UNIVERSIDAD LAICA ELOY ALFARO DE MANABÍ

TEMA:

GENERALIDADES DE TÉCNICAS UTILIZADAS EN HISTOLOGÍA,

GENERALIDADES DE LA CÉLULA Y DEL CITOPLASMA, GENERALIDADES DE

LOS TEJIDOS

INTEGRANTES:

- DELGADO BILBAO BRUNO NELSON

- ALAVA VALDIVIESO LUIS JESÚS

- ZAMBRANO OLMEDO BREITNER SANTIAGO

- PONCE VÉLEZ ALEX STEVEN

- FIENCO GARCÍA ANTHONY STEVEN

 TÉCNICA HISTOLÓGICA

Se denomina TÉCNICA HISTOLÓGICA al conjunto de procedimientos aplicados a un

material biológico (animal o vegetal) con la finalidad de prepararlo y conferir las condiciones

óptimas para poder observar, examinar y analizar sus componentes morfológicos a través de

los microscopios fotónicos y electrónicos.

De manera general, para alcanzar este objetivo es necesario realizar los siguientes

pasos:

 Obtención de la muestra

 Fijación

 Deshidratación

 Inclusión

 Corte (microtomía)

 Tinción

 Montaje

Obtención de la muestra

En cuanto la sangre deja de llevar oxígeno a los tejidos y de extraerles el anhídrido

carbónico, las enzimas de las células que componen los tejidos comienzan a actuar y se produce

la autólisis. Los tejidos y órganos se han de extraer considerando las siguientes prioridades:

 Las glándulas exócrinas y endocrinas lo más rápidamente posible.

 El páncreas y el riñón deben extraerse no más de 10 a 15 min. post-mortem.

 Otros órganos tales como intestino delgado y/o grueso, estómago, hígado, se deben

extraer no más allá de los 30 min.

  Los músculos esqueléticos, huesos, piel, encéfalo, médula, ganglios nerviosos no

deben extraerse más allá de 60 min. postmortem.

Mediante la biopsia: (del griego bios = vida y opsis = visión), consiste en la toma de

un fragmento de tejido u órgano de un ser vivo, se realiza a través de una operación quirúrgica.

La biopsia puede ser: incisional y excisional por sacabocados por punción y absorción por

raspado por trepanación.

Material de necropsia: El examen necrópsico debe ser realizado lo más rápidamente

posible después de la muerte, si esto no es posible el animal debe ser colocado a 4° C. o

sometido a embalsamamiento por vía arterial.

Recomendaciones para la toma de las muestras

Los tejidos y los órganos provenientes de biopsias y necropsias se seccionar empleando

bisturís o navajas de afeitar nuevos, sin hacer presión sobre ellos. No es recomendable el uso

de tijeras para cortar los tejidos pues éstas ocasionan compresiones y jalonamientos de los

tejidos y órganos que distorsionar su estructura microscópica. El tamaño de las muestras no

debe exceder de 10 mm por lado con un grosor de 5 mm.

Fijación

Es un procedimiento cuya finalidad, al aplicarlo es detener la vida de las células e

impedir las modificaciones post morten que pueda sufrir la célula (procesos autolíticos),

manteniendo la estructura morfológica de células y tejidos sin que ocurran cambios notables

en ellos.

Los fijadores se clasifican en dos grandes grupos:

 a. Oxidantes: el tetraóxido de osmio (ácido ósmico), el bicromato de potasio,

ácido crómico, bicloruro de mercurio o “sublimado corrosivo”, ácido pícrico, ácido acético.

b. Reductores: el formaldehído, el glutaraldehído, el alcohol etílico, el alcohol

metílico.

Una vez transcurrido el tiempo de fijación deseado es preciso detenerlo rápidamente, el

fijador que rodea la pieza puede ser eliminado por lavado en agua o alcohol.

Deshidratación

Significa extraer o remover el agua de los tejidos fijados. La deshidratación debe ser

completa porque, de lo contrario, el solvente no actúa de forma adecuada y el bloque de

inclusión no alcanza la dureza requerida. Para tal fin se utilizan líquidos deshidratadores en los

cuales se sumergen los tejidos. Los deshidratadores más usados son el alcohol etílico, el alcohol

isopropílico, el dioxano y el cloroformo.

En el caso de la inclusión en parafina, las muestras se deshidratan en baños sucesivos

en soluciones de concentración crecientes de alcohol etílico

Inclusión

El aclaramiento o desalcoholización permite que el alcohol de los tejidos sea

reemplazado por un líquido (solvente) que disuelva la parafina con la cual el tejido va a ser

impregnado. Inclusión en parafina. Después de la fijación y el “lavado” de las muestras, éstas

se encuentran embebidas en agua o en alcohol, por lo que resulta imposible que se infiltren con

parafina, medio de inclusión insoluble en agua y alcohol. La parafina es un hidrocarburo sólido,

con escasa elasticidad que ha de penetrar a los tejidos, ocupando hasta sus últimos intersticios.

Para lo cual ha de licuarse mediante temperatura.

 Xileno: es un excelente agente aclarante, pero tiende a hacer que los tejidos sean

excesivamente duros y quebradizos y esto nunca deben dejarse en este líquido más de 3 horas.

Las muestras deshidratadas se encuentran totalmente embebidas en alcohol etílico

absoluto; pero la parafina tampoco es soluble en alcohol por lo que es necesario reemplazarlo

por sustancias que sean capaces, simultáneamente, de mezclarse con el alcohol y disolver la

parafina. Estas se denominan líquidos diafaniza dores o intermediarios. Ejemplos: xilol,

tolueno, benceno, y el cloroformo.

Corte (Microtomía)

Las secciones delgadas o “cortes” se obtienen utilizando instrumentos mecánicos

diseñados para que en forma más o menos automática, seccionen el bloque de parafina en cortes

delgados y de grosor uniforme. Los instrumentos se denominan “microtomos”

 El sistema de funcionamiento de los microtomos consta de cuatro mecanismos

principales: sujeción del bloque de parafina.

 sujeción de la navaja.

 El que permite que el filo de la navaja seccione al bloque en cortes delgados y

de grosor uniforme.

 El de avance del bloque en un número determinado de micrómetros después que

se ha obtenido un corte.

Tinción

El procedimiento de coloración o tinción consiste en que una estructura celular o tisular

adquiere específicamente un color bajo la acción de una sustancia colorante. Se considera que

una estructura se ha coloreado o teñido cuando al ser lavada con el líquido que disuelve al

colorante, no se decolora.
 Clasificación de los colorantes.

Existen varios criterios para clasificar a los colorantes:

Colorantes naturales, se extraen de:

1) Animales. Como el carmín, que se extrae de la cochinilla, artrópodo parásito de

los tallos del nopal (tuna). El carmín (de color rojo intenso) es uno de los colorantes

naturales más empleado en la industria alimentaria y cosmética. En técnica histológica se

utiliza el carmín de Best para demostrar glucógeno, el carmín de Mayer para demostrar

mucina; las células fagocíticas se evidencian con el carmín de litio (colorante vital).

2) 2) Vegetales. Como la hematoxilina, obtenida de la corteza de un árbol, el “palo

de campeche” (Haematoxilum campechanum), la safranina que se extrae de una liliácea

(pistilos de la flor de azafrán) o la orceína que se obtiene de un liquen.

Colorantes artificiales o sintéticos. Son productos derivados de la destilación de la

hulla o carbón. Genéricamente se les conoce como colorantes derivados de la anilina.

Montaje

Concluido el proceso de la tinción de los cortes, éstos se deben colocar en condiciones

de protección y de poderlos utilizar infinidad de veces sin que se deterioren. Para alcanzar tales

propósitos se recurre al último procedimiento que es el montaje.

 Este procedimiento consiste en colocar encima del corte coloreado y diafanizado una

gota de una sustancia adherente, diluida, generalmente en xilol (resina natural como el bálsamo

de Canadá o resinas sintéticas, cuyos índices de refracción son similares a los del vidrio) y

encima de ellos, una laminilla cubreobjetos, cuidando que no queden burbujas de aire entre la

resina. A continuación, se deja que el xilol se evapore, y la resina adquiera solidez suficiente;

para ello las láminas se colocan en una platina caliente (45o 50o C) durante 24 a 48 horas y

estarán listas para ser observadas.

Generalidades de la célula

Cada una de las células del humano es una estructura viva que puede sobrevivir

indefinidamente y, en la mayoría de los casos, incluso reproducirse si los líquidos que la

rodean le proporcionan los nutrientes apropiados.

ORGANIZACION DE LA CELULA

Las diferentes sustancias que componen la célula se denominan colectivamente

protoplasma. El protoplasma está compuesto fundamentalmente de 5 sustancias básicas:

agua, electrolitos, proteínas, lípidos e hidratos de carbono.

Agua: El líquido principal de la célula es el agua, que está presente en la mayoría de

las células

Iones: Estos iones son los encargados en hacer las reacciones celulares. son necesarios

además para el funcionamiento de algunos de los mecanismos de control celular, por

ejemplo, los iones que actúan en la membrana celular permiten la transmisión de los impulsos

electroquímicos en el nervio y en las fibras musculares

Proteínas: las sustancias más abundantes en las células, después del agua, son las

proteínas, pueden dividirse en 2 tipos, proteínas estructurales y proteínas globulares

 Proteínas estructurales: están presentes en la célula fundamentalmente en forma de

largos filamentos delgados

Proteínas globulares: estas proteínas son fundamentalmente las enzimas de la célula.

las enzimas catalizan reacciones químicas

Lípidos: Los lípidos más importantes en la mayoría de las células son los fosfolípidos

y el colesterol, la especial importancia de los fosfolípidos y el colesterol reside en el hecho de

que son insolubles en el agua y por consiguiente forman parte de la membrana celular

Membrana celular o Bicapa lipídica

La barrera lipídica de la membrana celular evita la penetración del agua. Su estructura

básica es una bicapa lipídica.

La estructura básica de la bicapa lipídica son moléculas de fosfolípidos. un extremo

de cada una de las moléculas de fosfolípidos es hidrosoluble o hidrófila. El otro extremo solo

es soluble en grasas, o hidrófoba. El extremo fosfato de los fosfolípidos es el extremo

hidrófilo, y el extremo de ácidos grasos es el extremo

TRANSPORTE DE MEMBRANA

Transporte activo: Requiere energía porque las moléculas transportadas a través de la

membrana plasmática contra su concentración o gradiente electroquímico.

Transporte pasivo: Requiere proteínas transportadoras, pero no consume energía.

 TRANSPORTE VESICULAR

Endocitosis: Es la captación celular de líquidos y macromoléculas. Depende de tres

mecanismos diferentes, pinocitosis (captación de líquidos y solutos por micro y macro

pinocitos en vesículas pequeñas o grandes, respectivamente), fagocitosis (captación de

partículas grandes) y endocitosis mediada por receptores (captación de moléculas específicas

que se unen a los receptores).

Durante la endocitosis mediada por receptores se forman las vesículas de transporte

ya que implica la interacción con la proteína clatrina, que se ensambla en jaulas similares a

fositas recubiertas o vesículas cubiertas.

Exocitosis

Es el proceso de secreción celular en el cual las vesículas de transporte, cuando se

fusionan con la membrana plasmática, descargan su contenido en el espacio extracelular. Las

proteínas SNARE son necesarias para la fusión de la membrana en la exocitosis y para la

iniciación de la endocitosis.

Exocitosis constitutiva: Es un proceso continuo en el que los contenidos de las

vesículas de transporte son llevados hacia la membrana plasmática y descargados

continuamente.

Exocitosis secretora regulada: El contenido de las vesículas es almacenado dentro de

las células y liberado de acuerdo con la estimulación hormonal o neural.

DEGRADACION DE PROTEÍNAS

Lisosomas: Son orgánulos digestivos que contienen enzimas hidrolíticas que degradan

sustancias derivadas de la endocitosis y de la propia célula (autofagia). Tienen una membrana

única hecha de proteínas estructurales específicas resistentes a la digestión hidrolítica.

 Se desarrollan a partir de endosomas recibiendo enzimas y proteínas estructurales que

son dirigidas por la vía de señales de reconocimiento lisosómicas de la manosa-6-fosfafo (M-

6-P).

Proteasomas: Son orgánulos no membranos que representan complejos de proteínas

citoplasmáticas que destruyen proteínas mal plegadas o innecesarias que se han etiquetado

para su destrucción con la proteína ubiquitina sin la participación de los lisosomas.

RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO (RE)

Retículo endoplasmático rugoso (RER): Representa una región del RE asociado con

los ribosomas. Es el sitio de la síntesis de proteínas y modificación postraduccional de las

proteínas recién sintetizadas. El RER está más desarrollado en células secretoras activas.

Retículo endoplasmático liso (REL): Está compuesto por tubos unidos (túbulos

anastomosados) que no están asociados con los ribosomas. Contiene enzimas desintoxicantes

y enzimas para el metabolismo del glucógeno y los lípidos. También sirve como reservorio

para el calcio en las células musculares esqueléticas.

APARATO DE GOLGI Y OTROS ORGÁNULOS MEMBRANOSOS

Aparato de Golgi: Es una serie de cisternas apiladas y aplanadas que almacenan o

secretan proteínas dirigidas a la membrana plasmática apical y basolateral, las endosomas, los

lisosomas y el citoplasma apical.

Mitocondrias: Son orgánulos móviles alargados que contienen la cadena de transporte

de electrones de enzimas respiratorias para generar ATP. Son abundantes en células que

generan y gastan grandes cantidades de energía y regulan la muerte celular programada

(apoptosis).
 Peroxisomas: Son orgánulos pequeños involucrados en la producción y degradación

del agua y en la degradación de ácidos grasos.

MICROTÚBULOS

Los microtúbulos son tubos huecos rígidos y alargados (20-25 nm de diámetro)

compuestos por tubulina a y β. Se originan en anillos de tubulina y dentro del MTOC, y su

longitud cambia dinámicamente a medida que los dímetros de tubulina son agregados o

eliminados en un proceso de remodelación constante conocido como inestabilidad dinámica.

Los microtúbulos forman vías para el transporte vesicular intracelular y los husos

mitóticos; también son responsables del movimiento de los cilios y los flagelos, así como del

mantenimiento de la forma de la célula.

El movimiento de los orgánulos intracelulares junto con los microtúbulos es generado

por proteínas moleculares motoras (dineínas y cinesinas).

Centríolos: son un par de cilindros citoplasmáticos cortos y en forma de varilla

formados por nueve tripletes de microtúbulos. Representan el punto focal alrededor del cual

se reúne el MTOC, proporcionan los cuerpos basales para cilios y flagelos, y alinean el huso

mitótico durante la división celular.

FILAMENTOS DE ACTINA

Los filamentos de actina (microfilamento) son más finos (6-8 nm de diámetro), más

cortos y más flexibles que los microtúbulos. Están compuestos por actina G (actina globulina)

polimerizada que forma la actina F (actina filamentosa).

 Los filamentos de actina también son responsables de la unión célula - matriz

extracelular (adhesiones focales), los movimientos de las proteínas de membrana, la

formación del núcleo estructural de las microvellosidades y la movilidad celular a través de la

creación de extensiones celulares (lamelipodios y filopodios).

Las proteínas motoras de actina (familia de la miosina), que hidrolizan el ATP para

proporcionar energía para el movimiento a lo largo del filamento de actina, son responsables

de la contracción muscular.

FILAMENTOS INTERMEDIOS

Los filamentos intermedios tienen forma de cuerda (8-10 nm de diámetro), agregan

estabilidad a la célula e interactúan con las uniones celulares (desmosomas y

hemidesmosomas).

Los filamentos intermedios se forman a partir de subunidades de filamentos

intermedios no polares y altamente variables que incluyen queratinas (que se encuentran en

las células epiteliales), vimentina (células derivadas del mesodermo), desmina (células

musculares), proteínas de los neurofilamentos (células nerviosas), laminas (núcleo) y

proteínas de los filamentos perlados (cristalino del ojo).

INCLUSIONES

Las inclusiones contienen productos de la actividad metabólica de la célula y

consisten principalmente en gránulos de pigmento (la lipofuscina es el pigmento "de

desgaste" más frecuente), gotitas lipídicas y glucógeno.

 Generalidades de los tejidos

Los tejidos son conjuntos de células organizadas para llevar a cabo una o más

funciones específicas. A pesar de sus diferentes estructuras y propiedades fisiológicas, todos

los órganos están compuestos por solo cuatro tejidos básicos: epitelio, conjuntivo, muscular,

nervioso. Cada tejido básico está definido por un conjunto de características morfológicas

generales o propiedades funcionales.

Epitelio

Se caracteriza por la aposición estrecha de sus células y por su presencia en una

superficie libre. Tiene algunas funciones como: cubre las superficies del cuerpo, reviste las

cavidades corporales y forma las glándulas. Se clasifica con base en sus características

morfológicas: el número de capas celulares (simple o estratificado) y la forma de las células

(plano, cúbico y cilíndrico). Las superficies libres de las células epiteliales muestran

modificaciones de la superficie (microvellosidades, estereocilios o cilios). Las células

epiteliales descansan sobre la lámina basal.

Tejido conjuntivo

Se define por su matriz extracelular. Subyace y sostiene (estructural y

funcionalmente) a los otros tres tejidos básicos. El tejido conjuntivo se clasifica en tres

categorías con base en el contenido de su matriz extracelular y las características de las

células individuales: tejido embrionario, tejido conjuntivo propiamente dicho (laxo y denso) y

tejido conjuntivo especializado. Los ejemplos de los tejidos conjuntivos especializados son el

hueso, el cartílago y la sangre.

 Tejido muscular

El tejido muscular se clasifica según la capacidad contráctil de sus células. Todos los

tipos de células musculares contienen las proteínas contráctiles actina y miosina, que se

organizan en miofilamentos y se encargan de la contracción muscular. Las células del

músculo esquelético y del músculo cardíaco presentan estriaciones cruzadas producidas por

la organización específica de los miofilamentos. Las células del músculo liso no muestran

estriaciones.

Tejido nervioso

El tejido nervioso recibe, transmite e integra información de los medios interno y

externo para controlar las actividades corporales. Las células nerviosas (neuronas) están

especializadas en la transmisión de impulsos eléctricos. Una neurona típica está formada por

un cuerpo o soma celular, un solo axón largo que transmite los impulsos desde el cuerpo

celular y múltiples dendritas que reciben impulsos y los transmiten hacia el cuerpo celular.

Las neuronas se encuentran tanto en el sistema nervioso central (SNC), que incluye el

encéfalo y la médula espinal, como en el sistema nervioso periférico (SNP), que incluye los

nervios y los ganglios. En el SNC, las células de sostén se llaman células de la glía. En el

SNP, las células de sostén se denominan células de Schwann (neurilemáticas) y células

satélites.
 Histogénesis de los tejidos

- Las tres capas germinales son el ectodermo, el mesodermo y el endodermo.

- Las estructuras derivadas del ectodermo se desarrollan a partir del ectodermo de

superficie o neuroectodermo.

- El ectodermo de superficie da origen a la epidermis (y sus derivados), el epitelio de la

córnea y del cristalino del ojo, el esmalte dentario, los componentes del oído interno,

la adenohipófisis y la mucosa de la cavidad bucal y de la región distal del conducto

anal.

- El neuroectodermo da origen al tubo neural, la cresta neural y sus derivados.

- El mesodermo da lugar al tejido conjuntivo; el tejido muscular; el corazón y los vasos

sanguíneos y linfáticos; el bazo; el hígado y las gónadas con los conductos genitales y

sus derivados; el mesotelio, que reviste las cavidades corporales; y la corteza

suprarrenal.

- El endodermo da origen al epitelio del tubo digestivo; el epitelio de las glándulas

digestivas extramurales (hígado, páncreas y vesícula biliar); el epitelio de la vejiga

urinaria y la mayor parte de la uretra; el epitelio del sistema respiratorio; las glándulas

tiroides, paratiroides y timo; el epitelio de las amígdalas; y el epitelio de la cavidad

timpánica y de las trompas auditivas (de Eustaquio).

BIBLIOGRAFÍA

Pawlina, W. 1. (2015). Ross. Histología: Texto y atlas. Correlación con biología

molecular y celular. Philadelphia : Wolters Kluwer.