster P
• Función de NifT sigue sin estar clara
(b) Un diagrama de las tres formas de nitrogenasas involucradas
en la transferencia de electrones.
M = Mo, Fe o V.
La subunidad α está codificada por nif D
la subunidad β está codificada por nifK
la subunidad γ está codificada por nifH
la subunidad δ está codificada por nif G.
(c) La reacción de fijación de nitrógeno catalizada por las tres
formas de nitrogenasas.
Fe = óxido, S = amarillo, C = gris, N = azul, O = rojo, Mo = cian, Mg = verde.
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Producción de sideróforos
El hierro es un nutrientes esencial para las plantas.
• Es un cofactor de una serie de procesos como la respiración,
fotosíntesis y fijación del nitrógeno.
• Es muy abundante, pero su especie química predominante es ion Fe+3,
este reacciona para formar óxidos e hidróxidos, estos son insolubles y
por tanto inaccesibles para las plantas y los microorganismos.
• La plantas han desarrollado mecanismos de abosorcion del hierro:
a) Liberación de compuestos orgánicos quelantes del hierro >>
reducción del hierro, de esta forma el hierro puede ingresar a la
planta por los trasportadores FRO e IRT.
b) Absorber el complejo formado y reducirlo dentro de la planta.
• Las bacterias liberan sustancias quelantes llamados
sideróforos que atrapan hacia si al hierro.
• Los sideróforos son compuestos de bajo peso molecular que se
unen al hierro de forma reversible. Los grupos mas frecuentes con
los catecoles e hidrozamatos, recientemente se ha identificado
a los α-cetoácidos.
• Los sideróforos influyen en la competencia de nutrientes, ya
que inhibe el crecimiento de otros microorganismos.
• La gran mayoría de los fijadores de nitrógeno liberan
sideróforos para obtener hierro.
Estudio de bacterias del suelo y la rizosfera
[Link]
Área de muestreo y toma de muestra
7 metros
5 metros
Puntos de muestreo en el campo.
Anexo de Espíritu Zona de muestreo – Punto de muestreo Muestra
Santo - Distrito de 16°24’08,61’’S
Chiguata 71°22’23,40’’O, a
3115 msnm
Aislamiento de los Actinomicetos
rizosféricos
Se siguió los métodos propuestos por Xue et al. (2013), Franco-Franco (1999).
Se tomaron 10 g de suelo Diluciones seriadas en agua Agar Avena
rizosferico pepetonada
Incubación a 22°C por 10 días
Siembra en placa
Caracterización Morfológica
Se siguió la metodología propuesta por Bergey et al.
(2012); Franco (2008) y Franco-Franco (1999)
Macroscópicas
Textura de la colonia Coloración de la colonia
Microscópicas
Tinción de GRAM Observación al microscopio
Caracterización Bioquímica
se siguió el método propuestos por Salazar (2013).
Hidrolisis de la Catalasa
urea
Hidrolisis de la Fermentación de la
lactosa
caseína
Prueba de Hidrolisis de la
citratos gelatina
Oxidasa
Caracterización Molecular
se siguió el método propuesto por Carro
(2009); Antoras (2013) y Franco (2008)
Extracción de ADN
Cultivo en medio Buffer de Lisis Centrifuga Precipitación del
Líquido ADN
Pureza = 260nm/280nm
Electroforesis Concentración = Abs 280x50µg/ml
Amplificación y secuenciación del segmento ADNr 16S
se siguió el método propuesto por Franco (2008)
Preparación del Mix de PCR Termociclador Condiciones de PCR
Separación de los fragmentos
Secuenciación del gen ADNr 16S Análisis Bioinformático
amplificados
Caracterización como promotores del
crecimiento vegetal
Fijación del nitrógeno
Se utilizó los métodos plateados por Leon (2014); Franco (2008); Lara et al.
(2007); Valdes et al. (2005) y Gage (2004).
Cualitativa
Crecimiento en agar
ashby Grafica de la curva de calibración para la
cuantificación del nitrógeno.
0.8
0.7 y = 0.0144x + 0.0087
0.6 R² = 0.9867
Absorvancia 640 nm
0.5
0.4
Cuantitativa 0.3
0.2
0.1
0
0 20 40 60
Concentración de nitrogeno (atm-ug/L)
Crecimiento en Reacción fenol
medio liquido hipoclito
Solubilización del Fosforo
Se utilizó los métodos plateados por Rico (2009), Franco(2008), Vázquez et al. (2000)
Cualitativa
Siembra en agar SRSM Cepas solubilizadoras de
fosforo
Cuantitativa
𝑨𝑯 = π(𝑫𝟐 𝑻𝒐𝒕𝒂𝒍 - 𝑫𝟐 𝒄𝒐𝒍𝒐𝒏𝒊𝒂 )
Siembra en medio Medición del halo de Área del Halo de
Pikouskaya solubilización Solubilización del
Fósforo.
Producción del Acido Indol Acético (AIA).
Se utilizó los métodos plateados por Garcia et al. (2010); Mantilla (2007).
Cualitativa
Cepas que evidencian la producción de AIA
El reactivo de
Salkowsky vira a un
rojo grosella
Curva de calibración para cuantificar la
producción de AIA.
0.9
0.8 y = 0.0166x + 0.0162
R² = 0.992
0.7
Absorvancia 530 nm
0.6
0.5
0.4
Cuantitativa 0.3
0.2
0.1
0
0 10 20 30 40 50 60
Concentración de AIA (ug/ml)
Cepas creciendo en el Cuantificación de la
caldo B producción de AIA.
Capacidad antagónica frente a Fusarium oxiosporum
Se utilizó los métodos plateados por Perez-Rojas et al. (2015), Dávila et al. (2013),
Fernandez et al. (2001)
Siembra masiva Siembra de un disco
del actinomiceto de micelio del hongo
patógeno
3 cm. 3 cm. 3 cm.
Placa de enfrentamiento Placa control
Fusarium oxiosporum Enfrentamiento Mediciones periódicas Se calcula el
Actinomiceto Vs porcentaje de
Fusarium. inhibición del
crecimiento del
patógeno
𝑀𝑏−𝑀𝑎
%I = x100%
𝑀𝑏
Evaluación a nivel de vivero la capacidad
PGPR en plántulas de Allium sativum L.
Se siguió la metodología propuesta por Das et al. (2014), Borda-Medina et al.
(2009).
Cultivo de las cepas en caldo Dientes de ajos desinfestados Cultivo de ajos
czapeck
Diseño experimental Análisis de
resultados
Caracterización Molecular
Extracción de ADN
Relació
Cantidad Cantidad
Relación Concentraci n Concentraci
Cepa de ADN Cepa de ADN
A260/A280 ón (µg/ml) A260/A28 ón (µg/ml)
(µg) (µg)
0
ST-2A 1.86 526.67 15.8 ST-3F 1.81 404.00 12.12
ST-2B 1.8 557.33 16.72 ST-3G 1.8 469.67 14.09
ST-2E 1.91 520.67 15.62 ST-5A 1.86 504.00 15.12
ST-3A 1.86 572.33 17.17 ST-5B 1.92 505.67 15.17
ST-3B 1.84 604.00 18.12 ST-5C 1.79 516.00 15.48
ST-3C 1.9 434.33 13.03 ST-8A 1.92 626.67 18.8
ST-3E 1.81 447.33 13.42 ST-8B 1.81 526.67 15.8
Integridad Calidad, y concentración.
Amplificación del segmento ADNr 16S
Amplicones del segmento ADNr 16S Electroferograma de las secuencias
Antorras (2013), carro (2009), Franco (2008)
Caracterización Molecular
Cepa Identificación Tamaño (Pb) Similitud
ST-2A Streptomyces sp. (EF585404.1) 1370 98%
ST-2B Streptomyces sp. (KU975441.1) 1345 99%
ST-2E Streptomyces sp. (NR044141.1) 1345 99%
Streptomyces
ST-3A 1342 99%
novaecaesareae(NR041124.1)
ST-3B Streptomyces sp. (KX777578.1) 1325 98%
ST-3C Streptomyces huminus (FJ803753.1) 1349 98%
ST-3E Streptomyces cirratus (NR043356.1) 1319 99%
ST-3F Streptomyces sp. (NR044141.1) 1352 99%
ST-3G Streptomyces sp. (KX777578.1) 1309 98%
ST-5A Streptomyces sp. (KU975441.1) 1336 99%
ST-5B Streptomyces sp. (KF740312.1) 1325 99%
ST-5C Streptomyces aureus (NR112608.1) 1180 99%
ST-8A Streptomyces sp. (KY362396.1) 1353 99%
ST-8B Streptomyces sp. (KY362396.1) 1334 99%
ST-2B ST-5A ST-2E ST-3F
Lactosa + Lactosa -
Bergey et al. (2012) – diferencias
Carro (2009): marcadores
Fox et al. (1992): hibridación
