UNIDAD 1

Sangre:
Forma especializada del tejido conjuntivo
Consta de una parte liquida llamada plasma, en el que se encuentran en suspensión los elementos formes
(células sanguíneas: hematíes, leucocitos y plaquetas)
pH de 7.35-7.45
Funciones:
- distribuir nutrientes desde el intestino a los tejidos
- intercambio de gases: transporte de oxigeno desde los pulmones hasta los tejidos, y de dióxido de carbono
desde los tejidos hasta los pulmones
- transporte de productos de desechos resultantes del metabolismo celular
- transporte de hormonas
- brinda protección frente a microorganismos invasores
- protección frente a hemorragias.

EXISTEN 3 TIPOS DE CELULAS EN LA SANGRE

HEMATIES: función de mantener en circulación elevada concentración de hemoglobina la cual es esencial
para el transporte de O2 y CO2.
LEUCOCITOS: participan en la defensa del organismo por medio de resp. Celular inespecífica o especifica.
PLAQUETAS: participan en la prevención de hemorragias a través de mecanismos de la coagulación, y en
el mantenimiento de la integridad del endotelio vascular.

ELEMENTOS CONSTITUYENTES DE LA SANGRE

PLASMA: Es un líquido transparente y ligeramente amarillento que representa el 55 % del volumen total de
sangre. En el se encuentran suspendidas las células sanguíneas: glóbulos rojos, glóbulos blancos y
plaquetas.

Distinguimos entre plasma que es la parte liquida de la sangre sin coagular, y el suero que es el líquido
sobrenadante que queda cuando la sangre se coagula, por lo que tiene composición similar al plasma,
aunque sin fibrinógeno ni otros factores de la coagulación.
GLOBULOS ROJOS
Presentan color rojo por alta concentración de hemoglobina
VALORES NORMALES:
Hombre: de 4.7 a 6.1 millones de células por microlitro (células/mcL)
Mujer: de 4.2 a 5.4 millones de células/mcL.
Forma de discos bicóncavos, sin núcleo
Transportan 02 a los tejidos , y CO2 a los pulmones
Vida media 120días
Tamaño: 6-8 um y en frotis 7 um (disminuye por deshidratación)
Forman columnas en pilas de moneda llamadas rouleaux.
* Variación del contenido se refiere a la concentración de hemoglobina:
- HIPOCROMICOS: pobres en Hg.
- HIPERCROMICOS: contienen en exceso.
Son destruidos en el bazo, hígado y medula ósea por macrófagos, y no en sangre.
Niveles bajos se denomina ANEMIA, y niveles altos POLICITEMIA.

GLOBULOS BLANCOS
• Son células nucleadas
• número promedio en sangre circulantes: 5000-10000 mm3
• viven en la sangre unas doce horas

Existen dos tipos principales:

Granulocitos o polimorfo nucleares: tienen núcleos multilobulados y gránulos en el citoplasma.

Según la naturaleza de los gránulos que poseen son
neutrófilos (violetas) ,
eosinofilos ( rojos) y
basófilos (azules intensos)
Agranulocitos o mononucleares: no tienen gránulos en el citoplasma. Son los monocitos, con núcleos en
forma de riñón, y los linfocitos, con núcleos grandes y poco citoplasma.
Todos participan en la defensa del organismo frente a agentes causantes de enfermedades, pero cada clase
de célula tiene un papel diferente.
Los neutrófilos y los monocitos defienden al organismo al fagocitar microorganismos extraños.
Los eosinofilos y los basófilos aumentan en caso de reacciones alérgicas.
Y los linfocitos defienden al organismo por medio de la llamada inmunidad específica.
El adulto tiene unos 7000 gb /mm3 en sangre. Si tiene un número mayor a 10000/mm3 se dice que hay
LEUCOCITOSIS, y si su número es inferior a 4000/mm3 se dice que tiene LEUCOPENIA.
Los cayados o en bandas son neutrófilos inmaduros, no segmentados, y aparecen en gran número cuando
hay infección.
NEUTROFILOS. PROPIEDADES
Son los más numerosos.
Su nombre se debe a que su citoplasma NO se tiñe con colorantes
Son fagocitos capaces de ingerir partículas extrañas.
Niveles bajos NEUTROPENIA, niveles altos NEUTROFILIA.
MONOCITOS- PROPIEDADES
Son los de mayor tamaño.
Sus núcleos tienen forma de riñón.
Formados en la medula ósea, permanecen 24 hs y luego pasan a la sangre circulando 2 días antes de
emigrar a los tejidos en donde se transforman en macrófagos que tienen capacidad de fagocitar.
Niveles bajos MONOCITOPENIA, niveles altos MONOCITOSIS
EOSINOFILOS- PROPIEDADES
Sus gránulos citoplasmáticos adquieren un intenso color entre anaranjado-rojizo y rojo durante la tinción con
eosina.
Son producidos en la medula ósea donde quedan almacenados por varios días antes de ser liberados a la
circulación, donde permanecen 3-8 hs antes de emigrar a lugares donde son necesarios, como la piel y
sistema respiratorio y digestivo
Son fagocitos, capaz de ingerir partículas extrañas sólidas, y cumplen un papel importante frente a
infecciones por helmintos.
Niveles bajos EOSINOPENIA, niveles altos EOSINOFILIA.
BASOFILOS- PROPIEDADES
Contiene gránulos en su citoplasma teñidos fuertemente de azul en presencia de colorantes básico como el
azul de metileno.
El contacto con un alérgeno se libera histamina y otros mediadores.
Niveles bajos BASOPENIA, niveles altos BASOFILIA.
LINFOCITOS – PROPIEDADES
Existen dos tipos
Linfocitos T, provenientes del timo, de vida prolongada.
Linfocitos B, denominadas porque se encontraron en la Bolsa de Fabricio en las aves. En humanos,
proviene de la medula ósea y son de vida breve.
Niveles bajos LINFOPENIA, niveles altos LINFOCITOSIS

Respuesta inmunitaria medida por células:

Los linfocitos T expresan actividad inmunológica por resp. Inmunitaria mediada por células.
Cuando un Ag especifico se localiza en los tejidos, los linf. T están programados para reconocerlo y regresan
a los tejidos linfáticos, en estos sitios se activan
Algunos quedan en tejido como “células de memoria”, capaces de iniciar una resp. Más eficaz en una
segunda exposición a ese antígeno particular.
Otros linf. T entran en circulación para ejercer acción destructora mediante la producción de sustancias
(linfoquinas) activadoras de macrófagos los cuales ejercen su actividad fagocitaria sobre los Ag o bien
mediante linf. T asesinos, los cuales inician la destrucción directa de las células mediante destrucción
citotoxica.

Respuesta inmunitaria humoral:

Participan los linfocitos B, están programados para el reconocimiento de un solo Ag, una vez en circulación,
se activan, originan descendencia en los tejidos linfáticos.
Una parte de estas células permanecen en tejidos como “células de memoria”.
Los anticuerpos van al lugar afectado por el sistema vascular o por el sistema linfático.
PLAQUETAS- PROPIEDADES
• Vida media de 6-12 dias.
• Son corpúsculos anucleados en forma de discos biconvexos, redondos u ovales
• En hombre su nro varía entre 150.000 a 350.000 plaquetas/mm3
• En las extensiones de sangre, con coloración de May Grunwald Giemsa se distinguen dos zonas bien
definidas, una porción central compuesta por granulaciones púrpuras y una porción periférica
homogénea
La membrana plasmática tiene factores de la coagulación y antiplasmina, un inhibidor de la fibrinólisis.
Las plaquetas intervienen en la hemostasia, ya sea por medio de sustancias que liberan para estimular la
contracción de los vasos lesionados y evitar la pérdida de sangre, también participan en la formación de
tromboplastina, uno de los pasos fundamentales en la iniciación de la coagulación.
Un conteo bajo de plaquetas se denomina TROMBOCITOPENIA (hay mayor riesgo de sangrado, la causa
podría ser por quimioterapias, fármacos o trastornos inmunitario), y se debe a que no se están produciendo
suficientes plaquetas en la medula ósea, se destruyen en el torrente sanguíneo o son destruidas en el bazo
o hígado.
El conteo alto de plaquetas se denomina TROMBOCITOSIS (el cuerpo produce demasiadas plaquetas,
causas: anemias hemolíticas, deficiencia de hierro, cáncer, medicamentos, etc)
Algunas personas con conteos altos de plaquetas pueden estar en riesgo de formar coágulos sanguíneos.

METODOS DE RECUENTO – CONVENCIONALES

Recuento de leucocitos.
Principio: La sangre anticoagulada se diluye 1/20 en líquido de TURK para evidenciar los
Leucocitos, mientras que los eritrocitos son hemolizados.
Equipo
Microscopio.
Cámara cuentaglobulos (Cámara de Neubauer).

La cámara de Neubauer: instrumento ideado para contar células sanguíneas, es un portaobjetos grueso,
en el centro tiene dos cuadrados separados por cursos y dos barras trasnversales que estan mas elevadas.
Un cubreobjetos(cubre camara) se coloca sobre las barras formando una camara.
Fundamento. El recuento de leucocitos mediante cámara consiste en determinar el número de ellos
presentes en un volumen determinado de sangre diluída. A esta muestra se le lisan los hematíes para facilitar
la visualización y recuento de leucocitos
Procedimiento
Cargar en un tubo de Kahn 0.38 ml de solución de Turk. Y 20 μL de sangre total anticoagulada. la dilución
resultante es 1:20.
Cargar la cámara, dejando que el líquido se distribuya por capilaridad.
La lectura se realiza en los campos A, B, C y D
Enfocar con objetivo de 10x y pasar a 40x para el recuento: contar los 4 cuadrados grandes angulares.
Los métodos manuales son muy imprecisos comparados con el recuento automatizado, el método de
referencia es el recuento electrónico normalizado en autoanalizador de un solo canal por impedancia o
método volumétrico.
Recuento de eritrocitos
El método manual de recuento de eritrocitos debe considerarse obsoleto, dado el elevado error que se
comete al usar la cámara cuenta glóbulos. Solo es aceptable el recuento por auto analizador hematológico.
Recuento de plaquetas en cámara
Método
Homogeneizar bien la muestra de sangre obtenida con EDTA.
Hacer una dilución de 20 μL de sangre total con 380 μL de solución de oxalatode amonio 1% (dilución 1/20).
Dejar en reposo por 5 minutos en una gradilla, para asegurar la hemólisis total de los eritrocitos.
Con esta dilución, cargar la cámara de Neubawer.
Dejar la cámara en reposo por 15 minutos en cámara húmeda.
Transcurridos los 15 min, enfocar con objetivo de 40x y contar las plaquetas enel retículo central de 1 mm 2
cuadrado.
Calcular el número total de plaquetas.

AUTOMATIZACION EN HEMATOLOGIA
El examen hematológico más frecuente es el hemograma, es una de las pruebas que más aporta al médico
en la evaluación de un paciente
La automatización en hematología trae aparejado:
Mayor eficiencia: permite procesar un gran volumen de pruebas en menos tiempo.
Mejora en la precisión y la exactitud: de la mano de las calibraciones y programas decontroles internos y
externos.
Reducción de errores
Estandarización: Manejo de estándares y muestra de la misma forma.
Reducción de Costos Operativos
Aumento de Bioseguridad.

Parámetros obtenidos a partir de mediciones:

glóbulos blancos (WBC)
glóbulos rojos (RBC)
hemoglobina (HGB)
plaquetas (PLT)
Parámetros obtenidos a través de cálculos:
linfocitos (Lymph%)
células de tamaño medio (Mid%),
granulocitos (Gran%)
hematocrito (HCT)
hemoglobina corpuscular media (MCH)
concentración de hemoglobina corpuscular media (MCHC)
plaquetocrito (PCT).
De todos los parámetros informados resultan de vital importancia los índices hematimétricos, ya que debido
a su gran estabilidad son muy confiables, representando excelentes indicadores de calidad del desempeño
del instrumento.

FORMULA LEUCOCITARIA – RELATIVA Y ABSOLUTA

La fórmula leucocitaria es un análisis de sangre que mide la cantidad de cada tipo de glóbulo blanco que hay
en el cuerpo.
se usa para diagnosticar muchas enfermedades, por ejemplo, infecciones, enfermedades autoinmunitarias,
anemia, enfermedades inflamatorias, leucemia y otros tipos de cáncer. Es un análisis de sangre común que
se usa a menudo como parte de un examen físico general.
El recuento de cada especie leucocitaria se da de dos maneras.
1) Fórmula leucocitaria relativa: da idea del porcentaje de cada especie con respecto al total de leucocitos.
Por ejemplo: aproximadamente el 60% de los leucocitos son neutrófilos.
2) Fórmula leucocitaria absoluta: da idea del recuento de cada especie por mm3 de sangre. La Fórmula
absoluta reviste mayor importancia clínica que la relativa, otorgando una mejor herramienta diagnóstica.
Es decir que la formula leucocitaria determina el % de las distintas clases de leucocitos normales y anormales
en sangre (porcentaje relativo).
Y a partir del porcentaje se calcula el número de cada clase de leucocitos en sangre (valor absoluto)
conociendo el total de leucocitos.
PRODECIMIENTO (materiales: microscopio, aceite de inmersión y extendido de sangre coloreado)
Colocar aceite de inmersión en portaobjetos y enfocar con objetivos de 100x. Luego identificar la zona de
recuento (donde los gr se encuentren uniformemente distribuidos.
Se realiza el recuento de 100 glóbulos blancos (clasificarlos morfológicamente) y luego se observa la serie
eritroide y morfología de los eritrocitos. Por ultimo reconocer elementos plaquetarios.
Cuando se da el resultado de la formula leucocitaria, hay que sacar conclusiones acerca de si existe
leucocitosis, leucopenia o recuento normal y de si existe linfocitosis o linfopenia relativa y/o absoluta y
neutrofilia o neutropenia relativa y/o absoluta.

Tinción de May-Grunwald Giemsa

Es una técnica de tinción que se utiliza principalmente para el coloreo de muestras de frotis sanguíneos y
permite diferenciar cualitativa y cuantitativamente los principales elementos formes de la sangre.
Principio de la coloración: la técnica combina las técnicas de coloración desarrolladas por May-
Grunwald y Giemsa. Estas técnicas a su vez se basan en el empleo de dos soluciones colorantes:
La solución de May-Grunwald, que contiene el colorante aniónico eosina y el colorante catiónico azul de
metileno ambos disueltos en metanol
La solución de Giemsa, que contiene eosina, azul de metileno y una serie de productos de la oxidación de
este último tales como el azur A, el azur B, el violeta de metilo y el azul de metilo.
Técnica
Fijación: el primer paso es fijar las células sanguíneas presentes en el frotis. En la técnica de May-
Grunwald/Giemsa la fijación la hace el metanol de la solución de May-Grunwald. Para fijar se colocan los
vidrios con los frotis horizontalmente en una parrilla o en una caja de coloración y se vierten unas 20 gotas
de solución sobre cada uno hasta que los frotis queden completamente cubiertos. Se mantienen así durante
2 o 3 minutos para que el metanol fije las células.
Tinción con May-Grunwald: simultáneamente al proceso de fijación, tanto el azul de metileno como la
eosina habrán permeado todos los compartimientos celulares, pero los colorantes no se podrán unir a sus
respectivas estructuras afines hasta que la solución se convierta en polar, esto se consigue agregando
lentamente agua, permitiendo así que los colorantes precipiten selectivamente.
Lavado y rehidratación: luego de haber añadido el agua a la primera solución se lavan los vidrios con un
chorro de agua tamponada y luego se cubren con la misma solución de lavado durante un minuto, para
permitir una correcta rehidratación.
Tinción con Giemsa: Se cubren los portaobjetos con la solución de Giemsa recién preparada y se dejan
teñir por espacio de 15 a 20 minutos, transcurridos los cuales se retira el colorante se lavan los portaobjetos
con la solución tamponada y se dejan escurrir en posición vertical hasta que estén completamente secos.

HEMOGRAMA O EXAMEN CITOLOGICO COMPLETO

Hemograma: conjunto de magnitudes hematológicas, necesarias para un examen básico de sangre entera,
en donde cuyas alteraciones son reflejo de una multitud de enfermedades.
Comprende:
Examen de frotis sanguíneo
-cuantitativo: formula leucocitaria- relativa y absoluta- , recuento de eritoblastos y corrección de leucocitos.
- cualitativo: forma, color, tamaño, alteraciones morfológicas leucocitarias, eritrocitarias y plaquetarias.
Recuento de leucocitos
Recuento de eritrocitos
Recuento de plaquetas
Recuento de reticulocitos
Hematocrito (Hto)
Concentración de hemoglobina (Hb)
Índices hematometricos:
-VMC: volumen corpuscular medio
-HCM: hemoglobina corpuscular media
- CHCM: concentración de hcm
-RDW: dispersión de tamaño de glóbulos rojos
FROTIS SANGUINEO: consiste en recubrir parcialmente un porta con una gota de sangre, en donde las
células formen una sola capa de ellas.
Partes de una extensión:
Cabeza: zona inicial de la extensión y más gruesa.
Se encuentra mayor proporción de linfocitos, y los hematíes forman aglomerados.
Cuerpo: zona media, espesor apropiado.
Adecuada proporción de leucocitos
Zona ideal de observación.
Cola: zona final, con aspecto redondeado, es la región más fina
Hay mayor proporción de leucocitos grande (granulocitos y monocitos)
En posición terminal abundan las plaquetas
Bordes: mayor proporción de leucocitos grandes.

RECUENTO DE RETICULOCITOS: son GR jóvenes que permite clasificar las anemias como
REGENERATIVAS o ARREGENERATIVAS.
Método: en tubo de Kahn mezclar 2-3 gotas de reactivo y doble de sangre entera (sin anticoagulante o con
EDTA), homogenizar y llevar a baño a 37º por 15-20 min. Luego del periodo de incubación agitar suave y la
mezcla se extiende sobre porta. Por ultimo examinar al microscopio óptico.
HEMATOCRITO: mide la fracción que comprende a los glóbulos rojos (masa globular) respecto al volumen
total de la muestra venosa o capilar. Se expresa en porcentaje o decimal.
Procedimiento:
se toma la muestra con capilares rojos heparinizados (del dedo) o utilizar capilares azules (sin heparina)
para sangre venosa anticoagulada con EDTA.
Se llana el 70-80% del capilar.
Luego sellar con fuego el extremo opuesto usado para la carga de sangre
Colocar el capilar en la centrifuga de micro hematocrito por 5 minutos a 10.000-12.000 rpm
Resultados: la lectura se realiza con escala estandarizada ( Abaco).
ÍNDICES HEMATOMETRICOS: son valores que resultan de la relación entre el número de eritrocitos, la
cantidad de hemoglobina y el hematocrito.
VMC: volumen medio de la población de GR expresados en fentolitros dentro de valor de referencia , la
población es NORMOCITICA
Mayor a 1oo fl MACROCITOSIS
Menor a 80 fl MICROCITOSIS

HCM: es la Hb promedio contenida en la población de GR expresados en pico gramos.

- dentro de valores de referencia, la población es NORMOCROMICA
- inferior a v. de ref., la población es HIPOCROMICA

CHCM: es la concentración de Hb en la población de hematíes.

RDW: implica la amplitud de la curva de distribución eritrocitarias según el volumen.

Valor directamente proporcional al grado de Anisocitosis.

UNIDAD N° 2:

Fundamentos de reacciones antígeno anticuerpo in vitro: Las reacciones Ag-Ac se estudian más
fácilmente in vitro utilizando preparaciones de Ag y antisueros. Se distinguen 2 fases:

Consiste en la unión del Ag con el Ac.

Consiste en las manifestaciones de dicha unión.

Reacción de aglutinación: Es el punto de partida de la respuesta inmune, se pone de manifiesto in vitro por
la formación de un precipitado o aglutinación de partículas (eritrocitos).
El acoplamiento estructural entre las macromoléculas esta dado por varias fuerzas débiles que disminuyen
con la distancia como:
Puentes de hidrogeno
Fuerzas de van der waals
Interacciones electrostáticas débiles y las hidrofóbicas.

En la interacción in vitro de un Ag con su correspondiente Ac se distinguen 2 etapas:

La reacción primaria no visualizable y
La reacción secundaria, que sigue a la anterior y se caracteriza por la aparición de un fenómeno visible como
la aglutinación, la precipitación, etc.
El reconocimiento Ag-Ac es una reacción de complementariedad, por lo que se efectúa a través de múltiples
enlaces no covalentes entre una parte del Ag y los aa del sitio de unión del Ac.

Factores determinantes en la reacción de Aglutinación: La reacción se caracteriza por su especificidad,

rapidez, espontaneidad y reversibilidad.

Especificidad: La unión dada por la especificidad es muy precisa y permite distinguir entre grupos químicos
con diferencias mínimas.

Rapidez:
1) Primera etapa: La velocidad de la reacción Ag-Ac es de milésimas de segundos, limitada por la difusión.
2) Segunda etapa: La velocidad es más larga incluye todas las manifestaciones, precipitación, aglutinación,
neutralización, etc.

Espontaneidad: La reacción Ag-Ac no requiere energía adicional para efectuarse.

Reversibilidad: Dado que la reacción se debe a fuerzas no covalentes es reversible, se ve afectada por
factores como la temperatura, la proporción Ag-Ac, Ph y fuerza iónica.
En pruebas de laboratorio que usan aglutinación como punto final, las alteraciones de las condiciones físicas
pueden incrementar o reducir la sensibilidad de la prueba.

Clasificación de Ag Eritrocitarios: Existe actualmente más de 750 grupos eritrocitarios humanos, de estos
han sido aceptados y clasificados 254 Ag, definidos serológicamente y con herencia demostrada) se
definieron 23 sistemas que agrupan 194 Ag.

Clasificación de Ag según su producción de Acs:

ANTICUERPOS:
Naturales:

Regulares: Acs presentes casi durante toda nuestra vida, son de clase IgM, su producción está relacionada
con bacterias (sistema ABO)

Irregulares: Pueden producirse en cualquier etapa de nuestra vida, relacionadas con alimentos y Ag
bacterianos

Inmunes: Son los producidos por transfusiones y embarazos, el Ac que lo caracteriza es clase IgM.

INMUNOENSAYOS: Son técnicas analíticas basadas en la formación de complejos Ag-Ac que se ponen en
evidencia mediante una señal. Permiten dosar, cualitativa o cuantitativamente, moléculas cuya
concentración en el material biológico puede ser muy baja, tales como antígenos (por ejemplo, las hormonas
en estudio) así como también anticuerpos (por ejemplo los autoanticuerpos).

Los elementos que participan en los IE son:

El anticuerpo de captura
El antígeno
El trazador (antígeno o anticuerpo marcado)

CLASIFICACIÓN DE LOS IE SEGÚN:

1) El método de detección o tipo de marca utilizada (marcador)

2) Su diseño (técnica de medición)
3) La necesidad o no de un sistema de separación (medio por donde se realiza la medición)

1) Según el método de detección (marcador): Puede ser necesario poseer el analito a medir. Cualquier
compuesto que pueda ser detectado y cuantificado fácilmente y con alta sensibilidad, como así también ser
acoplado a uno de los elementos que participan en la reacción Ag - Ac, puede ser utilizado como “marca”
que permitirá obtener una señal y dará lugar al trazador: Ag o Ac marcado (Ag* o Ac*)

RADIOINMUNOENSAYO (RIA): Utiliza isotopos radiactivos para marcar el complejo Ag-Ac, luego se
procede a la lectura de la radiactividad para detectar dichos complejos y confirmar y/o cuantificar la presencia
de la proteína de interés en la muestra, técnica altamente sensible.

ENZIMOINMUNOANALISIS (EIA): El marcador es una enzima, como por ejemplo: ELISA utiliza enzimas
que permitirán la detección de uniones Ag-Ac y por lo tanto la presencia de un determinado Ag en la muestra
mediante la catalización de una reacción colorimétrica para añadir el sustrato correspondiente.

FLUOROINMUNOANALISIS: El marcador es una molécula fluorescente, como por ejemplo: (FIA) utiliza
fluoróforos como marca, La fluorescencia es el fenómeno donde algunos sistemas químicos absorben
radiación electromagnética, se elevan a niveles electrónicos de un estado excitado y regresan a su estado
basal emitiendo fotones.
Se han desarrollado dos tipos de fluoroinmunoensayos:
aquellos que emplean directamente un fluoróforo como marca (ejemplo FPIA, IE de polarización de la
fluorescencia (se mide la señal de la luz fluorescente polarizada)o DELFIA que es un IE de tiempo resuelto)
aquellos en los que la marca es una enzima y utilizan sustratos que se convierten en productos fluorescentes
(como MEIA, se utilizan partículas submicrónicas de látex como fase sólida, recubiertas de un Ac específico
contra la hormona a medir).

QUIMIOLUMINISCENTES: Utilizan compuestos luminiscentes como marca, los que requieren energía
química (en lugar de luz, como los fluoróforos) para la emisión de fotones (quimioluminiscencia). la marca
es en general una enzima capaz de catalizar una reacción quimioluminiscente es una reacción de óxido -
reducción a partir de la cual se genera la energía química para la emisión de fotones.

2) Según su diseño (técnica de medición):

Competitivo: el Antígeno (Ag) objeto de la medición compite con un antígeno marcado por un anticuerpo
(Ac). Se mide por la cantidad del antígeno marcado sin conjugar que se considera es inversamente
proporcional al analito.

No competitivo (llamado también tipo sándwich): El Ag de la muestra reacciona con dos Ac diferentes
que se fijan a distintas partes del Ag. Uno de los Ac generalmente está en soporte sólido para facilitar la
separación de la fracción ligada, y el otro Ac lleva la marca. Se mide por la cantidad del marcador
considerando que es directamente proporcional a la cantidad del analito.

3) Según la necesidad o no de un sistema de separación (medio por donde se realiza la medición):

Homogéneo: En este tipo de ensayo la señal generada por la unión del Ag y el Ac se mide directamente en
el mismo medio que se utiliza para favorecer la formación del complejo inmune.
Heterogéneo: En este tipo de ensayo la señal generada por la unión del Ag y el Ac se mide en un medio
diferente que el utilizado para la unión del complejo inmune, generalmente implican una etapa intermedia de
lavado para eliminar interferencias.
Se considera que los inmunoensayos con formato homogéneo no competitivo son los más sensibles y
específicos.

ENZIMOINMUNOANALISIS (ELISA) Ensayo por inmuno-absorción ligado a enzimas: Un Ag

inmovilizado se detecta mediante un Ac unido a una enzima capaz de generar un producto detectable, como
cambio de color o algún otro tipo; existe un Ac primario que reconoce al Ag y que a su vez es reconocido por
un Ac secundario que lleva unido la enzima. La aparición de colorantes permite medir mediante
espectrofotometría el Ag en la muestra.
Múltiples variantes de ensayos ELISA que permiten la cuantificación de un Ag en solución, la detección de
un Ac en una solución.

ELISA directo (ensayo ELISA simple de dos capas): Las placas ELISA se preparan recubriendo los
pocillos con las soluciones en las que se sospecha se encuentra el Ag, se incuban con Acs marcados que
indican la presencia de Ag en la solución analizada. Es necesario incluir controles negativosque serán
muestras del mismo tipo que las analizadas (sangre, orina) que tengan ausencia del Ag buscado y tambien
se incluyen controlespositivos (soluciones donde se encuentra el Ag buscado).

ELISA indirecto: Las placas se preparan igual a la anterior, los controles positivos ynegativos son los
mismos. El sistema de detección emplea dos Acs: uno primario contra el Ag y uno secundario marcado
contra el primario. La detección tiene mayorsensibilidad debida a la unión de dos o más Acs secundarios por
cada primario.
Método de elección para detectar la presencia de Acs séricos contra el virus del (VIH), agente causante del
síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), permite detectar Ac séricos contra VIH desde las primeras
seis semanas de una infección.

ELISA sándwich (Ensayo de captura de Ag y detección mediante inmunocomplejos): Se trata de un

ensayo muy empleado en el que se recubre el pocillo con un primer Ac anti-Ag. Después de lavar el exceso
de Ac, se aplica la muestraproblema en la que se encuentra el Ag, que será retenido en el pocillo al
serreconocido por el primer Ac. Después de un segundo lavado que elimina elmaterial no retenido, se aplica
una solución con un segundo Ac anti-Ag marcado, cada molécula de Ag estará unida a un Ac en la base que
lo retiene y un segundo Ac, al menos, que lo marca. Este ensayo tiene una gran especificidad y sensibilidad
debido a la amplificación de señal que permite el segundo Ac.

INMUNOBLOTTING (INMUNOTRANSFERENCIA): Es una técnica analítica usada para detectar proteínas

específicas en una muestra determinada, mediante una electroforesis en gel se separan las proteínas, estas
son transferidas desde el gel a la membrana electroforéticamente.

PCR – Reacción en cadena de la polimerasa: Sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es
que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias
causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN
amplificado.
Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de los ADN polimerasas para replicar hebras de ADN,
se emplean ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recién formadas
entre sí tras cada fase de replicación y dejar que las hebras de ADN vuelvan a unirse para poder duplicarlas
nuevamente.
Termociclador: Todo el proceso de la PCR está automatizado mediante un aparato llamado Termociclador,
que permite calentar y enfriar los tubos de reacción para controlar la temperatura necesaria para cada etapa
de la reacción, la PCR es una técnica común y normalmente indispensable en laboratorios de investigación
médica y biológica para una gran variedad de aplicaciones. Entre ellas se incluyen la clonación de ADN para
la secuenciación, el análisis funcional de genes, el diagnóstico de trastornos hereditarios, la identificación de
huellas genéticas y la detección y diagnóstico de enfermedades infecciosas.

UNIDAD N° 3
INMUNOHEMATOLOGIA:Es la parte de la hematología que estudia procesos inmunitarios que tiene lugar
en el organismo en relación con los elementos sanguíneos. Uno de los aspectos más importantes es el
estudio y cuantificación de los grupos sanguíneos eritrocitarios.

Membrana Eritrocitaria: La membrana del eritrocito tiene varios roles que ayudan en la regulación
superficial de la deformación, flexibilidad, adhesión a otras células y reconocimiento inmunológico. La
membrana del eritrocito está compuesta de tres capas:
el glicocálix al exterior, que es rico en carbohidratos;
la bicapa lipídica que contiene varias proteínas transmembranales además de sus constituyentes lipídicos
principales;
y el citoesqueleto membranal, una red estructural de proteínas localizado en la superficie interna de la bicapa
lipídica. La mitad de la masa de la membrana del eritrocito en humanos y la mayoría de los mamíferos son
proteínas, la otra mitad son lípidos, principalmente fosfolípidos y colesterol.

Los antígenos del sistema ABO: se detectan sobre los eritrocitos entre la quinta y sexta semana del
embrión y no se desarrollan completamente hasta después del nacimiento. Entre los 2 y 4 años de edad los
Ag A y B están completamente desarrollados y permanecen durante toda la vida.
Los antígenos más importantes son los antígenos de los grupos sanguíneos (ABO) y el antígeno Rh, el cual
se halla presente (positivo, +) o ausente (negativo, -). Por ello, los dos análisis de grupo sanguíneo más
comunes son las pruebas de ABO y Rh.
El Sistema de Grupo Sanguíneo: Compuesto por los Ag A, B, y los correspondientes anticuerpos contra
estos Ag. Los Ag A y B fueron identificados inicialmente sobre la membrana de los eritrocitos y
posteriormente sobre la superficie de otros tipos de células, así como también en algunas secreciones.
La compatibilidad ABO es importante no solo en la transfusión de sangre, sino también en el trasplante de
células, tejidos y órganos.
Termodinámica de la reacción Antígeno - Anticuerpo:

Afinidad: (Interacción monovalente) Es una medida termodinámica de la fuerza de interacción entre un sitio
de unión de un Ac y un único epítopo.
Avidez: (Interacción polivalente) Es una medida de la fuerza de interacción entre múltiples sitios de unión de
una molécula de Ac y múltiples epitopos repetitivos en un Ag polivalente.
Ac Afinidad y Avidez: IgG (Unión monovalente), IgG (unión bivalente), IgM (unión polivalente, hasta 10 sitios
de unión)
Reacción de aglutinación de glóbulos rojos: La aglutinación de glóbulos rojos en suspensiones
fisiológicas puede ocurrir por 2 mecanismos básicos:

Especifica: Partiendo del concepto que una suspensión de glóbulos rojos en solución salina fisiológica
constituye un sistema estable, entonces diremos que, cuando la estabilidad es cambiada por la introducción
de Ac específicos que se fijan con Ag de membrana eritrocitaria, produciendo la aglutinación de estas células.
Inespecífica: Llamado fenómeno de panaglutinacion, los glóbulos (no sensibilizados por los Ac) son
aglutinados por sustancias presentes en el medio de la suspensión. Como: Detergentes, iones metálicos,
macromoléculas.

Procesos físico químicos de la aglutinación: El factor más importante en este proceso es: la distancia
media que separa los glóbulos rojos en suspensión, esta distancia puede ser disminuida por la adición de
Acs u otras sustancias al medio, hasta un punto crítico en que ocurre la aglutinación.

Potencial Z: La diferencia del potencial eléctrico creado entre la doble capa de iones positivos cerca del
glóbulo y el medio con iones de sodio y cloruro se denomina potencial [Link] fuerza de repulsión entre glóbulo
rojo, en un medio salino depende del valor del potencial Z, puede bajar o aumentar la aglutinabilidad del
sistema, o hasta puede promover la aglutinación de los Gr en suspensión.

Factores que intervienen en la reacción Ag-Ac:

AFECTAN LA SENSIBILIZACION:
Temperatura (depende de la naturaleza del Ac)
Proporcion de Ag/Ac (cuando la concentración del Ac es más alta que el Ag)
Ph (entre 6-8, sino se produce hemolisis)
Cambios en la fuerza ionica del medio ( determinado por la cantidad de iones Na y Cl, su presencia bloquea
las cargas superficiales de los Gr y los Ac)
AGLUTINACION: Puede ser alterado por la variación de la carga de los hematíes o por la variación en la
concentración de cationes libres en el medio de suspensión, cuando la unión Ag-Ac sobre la superficie de la
célula, rompe el potencial Z hace más fácil la unión de un eritrocito con otro.
Disminución del potencial Z
Tipo de Ig
Numero de Ag
Ubicación de los Ag

Pruebas Serológicas: Esenciales para la detección e identificación de alo-anticuerpos, anti-anticuerpos,

fenotipaje de Gr, diagnostico de anemias hemolíticas y diagnóstico de enfermedades hemolíticas del RN.

PRUEBA EN PORTAOBJETO PARA LA DETERMINACIÓN DEL GRUPO ABO

Muestra: Sangre entera con anticoagulante o suspensión de hematíes al 40% en suero, plasma o solución
fisiológica (SF).
Reactivos: Anti-A Anti-B Anti-A,B

Técnica:
1. Colocar 1 gota de cada uno de los antisueros en un portaobjeto limpio y seco.
2. Agregar a los antisueros 1 gota de la suspensión de hematíes.
3. Mezclar utilizando una varilla para cada reactivo, extender e inclinar la placa suavemente durante 2
minutos observando presencia de aglutinación.

PRUEBA DE COOMBS

Hay dos formas de realizar la prueba de Coombs:

La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar anticuerpos que ya se han fijado a la superficie de los
glóbulos rojos. Estos anticuerpos algunas veces destruyen los glóbulos rojos y provocan anemia.
La prueba de Coombs indirecta busca anticuerpos que están flotando en la sangre. Estos anticuerpos
podrían actuar contra determinados glóbulos rojos. Este examen casi siempre se hace para determinar si
usted puede tener una reacción a una transfusión de sangre.
Resultados normales
Un resultado normal se conoce como un resultado negativo. Esto significa que no hubo agrupación de células
y que usted no tiene anticuerpos para los glóbulos rojos.
Significado de los resultados anormales
Una prueba de Coombs directa anormal (positiva) significa que usted tiene anticuerpos que actúan contra
sus glóbulos rojos, lo cual puede deberse a:
Anemia hemolítica autoinmune
Leucemia linfocítica crónica u otro trastorno similar
Enfermedad en la sangre en recién nacidos llamada eritroblastosis fetal (también conocida como
enfermedad hemolítica del recién nacido)
Mononucleosis infecciosa
Infección por micoplasma
Sífilis
Lupus eritematoso sistémico
Reacción a una transfusión, como la ocasionada por unidades de sangre cotejadas de manera impropia
El resultado de esta prueba también puede ser anormal sin una causa clara, especialmente entre las
personas mayores.
Una prueba de Coombs indirecta anormal (positiva) significa que usted tiene anticuerpos que actuarán contra
los glóbulos rojos que el cuerpo interpreta como extraños.
Esto puede sugerir la presencia de:
Eritroblastosis fetal
Incompatibilidad sanguínea (cuando se utiliza en bancos de sangre)

UNIDAD N° 4
BANCO DE SANGRE: Un banco de sangre es la entidad encargada o responsable de la selección del
donante, recolección, análisis, procesamiento, almacenamiento, en la distribución de la sangre y sus
componentes, en las pruebas del receptor, siguiendo estrictos controles de calidad.

SELECCIÓN: Los donantes serán sometidos a un proceso de selección, que incluye una entrevista médica
y examen físico, para asegurarse que cumplan con las normas establecidas de selección del donante,
además se le realiza un examen de laboratorio pre donación que consiste en la hemoglobina y hematocrito
y el tipaje sanguíneo.

RECOLECCIÓN: Los insumos utilizados para la donación deben ser estériles y desechables. La sangre será
recolectada utilizando métodos asépticos y en sistemas estériles cerrados (bolsas para colectar sangre
deben estar transparente, estériles y con el anticoagulante claro).

ANALISIS: La metodología que se emplea para evaluar las enfermedades que pueden ser transmitidas por
transfusión de hemoderivados. Técnicas para detectar nuevos agentes infecciosos.

Las pruebas que son obligatorias realizar a cada donante de sangre:

1. Hbsag (Antigeno de superficie de la hepatitisb),

2. Hbcore (anti-core de la hepatitis b),
3. H.C.V. (virus de la hepatitis c),
4. H.I.V., (Virus de la inmunodeficiencia humana),
5. CHAGAS (Enfermedad de chagas),
6. SIFILIS.
7. Rastreo de anticuerpos irregulares (Prueba de antiglobulina indirecta).

LA PRUEBA DE COMPATIBILIDAD: Es un procedimiento en la cual ven si hay compatibilidad serológica

entre la sangre de un donante y un receptor de sangre. Es una de las pruebas de mayor importancia que se
realiza en un servicio de medicina transfusional. El propósito de la prueba de compatibilidad es asegurar no
administrar sangre incompatible al paciente a quien se le ha solicitado la transfusión de la misma.

PRUEBAS DE LABORATORIO DE BANCO DE SANGRE:

Sensibilidad: Es la probabilidad de clasificar correctamente a un individuo enfermo, es decir, la probabilidad

de que para un sujeto enfermo se obtenga en la prueba un resultado positivo. Capacidad del ensayo para
detectar la enfermedad.
Especificidad: Es la probabilidad de clasificar correctamente a un individuo sano, es decir, la probabilidad de
que para un sujeto sano se obtenga un resultado negativo. Capacidad del ensayo para detectar a los
individuos sanos.

Pruebas de Tamizaje:
ALTA SENSIBILIDAD: Para poder captar a todos los enfermos.
Pruebas Confirmatorias:
ALTA ESPECIFICIDAD: Para evitar falsos positivos.

CARACTERISTICAS DE LOS ENSAYOS:

TAMIZAJE: Alta sensibilidad, adecuada especificidad.

Analiza los marcadores de infecciones transmisibles por transfusión, aplicados a una muestra de sangre
obtenida de cada donante, a fin de prevenir su transmisión.

Características de las pruebas de tamizaje:

Sensibilidad
Especificidad
Valor predictivo
Reproductibilidad
Costo
Rapidez
Complejidad de su desarrollo
Criterios operativos

Valor global de la prueba: Posibilidad que un individuo sea clasificado correctamente por la prueba.

PROCESO ANALITICO:
Pruebas de selección, screening o tamizaje destinadas a detectar marcadores de la ITT de interés (alta
sensibilidad).
Hallazgos de reactivos o positivos se consideran sospechosos y son confirmados según corresponda (alta
especificidad).
NAT (prueba de ac. Nucleicos, VIH, VHB Y VHC (acortamiento del periodo de ventana)

TAMIZAJE DE INFECCIONES TRANSMISIBLES POR TRANSFUSION EN ARG.:

HVB: Enzimoinmunoensayos HBsAg y anti-HBc total

HCV: Enzimoinmunoensayo anti-HCV y Ag HCV
HIV1/2: Enzimoinmunoensayo ag-p24 y anti-HIV1/2
HTLV(Virus Linfotrópico humano) I/II: Enzimoinmunoensayo anti-HTLV I/II
Chagas: Enzimoinmunoensayo y Hemaglutinación indirecta, ambos antiTripanosoma cruzi
Sífilis: Test de VDRL anti-Treponema pallidum
Brucelosis: Reacción de Huddlesson, anti-Brucella abortus

METODOS DE TAMIZAJE:
Métodos Indirectos: Detección en la sangre (suero o plasma) del donante de la presencia de una respuesta
inmune contra un patógeno dado
Diagnóstico serológico mediante diferentes técnicas de laboratorio
Ej: análisis en búsqueda de anticuerpos específicos contra HIV en el suero del donante (EIA anti-HIV 0/1/2).

Métodos Directos: Detección directa de la presencia del patógeno (genoma o antígenos) en la sangre del
donante
Ej: EIA para detectar p24 HIV, HBsAg o HCV ag
Técnicas de biología molecular: buscan el DNA o RNA viral

FACTORES DE RIESGO EN LA TRANSMISIÓN DE INFECCIONES ATRAVÉS DE LAS TRANSFUSIÓN:

Errores humanos o de laboratorio

Problemas en los sistemas de análisis/equipos
Insuficiencias en la calidad de los análisis
Periodo de “ventana” serológico

PERIODO DE VENTANA: Lapso durante el cual el donante está infectado pero los resultados de la pesquisa
de marcadores son negativos.

VENTAJAS DEL NAT (Prueba de Ac. Nucleicos):

Importante avance tecnológico en screening de sangre
Altamente sensible y especifico (dirigido a las secuencias nucleicas virales)
Ayuda a la prevención de enf. Transmisibles por transfusión

TECNICAS SEROLOGICAS:
HIV I y II:
SIGNIFICACION CLINICA: Los virus de la inmunodeficiencia humana (HIV-1 y HIV-2) son los agentes
causales del Síndrome de la InmunodeficienciaAdquirida (SIDA). Estos retrovirus son transmitidos por la
exposición a ciertos fluidos corporales infectados, principalmente secreciones genitales y sangre o productos
contaminados derivados de la sangre y por pasaje a través de la [Link] evidencia serológica de la
infección por HIV-1 y HIV-2puede ser obtenida determinando la presencia de Ags y Acs en el suero de
individuos en los que se sospecha la infección. Los Ags pueden generalmente ser detectados en la fase
aguda y durante la fase sintomática de la enfermedad. Los Acs pueden ser detectados a lo largo de toda la
infección, comenzando en la fase aguda o inmediatamente después de ella.
El ensayo HIV 1+2 ELISA está diseñado para detectar anticuerpos contra HIV-1, HIV-1 grupo O y HIV-
2.

FUNDAMENTOS DEL METODO: Los pocillos de la policubeta están recubiertos con Ags recombinantes de
los virus HIV-1 y HIV-2. La muestra se incuba en los pocillos. Si la muestra contiene Acs contra HIV-1 o HIV-
2, los mismos se unirán a los Ags sensibilizados en la placa. El material no unido es removido por lavado.
En el paso siguiente se agrega el conjugado que contiene los mismos Ags de la placa conjugados
aperoxidasa. Estos se unirán a los Acs si estaban presentes en la muestra. El conjugado no unido se
remueve por lavado. A continuación se agrega una solución y peróxido de hidrógeno. Las muestras reactivas
desarrollan color celeste que vira al amarillo cuando se detiene la reacción con ácido sulfúrico.

HBV (HBsAgs ELISA)

SIGNIFICACION CLINICA: La hepatitis B es una enfermedad viral del hígado causada por el virus de la
hepatitis B (HBV ). El HBsAg generalmente aparece 6 semanas después de la exposición al HBV y persiste
durante 4-14 semanas y puede ser detectado en sangre 2 a 8 semanas antes de la aparición de ictericia o
de evidencias bioquímicas de disfunción hepática. La hepatitis B crónica se define como la presencia del
HBsAg en sangre durante más de 6 meses.

FUNDAMENTOS DEL METODO: HBsAg ELISA es un método inmunoenzimático directo tipo sandwich. Los
pocillos de la policubeta están recubiertos con Acs de cobayo anti-HBs (anti-HBsAg) que actúa como Ac de
captura. La muestra se incuba en uno de los pocillos. Si la misma contiene HBsAg, éste formará un complejo
con el Ac unido a la placa. El material no unido se elimina por lavado. En el siguiente paso se agrega el Ac
de cabra anti-HBs conjugado con peroxidasa, que se unirá con los complejos Ac-Ag formados previamente.
El conjugado no unido se remueve por lavado. Posteriormente se agrega una solución y peróxido de
hidrógeno. En los casos en que el HBsAg esté presente en la muestra, se desarrolla color celeste que vira
al amarillo cuando se detiene la reacción con ácido sulfúrico.

HBC

SIFILIS (VDRL)
SIGNIFICACION CLINICA: La sífilis es una enfermedad venérea causada por el Treponema pallidum, que
invade las mucosas intactas o la piel en áreas de abrasiones. El contacto sexual es la forma más común de
transmisió[Link] el comienzo de la infección aparecenen el suero del individuo infectado ciertas sustancias
denominadas "reaginas", que reaccionan con antígenos de cardiolipina, lecitina y colesterol. Estas reaginas
junto a los signos clínicos son por lo tanto los procedimientos más rápidos y útiles disponibles para
diagnóstico de sífilis.

FUNDAMENTOS DEL METODO: Las "reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum se
detectan en suero por la reacción con un antígeno cardiolipínico purificado y estabilizado. Si la muestra
contiene reagina, ésta se unirá al antígeno produciendo una floculaciónvisible en microscopio. Las
reacciones inespecíficas se evitan con el empleo de antígeno altamente purificado y el agregado de cloruro
de colina característica de la técnica USR (Unheated
Serum Reagin) en la que no es necesario inactivar la muestra.

PROCEDIMIENTO: Tanto los reactivos como la muestra deben estar a temperatura ambiente antes de
realizar la prueba.

1- PRUEBA CUALITATIVA EN SUERO

2- PRUEBA SEMICUANTITATIVA EN SUERO
3- PRUEBA CUALITATIVA PARA LCR
.

BRUCELOSIS
SIGNIFICACION CLINICA: Es una infección bacteriana que se transmite de los animales a las personas en
su mayoría por los lácteos no pasteurizados por microorganismos del género Brucella. Aunque se
reconocen seis especies los estudios de hibridación de DNA demuestran que se trata de una sola
especie, Brucella melitensis, con biovariedades.
Las pruebas más empleadas en el diagnóstico serológico de la brucelosis son la aglutinación, la prueba del
Rosa de Bengala, el test de Coombs y las pruebas de ELISA. La detección de IgM frente a lipopolisacarido
(LPS) de Brucella es adecuada para el diagnóstico de las formas agudas de la enfermedad. La técnica de
ELISA es sensible y específica para la detección de estos anticuerpos tipo IgM frente a Brucella.

BRUCELLA ELISA IGM

FUNDAMENTO DEL MÉTODO: Método de ELISA basado en la reacción de los anticuerpos de la muestra
con el antígeno unido a la superficie de poliestireno. Las inmunoglobulinas no unidas por reacción con el
antígeno son eliminadas en el proceso de lavado. En un paso posterior la globulina anti-humana reacciona
con el complejo antígenoanticuerpo, y la que no se une es eliminada por los lavados; la unida reacciona con
el sustrato (TMB), para dar una reacción coloreada azul, que cambia a amarillo tras la adición de la solución
de parada.

CHAGAS
SIGNIFICACION CLINICA: La enfermedad de Chagas es una infección parasitaria producida por el
Trypanosoma cruzi. El diagnóstico de laboratorio depende del estadio en el cual se encuentre la enfermedad.
Durante la fase aguda, el diagnóstico se efectúa directamente mediante la comprobación de los parásitos en
sangre o por métodos inmunológicos que detecten anticuerpos específicos. Durante la fase crónica, se
pueden usar métodos inmunológicos como la reacción de aglutinación de látex, hemaglutinación,
aglutinación directa, inmunofluorescencia y últimamente ELISA.

CHAGAS (CHAGATEST HAI)

FUNDAMENTOS DEL METODO: La hemaglutinación indirecta (HAI), también llamada hemaglutinación
reversa pasiva, se basa en la propiedad que tienen los anticuerpos (que en este caso son anti-T. cruzi) de
producir aglutinación específica en presencia de glóbulos rojos sensibilizados con los correspondientes Ags.
En el suero existen Acs inespecíficos (heterófilos) que son capaces de aglutinar glóbulos rojos de distintas
especies. Su presencia se investiga enfrentando el suero con GR no sensibilizados. Los Acs interferentes
se eliminan mediante tratamiento con 2-mercaptoetanol.

HTLV I+II (ELISA Recombinante) Ensayo inmunoenzimático (ELISA) para la detección de anticuerpos
contra los virus HTLV I y II

SIGNIFICACION CLINICA: Los virus linfotrópicos de células T humanas tipo HTLV pertenecen a la familia
de los retrovirus, se dividen en dos tipos: HTLV-I y HTLV-II. Están asociados a enfermedades malignas de
las células T y a procesos neurológicos degenerativos.
El HTLV-I es el causante etiológico de dos tipos de patologías: la leucemia de células T de adulto (ATL) y
diversos trastornos neurológicos de desmielinización que incluyen la mielopatía asociada a HTLV-I (HAM) y
la paraparesia espástica tropical (TSP). También se detectan anticuerpos específicos contra HTLV-I en
ciertos casos de dermatitis, poliomiositis y artritis.
Ambos virus se trasmiten por contacto sexual, exposición a sangre contaminada, transfusión, o transmisión
de una madre infectada al feto durante el periodo prenatal o a través de la leche materna.
El ensayo HTLV I+II ELISA recombinante está diseñado para detectar Acs tanto contra HTLV-I como contra
HTLV-II. Se puede emplear en el diagnóstico de la infección y en el control de unidades de donantes en
bancos de sangre.

UNIDAD 5
Anemias hemolíticas:
Se producen por destrucción excesiva de los hematíes, manifestándose por un acortamiento en la sobrevida
de los glóbulos rojos.
La sobrevida de los hematíes normales en adultos es de 120 días. En el recién nacido es menor que en el
niño mayor o en el adulto.
Es más corta cuanto más inmaduro es el niño.
Clasificación
Corpusculares (la mayoría hereditarias)
– Trastornos de la hemoglobina
– Membranopatías
– Enzimopatías
Extracorpusculares(adquiridas)
– Inmunes
– No inmunes
De acuerdo a la mayor o menor efectividad de los mecanismos compensatorios frente a una hemólisis
patológica, el resultado del balance entre destrucción y producción podrá llevar a alguna de las siguientes
situaciones:
a. Hemólisis compensada: aumento de la destrucción con excelente capacidad de la médula ósea para
formar la cantidad de glóbulos rojos necesaria para mantener un hematocrito y/o hemoglobina en valores
normales.
b. Hemólisis descompensada: la destrucción de glóbulos rojos sobrepasa la capacidad de la médula ósea
y el paciente presenta anemia severa.
c. Hemólisis parcialmente compensada: la médula ósea es capaz de formar glóbulos rojos en cantidad tal
como para que el paciente presente anemia pero sin llegar a requerir transfusiones.
Metodología de estudio
Anamnesis y manifestaciones clínicas:
El interrogatorio debe ser exhaustivo y dirigido fundamentalmente a los siguientes aspectos: Historia
familiar (anemia, ictericia, litiasis vesicular, esplenomegalia o esplenectomía) – Antecedentes personales
(ictericia neonatal, ingesta de fármacos, abortos).
Las manifestaciones clínicas incluyen:
Anemia aguda, crónica o recidivante, de intensidad variable, asociada a reticulocitosis.
Ictericia
Hemoglobinuria
Presencia de anemia o hemoglobinuria después de la exposición a drogas o actividad física, etc)

Pruebas generales de laboratorio, para demostrar la presencia de hemólisis:

Los estudios que sirven para demostrar la existencia de un proceso hemolítico son el hemograma con
recuento reticulocitario, observación del extendido de sangre periférica y las pruebas indicativas de hemólisis
intra y extravascular.

Pruebas especiales de laboratorio, para llegar al diagnóstico de la causa de hemólisis

Una vez demostrada la presencia de hemólisis, y sobre la base de la sospecha diagnóstica brindada por la
anamnesis, el examen físico y las pruebas generales de laboratorio, se deben solicitar los estudios
especiales confirmatorios para llegar al diagnóstico etiológico.
La PCD (prueba de Coombs directa) es indispensable en presencia de anemia hemolítica para la
identificación de anemias inmunes. Las anemias hemolíticas corpusculares requieren múltiples estudios de
muy variado grado de complejidad de realización y costos.
Orientación diagnóstica:
Las anemias hemolíticas se caracterizan por la disminución de la hemoglobina con aumento de reticulocitos
(anemias regenerativas). Los parámetros de laboratorio permitirán establecer si la hemólisis se produce con
predominio intra o extravascular. En ambos casos, la primera prueba diagnóstica a realizar es la PCD, que
permitirá poner de manifiesto la participación de anticuerpos en el proceso hemolítico pudiendo establ ecer
la etiología de la [Link] la PCD resultara negativa, aún cuando el reactivo utilizado fuera polivalente (con
anticomplemento), se deberá tener en cuenta la morfología eritrocitaria para realizar pruebas específicas
para el diagnóstico. Si en el frotis se observa hipocromía, microcitosis con anisocitosis, dianocitos (target
cells), células falciformes, etc., se procederá al estudio de posibles hemoglobinopatías. Si se observa la
presencia de esferocitos o eliptocitos se procederá a realizar el estudio para membranopatías. En el caso
que la morfología no sea muy concluyente deberán realizarse todas las pruebas diagnósticas de un proceso
hemolítico.

ANEMIA HEMOLÍTICA AUTOINMUNE

La AHAI es producto de la destrucción de eritrocitos por anticuerpos dirigidos a antígenos propios de la
membrana. Es una enfermedad heterogénea con respecto al tipo de Ac involucrado y a la presencia o
ausencia de condición subyacente.

La AHAI primaria es menos frecuente que las formas secundarias.

Diagnóstico
El diagnóstico se basa en los siguientes hallazgos:
Anemia, en general macrocítica
Reticulocitosis
Leucocitosis neutrófila
Plaquetas normales
LDH elevada (láctico deshidrogenasa)
Bilirrubina indirecta aumentada
Haptoglobinas disminuida
La respuesta reticulocitaria está en relación a la respuesta medular frente a la anemia. Es necesario
demostrar la participación inmune mediante la PCD frente a un paciente con diagnóstico de hemólisis.
Hemólisis + PCD positiva = Anemia hemolítica inmune
Dos interrogantes son fundamentales frente al hallazgo de AHAI:
A) ¿Cuál es el Ac involucrado?
B) ¿La AHAI es primaria o secundaria?
Anticuerpo
Es necesario conocer si el Ac involucrado es IgG o IgM, y si el Complemento está o no involucrado. La
presencia de Complemento, sobre todo si se activa completamente, produce mayor lesión en la membrana
eritrocitaria y es responsable de la lisis intravascular.
Si el Ac es una IgG, la hemólisis es a predominio intracelular en el sistema retículo endotelial.
– Anticuerpo caliente: El patrón es solamente IgG positiva o IgG y C3 positivo. Se unen y reaccionan a
37°C de temperatura (rango 35°- 40°C).
La AHAI por Ac calientes es de hemolisis principalmente extravascular y predominantemente en el bazo.
– Anticuerpo frío: El patrón es IgG negativa y C3 positivo.
Las aglutininas frías son detectadas en títulos significativos (>1/64). Tienen la propiedad de inducir
aglutinación a bajas temperaturas (4° C).
La PCD es altamente sensible (95%) y relativamente específica (80%)
Excepciones: El hallazgo de PCD negativa en presencia de AHAI puede ser por:
1. Bajo nivel de autoanticuerpos
2. Baja afinidad del autoanticuerpo
3. El autoanticuerpo es isotipo IgA o IgM
Importante: El paciente puede tener PCD positiva sin hemólisis y la anemia está dada por otros mecanismos.

Etiología
– Anemia Hemolítica Primaria: no presenta enfermedad subyacente
– Anemia Hemolítica Secundaria: Se debe evaluar:
Historia clínica; forma de presentación (aguda o insidiosa)
Examen físico
Historia de infección
Historia transfusional
Exposición a drogas
Vacunación
Signos de enfermedad inmune.

AHAI EN PEDIATRÍA
La AHAI es la principal causa de hemólisis extracorpuscular en niños. Su prevalencia se incrementa con la
edad.
Diagnóstico
En presencia de anemia hemolítica el diagnóstico se basa en la positividad de la PCD y la exclusión de otras
causas de anemia hemolítica (hereditaria o adquirida).
Dos datos deben ser evaluados:
Tipo de Anticuerpo
Si la AHAI es primaria o secundaria
La distinción entre AHAI por Ac caliente y AHAI por Ac fríos es un parámetro importante no solamente por el
espectro de enfermedad sino por el tratamiento a indicar. Más allá de la distinción entre Ac calientes y fríos,
la AHAI es clasificada como primaria (idiopática) o secundaria dependiendo de la ausencia o presencia de
enfermedad o de desregulación inmune.
AIHA primaria
La Anemia hemolítica primaria es un hallazgo. No se identifica enfermedad sistémica asociada Es importante
enfatizar que las formas “presumiblemente primarias” pueden preceder a las formas secundarias.

AIHA secundaria
Ocurre en el contexto de otro diagnóstico clínico siendo la hemólisis una manifestación de enfermedad
sistémica. El laboratorio adquiere jerarquía en el momento del diagnóstico para la evaluación de esta
condición.
El 50% de los pacientes con AHAI son AIHA secundarias.

Recomendaciones para el diagnóstico de AHAI

– Hemograma con recuento de reticulocitos: La media de concentración de Hb es de 4 a 7 g/[Link] VCM
normal puede reflejar un promedio entre microesferocitos y reticulocitos y el VCM aumentado puede estar
relacionado con aglutinación eritrocitaria en el tubo. El recuento de glóbulos blancos y de plaquetas
generalmente es normal. La combinación de AHAI y trombocitopenia inmune define el Síndrome de Evans.
– Frotis de sangre periférica: La evaluación del frotis es útil en establecer el diagnóstico de AHAI. Los
esferocitos están presentes en AHAI por anticuerpos calientes y la aglutinación en pacientes con AHAI por
anticuerpos fríos. El hallazgo de esquistocitos y trombocitopenia conduce al diagnóstico diferencial de SUH-
PTT. Puede observarse policromatofilia secundaria a reticulocitos y eritroblastos circulantes.
– Reticulocitos: Su aumento es lo más frecuente de observar debido a la compensación de la médula ósea
a la disminución de la sobrevida del glóbulo rojo. En el 10% de los pacientes pediátricos los autoanticuerpos
pueden reaccionar con antígenos de precursores eritroides y los autoanticuerpos eritrocitarios pueden inducir
apoptosis de eritroblastos causando reticulocitopenia.
– Aspirado de médula ósea: Debe realizarse en pacientes con reticulocitopenia u otra citopenia para el
diagnóstico diferencial de malignidad/mielodisplasia. La diseritropoyesis en AHAI es leve, por lo que en caso
de ser severa se sugiere descartar síndrome mielodisplásico.
– Química sanguínea: Los valores aumentados de LDH y aspartatoaminotransferasa reflejan liberación de
enzimas intraeritrocitarias. La haptoglobina se encuentra disminuida, sin embargo no se sintetiza en niños
menores de 6 meses; es un reactante de fase aguda por lo cual es inespecífica. La bilirrubina sérica está
aumentada, aunque niveles >5mg/dl son poco frecuentes. La fracción directa (conjugada) no excede el 10
al 20% del total de la concentración de bilirrubina.
– Coagulograma: Anticuerpos antifosfolipídicos y anticoagulante lúpico.
– Grupo y factor sanguíneo con fenotipo extendido
– Examen de orina: Búsqueda de hemoglobinuria, hematuria y proteinuria.
– PCD
– Serologías: Hepatitis, Micoplasma, HIV, Citomegalovirus, Epstein Barr, Rubeola, Parvovirus, Herpes, etc.
– Ecografía abdominal: Para evaluar tamaño del bazo – Radiografía de tórax: Búsqueda de síndrome
tumoral
– Laboratorio inmunológico

Enfermedad hemolítica del recién nacido

Es un trastorno sanguíneo en un feto o en un bebé recién nacido. En algunos bebés, puede ser mortal.
Normalmente, los glóbulos rojos (GR) duran cerca de 120 días en el cuerpo. En este trastorno, los GR son
destruidos demasiado rápido.
Causas
Ante una mujer RH negativo (RH-) y feto RH positivo (RH+). Si la madre entra en contacto con la sangre
fetal puede crear anticuerpos-anti RH que ataquen al feto y le origen una ERITROBLASTOSIS FETAL o
ENFERMEDAD HEMOLÍTICA DEL RN
Durante el embarazo, los glóbulos rojos (GR) del recién nacido pueden cruzar hacia la sangre de l a madre
a través de la placenta.
La EHRN sucede cuando el sistema inmunitario de la madre ve los GR del bebé como extraños.
Se desarrollan anticuerpos en contra de los GR del bebé. Estos anticuerpos atacan a los GR en la sangre
del bebé y provocan que se descompongan mucho antes.
La EHRN se puede desarrollar cuando la madre de un feto tiene un tipo de sangre diferente. Estos tipos se
basan en pequeñas sustancias (antígenos) en la superficie de las células sanguíneas.
La etiología de la EHRN está basada en la incompatibilidad de grupo sanguíneo madre/neonato, lo que
origina el desarrollo de una respuesta inmunitaria en la madre, el paso de anticuerpos de la clase IgG a
través de la placenta y su unión a la membrana de los hematíes.
Este trastorno se relaciona principalmente con el antígeno D del sistema Rh y con los antígenos ABO del
sistema del mismo nombre.
La EHRN por incompatibilidad ABO entre la madre y el recién nacido es la más frecuente de las EHRN y se
produce en gestantes de grupo O con hijo A, B, o AB. Esto es porque los individuos de grupo 0 además de
la IgM natural contra el antígeno ABO del cual carecen, presentan cierta cantidad de IgG. Entonces, la IgG
anti-A o IgG anti-B presente en el suero de la gestante de grupo O podría atravesar la placenta y unirse a
los hematíes fetales o del recién nacido.
Los niños con incompatibilidad ABO suelen tener valores más bajos de hemoglobina y mayor ictericia que
los niños compatibles ABO.
La prueba directa de Coombs (PDC) permite identificar la presencia de anticuerpos antieritrocitarios del
isotipo IgG, provenientes del suero materno en la superficie de los eritrocitos del feto o neonato .
La prueba de Coombs directa (CD) generalmente es negativa, a pesar de que un anticuerpo IgG anti-A o
anti-B puede ser eludido de los eritrocitos del recién nacido. En ocasiones el CD es positivo.
Un título de IgG anti-A o anti-B en técnica de Coombs indirecta (CI) mayor de 32 es criterio diagnóstico de
EHRN-ABO.

Existe más de una manera en las que la sangre del feto puede no ser compatible con la de la madre.
A, B, AB y O son los 4 tipos o grupos de antígenos sanguíneos principales. Este es el tipo más común de
incompatibilidad. En la mayoría de los casos, esto no es muy grave.

Si la madre es Rh-negativo y el bebé en el útero tiene células Rh-positivo, sus anticuerpos del antígeno Rh
pueden atravesar la placenta y causar anemia grave en el bebé. En la mayoría de los casos se puede
prevenir.
Existen otros tipos menos frecuentes de incompatibilidad entre un grupo menor de antígenos. Algunos de
estos también pueden causar problemas graves.
METODO – DIAGNOSTICOS
Examen físico: palidez o ictericia
Exámenes de laboratorio: cifras de Hb o Hto, reticulocitos y de bilirrubina indirecta.
Exámenes inmunohematologicos: fenotipificacion de grupo ABO, CD y el título de IgG anti-A/B materno.