UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, Decana de América)

FACULTAD DE QUÍMICA E INGENIERÍA QUÍMICA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

PRÁCTICA #4 COMPORTAMIENTO CULTURAL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

DETERMINACION DEL NUMERO DE MICROORGANISMOS

14070201 JORGE ANDAHUA FRANCO JOEL

ALUMNOS
14070064 TORRES ORZELÍS JUAN GABRIEL
14070062 QUISPE RUEDA FREDDY JHONATHAN

14070209 CONTRERAS GONZALEZ FELIX ANDRÉS

14070193 CONTRERAS OGOSI LUIS FERNANDO

PROFESOR: Blgo. José Manuel Bustamante A.

TURNO Sabado 2pm a 6pm

FECHA DE ENTREGA: 24 de octubre del 2015

Lima-Peru 2015-II
Contenido
I. INTRODUCCIÓN............................................................................................................... 1
II. OBJETIVOS .................................................................................................................... 2
III. METODOLOGIA ........................................................................................................... 6
IV. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ................................................................................... 16
V. CONCLUSIONES ............................................................................................................. 32
VI. CUESTIONARIO.......................................................................................................... 33
VII. BIBLIOGRAFÍA ........................................................................................................... 36
 I. INTRODUCCIÓN

En el presente practica hemos evaluado la morfología de las colonias en los diferentes medios
en los que los hemos cultivado por dos días , ya sea este solido o liquido , podremos evaluar
diferentes porpiedades tales como Cantidad de desarrollo, turbiedad desarrollo en superficie y
olor ; en el caso del medio líquido y en el medio solido , cantidad de desarrollo , forma , textura
de superficie , consistencia , brillo , transparencia , cromogenesis , aspecto del medio y olor .

Los estudios de microorganismos en el laboratorio se realizan con cultivos puros, es decir con
una sola especie de microorganismos el cual es inoculado en medios sólidos y líquidos estériles
que aseguren la pureza del cultivo. Las muestras desde las cuales se les quiere aislar los
microorganismos son complejas presentan una gran variedad. Cada carácter varía según las
necesidades metabólicas y de multiplicación de las especies o grupos bacterianos y en parte
ayuda a la identificación.

Para la parte de conteo de colonias hemos utilizado una hamburguesa (que compramos en un
carrito sanguichero al frente del estadio de Alianza Lima )de la cual hemos extraido una muestra
de 10g. para poder estimar el numero de colonias existentes en la muestra utilizaremos una tabla
y la precensia de turbidez en los tubos .

1
 II. OBJETIVOS
Principal

 Estudiar el comportamiento de los microorganismos aislados previamente en diferentes

medios de cultivo y comprobar la pureza de los mismos.
 Identificar la formación de diferentes colonias en un mismo medio de cultivo.
 Estimar el numero de colonias en determinada muestra muestra .

Secundario

 Conocer los metodos de tincion

 Adiestramiento en los métodos usados en la determinación del número de
microorganismos
 Comprender las ventajas que tiene un metodo de aislamiento comparado con otro

III. MATERIALES

 Cepas puras de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus, Pseudomonas,

Saccharomyces, Aspergillus y Penicillium codificado de 24 a 48 horas.
 Placas con agar nutricio y agar sabouraud.
 Placa con agar papa dextrosa.

2
 Tubos de ensayo con caldo nutricio.
 Tubos con agar nutritivo semisólido en columna.

 Asa de siembra, gradilla, plumón indeleble.

 Bacteria Gram: cristal violeta, lugol, alcohol-acetona, fucsina fenicada de ziehl,

laminas portaobjetos limpias, papel lente.

3
 Microscopio, aceite de inmersión y alcohol de 70°

4
 Parte 2

 1 hamburguesa de pollo no cocinado.

 Frasco de 90 ml con agua destilada estéril.

 Placa Petri

5
  Tubos con 9ml de solución salina estéril de 0.85%.
 Tubos con 9ml de caldo lactosa.
 Tubo con 1ml de agua destilada estéril.
 Pipetas (1 y 10 ml), gradilla, mechero, plumón indeleble.

IV. METODOLOGIA

 Comportamiento cultural del crecimiento bacteriano

BACTERIAS:

Se utilizó 4 cepas las cuales estuvieron rotuladas: A,B,Cy D

A. Replicación de líquido a líquido

1. Tomar el cultivo de bacterias con la mano izquierda y destapar con el dedo meñique de la
mano derecha a la altura del mechero.

6
2. Con el asa de Kohle previamente flameada al fuego extraer una alícuota del inóculo.

3. Tapar el tubo y colocarlo en la gradilla .

7
4. Depositar el inóculo en el nuevo tubo de caldo nutritivo agitando, flamear la boca del tubo al
mechero y taponar.

5. Esterilizar el asa al mechero 6. Rotular e incubar a 28 – 30º.

B)Replicación de líquido a sólido :

1. Repetir los pasos (1), (2) y (3) de la técnica anterior.

2. Tomar con la mano izquierda la placa con agar, destapar la placa a la altura del mechero,

8
introducir el asa y realizar estrías en zigzag con el inóculo en la superficie del medio.

3. Cerrar la placa y flamear el asa de siembra.

4. Rotular e incubar a 28 – 30º.

C) Replicación en medio semisólido

1. Repetir los pasos (1), (2) y (3) de la técnica anterior

2. Tomar con la mano izquierda el tubo con agar semisólido, destapar el tubo con el dedo
meñique de la mano derecha a la altura del mechero, e inocular en el agar la muestra
introduciendo el asa (usando alambre de micrón en punta) has

9
ta la zona media del tubo.

3. Flamear la boca del tubo, flamear el asa y colocar el tubo en la gradilla.

4. Rotular e incubar a 28 – 30º por 48 horas

*HONGOS

Se utilizó 2 muestras a la cual llamamos E y F donde contenían AEM(Agar extracto de malta )

y APM(Agar papa dextrosa) respectivamente.

-Muestra E

1.Se esterilizó el alambre de microm en el mechero .Se abrió la placa Petri con la muestra E y se
retiró una pequeña parte con la asa de siembra. Todo el proceso cerca al mechero.

2.Se tapó la muestra E.

10
3. Tomar con la mano izquierda la placa con agar, destapar la placa a la altura del mechero,
introducir el asa y realizar estrías en zigzag con el inóculo en la superficie del medio.

4. Cerrar la placa y flamear el asa de siembra.

5. Rotular e incubar a 28 – 30º.

11
-Muestra F

1.Se esterilizó el alambre de microm en el mechero .Se abrió la placa Petri con la muestra F y se
retiro una pequeña parte con la asa de siembra. Todo el proceso cerca al mechero.

2.Se tapó la muestra F.

3.Tomar con la mano izquierda la placa con agar, destapar la placa a la altura del mechero,
introducir el asa y realizar estrías en zigzag con el inóculo en la superficie del medio.

4. Cerrar la placa y flamear el asa de siembra

5. Rotular e incubar a 28 – 30º.

 Determinación del número de microorganismos

PROCEDENCÍA DE LA HAMBURGUEZA , al frente del estadio matute , en un

negocio de salchipapas.

*Se pesó 10 gramos de hamburguesa de pollo. La cual se agregó en 90 ml de agua destilada

y se mezcló con la ayuda de la bagueta.

12
Luego :

1. Tomar 1 ml ó 1 gr de la muestra problema según sea líquida o sólida y transferir a un

tubo de ensayo con 9 ml de agua destilada estéril, ésta constituirá la dilución 10-1 .

2. Realizar diluciones seriadas 10-2, 10-3 en los tubos de agua destilada estéril.

13
3. Proceder al aislamiento por los métodos descritos abajo.

 RECUENTO DE MICROORGANISMOS POR EL METODO DE PLACAS:

1. Tomar 1 ml de la dilución de la muestra10-3.

2. Destapar con la mano izquierda la placa Petri lo necesario y depositar el inóculo.

3. Colocar la cubierta de la placa Petri.

4. Incorporar 10 a 15 ml del agar respectivo mantenidos a 45° C tapar y describir

movimientos rotatorios a fin de distribuir homogéneamente el inóculo.

5. Rotular e incubar a 28° C.

6. Contar el número de colonias que aparecen al final de la incubación.

14
 B) RECUENTO DE MICROORGANISMOS COLIFORMES POR EL METODO
DEL NUMERO MAS PROBABLE ( NMP)
1. Tomar 1 ml de la muestra problema y transferir a un tubo con 9 ml de agua destilada
estéril, ésta constituirá la dilución 10-1 .
2. Realizar diluciones seriadas 10-2, 10-3 en los tubos de agua destilada estéril.
3. Tomar 3 tubos con caldo lactosa e inocular 1 ml de la dilución seleccionada a cada
uno, repetir el procedimiento con las otras diluciones tomando siempre 3 tubos para
cada dilución, empezando siempre con la menor dilución.

4. Rotular los datos en los tubos e incubar a 28° C por 48 horas.

Después de realizar todas las pruebas y ponerlas a incubar , pasaron 48 horas y se realizó el
método de Gram , para poder identificar los microorganismos presentes en el medio líquido
,sólido ,semisólido .

METODO DE GRAM:

esterilizar el asa contraste con se lava con

de siembra fucsina basica agua de caño

se fija la lavado con agua

secado al M.A.
muestra fría

diferenciacion
se agrega cristal se observa al
con alcohol
violeta microscopio
acetona

se enjuaga en
se agrega luegol
agua de caño
15
 V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

COMPORTAMIENTO CULTURAL DE LAS BACTERIAS EN MEDIO SOLIDO

CARACTERIZACAION MORFOLOGICA DE LAS COLONIAS:

BACTERIA DE MUESTRA A:
En un supuesto caso, según el cuadro que se encuentra en nuestra guía , hicimos las
observaciones respectivas y según las características que la bacteria presenta, pensamos
que esta bacteria se trataba de una Escherichia Coli (E. coli). Puesto que algunas de las
características morfológicas que se observaron a simple vista fueron las siguientes:

16
Las colonias se desarrollaron en abundante cantidad.
Presentaban una textura particularmente lisa (esta observación no fue muy clara)
Su consistencia era cremosa (esto lo percatamos luego de hacer la tinción gran, abrimos
la placa petri y tocamos la muestra para constatar esta característica, puesto que si lo
hacíamos antes íbamos a contaminar a la bacteria)
El brillo mate no fue muy bien presenciado debido que las observaciones en el
laboratorio se realizaron de día.
Se percato que entre las colonia de las bacterias había una adherencia relativamente
Moderada.
La cromogenesis de las colonia era ausente, esto se observa en el medio de cultivo, si
alrededor del medio el cambio de color no se presencia es por que la bacteria carece de
color, en esta característica colocamos color ausente.
Par el olor , al igual para constatar la consistencia, esperamos después de hacer la
tinción para destapar la placas petri de las muestras para determinar el olor que emana la
colonia de bacteria, resultando tener entre un olor desagradable que lo calificamos como
un olor fecaloidal.
Con las características mencionadas concluimos en un primer caso que se trataba de una
Escherechia Coli. Pero no fue hasta realizar la tinción de gran para quedar con la mayor
certeza de que bacteria es realmente. Esta interpretación será analizada luego.

BACTERIA DE MUESTRA B:
En el caso de la bacteria de muestra B , las carecteriscas que anotamos nos daba a creer
en un principio que se trataba de una Salmonella ,pero como se cultivaron las mismas
bacterias en diferentes medios de cultivo ( solido, liquido y semi liquido) por momentos
nos hicieron pensar que se podría tratar de un Bacillus sp por algunas características que
mostraron las bacterias. Siendo la tinción de Gram la que acabaría con el incierto puesto
que cada una de las dos supuestas bacterias son clasificados de manera distinta y
contraria (Salmonella Gram positivo, Bacillus Gram negativo).
Las características que se observaron de la bacteria fueron las siguientes:

17
Las colonias crecieron en el medio de cultivo solido demanera moderada, siendo asi una
cantidad de desarrollo moderado.
La forma en las que crecieron las colonia microbianas fueron en forma de hilo y en ZIG
ZAG (este ultimo es porque se utilizo el medoto aseptico del estriado para la siembra
del cultivo). La foram que se presencion era catalogada como filiforme.
Tenia una textura corrugada, haciendo una observación detalallada se notaba que los
bordes tenias ciertas curvaturas como si estuviera arrugado.
La consistencia al igual que el olor, en todas las muestras se observaron luego de las
tinciones. Para evitar la contaminación de la muestra y no observar en el microscopio
bacterias erróneas.
Su cromogenesis fue ausente, debido que alrededor de las colonias, en el medio de
cultivo no cambio de color.
Su aspecto del medio era medio palido, siendo clasificado como medio opalescente.
Nuestras dudas al saber si se trataba de una Salmonella o un Bacillus sp, se terminaron
luego de hacer las tinciones de Gram respetivos. Nuestra duda se inicio pues en el
medio de cultivo liquido se notaron características del bacillus (resultados en medio
liquido) , por lo que concluimos que una posible respuesta a notar que no todas las
características coincidían , fue que de repente al momento de preparación del medio
hubo errores que hizo que el comportamiento microbiano cambie, y no recibir los
resultados que esperábamos.
La discision final se terminaría con la tinción de gran respectivo que se vera mas
adelante.

18
BACTERIA DE MUESTRA C:
Por las características anotadas y las observaciones respectivas en un comienzo
deducimos que se trataba de una Pseudomona pero similarmente a la muestra B este
tenía características contrarias vistas en el medio de cultivo líquido que nos daba a
sospechar que se podría tratar de un Staphylococcus Aureus. Siendo otra vez la tinción
de Gram quien pondría fin a la discusión de la posible identificación de la bacteria. Las
características en el medio solido de cultivo observadas fueron la siguiente:
Las colonias crecieron de manera abundante (se observa claramente en la imagen)
La forma que se observo no fue claramente definida, por los que se cataloga como
forma difusa
Su textura se noto que era lisa y plano a diferencia de otras muestras estas no tenían la
forma arrugada en los bordes
La consistencia y el olor fueron observados luego, obteniendo como resultado una
consistencia cremosa y un olor a fruta podrida

BACTERIA DE MUESTRA D:
Las características observadas hizo suponer en un principio que la bacterias estudiada se
trataba de un Bacillus sp pero las observaciones vistas en el medio de cultivo liquido,
nos hicieron dudar que se podría tratar también de una salmonella puesto que las dos
bactiras tienen un comportamiento similar en el medio de cultivo pero distinto en otros

19
medio, la discusión con la bacteria de la muestra B se acabaron luego de hacer las
tinciones respectivas.
Las características observadas a simple vista y las que fueron anotadas son las
siguientes:
Un desarrollo de las colonias en cantidad abundante
Presentaba una forma filoforme (en forma de hilo) y la consistencia resulto ser cremosa
algo pegajosa
Su brillo cuando era llevada a la oscuridad (tapamos connuestras manos) notamos que
emanaba un brillo brillante.
Tenía un olor desagradable como a una fruta descompuesta.
En cromogenesis, nos dimos cuenta que alrededor donde crecieron las colonias no se
presencio ningún cambio de color en el medio de cultivo, por lo cual resulto tener
ausencia de color

20
IDENTIIFICACION DE LAS BACTERIAS MEDIANTE LA TINCION DE
GRAM:
Mediante la técnica de tinción, se solucionarion varias de las dudas para la correcta
identificación de las bacterias, Con la información sacada de libros,revistas y paginas
web, mas la discusión de cada uno de los integrantes del grupo podimos identificar las
muestras. Los resultados obtenidos y con fotos de cada una de las muestras se presentan
a continuación:
TINCION DE GRAM DE LA MUESTRA (BACTERIA A)

21
22
 MUESTRA DE LA BACTERIA C ,
CLARAMENTE SE DEIFERENCIA QUE
SE TRATAN DE BACILOS GRAM
NEGATIVOS

23
RESULTADO FINAL
Luego de las observaciones del comportamiento morfológico de las colonias de
bacterias y también después de hacer las tinciones respectivas y haciendo uso de
información básica sacada de libros a cada bacteria llegamos a identificarlas siendo
anotadas en la siguiente tabla:

24
En medio Líquido
Estos resultados se dieron luego de que se dejara dos días en el laboratorio:
- Replicación de Líquido a Líquido para Bacterias

25
26
27
28
 Luego de esto va lo que hará Mickey mouse, y luego, la parte que hago a continuación.

- Replicación de Líquido a Líquido.

29
30
31
VI. CONCLUSIONES

32
  Cada microorganismo tendrán características en distintos medios cultivados; por
ello, es requerido observar todas sus características para poder descubrir con que
microorganismo estaríamos trabajando.
 La tinción Gram es importante ya que nos ayuda a despejar dudas entre que
microorganismo estamos trabajando.
 Se debe trabajar con la técnica de estriado simple para una mejor evidencia de la
muestra(hongo-APD)
 En el hongo APD se observó más notorio la cromatografía que en las otras
muestras elaboradas.
 La disolución en la turbidez en las 3 distintas concentraciones (10-1, 10-2, 10-3)
nos ayuda a tener un valor más exacto al momento de observar el crecimiento de los
microorganismos.
 Hay un gran crecimiento bacterial en la muestra de la hamburguesa ya que en los
resultados nos salió la totalidad de turbidez en las 3 concentraciones hechas.
 La hamburguesa de pollo está contaminada y puede ser a causa del lugar o sitio en
donde lo mantuvieron, también se puede deber a la elaboración de esta ya que pudo
haber una baja calidad de higiene.

VII. CUESTIONARIO
PARTE 1

1. ¿Cuál es la razón de utilizar cultivos puros para el estudio morfológico?

Los estudios de microorganismos en el laboratorio se realizan con cultivos puros

(microorganismos de una misma especie) . Las muestras originales (leche , chicha de jora y
abono como ejemplo para esta practica ) desde las cuales se les quiere aislar son complejas
presentan una gran variedad de microorgranismos . La pureza de estos cultivos permite estudiar
sus características que presentan en los diferentes medios en los cuales se les cultiva.

Cada carácter varía según las necesidades metabólicas y de multiplicación de las especies o
grupos bacterianos y en parte ayuda a la identificación.

2. ¿La morfología de los microorganismos varia con el medio de cultivo. Por qué?

33
Los medios de cultivo que se utilizan el laboratorio dependen del microorganismo que se
pretende cultivar y de la finalidad de su cultivo. Como la distribución se hace atendiendo a
diferentes criterios un medio de cultivo puede incluirse en más de una categoría.

La morfología varía según las exigencias de la colonia , y el contenido del medio , por ejemplo
Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los gérmenes Gram
negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos .

Por otro lado tenemos los Medios de multiplicación: Sirven para obtener una gran cantidad de
células a partir de un microorganismo ya aislado. Seemplean en la obtención de vacunas, en la
investigación y en la industria. Los medios más adecuados para la multiplicación suelen ser
líquidos. El caldo-infusión cerebro-corazón (BHI), es un ejemplo típico de estos medios.

Medios de conservación que se utilizan para conservar una cepa que, por diversas razones nos
interese mantener. Tambien se puede usar un agar nutritivo que es un medio para
microorganismos poco exigentes , no es diferencial. El Agar King permiten el crecimiento de
Pseudomonas, inhibiendo Gram positivos y la mayoría de enterobacterias.El segundo pone
además de manifiesto la pigmentación fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV y así hay
muchos más ejemplos de medios que podrían evidenciar marfología diversas de diferentes
colonias .

3. ¿Cuál es el fundamento de la cromogénesis?

En general es frecuente algún tipo de color en las colonias , esto puede ser debido a la
elaboración de algún pigmento , a la formación de alguna sustancia por parte de la bacteria o la
utilización de algún sustrato del medio que acidifique o basifique a este de forma que , ante la
presencia de indicadores de pH que están en el medio , cambia el color ,hecho que nos ayuda a
conocer la utilización de ese sustrato por parte de la bactería (tipificación bioquimica).

4. ¿Cuál es el fundamento de la fluorescencia en los microorganismos?

La muestra se tiñe con una sustancia fluorescente que absorbe la energía de las ondas cortas de
la luz (azul) y emite la luz de longitudes de ondas más largas (verde). Se utiliza una sustancia
fluorescente que se une al microorganismo, el cual emite fluorescencia y se puede identificar.
Esta técnica se usa en clínica.

FLUOROCROMOS - Sustancias que emiten un fotón cuando son excitados por un fotón
incidente.

34
 El colorante fluorescente es una molécula que absorbe luz en una longitud de onda, lo que
excita los electrones y los lleva a un nivel energético mayor y al volver a su nivel energético
inicial emite luz en una segunda longitud de onda.

PARTE 2

1. ¿Puede Ud. Medir el crecimiento de hongos por turbidimetría?

Si se puede , la turbidimetría se mide de acuerdo a la capacidad de los microorganismos de

absorber la luz.

Aunque en el caso de los organismos filamentosos como los hongos , la determinación del peso
seco es un método conveniente para evaluar el crecimiento .

2. ¿En qué casos se emplea la Escala de Mac Farland?

El inconveniente de este métodoes que es poco preciso, que sólo se emplea cuando no hace
falta exactitud. Ha sido desplazado por los métodos espectrofotométricos.Por ejemplo:

El espectrofotómetro :Este aparato es de uso habitual en cualquier laboratorio de Microbiología

o Bioquímica. Mide la densidad óptica (D.O.), es decir la absorbancia.

El Nefelómetro: Es un aparato similar al anterior, pero el dispositivo sensor está situado en

ángulo recto respecto de la dirección de la luz incidente, y lo que se mide es pues, la
luz dispersada directamente por la preparación. Posee mayor sensibilidad que el
espectrofotómetro.

La escala de Mac Farland Consiste en varios tubos de vidrio herméticamente cerrados que
contienen {1% de Cl2Ba + cantidades crecientes de SO4H2 al 1%}; por lo tanto, en cada tubo
se origina un precipitado de SO4Ba, origen de la turbidez. Para cada cepa bacteriana hay que
establecer la equivalencia entre la turbidez de cada tubo y la masa o la concentración de
bacterias (en céls/ml) que genera una turbidez similar, pero como mencioné en la parte de arriba
, es un método que se usa solo cuando no es necesaría la precisión .

3. ¿Cuál es la desventaja que presentan los contadores electrónicos?

35
Ciertas bacterias son tan pequeñas que casi no producen cambios en la resistencia generado por
la turbulencia que se desarrolla al pasar el fluido por el orificio, tampoco pueden medirse
células que formen filamentos o agregados o soluciones muy concentradas de microorganismos,
debido a que el pasaje de más de una célula en un breve período de tiempo va a ser tomado
como una célula más grande. Es común la obstrucción del orificio por microorganismos muy
grandes.

Funcionamiento

Estos instrumentos constan básicamente de dos compartimientos comunicados a través de un

pequeño conducto. En ambos compartimientos hay electrodos que miden la resistencia eléctrica
del sistema, y como el orificio del conducto es muy pequeño y su resistencia es muy alta, la
resistencia eléctrica de cada compartimiento es independiente.

Un volumen fijo de una suspensión bacteriana es forzada a pasar desde un compartimiento al

otro a través del pequeño conducto, en un muy breve intervalo de tiempo. Cuando un
microorganismo pasa al nuevo compartimiento, la resistencia de éste se incrementa debido a que
la conductividad de la célula es menor que la del medio. Estos cambios en la resistencia son
convertidos en pulsos o voltaje y contados.

4. ¿Cuál es el inconveniente que presenta el recuento directo al microscopio?

La mayor dificultad del recuento en cámara es obtener reproducibilidad en el llenado de la

cámara con líquido .

La adsorción (cuando las células son atrapados o retenidos en la superficie de un material ) de

las células en las superficies del vidrio, incluyendo pipetas. Esta adsorción es crítica en el
proceso de dilución de la muestra y se minimiza al realizar las diluciones en medios de alta
fuerza iónica (solución fisiológica o medios mínimos sin fuente de carbono).

VIII. BIBLIOGRAFÍA

o Madigan, M. T., Martinko, J. M., y Parker, J. Brock Biología de los Microorganismos.

10ª edición. Prentice-Hall. Madrid, 2003.
o Díaz, R., Gamazo, C, y López-Goñi, I. Manual práctico de Microbiología. 2ª edición.
Masson, S.A.. Barcelona, 1999.
o P. de Kruiff. Los cazadores de microbios. 2ª edición. Aguilar, Madrid, 1960.
o http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioRecuento.htm
o WATSON, James D.; 2008; Biología molecular del gen; 5ta Edición; pag. 732 – 734

36