Trabajo práctico SDS-PAGE
Gel 2.
1. Patrones de PM
2. OVO + 2-ME
3. OVO + 2-ME
4. OVO sin 2-ME
5. OVO sin 2-ME
6. γ Glob sin 2-ME
7. γ Glob sin 2-ME
8. γ Glob + 2-ME
9. γ Glob + 2-ME
10. Patrones de PM
Calle
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
- Confeccionar una curva de calibración con los valores de Rf o las distancias migradas
por los Patrones de PM. Estimar el PM de las muestras sembradas y evaluar la
presencia de puentes disulfuro intra o intercatenarios de las mismas.
1
Tabla 1. PM de patrones
Proteína Peso molecular (Da)
Miosina 200.000
galactosidasa 116.250
Fosforilasa b 97.400
Seroalbúmina bovina 66.200
Ovoalbúmina 45.000
Anhidrasa carbónica 31.000
Inhibidor de tripsina 21.500
Tabla2. Distancias (cm) de las bandas del Gel 1
Calles 1/10 Calles 2/3 Calles 4/5 Calle 6* Calles 8/9
0,3 2,1 2,4 0,4 1,9
0,8 3,1
1,0
1,4
2,0
2,9
3,8
Distancia del frente de corrida (Azul de bromofenol): 4,0 cm
* no tomamos las medidas de la calle 7 porque se vio afectada por la difusión del 2-
mercarptoetanol de la calle 8.
a. Confeccionar una curva de calibración del log PM en función de la movilidad relativa
(Rf) de los patrones de PM.
b. Estimar el PM de las muestras sembradas con 2-ME y el PM aparente obtenido en
ausencia del reductor.
c. Evaluar la presencia de puentes disulfuro intra o intercatenarios en la OVO y en la γ-
Glob.
