INSTITUTO TECNOLÓGICO DE LA CUENCA DEL PAPALOAPAN

Asignatura: Microbiología.

Unidad N° 3:
Nomenclatura, taxonomía y características generales de los microrganismos.

Práctica N° 8: Preparación de un medio de cultivo PDA.

Nombre del docente: M. C. José Alfredo Garcidueñas Paz

Numero de equipo: 2

Integrantes:
DIAZ IGLECIAS ENRIQUE
ESPINDOLA MEDINA YARITZA
ESTEFES GARCIA MOISES

Calificación: _________________

Observaciones:

San Bartolo, Tuxtepec, Oax. a 12 de Octubre de 2024.

Av. Tecnológico #21 San Bartolo C.P.68446 Tuxtepec, Oaxaca. Tel.

287 8753926 e-mail: dir_cpapaloapan.[Link] [Link] |
[Link]
 INDICE.

Portada. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1

Índice. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

Practica 8. Preparación de un medio de cultivo PDA

INTRODUCCIÓN. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

OBJETIVOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

OBJETIVOS ESPECIFICOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3-4

MATERIALES. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4-5

METODOLOGÍA. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5-6

RESULTADOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6, 7,8

CONCLUSIÓN. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

CUESTIONARIO. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. . . . . . . . . . . . . . . . . . .10

PEACTICA No 8. Preparación de un medio de cultivo PDA.

INTRODUCCIÓN.

El agar de papa y dextrosa (APD1) –en inglés Potato Dextrose Agar (PDA)– y
el caldo de patata y dextrosa son medios comunes de cultivo microbiológico que se
preparan a partir de infusión de patata y dextrosa. El agar de patata y dextrosa es
el medio más utilizado para el crecimiento de hongos y levaduras que atacan a las
plantas vivas o materia vegetal muerta en descomposición. El agar de patata
y dextrosa puede ser suplementado con antibióticos o ácidos para inhibir el
crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado para realizar el recuento
colonial. También puede ser utilizado para promover el crecimiento de hongos y
levaduras de importancia clínica. La base del medio es altamente nutritiva y
permite la esporulación y la producción de pigmentos en algunos dermatofitos.
Algunos procedimientos señalan bajar el pH del medio a 3.5 ± 0.1 con ácido tartárico
al 10 %, para inhibir el crecimiento bacteriano. La infusión de patata promueve un
crecimiento abundante de los hongos y levaduras y el agar es adicionado como
agente solidificante. (Lawrence C. Parks, 2011).

OBJETIVOS.

Preparar adecuadamente el medio de cultivo Papa Dextrosa Agar (PDA) en

condiciones estériles, con el fin de proporcionar un ambiente adecuado para el
crecimiento de hongos y levaduras, aplicando técnicas de laboratorio que
garanticen la calidad y esterilidad del medio.

OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Aplicar correctamente los procedimientos de pesaje y medición de los
componentes necesarios para la preparación del medio PDA.
 Esterilizar el medio de cultivo mediante autoclave, asegurando la eliminación
de contaminantes y microorganismos no deseados.
 Preparar un medio de cultivo PDA: Medir y mezclar con precisión los
ingredientes necesarios (dextrosa, extracto de papa, agar y agua) para
elaborar un medio de cultivo adecuado para el crecimiento de hongos y
levaduras.
 Realizar el proceso de esterilización: Utilizar una autoclave para esterilizar el
medio preparado, garantizando la eliminación de microorganismos no
deseados y asegurando la pureza del cultivo.
 Desarrollar un medio de cultivo PDA (Papa Dextrosa Agar) que favorezca el
crecimiento de hongos y levaduras, garantizando condiciones óptimas de pH
y esterilidad, para facilitar la observación y análisis de la morfología de las
colonias.

MATERIALES

 5.85 g Agar papa dextrosa (PDA)

 150 ml Agua destilada
 10 cajas Petri
 1 Autoclave
 1 Parrilla eléctrica
 1 Probeta de 500mL
 1 Matraces de 250 ml
 1 pinzas de disección
 1 Piceta
 1 Espátula pequeña
 Algodón plisado y pañalina
 1 Balanza granataria
 1 Agitador Magnético
  1 atomizador con alcohol al 70%
 Franela
 Detergente y toallas de papel
 2 pares de guantes de asbesto
 1 Tuvo tapón rosca
 1 Mechero Fisher

METODOLOGÍA PARA LA ELABORACIÓN DE UN MEDIO DE

CULTIVO PDA (PAPA DEXTROSA AGAR)

1. Medición de Ingredientes: Pesar 5.85g de Agar Dextrosa Papá

Medir 150 ml de agua destilada en la probeta

2. Disolución:

En un matraz, Agregar el agar a 150 ml de agua destilada.

Insertar el agitador magnético al matraz y ponerlo sobre la parrilla eléctrica
para que se disuelva bien el agar.

3. Calentamiento:

Mezclar bien y calentarla en la parrilla eléctrica, agitándolo suave hasta su

completa disolución para que no se asiente el agente solidificante.

4. Esterilización:

Esterilizar en autoclave a 121°C o 15 lbs /in2 de presión y mantener estas

condiciones durante 15 minutos. Apagar la autoclave y dejar que la presión
baje al valor de cero. Abrir cuidadosamente la tapa, desde la parte trasera
para evitar que el vapor caliente cause quemaduras.

5. Vertido en placas:

Enfriar los medios de cultivo de los matraces hasta una temperatura

aproximada de 45-50°C, que coincide con la posibilidad de sostener el matraz
en la palma de la mano sin quemarse.
 Limpiar la mesa con solución de alcohol al 70% (v/v). Verter 15 ml de cada
uno de los medios en las 10 cajas Petri en esta zona aséptica.

6. Solidificación:

Dejar que el medio se enfríe y solidifique a temperatura ambiente.

7. Almacenamiento:
Abrir una caja Petri de PDA, durante 1 minuto en zona asépticas y
etiquetarlas. Colocar las cajas Petri en una incubadora ajustada a 30ºC
durante 24-48 horas. Las cajas Petri se colocarán con la tapa hacia abajo.

RESULTADOS.

La solución preparada servirá como medio de cultivo para levaduras, después de

haber llegado a su punto solidificado en las cajas Petri se podrá usar para el cultivo
de levaduras. A continuación se mostraran algunos de los resultados que se llevaron
a cabo para realizar la práctica.

Imagen 1. Se pesó la cantidad Imagen 2. Se agregó la

correcta de agar para preparar la cantidad pesada de
150 ml. Agar en el matraz de
250 ml.
Imagen 3. Se agregaron los Imagen 4. El matraz se puso
150 ml de agua destilada al en la parrilla eléctrica con un
matraz con el agar ya incluido agitador magnético para que
en el matraz. se disolviera correctamente
el agar.

Imagen 5. Se llevaron a la autoclave Imagen 6. La presión de la

para realizar la esterilización del autoclave llego a los 121°C
medio de cultivo. y se mantuvo asi por 15
minutos para lograr una
buena esterilización.
Imagen 7. Despues de sacar el agar ya esterilizado se procedió a vaciar en las
cajas Petri estando cerca del mechero Fisher para evitar contaminación.

Terminando de vaciar el medio de cultivo en las cajas Petri se sellaron y se

etiquetaron para llevarlas a la estufa para que se solidificaran correctamente a la
temperatura requerida.

CONCLUSION.

Se preparó el agar PDA correctamente siguiendo los pasos de la metodología y

llevando a cabo una buena esterilización de este medio de cultivo gracias a la
autoclave con esto también se aprendió a cómo usar una autoclave correctamente
para llevar a cabo la esterilización, concluimos que el vaciado del medio de cultivo
en las ajas Petri se debe hacer en una zona aséptica por eso se llevó a cabo cerca
del mechero Fisher para evitar una contaminación con esto terminado sabemos que
después de estar solidificado el agar está listo para la siembra de levaduras.
 CUESTIONARIO.
1.- ¿Qué compuestos conforman a un medio de cultivo PDA?
Es un gel nutritivo compuesto por extracto de papa, dextrosa y agar.

2.- ¿Qué especies de microorganismos pueden llegar a crecer en un medio de

cultivo PDA? En un medio de cultivo PDA (Agar Papa Dextrosa) pueden crecer la
mayoría de las especies de hongos y levaduras que no tengan requerimientos
nutricionales específicos. Este medio es muy utilizado para aislar hongos, como los
parásitos de insectos, de plantas y los hongos saprofitos.

3.- ¿Qué tipo de medio es el medio PDA?

El medio de cultivo PDA, o Agar de Dextrosa y Papa, es un medio nutritivo no
selectivo que se utiliza para el estudio de hongos y levaduras.

4.- Describe 5 características del medio PDA.

 Es un medio de cultivo microbiológico que se utiliza para detectar y enumerar
levaduras y mohos.
 Se prepara con infusión de papa y dextrosa.
 Su bajo pH (3.5) evita el crecimiento de bacterias.
 Se puede encontrar listo para usar o en forma deshidratada.
 Se puede suplementar con antibióticos o ácidos para inhibir el crecimiento
bacteriano.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.

 INSUMOLAB. (Mayo de 2018). Agar papa dextrosa. Disponible en:

[Link]
[Link]

 BIOSER. (s.f.). Potato Dextrosa Agar (PDA) Levaduras y Mohos. Disponible

en:
[Link]

 Medios de cultivo. (Enero 2015). Potato Dextrose Agar (PDA) Microkit:

Medios de cultivo. Disponible en: [Link]
dextrose-agar-pda/

 TM Media. (8 de Junio de 2023) Entendiendo el Agar Papa Dextrosa.

Disponible en:
[Link]
ing-potato-dextrose-agar-what-it-is-and-what-it-
does/&hl=es&sl=en&tl=es&client=rq&prev=search#:~:text=In%20the%20fiel
d%20of%20microbiology,genera%20and%20species%20of%20fungi.

 Casado, A. (2018). Técnicas de microbiología: Teoría y práctica. Editorial

Médica Panamericana.
 INSTITUTO TECNOLÓGICO DE LA CUENCA DEL PAPALOAPAN

Asignatura: Microbiología.

Unidad N° 3:
Nomenclatura, taxonomía y características generales de los microrganismos.

Práctica N° 9: Cultivo de levaduras.

Nombre del docente: M. C. José Alfredo Garcidueñas Paz

Numero de equipo: 2

Integrantes:
DIAZ IGLECIAS ENRIQUE
ESPINDOLA MEDINA YARITZA
ESTEFES GARCIA MOISES

Calificación: _________________

Observaciones:

San Bartolo, Tuxtepec, Oax. a 12 de Octubre de 2024.

Av. Tecnológico #21 San Bartolo C.P.68446 Tuxtepec, Oaxaca. Tel.

287 8753926 e-mail: dir_cpapaloapan.[Link] [Link] |
[Link]
 INDICE.

Portada. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
Índice. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

PRACTICA 9. Cultivo de levaduras.

INTRODUCCIÓN. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

OBJETIVOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

MATERIALES. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4

METODOLOGIA. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4, 5, 6

RESULTADOS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6, 7

CONCLUSIÓN. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7

CUESTIONARIO. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7, 8, 9

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10
 PRACTICA No 9. Cultivo de levaduras.

INTRODUCCIÓN.
El cultivo de levaduras en medio Papa Dextrosa Agar (PDA) es una técnica utilizada
para favorecer el crecimiento de estas en condiciones controladas. El medio PDA
proporciona nutrientes esenciales, como carbohidratos y extractos vegetales, que
facilitan el desarrollo de levaduras. En la práctica, se inocula una muestra de
levadura en la superficie del medio estéril es decir ya en las cajas Petri con la
muestra y se incuba a una temperatura óptima, generalmente entre 25 y 30°C. Esta
técnica permite observar el crecimiento de colonias, realizar conteos y estudiar
características morfológicas de las levaduras. López, A., & García, R. (2021).

OBJETIVO GENERAL
Realizar el cultivo de levaduras en medio de cultivo Papa Dextrosa Agar (PDA) en
condiciones controladas de laboratorio, para favorecer su crecimiento y analizar sus
características morfológicas.

OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Preparar el medio de cultivo pda de acuerdo a los protocolos establecidos,
garantizando su esterilidad.
 Inocular correctamente las muestras de levaduras en el medio pda bajo
condiciones asépticas.
 Incubar las placas con el medio inoculado a la temperatura adecuada para
promover el crecimiento de las levaduras.
 Observar y describir las características morfológicas de las colonias de
levaduras desarrolladas en el medio pda, evaluando su crecimiento.
MATERIALES.
 1 Asa de siembra

 1 Lámpara alcohol

 Placas Petri con medio de cultivo PDA

 Levadura (Pichia membranaefaciens)

 Alcohol al 70%

 Papel film transparente o cinta adhesiva

 Gorro

 Guantes

 Cubre bocas

METODOLOGÍA.

1.- Colocarse gorro y cubre bocas, desinfectarse las manos con alcohol al 70%
seguido colocarse los guantes y rosearse de nuevo alcohol al 70%.
2.- Preparación de los Materiales para la Inoculación:
A) Desinfección: Desinfectar la mesa de trabajo con alcohol al 70% y encender la
lámpara alcohol para crear una zona libre de contaminantes.
B) Esterilización del instrumental: Esterilizar el ansa de inoculación calentándola en
la llama de la lámpara alcohol. Dejarla, enfriar antes de tomar la muestra de
levadura.

3. Inoculación de Levadura
A) Toma de muestra: Con la espátula o ansa estéril, tomar una pequeña cantidad
de levadura (Pichia membranaefaciens) tomada de tepache de piña.
B) Siembra: Inocular la levadura en la placa Petri con el medio PDA ya solidificado.
Hacerlo en zigzag o en un patrón específico (ej. Dispersión por estrías) para
asegurar una distribución adecuada de la muestra.
Método de aislamiento por siembra por estría en placa. Para obtener un
cultivo axénico:
(a) esterilizar un asa de siembra por
flameado en la llama de un mechero, (b)
introducirla en la suspensión bacteriana
para recoger una muestra, (c) sembrar
haciendo estrías sobre la superficie de
un medio sólido en una placa Petri, y (d)
volver a esterilizar el asa, tocar en la
zona de la placa ya sembrada y hacer un
Segundo grupo de estrías en una región nueva de la placa. Repetir el
proceso una tercera y una cuarta vez, hasta conseguir que los grupos de
células se diluyan y se separen células aisladas. (e) Después de la
incubación, se desarrollan colonias aisladas. Para estar seguro de que el
cultivo es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar una colonia
aislada y sembrar por estrías una segunda placa.
C) Sellado: Cerrar las placas y sellarlas con papel film transparente o
cinta adhesiva para evitar contaminaciones ambientales.
 4. Incubación
a) Condiciones de incubación: Colocar las placas en una incubadora
ajustada a 28-30°C.
b) Tiempo: Dejar incubar entre 24 y 48 horas.

5. Observación y Análisis del Crecimiento:

a) Registro de observaciones: Inspeccionar las placas después de la
incubación, registrando el número, tamaño, color y forma de las colonias
de levadura.
b) Análisis: Evaluar si el crecimiento fue homogéneo y si hay presencia
de contaminantes, que podrían aparecer como colonias con
características distintas a las de la levadura.

RESULTADOS.
Los resultados de esta práctica son el haber realizado bien la siembra de la levadura
del tepache de piña. Con la inoculación después de 24 horas se lograra ver el
crecimiento de la levadura del tepache en el estriado que se formó con la inoculación
en el Agar PDA.

Es así como el crecimiento de la levadura podrá verse en el agar PDA.

CONCLUSIÓN.
Con esta práctica se aprendió a realizar la correcta siembra de levaduras en el
cultivo PDA ya que se debe inocular en tres pontos de la caja Petri y formar un
estriado para poder observar en esa forma el crecimiento de la levadura Pichia
membranaefaciens y también observar su morfología. En esta práctica
comprendimos como se debe realizar el cultivo de una levadura para hacer la
siembra se debe estar cerca del mechero de alcohol para evitar una contaminación
también la asa de siembra se debe desinfectar poniéndola en la flama del mechero
de alcohol se debe dejar enfriar un poco para tomar la muestra de levadura y luego
así realizar la inoculación en el agar.

CUESTIONARIO.

1.- ¿Cuáles son las características principales de los hongos

microscópicos?
Estructura

Los hongos microscópicos se dividen en dos grupos: los hongos filamentosos

y las levaduras. Los hongos filamentosos crecen formando filamentos
alargados, mientras que las levaduras se mantienen en forma unicelular.

Pared celular

Los hongos tienen una pared celular rígida compuesta de quitina, similar a la
de las células vegetales.

Eucariotas

Las células de los hongos son eucariotas, lo que significa que tienen un núcleo
celular.

Heterótrofos

Los hongos son heterótrofos, como los animales, por lo que no fotosintetizan.

Sésiles

Los hongos son sésiles, como las plantas, por lo que no se desplazan.
 Crecimiento

Los microhongos crecen en plantas, suelo, agua, insectos, rumen de ganado,

cabello y piel.

Esporas
El micelio de los microhongos produce esporas que son transportadas por el
aire y propagan el hongo

2.- Menciona a que grupos taxonómicos pertenecen los hongos

microscópicos.
Los unicelulares o levaduriformes y los multicelulares o filamentosos

3.- Describe. ¿Qué es un cultivo puro de hongos levaduriformes?

Un cultivo puro de hongos levaduriformes es un cultivo en el que solo está presente
el hongo de interés, sin ningún tipo de contaminantes.
Los hongos levaduriformes son microorganismos que se encuentran en muchos
lugares, incluso en el cuerpo humano. Algunos tipos de hongos levaduriformes se
utilizan para la elaboración de alimentos como el pan, el queso y las bebidas
alcohólicas.

4.- ¿Qué es un hongo levaduriforme y describe características generales?

Tipo de microrganismo que se encuentra en casi todos lados, incluso dentro del
cuerpo. Hay muchos tipos de hongos levaduriformes. Algunos tipos se usan para
elaborar alimentos como el pan, el queso y las bebidas alcohólicas.
Los hongos levaduriformes son microrganismos que tienen las siguientes
características:
 Son células aisladas y únicas, de forma ovalada, redonda o gemante.

 Se reproducen asexualmente por gemación.

 Forman colonias cremosas y suaves de colores variados, como blanco, crema, café
o negro
 Pueden adoptar formas alargadas que se asemejan a hifas, formando un
pseudomicelio.

5.- ¿Cuáles son las condiciones de crecimiento de un hongo levaduriforme

(temperatura y pH)?
Las condiciones de crecimiento de un hongo levaduriforme son:
 Temperatura: La temperatura ideal para el crecimiento de las levaduras es de 30°C
a 35°C. Si la temperatura supera los 35°C, las levaduras se debilitan y a 60°C
mueren.

 pH: Los hongos se desarrollan a pH bajos, como 1.0.

Otros factores que influyen en el crecimiento de los hongos son:

 La humedad, que debe ser alta, alrededor del 94-96%.

 La iluminación.

 La ventilación.

 La disponibilidad de nutrientes.

 La contaminación atmosférica.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.

 REPASILUD. (2018). Los hongos microscópicos. Disponible en:

[Link]
[Link]
 UNAM. (30 de Junio de 2021). Conociendo a los hongos microscópicos.
Disponible en:[Link]
tierra/archivos/35/Revista_Nuestra_tierra_Ed35_version_web.pdf

 Aranda, C., & Valdés, M. (2018). Levaduras: Biología y aplicaciones en la

industria alimentaria. Ediciones de la U.

 González, M. A. (2020). Cultivo y fermentación de levaduras: Fundamentos

y técnicas. Editorial Síntesis.

 López, M. J. (2019). Levaduras en la biotecnología: Principios y aplicaciones.

McGraw-Hill.
 1.- ¿Qué compuestos conforman a un medio de cultivo EMB?
Peptona 10,0; hidrogenofosfato dipotásico 2,0; lactosa 5,0; sacarosa 5,0; Eosina
amarillenta 0,4; Azul de metileno 0,07; Agar-agar 13,5.

2.- ¿Qué especies de microorganismos pueden llegar a crecer en un medio

de cultivo EMB?
En un medio de cultivo EMB (Eosin Methylene Blue Agar) pueden crecer
microorganismos como:
 Bacilos gram-negativos, como Pseudomonas y Aeromonas

 Enterobacterias

 Salmonella y Shigella

3.- ¿Para qué son empleados los medios de cultivo EMB en el área médica y
clínica?
El medio EMB (Eosin Methylene Blue Agar) se utiliza en la medicina para aislar e
identificar enterobacterias, principalmente Escherichia coli y Enterobacter
aerogenes. Se puede usar en productos de la industria farmacéutica, cosmética y
agroalimentaria, incluyendo el agua.

4.- ¿Qué tipo de medio es el medio EMB?

El medio EMB (Eosin Methylene Blue Agar) es un medio de agar selectivo y
diferencial que se utiliza para aislar y identificar bacterias gramnegativas,
principalmente enterobacterias. Es un medio de cultivo que se usa con frecuencia
en laboratorios clínicos.

5.- Describe cinco características del medio EMB.

El medio de cultivo EMB (Eosin Methylene Blue Agar) tiene las siguientes
características:
 Es un medio de cultivo sólido, de color café anaranjado, que se envasa en placas
de Petri.

 Su consistencia debe ser ligeramente dura para permitir la siembra de muestras

sin romperse.
 Es un medio selectivo y diferencial que se utiliza para el aislamiento de bacilos
Gram negativos de rápido desarrollo.

 Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

 Se utiliza para el aislamiento e identificación de enterobacterias en productos de la

industria farmacéutica, cosmética y agroalimentaria.

 La incubación se realiza a 37°C en atmósfera aeróbica durante 18-24 horas.