Escuela de Medicina Humana
Departamento de Ciencias Médicas Curso
Microbiología
MANUAL DE PRÁCTICAS DE
LABORATORIO
Lima, 2024-II
1
LAB 23
ESTUDIO MACROSCÓPICO Y MICROSCÓPICO DE
LEVADURAS: CANDIDA Y DERMATOFITOS:
MICROSPORUM, TRICHOPHYTON Y EPIDERMOPHYTON
1. INTRODUCCIÓN
En cuanto a hongos patógenos en humanos, existen cerca de 200 especies que han sido reconocidas;
de estas, alrededor de 30 son levaduras de interés médico. Entre ellas, desde el punto de vista clínico,
han sido y siguen siendo relevantes las del género Candida, las cuales forman parte de la flora normal
de nuestro organismo. Son los agentes causales de la candidiasis o candidosis, micosis oportunista,
aguda, subaguda o crónica, de alta incidencia a nivel mundial; pueden afectar a individuos de cualquier
edad, raza o sexo, siendo los factores predisponentes del huésped en combinación con los
microorganismos, los que favorecen el desarrollo de la infección 1.
Las infecciones por dermatofitos tienen prevalencia mundial y son conocidas clínicamente como
“tiñas”, y pueden adquirir el nombre de la zona donde se localicen, por ejemplo: “tiña pedís”. La
transmisión se puede dar por contacto directo con personas infectadas, suelos, animales o
indirectamente a través del uso de fómites contaminados. La inoculación directa a través de la piel no
intacta ocurre principalmente en pacientes con algún grado de compromiso de su estado inmunológico2.
En esta práctica, estudiaremos e identificaremos Candida y dermatofitos a partir del examen
microscópico y macroscópico de diversas especies. Como se verá, ambos tipos de exámenes son
complementarios en la identificación de estos hongos patógenos.
2. OBJETIVOS
• Describir las características macroscópicas y microscópicas de levaduras: Candida y
dermatofitos: Microsporum, Trichophyton y Epidermophyton.
3. GENERALIDADES
3.1. Género Candida
Las especies pertenecientes al género Candida representan los patógenos fúngicos oportunistas más
frecuentes. Actualmente se sabe que estos microorganismos colonizan la mucosa digestiva y pasan al
torrente circulatorio mediante un proceso de translocación gastrointestinal o a través de catéteres
vasculares contaminados, interaccionan con las defensas del organismo anfitrión, y abandonan el
compartimiento intravascular para invadir tejidos profundos de distintos órganos diana, como el hígado,
el bazo, el riñón, el corazón y el cerebro. Entre las características del microorganismo que podrían
contribuir a su potencial patogénico se encuentran la capacidad de adhesión a tejidos, el dimorfismo
levadura-micelio, la hidrofobicidad de su superficie celular, la secreción de proteinasas, y el cambio de
fenotipo3 (figura 1). Las especies más frecuentes de Candida sp son: C. albicans, C. tropicalis, C.
glabrata, C. dubliniensis, C. parapsilosis, C. orthopsilosis, C. metapsilosis, C. krusei, C. famata, C.
guilliermondii y C. lusitania. Una de las principales diferencias entre la C. albicans y C. no albicans es
que la primera es dimórfica4.
2
Se cree que la capacidad de adhesión a distintos tejidos y superficies inanimadas es importante en
las fases iniciales de la infección por Candida. La capacidad de adhesión de las distintas especies de
este género presenta una relación directa con su nivel de virulencia en diversos modelos
experimentales.
Figura 1. Características patogénicas de Candida sp. Fuente:
https://www.adiclair.com/candida/pathogenicity- characteristics-of-candida.html
La adhesión se lleva a cabo por medio de la combinación de mecanismos específicos (interacción de
un ligando con su receptor) e inespecíficos (fuerzas electrostáticas de van der Waals) 3.
Durante mucho tiempo se ha considerado que
la capacidad de transformación de la fase de
levadura a una forma micelial influye en el
potencial patogénico. La mayoría de las
especies de Candida puede someterse a esta
transformación, la cual se encuentra regulada
por el pH y la temperatura (figura 2). La
transformación dota a Candida de un
mecanismo de respuesta a las alteraciones
ambientales. Las hifas de C. albicans muestran
tigmotropismo (sentido del tacto); esta
propiedad les permite crecer a lo largo de
surcos y a través de poros, y podría facilitar la
infiltración de las superficies epiteliales.
Figura 2. Cambios morfológicos en el
género Candida. (A) Levadura, (B)
Pseudohifa, (C) Hifa4.
3
La composición de la superficie celular del género Candida puede afectar tanto a la hidrofobicidad de
la célula como a la respuesta inmunitaria de la misma. El tipo y el grado de glucosilación de las
manoproteinas de superficie pueden incidir en la hidrofobicidad de la célula, y, por ende, en la adhesión
a las células epiteliales. Los tubos germinales de C. albicans son hidrofóbicos, mientras que las yemas
o blastoconidias son hidrofílicas. Las distintas glucoproteínas de esta especie inhiben también la
respuesta inmunitaria al microorganismo mediante ciertos mecanismos que aún no se conocen
adecuadamente.
Algunas especies de Candida secretan aspartil-proteinasas que hidrolizan proteínas pertenecientes a
las defensas del organismo anfitrión frente a la infección, lo que perite que atraviesen las barreras del
tejido conjuntivo. De la misma manera, casi todas las especies de Candida que provocan enfermedad
en el ser humano generan fosfolipasas, unas enzimas que provocan daños en las células anfitrionas y
desempeñan un papel significativo en el proceso de invasión hística.
La capacidad del género Candida de pasar rápidamente de un morfotipo a otro se denomina cambio
de fenotipo. En un principio de aplico a la modificación de la morfología macroscópica de las colonias,
pero en la actualidad se sabe que los distintos cambios fenotípicos observados en los medios de cultivo
solido representan diferencias en la formación de yemas e hifas, expresión de glucoproteínas de pared
celular, secreción de enzimas proteolíticas, sensibilidad al daño oxidativo causado por neutrófilos, y la
sensibilidad y resistencia al hongo. El cambio de fenotipo contribuye a la virulencia de este género al
permitir que el microorganismo se adapte con rapidez a los cambios acontecidos en su entorno,
facilitando su capacidad de supervivencia, invasión de tejidos y evasión de las defensas del organismo
anfitrión3.
La candidemia es la forma más común de candidiasis invasiva, la cual corresponde a un 30%. Se
conocen muchos orígenes o puertas de entrada de la candidemia, sin embargo, las más destacadas
son el tracto gastrointestinal y la piel. La candidemia consiste en la presencia de al menos un
hemocultivo periférico positivo para Candida sp. obtenido en pacientes que presenten signos y síntomas
clínicos compatibles. La candidiasis invasora diseminada consiste de un síndrome febril sin foco claro
y sin respuesta al manejo con antibióticos de amplio espectro, en un paciente con factores de riesgo y
con dos hemocultivos positivos para esta especie.
3.1.1. Factores de riesgo asociados a infecciones por Candida
Los factores de riesgo asociados a infecciones por Candida se pueden dividir en dos grandes grupos:
los relacionados a la atención en salud como uso de catéteres, nutrición parenteral total, intervenciones
quirúrgicas y uso de drogas antimicrobianas y los asociados a estado del paciente como edad,
enfermedades inmunosupresivas, deterioro clínico y comorbilidades. La identificación de los factores
de riesgo no solo sirve para sospechar y dar tratamiento a una infección micótica, sino también para
tomar medidas preventivas e iniciar una terapia profiláctica que conllevaría a un mejor pronóstico de los
pacientes4.
3.1.2. Manifestación clínica
La presentación clínica de la candidemia puede simular una infección causada por bacterias, de hecho,
esta infección fúngica puede compartir algunos factores de riesgo que conllevan a las infecciones
provocadas por bacterias multirresistentes, el problema surge ya que no hay signos o síntomas
patognomónicos o específicos que nos permitan diferenciarlas.
4
Los espectros clínicos de la candidiasis invasiva que se describen en la literatura con mayor frecuencia
son: candidemia, endoftalmitis, peritonitis, esofagitis, meningitis y endocarditis infecciosa. La
candidiasis diseminada crónica (CDC) se observa a nivel hepatoesplenico y se produce principalmente
en pacientes oncohematológicos.
3.1.3. Métodos diagnósticos
Las pruebas diagnósticas deben identificar tres entidades: 1) candidemia en la ausencia de candidiasis
profunda; 2) candidemia asociada a candidiasis profunda; y 3) candidiasis profunda en la ausencia de
candidemia6.
El hemocultivo se encuentra como el goldstandar para el diagnóstico de la candidemia, pero presenta
baja sensibilidad (30% - 50%) y requiere mucho tiempo para dar un resultado. Los tiempos promedio
para que el cultivo sea positivo varían según la especie, se requieren entre 35.3 ± 18.1 horas para el
crecimiento de colonias de Candida albicans y 80.0 ± 22.4 horas para el crecimiento de Candida
glabrata. El mejor sistema de cultivo para el diagnóstico de candidemia es el desarrollo de tubos con
lisis y centrifugación y el monitoreo automatizado de los frascos de hemocultivo, los cuales son muchos
más sensibles, tienen un mejor rendimiento diagnóstico, pero aumentan los costos, generan alta carga
de trabajo y se contaminan fácilmente.
Para el diagnostico de candidemia se vienen utilizando otras técnicas diagnósticas que al igual que los
hemocultivos presentan ciertos inconvenientes. Dentro de estas pruebas se encuentran la detección de
(1-3) β D glucano que sirve únicamente en los hongos que tengan este componente en su pared celular,
presenta una sensibilidad del 87% y especificidad del 73%, y su positividad se observa entre 4 a 8 días
antes que los hemocultivos.
Las pruebas serológicas, aunque constituyen una opción para el diagnóstico de candidemia, no tienen
un nivel deseado de sensibilidad y no reporta un mejor rendimiento en cuanto al diagnóstico temprano
por laboratorio en comparación con otras pruebas.
El ensayo de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) de ADN es una prueba
molecular que tiene un buen rendimiento diagnostico con un tiempo entre -1 y +5 días, presenta una
sensibilidad de 87%, especificidad del 100% y valor predictivo negativo de 99.6%.
El examen histopatológico de secreciones de tejido es un método fiable para el diagnóstico de
candidemia, pero la detección del hongo patógeno depende de la cantidad de tejido comprometido con
el germen y esta prueba para detectar candidemia no es factible en la mayoría de pacientes que
ingresan a UCI. Se buscan las blastosporas típicas y seudohifas de la Candida spp.
El diagnóstico tardío de la candidemia se debe a que los métodos diagnósticos no son altamente
sensibles, no tienen un adecuado rendimiento diagnostico o no están disponibles. Otros factores
involucrados son el inadecuado volumen de muestra para los cultivos, los resultados falsos negativos
debido al uso de agentes antimicóticos en la profilaxis y la frecuente colonización de los pacientes por
hongos que no constituye una razón para inicio de terapia antifúngica.
3.1.4. Exámen microscópico y macroscópico
El examen directo o microscópico de la muestra clínica: es un método rápido para la visualización
de las estructuras fúngicas. En una lámina portaobjeto se añade a la muestra clínica, una gota de un
aclarante (KOH 10-40 %, Clorazol Black E), para favorecer la ruptura de los enlaces intercelulares y
liberar la célula fúngica; se coloca el cubre objeto y se examina directamente al microscopio de luz (o
5
en microscopio de fluorescencia en el caso de usar Calcofluor), observándose estructuras tales como:
blastoconidias redondas u ovales, con o sin gemación, pseudohifas. La presencia de blastoconidias y
pseudohifas está asociada con la forma patógena de C. albicans.
El cultivo se efectúa por siembra del material clínico en medios de cultivo como Sabouraud-Dextrosa-
Agar, micosel, lactritmel, etc. La mayoría de estas levaduras presentan un crecimiento entre 3 – 5 días.
El crecimiento del cultivo nos puede mostrar colonias lisas, cremosas, de bordes bien definidos, poco
elevadas, de color blanco o amarillento2.
3.2. Dermatofitos
Los dermatofitos son un complejo de hongos filamentosos relacionados desde el punto de vista
taxonómico que pertenecen a los géneros Trichophyton, Epidemophyton y Microsporum. Todos estos
pueden causar enfermedad en el ser humano, animales o ambos. Este grupo de hongos comparte la
capacidad de invadir la piel, el cabello o las uñas.
En cada caso, los hongos son queratinofilicos y queratinoliticos, por lo que son capaces de degradar
las superficies de queratina de las estructuras antes mencionadas. En el caso de las infecciones
cutáneas, los dermatofitos invaden solamente la capa más externa de la epidermis, el estrato corneo.
Es infrecuente la penetración por debajo de la capa granular de la epidermis. De igual forma, tan solo
invaden las capas queratinizadas mas externas del cabello y las uñas puesto que forman parte de la
piel. Las diversas dermatofitosis reciben el nombre de tiñas. Clínicamente, las tiñas se clasifican en
funcion de su localización anatómica o la estructura afectada: 1) tiña del cuero cabelludo, las cejas y
las pestañas; 2) tiña de la barba; 3) tiña corporal de la piel lisa o glabra, 4) tiña inguinal de la ingle; 5)
tiña de los pies, y 6) tiña ungueal de las uñas (también llamada onicomicosis). Los signos y síntomas
clínicos de las dermatofitosis dependen del agente etiológico responsable de la infección, la reacción
del organismo anfitrión y la localización de la infección3.
Cada género dermatofitico se caracteriza por un patrón específico de crecimiento en cultivo y la
producción de macroconidias y microconididas. La identificación a nivel de especie tiene en cuenta la
morfología de las colonias, la producción de esporas y las necesidades nutricionales in vitro.
3.2.1. Examen microscópico de dermatofitos
En el examen microscópico, el género Microsporum se identifica por la observación de macroconidias,
mientras que las microconidias representan las estructuras características del género Trichophyton
(tabla 1). Epidermophyton floccosum no genera microconidias, aunque son inconfundibles sus
macroconididas de pared lisa agrupadas en parejas o tríos (figura 3). Microsporum canis produce
unas macroconidias multicelulares características (5 a 8 celulas por conidia) de pared gruesa y rugosa
(figura 4). Trychophyton rubrum da lugar a microconidias piriformes (figura 5), mientras que T.
mentagrophytes genera macroconidias solitarias en forma de puro o bien racimos de microconidias
esféricas (figura 6). T tonsurans origina microconidias de tamaño y forma variables, y un número
relativamente grande de conididas esféricas se halla en la proximidad de pequeñas conidias de paredes
paralelas y otras microconidias de diversos tamaños y formas (figura 7).
6
Genero Macroconidias Microconidias
Epidermophyton Pared lisa, reunidas en grupos de dos o Ausentes
tres
Microsporum Abundantes, gran tamaño, pared gruesa Infrecuentes
y rugosa
Trichophyton Infrecuentes, lisas, pared delgada Abundantes, esféricas,
piriformes
Tabla 1. Propiedades características in vitro de dermatofitos3.
Figura 3. Epidermophyton
flocossum. Tinción con azul de
lactofenol que pone de manifiesto la
presencia de macronocidias de
pared lisa (aumento 400x).
(Tomado de Marler LM et al:
Mycology CD-ROM, Indiana
Pathology Images, 2004)3.
Figura 4. Microsporum canis.
Tinción con azul de lactofenol que
revela la presencia de
macroconidias de pared rugosa y
microconidias (aumento 400x).
(Tomado de Marler tM et al:
Mycology CD-ROM, Indiana
Pathology Images, 2004)3.
Figura 5. Trichophyton rubrum.
Tinción con azul de lactofenol que
muestra microconidias piriformes y
macroconidias multicelulares
(aumento 500x). (Tomado de
Marler LM et al: Mycology CD-
ROM, Indiana Pathology
Images, 2004)3.
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Figura 6.
Trichophyton
mentagrophytes. Tinción con
azul de lactofenol que permite
observar la presencia de
macroconidias en forma de puro
y racimos de microconidias
(aumento 400x). (Tomado de
Marler LM et al: Mycology CD-
ROM, Indiana Pathology Images,
2004)3.
Figura 7. Trichophyton
tonsurans. Tinción con azul de
lactofenol que revela la presencia
de microconidias, macroconidias
y artroconidias (aumento 400x).
(Tomado de Marler LM et al:
Mycology CD- ROM, Indiana
Pathology Images, 2004)3.
En las biopsias cutáneas, los dermatofitos son semejantes desde el punto de vista morfológico y
aparece como hifas tabicadas hialinas, cadenas de artroconidias, o cadenas disociadas de artroconidias
que invaden el estrato corneo, los folículos pilosos y los cabellos.
3.2.2. Diagnóstico de dermatofitos
El diagnóstico de laboratorio de las dermatofitosis se basa en la demostración de la presencia de hifas
fúngicas mediante microscopia directa de muestras de piel, cabello o uña y el aislamiento in vitro de los
microorganismos. Las muestras se tratan con una gota de hidróxido de potasio al 10% - 20% en un
portaobjeto y se examinan a nivel microscópico. Se pueden observar hifas filamentosas hialinas
características de los dermatofitos en las muestras de raspado de piel y uñas, y de cabello. El blanco
de calcofluor se ha empleado para examinar muestras respecto a la presencia de elementos fúngicos
y se ha asociado a excelentes resultados.
Los cultivos son útiles y se practican mediante la introducción de raspados de piel, cabello o uña de las
áreas afectadas en medio micológicos estándar, como agar de Sabouraud, con o sin antibióticos, o
medio de prueba para el aislamiento de dermatofitos. Las colonias se visualizan tras un periodo de
incubación comprendido entre 7 y 28 días. El aspecto macro y microscópico de las colonias y las
necesidades nutricionales se integran en el proceso de identificación.
8
4. MATERIALES Y MÉTODOS
4.1. Materiales y Reactivos
▪ Cultivos de Candida y dermatofitos en Agar Saboraud
▪ Microcultivos de Candida y dermatofitos
▪ Láminas coloreadas con azul de lactofenol
4.2. Procedimiento
1. Observar y describir las imágenes de cultivos de Candida y dermatofitos.
2. Describir las características macroscópicas y microscópicas de las imágenes de Candida y
dermatofitos.
5. GALERÍA DE IMÁGENES
Candida albicans
9
Epidermophyton floccosum
Características de la colonia
Crecimiento Color Superficie y aspecto Reverso
del anverso
Moderado (6 a 20 días) Verde oliva amarillento Finamente vellosa, Marrón naranja
plegada, estrellada
Características microscópicas
Hifas Microconidias Macroconidias Otras características
En raqueta No hay En clava o bastón, en Pleomorfismo rápido,
clamidoconidios racimos de plátano no afecta pelo
10
Microsporum canis
Características de la colonia
Crecimiento Color Superficie y aspecto Reverso
del anverso
Moderado (6 a 10 días) Blanco amarillento Vellosa, plana, radiada anaranjado
o lanosa
Características microscópicas
Hifas Microconidias Macroconidias Otras características
En raqueta Ocasionales En huso, extremos No crece en medio
clamidoconidias, afilados, pared gruesa arroz, pleomorfismo
cuerpos nodulares rápido
Anverso Reverso
11
Microsporum gypseum
Características de la colonia
Crecimiento Color Superficie y aspecto Reverso
del anverso
Rápido (6 días) Café canela Pulvurenta, granulosa, Marrón
plana
Características microscópicas
Hifas Microconidias Macroconidias Otras características
Septadas, Ocasionales Septadas, equinuladas, Pleomorfismo rápido
microsifonadas, de pared delgada y de
hialinas, ramificadas extremos
redondeados.
12
Trichophyton mentagrophytes
Características de la colonia
Crecimiento Color Superficie y aspecto Reverso
del anverso
Moderado (6 a 20 días) Blanco marfil Pulvurenta, granulosa, Vinoso
plana, centro
acuminado
Características microscópicas
Hifas Microconidias Macroconidias Otras características
En raqueta, asta Abundantes, en Escasos, en cigarro In vitro perfora pelos en
de ciervo, racimos redondos o salchicha, pared 4 semanas. Ureasa
espirales, zarcillos delgada. + (5-7 días)
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Trichophyton rubrum
Características de la colonia
Crecimiento Color Superficie y aspecto Reverso
del anverso
Moderado (6 a 12 días) Blanco, difunde Vellosa, algodonosa Rojo sangre
o granulosa
Características microscópicas
Hifas Microconidias Macroconidias Otras características
Pectinadas Piriformes en lagrima a Escasos fusiformes In vitro no perfora
Clamidoconidias los lados del filamento largos, estrechos en pelos, pigmentos en
punta de lápiz APD y Cornmeal. Urea
+
14
6. BIBLIOGRAFÍA
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PMC5925725.
7. https://atlasdemicologia.wordpress.com/
7. CUESTIONARIO
1. Qué es la candidiasis? Cuáles son sus síntomas? Como se transmite? Qué produce en el
organismo?
2. Qué métodos de identificación existen para diferenciar entre Candida albicans y no albicans?
3. Realice un cuadro diferencial entre las características macroscópicas y microscópicas de los
dermatofitos.
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